HPLC法测定重楼克感滴丸中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的含量

目的:建立高效液相色谱法测定重楼克感滴丸中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的含量。方法:采用Kromasil C18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(42:58),检测波长为203nm,流速1.0mL/min,柱温40℃。结果:重楼皂苷Ⅰ在0.465-4.185μg范围内线性关系良好(r=0.9999),重楼皂苷Ⅱ在0.236-2.124μg范围内线性关系良好(r=0.9999)。重楼皂苷Ⅰ的平均加样回收率为99.56%(RSD=1.93%),重楼皂苷Ⅱ的平均加样回收率为99.64%(RSD=1.90%)。结论:该方法简便、快速、准确,可用于重楼克感滴丸的质量控制。     

滇重楼不同生长发育期化学成分的变化规律

目的:建立滇重楼HPLC指纹图谱,考察滇重楼不同生长期主要化学成分的变化。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agela Venusil XBP-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1;检测波长210 nm;柱温35℃。结果:滇重楼中所含成分的各色谱峰均得到了有效的分离,在指纹图谱中共有峰20个,并指认了4个色谱峰。滇重楼化学成分随生长期的不同而各异。结论:该方法为滇重楼质量控制以及实现规范化种植提供了参考依据。     

HPLC测定热毒清片中重楼皂苷含量

目的:采用高效液相色谱法测定热毒清片中重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅱ的含量。方法:色谱条件为ODS色谱柱,流动相乙腈-水(48∶52),检测波长203nm。结果:重楼皂苷I和重楼皂苷Ⅱ两成分均达基线分离,其他成分无干扰,重楼皂苷I进样量在1.88～23.5μg线性关系良好,r=0.9994,重楼皂苷Ⅱ进样量在1.80～22.5μg线性关系良好,r=1.000),平均回收率分别为99.6%,98.6%。结论:该方法简便、准确可靠。     

UPLC法测定云南省不同地区云南重楼及多芽品系中7种甾体皂苷量及其指纹图谱建立

目的以云南省不同地区云南重楼及多芽品系为材料,采用UPLC-ELSD法同时测定7种甾体皂苷量并建立高黎贡山地区样品UPLC指纹图谱,评价其质量。方法采用UPLC-ELSD法,ACQUITY UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,体积流量0.2 m L/min,漂移管温度55℃,氮气压力275.8 k Pa,增益500,以乙腈-水为流动相梯度洗脱。结果样品在23 min内能完全被分离,方法学考察均符合要求;23份样品中19份符合《中国药典》2015年版要求,《中国药典》项下4个皂苷平均质量分数为1.42%,其中高黎贡山地区的样品平均质量分数高达1.660%;10批次高黎贡山地区云南重楼(多芽品系)样品间相似度小于0.9,标定了8个共有特征峰,并对4个特征峰进行了归属;样品中7个皂苷的种类和量经PCA分析和系统聚类分析均不能明显分类。结论该方法简便、快速、灵敏度高,可用于云南重楼的质量快速评价;云南重楼及其多芽品系在化学成分种类和量上并无明显区别;高黎贡山地区的云南重楼(多芽品系)是一个值得推广栽培和深入研究的品种。     

滇重楼不同生长发育期有效成分的变化规律

目的 通过对滇重楼不同生长发育期有效成分(重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ)含量的研究,为滇重楼适宜采收期的确定提供实验依据.方法 采用高效液相色谱法.色谱柱为Agilent Zorbax SB-C<,18>(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速为1.0 ml·min<'-1>;检测波长为203 nm;柱温为35℃.结果 不同生长期滇重楼中4种重楼皂苷总含量发生明显变化.该类成分在5～6月份含量最高;5～10月呈下降趋势;到次年的4～6月呈升高趋势.结论 明确了滇重楼不同生长发育期重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ的量和总量的动态变化规律.     

重楼的基源、生长条件与质量相关性研究

目的 比较不同基源、生长条件及采收季节的重楼皂苷含量,为重楼的引种栽培提供科学依据.方法 采集不同基源、不同生长年限、不同海拔及不同采收季节的重楼药材,按2015年版《中华人民共和国药典》重楼总皂苷含量测定方法进行测定.色谱柱为ACQUITY UPLC?HSS T3(3.0 mm×100 mm,1.8μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,检测波长203 nm,进样量5μl,流速0.5 ml/min,柱温35℃.结果 在所测样品中,总皂苷含量范围在1.35%~3.89%之间,含量顺序为:多叶重楼>滇重楼>华重楼;3~10年生的华重楼,生长年限越长,总皂苷含量越高;在海拔400~800 m生长的华重楼,总皂苷含量随着海拔上升而增加;春季采收的云南重楼其皂苷含量高于其他季节.结论 不同基源、生长条件、采收季节的重楼皂苷含量不同,引种栽培重楼应综合考虑.     

HPLC测定热毒清片中重楼皂苷Ⅰ的含量

目的:建立热毒清片中重楼皂苷Ⅰ含量的HPLC测定方法.方法:采用Waters Symmetry ShieldTMRP18(5U,3.9 mm×150 mm)色谱柱,流动相为乙腈-水(41:59),在203 nm波长处检测.结果:重楼皂苷Ⅰ在1.068～5.340μg范围内线性关系良好,相关系数:r=0.999 9;平均加样回收率为98.53%,RSD=1.69%(n=6).结论:该方法结果准确,重复性较好,可用于热毒清片质量控制.     

15种重楼属植物中8种甾体皂苷的含量测定

建立了同时测定重楼中8种重楼皂苷(重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅰ、Ⅴ,薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷)的分析方法,并对15种重楼属植物根茎中重楼皂苷的含量进行了评价。本研究采用Waters Acquity H-Class~(TM)液相色谱系统,PDA检测器,色谱柱为资生堂CAPCELL PAK ADME色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-水为流动相(0.8 mL·min~(-1))梯度洗脱,柱温21℃;检测波长为203 nm。可知(1)8种重楼皂苷得到良好分离,稳定性和重复性好,且线性良好(R20.999 9),线性范围较宽(0.041 70~3.812 00μg),平均回收率在95.91%~103.8%。(2)不同种重楼中重楼皂苷的含量差异显著,毛重楼、狭叶重楼和金线重楼中含量较低或基本不含重楼皂苷,不适合作为重楼药用;不同产地的七叶一枝花含量差异显著;滇重楼、长柱重楼、大理重楼和五指莲中重楼皂苷含量较高,最高达5.0%,长柱重楼、大理重楼和五指莲可作为潜在的重楼药用资源。     

云南省不同地区滇重楼4种皂苷含量的比较

目的:研究云南省不同产地滇重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ4种皂苷的含量。方法:采用Waters C18柱(4.6mm×150mm,5μm),乙腈-水梯度洗脱,流速1mL/min,柱温30℃,检测波长203nm。结果:4种甾体皂苷在0.384-8.16μg范围内线性良好,R=0.9994-0.9998,平均加样回收率97.7%-99.1%;云南省不同产地的滇重楼中4种皂苷含量差异较大,依次为Ⅰ(0.979%)Ⅱ(0.492%)Ⅶ(0.097%)Ⅵ(0.004%);野生滇重楼皂苷的总含量(1.52%)高于人工栽培滇重楼(1.26%)。结论:该方法准确、简捷,可用于重楼中4种皂苷的含量测定。     

基于多指标成分含量测定及HPLC指纹图谱的多茎重楼品质评价

目的 HPLC法测定不同产地多茎重楼Paris polyphylla Smith var. yunnanensis根茎中重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅴ的含量,建立其HPLC指纹图谱,并与滇重楼根茎对照药材HPLC指纹图谱进行比较分析。方法采用Thermore C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为水-乙腈,梯度洗脱,检测波长203 nm;柱温30℃;体积流量1 mL/min;进样量10μL,外标法与一测多评法同时对不同产地多茎重楼根茎中重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅴ的含量进行测定,采用单因素方差分析法对含量差异进行分析;建立多茎重楼根茎HPLC指纹图谱,并与滇重楼根茎对照药材HPLC指纹图谱进行比较分析。结果不同产地多茎重楼根茎重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅴ的含量测定结果表明,在线性范围内线性关系良好(r0.9997),平均加样回收率为98.34%～99.34%,RSD≤1.00%;不同产地多茎重楼根茎中重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅴ的含量存在显著(P0.05)或极显著(P0.01)差异,重楼皂苷(Ⅰ+Ⅱ+Ⅵ+Ⅶ)总量在1.239%～6.236%,显著高于《中国药典》规定的重楼药材质量控制标准的0.60%,且外标法与一测多评法测定结果无显著性差异。HPLC指纹图谱相似度评价结果表明,不同产地多茎重楼和滇重楼对照药材根茎中共有12个共有指纹特征峰,二者HPLC指纹图谱相似度较高。结论该方法操作简单、准确、重复性好,可用于多茎重楼根茎中重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅴ的含量测定;不同产地多茎重楼根茎中重楼皂苷(Ⅰ+Ⅱ+Ⅵ+Ⅶ)总含量较高,不同产地多茎重楼与滇重楼对照药材根茎HPLC指纹图谱相似度较高。     

长药隔重楼化学成分研究

目的研究长药隔重楼Paris polyphylla var.pseudothibetica根茎中的化学成分,为阐明其有效成分及扩大重楼属植物的药用资源提供科学依据。方法利用正相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、正反相制备色谱等手段进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱技术进行结构鉴定。结果从长药隔重楼中分离得到了12个化合物,分别鉴定为:薯蓣皂苷元(1)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、β-谷甾醇(6)、豆甾醇(7)、胡萝卜苷(8)、豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、山柰酚(10)、β-蜕皮激素(11)、蔗糖(12)。结论化合物1～9为首次从该植物中分离得到。     

黑籽重楼化学成分及其抗肿瘤活性研究

目的研究黑籽重楼Paris thibetica根状茎的化学成分及其抗肿瘤活性。方法综合运用正相硅胶、Sephadex LH-20、ODS-C18等柱色谱以及半制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,并通过MS、1H-NMR、13C-NMR等波谱学方法进行结构鉴定。采用MTT法研究化合物的体外抗肿瘤活性。结果从黑籽重楼根状茎的乙醇提取物中分离得到14个化合物,分别鉴定为重楼皂苷V(1)、重楼皂苷I(2)、重楼皂苷II(3)、重楼皂苷VI(4)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、重楼皂苷H(6)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、重楼皂苷VII(8)、parisyunnanoside G(9)、trikamsteroside E(10)、豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(11)、β-谷甾醇棕榈酸酯(12)、β-香树脂醇(13)、4-羟基-5-甲基呋喃-3-羧酸(14)。结论所有化合物均为首次从黑籽重楼中分离得到,化合物10、12~14为首次从重楼属植物中分离得到。化合物1~8对人肝癌细胞BEL-7402有细胞毒活性,其中化合物3活性最好,IC50为0.48μmol/L。     

七叶一枝花和滇重楼提取物的制备、表征及其体外溶血作用分析

目的:比较七叶一枝花和滇重楼提取物体外溶血作用强弱,探讨不同结构类型重楼皂苷的溶血作用特点。方法:采用75%乙醇对七叶一枝花和滇重楼根茎进行提取,采用大孔吸附树脂对各类物质进行富集,采用快速制备色谱技术对目标组分群进行定向制备,基于对照品对照和在线紫外吸收光谱对总取物、部位和组分进行化学信息表征,采用分光光度法测定各样品的溶血率。结果:根据质量浓度-溶血率曲线计算七叶一枝花和滇重楼总提物的50%溶血浓度分别为34.97,46.52 mg·L~(-1)。在2.5~10 mg·L~(-1)时,七叶一枝花部位中仅有70%乙醇洗脱部位(PPC-D)显示了较强溶血作用,滇重楼部位中70%乙醇和95%乙醇洗脱部位(PPY-D和PPY-E)均显示溶血作用。5.0,10 mg·L~(-1)时PPC-D的溶血率分别为78.00%和95.68%,PPY-D(PPY-E)的溶血率分别为31.86%和63.29%(15.82%和55.25%)。在2.5~5.0 mg·L~(-1)时,七叶一枝花的组分呋甾皂苷和薯蓣皂苷未显示溶血作用,偏诺皂苷组分在质量浓度为2.5,5.0 mg·L~(-1)的溶血率分别为5.89%和90.33%;滇重楼的呋甾皂苷组分同样未显示溶血作用,偏诺皂苷(薯蓣皂苷)组分在质量浓度为2.5,5.0 mg·L~(-1)的溶血率分别为0.51%和57.75%(4.29%和49.39%)。结论:七叶一枝花和滇重楼均具有溶血作用,其中七叶一枝花强于滇重楼;七叶一枝花溶血成分群主要为偏诺皂苷类,滇重楼溶血成分群为偏诺皂苷和薯蓣皂苷;两者呋甾皂苷均无溶血作用;总提物溶血作用强弱主要由其中所含偏诺皂苷和薯蓣皂苷类成分的绝对含量和相对比例来决定。     

红花岩黄芪皂苷的分离鉴定

目的：研究红花岩黄芪的皂苷成分。方法：应用溶剂法、色谱法提取分离皂苷,用波谱法鉴定其结构。结果：从红花岩黄芪中分离得到4个皂苷,分别为大豆皂苷II甲酯(1),大豆皂苷II(2),大豆皂苷Bg(3)和大豆皂苷I(4),该4个皂苷均为首次从红花岩黄芪分离得到,化合物3为首次从岩黄芪属植物中分离得到,其NMR数据为首次报道。     

华重楼皂苷类成分的动态分布规律对药材质量的影响

目的研究华重楼皂苷类成分及药材生物量积累速度的时间、空间分布规律(随植株生长年限、采挖季节的变化规律及在不同部位的积累特征),明确最佳种植年限、采收季节、入药部位。方法建立了基于高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)同时测定华重楼6种皂苷(重楼皂苷I、II、VI、VII、V、H)量的方法以检测皂苷量的变化;采用烘干法测定药材折干率以指示生物量积累速度。结果华重楼根茎折干率同生长年限呈正相关,8年生最高;随着采收月份呈波浪式,6月和1月为波峰;总皂苷构成以重楼皂苷VII、H为主,总皂苷量随着生长年限呈"V"字型,2年和8年为顶点;随着采收季节呈波浪式,3月和11月为波峰;植株不同部位的总皂苷分布差异明显,茎叶总皂苷量根茎尖段总皂苷量根茎中段总皂苷量≈根茎尾段总皂苷量,其中重楼皂苷VII的分布从茎叶向根茎尾端呈明显下降趋势,而重楼皂苷H则呈显著上升趋势。结论生长年限、采收季节、植株部位对华重楼皂苷的累积有明显影响,人工栽培华重楼最佳种植年限为8年、最佳采收季节为11月;仅采用根茎尾段入药会降低商品药材质量;重楼皂苷VII可能同华重楼的萌芽和茎叶生长有关;茎叶可作为获取重楼皂苷的重要资源,对于扩大药源,提高资源利用效率有重要意义。     

滇重楼根茎品质与根际土壤因子的相关性分析

目的 探明野生与移栽滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis根际土壤中基本养分、土壤酶活性与根茎品质的关系,筛选影响滇重楼活性成分的主导土壤因子,为滇重楼合理施肥提供参考依据。方法 以采自云贵川33个样点的滇重楼为材料,测定了其根茎品质指标以及生长土壤基本养分含量和土壤酶活性;分析了根茎品质指标与土壤因子的相关性,并采用逐步回归分析方法筛选出影响滇重楼根茎品质的主要土壤因子。结果 滇重楼野生品和移栽品在总皂苷、总多糖、总黄酮含量上具有一定的差异,药材品质具有一定的地域性。所有滇重楼根际土壤样品的酸碱度适中,基本养分充足、含量丰富,土壤酶活性高,适宜于滇重楼的生长发育,野生地土壤肥力质量优于移栽地。野生滇重楼根茎总皂苷与多酚氧化酶活性呈现出极显著正相关,总黄酮与pH值、脲酶活性呈极显著负相关关系。移栽滇重楼根茎总皂苷与速效钾含量呈现出显著负相关,总黄酮与蔗糖酶活性呈显著正相关关系,总多糖与碱性磷酸酶活性呈显著正相关。结论 滇重楼品质主要受到土壤因子综合影响,在滇重楼野外就地保护或人工栽培过程中,注意根据实际情况增减土壤各养分的含量及其比例关系。     

椒枝软胶囊的质量控制研究

目的:建立椒枝软胶囊的质量控制标准。方法:采用薄层色谱法(TLC)法对椒枝软胶囊中的亚麻酸、重楼皂苷进行鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)法对椒枝软胶囊中的重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ进行定量测定。结果:在TLC谱图中能检出亚麻酸、重楼皂苷的特征斑点;HPLC法测得重楼皂苷Ⅰ在0.4908-4.908μg线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为99.42%,RSD为1.36%;重楼皂苷Ⅱ在0.4276-4.276μg线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为101.00%,RSD为1.52%。结论:该方法准确、灵敏,重现性好,能有效地控制椒枝软胶囊的质量。     

云南重楼种子育苗技术研究

目的：缩短云南重楼种子萌发和出苗所需时间,提高其出苗率；提出在生产中切实可行的云南重楼种子有性繁殖育苗方法。方法：考察不同温度、不同播种方式(播种时间、覆土厚度、地膜覆盖)等因素对云南重楼种子萌发和出苗的影响。结果：云南重楼种子胚后熟和萌发的最适温度在18～20 ℃,在此温度下处理3～4个月以后,转至0～10 ℃低温处理2～4个月,可在翌年4月出苗；适宜的播种时间是4月份以前,育苗土覆盖厚度为1 cm左右,播种后用黑色地膜进行覆盖,可提高出苗率。结论：上述试验结果可为云南重楼种子育苗提供操作参考。     

素馨花三萜皂苷类化学成分研究

目的:研究木犀科茉莉属植物素馨花干燥花蕾的化学成分。方法:通过硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和重结晶等方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定结构。结果:从素馨花干燥花蕾70%乙醇提取物中分离得到6个三萜皂苷类化合物,分别鉴定为3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃木糖基常春藤皂苷元-28-O-β-D-吡喃半乳糖基(1→6)-β-D-吡喃半乳糖酯苷(1)、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(2)、2α,3β,23-trihydroxyolean-12-en-28-oic-O-β-D-glucopyranosyl ester(3)、常春藤皂昔元-3-O-β-D-吡喃木糖基(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(4)、2α,3β,23-trihydroxyolean-12-en-28-oic-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→4)-O-β-D-glucopyranosyl(1→6)-β-D-glucopyranosyl ester(5)、常春藤皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→)2-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(6)。结论:化合物1为新化合物,化合物26为首次从茉莉属植物中分离得到。     

接种不同AM真菌对滇重楼菌根侵染率和入药品质的影响

通过室温盆栽接种试验与室内分析相结合的方法,观察灭菌土壤条件下接种28种丛枝菌根(AM)真菌对药用植物滇重楼根系AM真菌侵染能力和入药质量的影响。结果显示,与对照组(CK)相比,接种外源AM真菌对滇重楼根系AM真菌的孢子密度、侵染率、侵染强度具有调控(增减)作用,增强根内菌丝的琥珀酸脱氢酶(SDH)和碱性磷酸酶(ALP)活性,从而提高滇重楼菌根生活力。AM真菌诱导子处理后,不同AM真菌对滇重楼根茎中不同甾体皂苷的影响有所差异,AM真菌的施用能够提高滇重楼的药用品质,但在实验期间未造成滇重楼甾体皂苷质量的变异。实验结果表明,滇重楼与AM真菌之间的共生关系具有一定的相互选择性,近明球囊霉Claroideoglomus claroideum和瑚状盾巨囊霉Racocetra coralloidea是最适宜滇重楼大田栽培时推广应用的优良接种菌剂。