以叶酸受体为靶向的脂质体介导MYCN基因小干扰RNA体外抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞的增殖

目的以氨基脂为主要成分、叶酸受体为靶向的脂质体包裹MYCN基因小干扰性RNA,研究其体外对神经母细胞瘤LA-N-5细胞MYCN基因表达的抑制及细胞增殖的影响。方法制备氨基脂为主要成分、叶酸受体为靶向的脂质体包裹CY3标记的MYCNsiRNA转染LA-N-5细胞,以每微克蛋白中荧光强度半定量siRNA的转染效果;用定量RT-PCR检测转染前后MYCN基因mRNA变化;MTT法检测细胞增殖受抑情况：结果以100nmol／L终浓度转染LA—N-5细胞后每微克蛋白含siRNA（1808．5±140．2）pg,作用72hMYCN基因mRNA表达显著下降,抑制率79．2％,瘤细胞增殖受抑达66．2％。结论叶酸受体为靶向脂质体介导MYCNsiRNA在体外对LA—N-5细胞MYCNmRNA表达有显著抑制作用,明显抑制LA—N-5细胞增殖,为神经母细胞瘤靶向治疗、基因治疗开辟了新的思路。     

miR-221对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y裸鼠移植瘤生长的影响

目的 研究高表达miR-221对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的分子机制.方法 将18只裸鼠按照随机区组法分成3组:SH-SY5Y组(空白对照组)、miR-221-up组(实验组)和miRNA-NC组(阴性对照组),分别接种SH-SY5Y细胞、稳定转染miR-221的SH-SYSY-miR-221细胞及稳定转染对照质粒的SH-SY5 Y-miRNA-NC细胞,观察裸鼠体内成瘤及生长情况,30 d后处死取瘤体测量肿瘤体积、质量;qRT-PCR检测各组肿瘤组织中miR-221和MYCN mRNA水平的表达;Western blot和免疫组织化学法检测肿瘤组织中MYCN蛋白的表达水平.结果 与SH-SY5Y组相比,miR-221-up组裸鼠的瘤体体积和质量明显增加(P＜0.01),miRNA-NC组无统计学差异(P＞0.05);与SH-SY5Y组相比,miR-221-up组中miR-221、MYCN mRNA以及MYCN蛋白的表达明显升高(P＜0.01),而miRNA-NC组与SH-SY5Y组相比无统计学差异(P＞0.05).结论 miR-221可能通过上调MYCN的表达,促进SH-SY5Y细胞在裸鼠体内的生长.     

Bmi-1基因沉默对人视网膜母细胞瘤SO-RB50细胞生长的体外抑制作用

[目的] 探讨体外沉默Bmi-1基因对人视网膜母细胞瘤SO-RB50瘤细胞增殖和凋亡的影响。[方法] 免疫组织化学和RT-PCR分别检测Bmi-1基因在人视网膜母细胞瘤瘤组织和SO-RB50瘤细胞中表达。体外化学合成法合成靶向Bmi-1基因的siRNA双链转染培养的人SO-RB50瘤细胞。荧光定量RT-PCR和western-blot分别检测转染Bmi-1 siRNA后的人SO-RB50瘤细胞中Bmi-1 mRNA和蛋白水平的变化。MTT法测定Bmi-1基因干扰后SO-RB50瘤细胞增殖情况。流式细胞仪检测Bmi-1 siRNA对人SO-RB50瘤细胞凋亡的影响。[结果] 免疫组化和RT-PCR显示Bmi-1基因在人视网膜母细胞瘤瘤组织和SO-RB50瘤细胞中表达。人SO-RB50瘤细胞经Bmi-1沉默处理后,与阴性对照组相比,Bmi-1在mRNA和蛋白水平抑制率分别为（83.9±3.2）%和（82.8±1.1）%。MTT结果显示干扰组细胞在第3天增殖抑制作用最明显,抑制率达（52.5±1.9）%。干扰组人SO-RB50瘤细胞凋亡率为（20.67±1.1）%,阴性组细胞凋亡率为（1.9±0.2）%,两者有统计学差异。[结论] Bmi-1特异性siRNA能显著抑制人SO-RB50瘤细胞 Bmi-1基因的表达,抑制细胞生长,可能通过促进瘤细胞凋亡而起作用,Bmi-1基因可能为RB治疗的新靶点。     

应用小干扰RNA技术阻断VEGF-C基因体内抑制乳癌细胞增殖

目的 应用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)阻断裸鼠乳癌移植瘤中血管内皮生长因子C(VEGF-C)基因, 探讨其对人乳癌MCF-7裸鼠移植瘤生长的影响.方法 于雌裸鼠皮下种植MCF-7细胞,将成瘤阳性的裸鼠随机分为VEGF-C siRNA处理组、脂质体组和对照组,每组5只.VEGF-C siRNA处理组肿瘤局部注射VEGF-C siRNA 1 mg/kg和PEITM,脂质体组肿瘤局部注射PEITM和PBS,对照组仅注射PBS,每3 d注射1次,连续注射8次.22 d后拉颈处死全部动物, 取肿瘤,采用半定量 RT-PCR 分析VEGF-C mRNA水平,Western blotting检测VEGF-C蛋白表达水平.结果 VEGF-C siRNA处理组瘤组织的增长受到明显抑制,VEGF-C基因的mRNA和蛋白表达水平显著降低(F=73.64～197.15,q=8.74～25.56,P＜0.05).对照组各指标无显著变化.结论 化学修饰的siRNA介导的RNAi在体内能成功下调人乳癌裸鼠移植瘤中VEGF-C基因的表达, 抑制肿瘤的生长,是潜在的肿瘤基因治疗新方法.     

131I-VEGF siRNA/SPIO在人肝细胞癌移植瘤裸鼠体内的血液清除动力学及生物分布

目的研究在外加磁场作用下¹³¹I-VEGF siRNA/SPIO在人肝细胞癌移植瘤裸鼠体内的血液清除动力学及生物分布特性。方法以Bolton-Hunter法使VEGF siRNA标记上¹³¹I,以氧化铁超顺磁性纳米颗粒（superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIO）包裹¹³¹I-VEGF siRNA。以人肝细胞癌细胞株Hep G2细胞悬液臀部皮下注射建立人肝细胞癌移植瘤裸鼠模型。45只人肝细胞癌移植瘤裸鼠随机分成外加磁场组（尾静脉注射¹³¹I-VEGF siRNA/SPIO+肿瘤部位外加磁场）、非外加磁场组（尾静脉注射¹³¹I-VEGF siRNA/SPIO+肿瘤部位无外加磁场）及对照组（尾静脉注射¹³¹I-VEGF siRNA+肿瘤部位无外加磁场）。然后进行：（1）血液清除动力学研究：三组人肝细胞癌移植瘤裸鼠（每组5只）尾静脉给药后,分别于0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、3.0 h、4.0 h、6.0 h、8.0 h、10.0 h、12.0 h时间点尾静脉采血20 μL,测量血样每分钟放射性计数(counts per minute,cpm)值并绘制放射性-时间曲线,计算血液半衰期;（2）体内生物分布研究：三组人肝细胞癌移植瘤裸鼠尾静脉给药1 h后进行SPECT显像（每组5只）及MRI显像（每组5只）,SPECT及MRI显像完毕,依次摘取移植瘤裸鼠肿瘤、皮肤、肌肉、骨、甲状腺、胃、小肠、大肠、肺、脾、性腺、肝、心、肾、膀胱等脏器称重并测量cpm值,然后计算各离体组织的%ID/g[即组织的放射性比活度 (cpm/g) / 注入标记物的放射性比活度 (cpm/g)]。结果本研究分别以薄层层析硅胶板为载体、1∶1丙酮-生理盐水为展开剂和以新华一号滤纸为载体、1∶1甲醇-5%醋酸铵为展开剂测定¹³¹I标记VEGF siRNA的放化纯分别为81.15%和84.05%。外加磁场组、非外加磁场组及对照组移植瘤裸鼠的血液半衰期分别约为（2.27±0.14） h、（2.93±0.20） h和（3.06±0.23） h,外加磁场组半衰期小于其它两组（差异有统计学意义,P<0.01）。SPECT显像显示外加磁场组肿瘤局部明显放射性增浓,非外加磁场组及对照组肿瘤局部未见明显放射性增浓;尾静脉给药前后MRI T1WI显示外加磁场组肿瘤局部信号明显强化,非外加磁场组及对照组肿瘤局部信号未见明显强化;外加磁场组肿瘤组织的%ID/g分布较非外加磁场组及对照组的均明显增高（P<0.01）。结论在外加磁场的作用下,以SPIO作为siRNA载体能够较成功地将¹³¹I-VEGF siRNA转导至人肝细胞癌移植瘤裸鼠臀部皮下的肿瘤部位,对进一步研究肝细胞癌的VEGF靶向治疗、基因治疗以及示踪体内基因转导均有重要的意义。     

靶向PEGl0的siRNA真核表达载体对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响

目的探讨靶向PEGl0的siRNA真核表达载体（psiRNA—PEGl0）对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响。方法建立人肝癌细胞HepG2的荷瘤裸鼠模型，在接种后第14天分别将psiRNA空载体和psilk—NA-PEGl0瘤内多点注射进行治疗，观察肿瘤大小变化、组织形态学及超微病理改变。结果psiRNA—PEGl0治疗组肿瘤生长受到明显抑制，与生理盐水组和psiRNA组比较差异有显著性（P〈0．001），抑瘤率明显高于其他两组．电镜下可见明显的细胞凋亡。结论靶向PEGl0的siRNA真核表达载体对裸鼠肝癌移植瘤生长有抑制作用。     

Rb94联合放疗对裸鼠肺腺癌皮下移植瘤的抑制作用

目的  观察人视网膜母细胞瘤基因（Rb94）对裸鼠肺腺癌皮下移植瘤的放射增敏作用及其机制。方法  将40只裸鼠分别皮下接种5×106个A549细胞,当肿瘤长至180mm3时随机分为8组,每组5只,即空白对照组、空白对照+射线组、脂质体组、脂质体+射线组、空载体组、空载体+射线组,每两组分别于肿瘤内注射PBS、脂质体、pIRES。另有转染Rb94基因组、转染Rb94基因+射线组,分别注射pIRES-Rb94。空白对照+射线组、脂质体+射线组、空载体+射线组、转染Rb94基因+射线组裸鼠瘤体内注射后加照一定剂量X线。观察肿瘤生长情况并计算抑瘤率,采用实时RT-PCR和Western bolt法检测瘤组织中Rb94基因的表达,Hoechst染色观察细胞凋亡情况,实时RT-PCR检测hTERT、Bcl-2mRNA的表达,免疫组织化学SP法检测细胞周期阻滞。结果  转染Rb94基因+射线组抑瘤率为95.84%,与转染Rb94基因组和空白对照+射线组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论  Rb94基因对裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用,联合射线抑瘤效果更好,其作用机制可能与Rb94基因引起细胞凋亡、G2/M期周期阻滞以及下调hTERT、Bcl 2 mRNA的表达有关。     

Apoptin对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用研究

目的探讨Apoptin质粒对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用。方法皮下注射T24细胞,建立裸鼠移植瘤模型,于肿瘤直径0.5cm大小时,多点注射脂质体包裹质粒pApoptin-EGFP,设立空质粒组、生理盐水组作为对照组,观察裸鼠肿瘤生长情况;5周后处死,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,肿瘤组织石蜡包埋,常规切片,TUNEL法检测移植瘤凋亡情况。结果成功建立移植瘤模型,注射脂质体包裹pApoptin-EGFP质粒能明显抑制移植瘤生长;TUNEL检测凋亡率为(23.24±6.12)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Apoptin通过诱导凋亡能明显抑制人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤生长。     

肝素酶特异性RNAi对人食管癌移植瘤组织中Hpa基因表达的影响

目的:应用RNAi技术沉默肝素酶(heparanase,Hpa)基因,探讨其对人食管癌裸鼠移植瘤组织中Hpa基因表达的影响.方法:①先转染后成瘤:采用浓度为15 μmol/L体外合成的Hpa小分子干扰RNA(siRNA)转染EC9706细胞72 h,另设无关序列组及空白对照组.然后将转染后的EC9706细胞种植于裸鼠皮下构建裸鼠食管癌移植瘤,待瘤体长至足够大时,取瘤组织;②先成瘤后转染:构建裸鼠食管癌移植瘤模型,待肿瘤长出1周后,依每次3 μg/只腹腔注射siRNA及无关序列,连续3 d,另1组仅注射PBS作空白对照,然后取瘤组织.采用免疫组化及原位杂交技术观察各组瘤组织中肝素酶蛋白及mRNA的表达.结果:无论是先转染后成瘤组还是先成瘤后转染组siRNA均可下调裸鼠食管癌移植瘤组织中Hpa蛋白及mRNA的表达,与无关序列组及空白对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:应用RNAi技术沉默Hpa基因可以有效下调裸鼠食管癌移植瘤组织中Hpa蛋白及mRNA的表达,为临床防治食管癌浸润转移奠定了一定的理论基础.     

β1整合素反义寡核苷酸联合顺铂治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的研究

目的：探讨以β1整合素反义寡核苷酸（ASODN）治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的可行性.方法：常规体外培养SKOV3细胞,采用皮下注射法建立移植瘤裸鼠动物模型.32只荷瘤鼠随机分为ASODN组（A组）、ASODN联合顺铂（DDP）组（A＋D组）、DDP组和0.9％氯化钠注射液对照组（NS组）,每组8只,分组给药.以脂质体包裹的β1整合素ASODN直接移植瘤内注射,观察肿瘤生长情况,测瘤体积并计算抑瘤率.采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法分别检测β1整合素mRNA的表达.结果：A组肿瘤体积和抑瘤率分别为（316.10 ±21.77） mm3和48.15％,与NS组比较抑瘤率较高,肿瘤生长缓慢（P＜0.01）.而A＋D组肿瘤体积和抑瘤率分别为（178.70±40.67） mm3和70.37％,与DDP组、A组及NS组差异均有统计学意义（P ＜0.05 ～P＜0.01）.RT-PCR和免疫组织化学检测,A组和A＋D组肿瘤组织中β1整合素mRNA的表达均明显下调（P＜0.01）.结论：单用β1整合素ASDON或联用DDP均可有效抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织的生长,可能与其特异性下调β1整合素基因表达有关.特异性靶向β1整合素ASODN可用于卵巢癌的辅助治疗.     

人血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠骨髓基质细胞的实验研究

目的探讨对大鼠骨髓基质细胞进行重组人血管内皮细胞生长因子(VEGF)165基因修饰的可行性。方法采用全骨髓细胞贴壁培养法获得稳定的大鼠骨髓基质细胞,分别在脂质体LipofectamineTM2000和新型的阳离子聚合物Sofast介导下行pcDNA3.1-VEGF165转染骨髓基质细胞,在倒置显微镜下观察转染后细胞形态和生长情况的变化,通过免疫细胞化学鉴定VEGF在细胞中的表达情况。结果脂质体LipofectaminTM和新型阳离子聚合物Sofast介导转染的阳性细胞率分别为11.34%和11.42%,两者无明显差异。而细胞存活率分别为74.60%和85.88%,后者稍高于前者(P<0.05)。结论真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165可以成功地在骨髓基质细胞中表达,新型阳离子聚合物Sofast的转染效率与传统的脂质体无明显差异,而细胞毒性略小于传统的脂质体。     

靶向ST6Gal Ⅰ的siRNA与ASO联合应用对宫颈癌细胞转移能力的影响

目的 探讨人α2,6-唾液酸转移酶(ST6Gal Ⅰ)小分子干扰RNA(siRNA)及其与反义寡核苷酸(ASO)联合应用对ST6Gal Ⅰ高表达的宫颈癌HeLa细胞的粘附和侵袭力的影响.方法 设计并合成靶向ST6Gal Ⅰ的siRNA及ASO,用脂质体Lipofectamine 2000包裹后转染HeLa细胞.实验分为空白对照组、脂质体对照组、siRNA组、ASO1组(与siRNA相同靶点)、ASO2组(与siRNA不同靶点)、siRNA ASO1组及siRNA ASO2组,用RT-PCR测定细胞中ST6Gal Ⅰ mRNA水平,流式细胞仪检测细胞表面α2,6-唾液酸含量,分别用CytoMatrixTM细胞粘附试剂盒及细胞侵袭分析试剂盒,检测细胞对细胞外基质(ECM)的粘附与侵袭力.结果 转染后各实验组细胞的ST6Gal Ⅰ mRNA表达水平、细胞表面α2,6-唾液酸含量及细胞对ECM的粘附与侵袭力均低于空白对照组及脂质体对照组(P均＜0.05),以siRNA ASO2组调低作用最明显.其中siRNA组细胞的ST6Gal Ⅰ mRNA表达水平(0.55±0.08)、细胞表面α2,6-唾液酸含量(39.27±9.23)分别与siRNA ASO1组(0.54±0.09、38.27±7.74)比较,差异均无统计学意义,与siRNA ASO2组(0.33±0.09、9.10±0.40)比较,差异有统计学意义(P均＜0.05);siRNA组与siRNA ASO1组比较,细胞对ECM的粘附与侵袭力差异均无统计学意义,而siRNA ASO2组细胞对ECM的粘附与侵袭力较siRNA组降低(P均＜0.05).结论 化学合成的靶向ST6Gal Ⅰ的siRNA能够下调HeLa细胞中ST6Gal Ⅰ基因的表达,继而降低细胞对ECM的粘附和侵袭力,并且与不同靶点的ASO联合应用具有相加和协同效应.     

靶向ST6GalⅠ的siRNA与反义寡核苷酸联合应用对结肠癌细胞转移能力的影响

目的 探讨人α2,6-唾液酸转移酶(ST6Gal Ⅰ)小分子干扰RNA(siRNA)及其与相同或不同靶点的反义寡核苷酸(ASO)联合应用,对ST6GalⅠ高表达的结肠癌SW480细胞的粘附和侵袭力的影响.方法 设计并合成靶向ST6GalⅠ的siRNA及ASO,用脂质体Lipofectamine 2000包裹后转染SW480细胞.实验分为空白对照组、脂质体对照组、siRNA组、ASO1组(与siRNA不同靶点)、ASO2组(与siRNA相同靶点)、siRNA ASO1组及siRNA ASO2组,应用RT-PCR测定细胞中ST6GalⅠ Mrna水平,流式细胞术检测细胞表面α2,6-唾液酸含量,分别用CytoMatrixTM细胞粘附试剂盒及细胞侵袭分析试剂盒,检测细胞对细胞外基质的粘附与侵袭力.结果 siRNA组、ASO1组、ASO2组、siRNA ASO1组、siRNA ASO2组中,SW480细胞的ST6GalⅠ Mrna表达水平、细胞表面α2,6-唾液酸含量及细胞对ECM的粘附与侵袭力均明显低于空白对照组、脂质体对照组(P＜0.05),以siRNA ASO1组最明显,且siRNA ASO1组与siRNA组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而siRNA ASO2组与siRNA组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 化学合成的靶向ST6GalⅠ的siRNA能够下调SW480细胞中ST6GalⅠ基因的表达,继而降低细胞对ECM的粘附和侵袭力,并且与不同靶点的ASO联合应用具有相加和协同效应.     

siRNA对骨肉瘤细胞MDM2的表达及细胞增殖的抑制作用

目的: 研究siRNA对人骨肉瘤U20S细胞MDM2基因表达及肿瘤细胞增殖的抑制作用。 方法: 构建可表达针对MDM2的siRNA质粒(PGCsilencer^TM-MDM2-siRNA)。转染siRNA MDM2(简称siMDM2),阴性对照质粒到U20S,并设只加转染试剂作空白对照组,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting法检测siMDM2对MDM2基因和蛋白表达的抑制作用,并用MTT法检测siMDM2对细胞增殖的抑制作用。 结果: RT-PCR结果显示,转染siMDM2-1和 -2组MDM2的mRNA表达量分别下调到空白对照组的32.61%和39.06%;Western blotting结果显示,转染siMDM2-1和 -2组蛋白表达量下调到空白对照组的35.76%和42.20%;转染阴性对照质粒的MDM2基因和蛋白与转染试剂组比较差异均无显著性(P>0.05)。MTT结果显示,转染siMDM2后细胞生长受到明显抑制,与转染试剂组比较差异具有显著性(P<0.05),阴性对照组抑制率与转染试剂组比较差异无显著性(P>0.05)。结论：siRNA可以有效地抑制U20S细胞中MDM2的表达,并抑制细胞增殖。     

VEGF真核表达载体构建及其转染骨髓间充质干细胞的表达

目的 构建大鼠血管内皮细胞生长因子164（vascular endothelial growth factor,VEGF164）真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF164,观察大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)转染pcDNA3.1(-)/VEGF164基因后,外源性基因VEGF在蛋白水平的表达,为其在治疗肺组织损伤中的应用奠定基础。方法 应用DNA重组技术构建VEGF164真核表达载体并鉴定。采用脂质体介导的转染方法将pcDNA3.1(-)/VEGF164转染大鼠MSCs,并设立空质粒对照组（转染pcDNA3.1空载体）、脂质体对照组,用细胞免疫组化和Western blot检测大鼠MSCs 中VEGF164蛋白的表达情况。结果 重组质粒pcDNA3.1(-)/VEGF164测序结果与基因库(GENEBANK)中序列一致。细胞免疫组化检测显示pcDNA3.1(-)/VEGF164转染组MSCs中可见散在黄色颗粒,而空质粒对照组和脂质体对照组均未见明显黄色颗粒出现。Western blot检测pcDNA3.1(-)/VEGF164转染MSCs 72h后, 细胞裂解产物中VEGF含量明显高于空质粒对照组和脂质体对照组。结论 成功构建了大鼠VEGF164真核表达载体,实现VEGF164基因在大鼠MSCs的成功转染,并有外源性基因及蛋白的表达,具有促进肺组织损伤修复的应用前景。     

VEGF真核表达载体构建及其转染骨髓间充质干细胞并鉴定

目的 构建大鼠血管内皮细胞生长因子164（vascular endothelial growth factor,VEGF164）真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF164,观察大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)转染pcDNA3.1(-)/VEGF164基因后,外源性基因VEGF在蛋白水平的表达,为其在治疗肺组织损伤中的应用奠定基础。方法 应用DNA重组技术构建VEGF164真核表达载体并鉴定。采用脂质体介导的转染方法将pcDNA3.1(-)/VEGF164转染大鼠MSCs,并设立空质粒对照组（转染pcDNA3.1空载体）、脂质体对照组,用细胞免疫组化和Western blot检测大鼠MSCs 中VEGF164蛋白的表达情况。结果 重组质粒pcDNA3.1(-)/VEGF164测序结果与基因库(GENEBANK)中序列一致。细胞免疫组化检测显示pcDNA3.1(-)/VEGF164转染组MSCs中可见散在黄色颗粒,而空质粒对照组和脂质体对照组均未见明显黄色颗粒出现。Western blot检测pcDNA3.1(-)/VEGF164转染MSCs 72h后, 细胞裂解产物中VEGF含量明显高于空质粒对照组和脂质体对照组。结论 成功构建了大鼠VEGF164真核表达载体,实现VEGF164基因在大鼠MSCs的成功转染,并有外源性基因及蛋白的表达,具有促进肺组织损伤修复的应用前景。     

ORC1基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascu lar smooth musc le cells,VSMCs)ORC1基因,探讨ORC1基因表达抑制后VSMCs增殖的变化。方法实验设置正常对照组、阴性siRNA组及阳性(ORC1 A、ORC1 B、ORC1 C)siR-NA组。应用W estern b lot检测ORC1基因表达的变化;应用MTT比色试验、3H-TdR掺入试验检测VSMCs增殖的情况。免疫细胞化学染色观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuc lear antigen,PCNA)表达。结果①siRNA转染后,3个阳性siRNA转染组ORC1基因表达水平均降低,尤以第2对阳性siRNA抑制效果最为显著,而空白对照组及阴性对照组间ORC1基因表达水平无显著差异。②siRNA转染使ORC1表达减弱后,VSMCs的MTT吸光度值3、H-TdR掺入量和PCNA表达量均较空白对照组及阴性对照组显著降低。结论RNA干扰介导的ORC1基因沉寂可显著抑制VSMCs增殖。     

通过血象变化判断神经母细胞瘤患者骨髓累及情况

目的 神经母细胞瘤患者多为10岁以下儿童,而且骨髓累及率非常高。目前骨髓穿刺或者活检为确诊神经母细胞瘤累及比较有效的方法。但是这两种方法创伤、疼痛偏大,患儿多不配合检查,临床常出现患儿不配合造成骨髓稀释,降低检出率等情况,因此迫切需要一种简单的费用较低的创伤偏低的方法评估或者预测骨髓的肿瘤情况。本研究通过观察神经母细胞瘤骨髓侵犯对外周血象的变化情况,从而指导临床上通过血象变化预测神经母细胞瘤患者骨髓侵犯情况。方法 检测神经母细胞瘤患者未侵犯组、早期侵犯组、中期侵犯组和晚期侵犯组的血象,并相互对比研究及绘制ROC曲线以评价其诊断价值。结果 与神经母细胞瘤骨髓未侵犯组比较,早期侵犯组三系均无明显改变（P>0.05）,中期侵犯组红细胞计数、血红蛋白及血小板计数降低,晚期侵犯组三系均降低（P<0.05）。早期侵犯组白细胞计数和红细胞计数减少、贫血及血小板计数升高发生率与未侵犯组比较差异均无统计学意义（P>0.05）,中晚期各系变化与未侵犯组比较差异均有统计学意义（P<0.05）,发生率有所增加。红细胞计数对神经母细胞瘤中晚期骨髓侵犯的诊断敏感度为90%,特异性为70%,ROC曲线下面积为0.855。结论 神经母细胞瘤早期骨髓侵犯对骨髓无明显抑制作用,中晚期侵犯造成骨髓抑制作用。中期侵犯主要抑制红系和血小板两系,晚期侵犯对骨髓抑制作用使三系均受到抑制。未侵犯组及早期侵犯组的血象特点主要是白细胞计数减少,血小板计数升高及轻中度贫血。中晚期白细胞计数和红细胞计数减少,多见中重度贫血,血小板计数多在正常范围。红细胞计数对神经母细胞瘤中晚期骨髓侵犯具有诊断价值。     

RNA干扰HER2/neu对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响

目的研究靶向HER2/neu基因的siRNA对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响。方法化学合成的靶向HER2/neu基因siRNA在脂质体的介导下转染BIU-87细胞,实验分为HER2/neu siRNA组、空脂质体组、阴性siRNA序列组,以未转染BIU-87细胞为空白对照组。利用CCK-8法评价HER2/neu基因siRNA对BIU-87细胞体外生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测转染前后细胞中HER2/neu mRNA和蛋白表达水平的变化。结果转染HER2/neu siRNA后BIU-87细胞的存活率显著下降,从(82.37±0.90)%降低到(56.76±1.70)%,差异有统计学意义(P<0.05);同时能诱导细胞凋亡,HER2/neu siRNA组凋亡率达(45.60±0.70)%,与空白对照组、空脂质体组、阴性siRNA序列组比较差异有统计学意义(P<0.05);靶向HER2/neu基因siRNA能显著降低BIU-87细胞中HER2/neu mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论化学合成的靶向HER2/neu基因siRNA能有效抑制HER2/neu基因在BIU-87细胞中的表达,进而能有效抑制BIU-87细胞的增殖和诱导凋亡的作用。