乌鸡白凤丸对Aβ1-40诱导的大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的研究乌鸡白凤丸（BFP）对,β-淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）诱导体外培养大鼠海马神经元凋亡的保护作用以及可能的作用机制。方法体外培养新生Wistar大鼠海马神经元,MTT法检测不同浓度Aβ1-40m的细胞毒作用,选择出现显著细胞毒性的剂量为使用剂量。同时给予BFP（100mg／L）干预。用原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡情况,用半定量RT-PCR技术检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3基因mRNA的表达水平。结果10μmol／L Aβ1-40。与海马神经元共孵育24h有明显的细胞毒作用,并可诱导神经元凋亡,加入BFP干预后凋亡指数降低。Aβ1-40可使bcl-2基因表达下调,bax基因表达上调,caspase-3基因的表达增强。加入BFP干预后,部分拮抗了Aβ1-40。诱导的bcl-2基因的表达变化,从而使caspase-3基因的表达降低。结论BFP可通过调控bcl-2／bax的比值、降低caspase-3基因mRNA的表达来阻断Aβ1-40所诱导的海马神经元凋亡,具有神经保护作用。     

原儿茶酸对Aβ1-42寡聚体诱导AD海马神经元的保护作用

目的：应用Aβ1-42寡聚体诱导SD胎鼠海马神经元制备细胞损伤模型,观察海南益智仁提取物-原儿茶酸(PCA)对模型细胞的保护作用。方法采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blot)检测ERK蛋白,观察原儿茶酸对模型细胞的保护作用。结果 Aβ1-42寡聚体干预SD胎鼠海马神经元后,神经元生存率下降,神经元凋亡率升高,ERK蛋白表达下调。添加原儿茶酸后,模型细胞存活率改善明显、凋亡率显著性降低,且呈现浓度依赖性,并且ERK蛋白表达上调。结论原儿茶酸可拮抗Aβ1-42寡聚体所诱导的海马神经元损伤,具有神经保护作用。     

鹿茸多肽联合GDNF基因修饰的雪旺细胞对Aβ25-35诱导脊髓神经元凋亡的保护作用

目的：探讨鹿茸多肽（VAP）联合胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因修饰的雪旺细胞（SCs）对β淀粉样蛋白25-35（Aβ_25-35）诱导的脊髓神经元凋亡的保护作用,阐明其作用机制。方法：制备胎鼠脊髓细胞,取对数生长期的脊髓神经元,采用Aβ_25-35诱导脊髓神经元凋亡,将脊髓神经元分为正常细胞组（正常脊髓神经元）、诱导凋亡组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元）、SCs组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+SCs）、GDNF组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF）、SCs+GDNF组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF转染的SCs）和VAP联合组（Aβ_25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+VAP联合GDNF转染的SCs）。流式细胞术检测各组脊髓神经元凋亡率,免疫组织化学染色检测各组脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数。结果：胎鼠脊髓神经元悬液接种后初始脊髓神经元大多为圆形。流式细胞术检测,与诱导凋亡组比较,SCs组、GDNF组、SCs+GDNF组和VAP联合组脊髓神经元凋亡率降低（P<0.05）;与SCs+GDNF组比较,VAP联合组脊髓神经元凋亡率明显降低（P<0.05）。免疫组织化学检测,各组脊髓神经元中均有caspase-3表达,SCs组、GDNF组和SCs+GDNF组细胞着色差异不明显,脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数差异不大,但与诱导凋亡组比较明显减少（P<0.05）。结论：VAP联合GDNF转染的SCs对脊髓神经元凋亡有保护作用,该作用通过下调脊髓神经元中caspase-3表达来实现。     

丁苯酞拮抗Aβ1-42致原代培养皮层神经元凋亡的保护机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)对Aβ1-42致原代培养皮层神经元凋亡线粒体的保护作用及其机制.方法 用0.1、1、10 μmol/L NBP预处理4h,Aβ1-42 10 μmoVL作用24h后,用MTT比色法检测细胞存活率,分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,免疫荧光法染色观察细胞形态、计算凋亡细胞比率,Western blot定量检测Bcl-2、Bax、Capsase-3、Cleaved caspase-3、Cytc等线粒体凋亡途径相关蛋白的表达水平.结果 Aβ1-42作用24h后细胞存活率显著下降,神经元凋亡率显著增加,MDA含量和LDH活性明显增高,SOD活性下降,Bax、Capsase-3、Cleaved easpase-3、胞浆中Cytc表达增加、Bcl-2和线粒体内Cytc表达下降(P＜0.05).NBP预处理可以使细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,MDA含量和LDH活性下降、SOD活性增高(P＜0.05),NBP预处理可以拮抗Aβ1-42引起的Bax、Capsase-3、Cleaved caspase-3、胞浆中Cytc表达增加、Bcl-2和线粒体内Cytc表达下降(P＜0.05).结论 NBP可以减少Aβ1-42引起氧化损伤,通过线粒体凋亡途径抑制神经元凋亡.     

人参皂苷对Aβ25-35蛋白诱导的老年性痴呆体外模型NG108-15神经元细胞凋亡的抑制作用

【目的】探讨在以NG108-15细胞作为神经元代表、β-淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默病体外细胞模型中,人参皂苷Rg1保护神经元的作用及其机制。【方法】采用倒置显微镜观察细胞形态,结合流式细胞仪检测凋亡率,进行Aβ25-35造模浓度与时间的选择以及Rg1预处理最佳浓度时间的选择;在此基础上,采用荧光显微镜和数据处理系统(DMR)图像分析仪检测免疫细胞化学法标记的核因子-κB(NF-κB)的活性;采用免疫组化染色法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达;采用酶标光度计、半胱氨酸/天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)比色检测试剂盒检测caspase-3活性。【结果】20μmol/L Aβ25-35作用24 h可诱导NG108-15细胞凋亡,2μmol/L Rg1组的NF-κB活性与模型组比较显著性提高(P<0.01),Rg1预处理组Bcl-2表达呈阳性,且caspase-3活性较模型组显著性降低(P<0.01)。【结论】高浓度聚焦状的Aβ25-35可下调神经元内NF-κB的活性,诱导细胞凋亡,Rg1通过启动神经元中NF-κB的活化从而上调Bcl-2表达,抑制caspase-3活性而发挥保护神经元的作用。     

鹿茸多肽对β-淀粉样蛋白诱导脊髓神经元细胞凋亡的保护作用

[目的]探讨鹿茸多肽对β-淀粉样蛋白诱导脊髓神经元细胞凋亡的保护作用。[方法]体外进行胎鼠脊髓神经元细胞培养传代,细胞进入对数生长期后进行实验。MTT比色法检测不同浓度β-淀粉样蛋白作用24h后细胞活力变化;检测25μmol／L β-淀粉样蛋白作用24h后,细胞凋亡百分数和观察细胞caspase-3表达情况。[结果]不同浓度的β-淀粉样蛋白作用24h后对细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性（P〈0．05）;鹿茸多肽可明显抑制β-淀粉样蛋白诱导的脊髓神经元细胞凋亡现象（P〈0．05）,且可使caspase-3的表达量下降。[结论]鹿茸多肽通过抑制β-淀粉样蛋白诱导脊髓神经元细胞caspase-3表达增高而对其细胞凋亡发挥保护作用,本实验为探索新的治疗脊髓神经损伤的药物提供了重要的理论基础。     

贯叶连翘衍生物GF1029对Aβ1-42诱导原代大鼠皮层细胞凋亡的保护作用

目的探讨贯叶连翘衍生物GF1029对经Aβ1-42诱导的大鼠原代培养皮层细胞凋亡的保护作用。方法采用老化的Aβ1-42处理大鼠原代培养皮层细胞12 h,用电镜观察细胞的形态变化,MTT法观察细胞活力变化,用荧光实时定量RT-PCR、Western-blot检测细胞中Bcl-2,Bax mRNA和蛋白的水平及GF1029预处理后这些指标的变化。结果老化的Aβ1-42处理可诱导大鼠皮层神经元凋亡,使神经细胞活力下降,降低Bcl-2 mRNA及蛋白表达,增加Bax mRNA及蛋白表达;而经40、80μmol/L的GF1029预处理2 h后,神经细胞活力增加,Bcl-2 mRNA及蛋白表达增加,Bax mRNA及蛋白表达减少。结论贯叶连翘衍生物GF1029对Aβ1-42诱导的大鼠原代皮层神经细胞凋亡有保护作用,其机制可能与Bcl-2表达增加、Bax表达下调有关。     

吡格列酮对Aβ1-42引起大鼠海马神经细胞凋亡caspase-3 表达的影响

目的 研究吡格列酮对Aβ1-42所致大鼠海马神经细胞凋亡基因caspase-3蛋白表达的影响.方法 大鼠脑室内一次性注射Aβ1-42制备AD动物模型,通过Western Blot方法检测caspase-3蛋白表达量的变化.结果 与正常对照组比较,caspase-3蛋白在Aβ1-42模型组的表达明显增多,(P＜0.05),吡格列酮组(20mg·kg-1,40mg·kg-1,80 mg·kg-1)的easpase-3蛋白表达比模型组明显减少(P＜0.05);吡格列酮40 mg·kg-1治疗组的caspase-3蛋白表达量要少于20、80 mg·kg-1剂量组.结论 吡格列酮可以明显的抑制Aβ1-42引起的海马神经细胞凋亡.     

注射Aβ25-35后大鼠海马超微结构及caspase-3表达的改变

目的探讨大鼠双侧海马注射Aβ25-35后海马组织形态、超微结构及caspase-3表达的改变.方法采用Aβ25-35双侧海马注射的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型,光镜及透射电镜观察海马组织结构,免疫组化法观察caspase-3蛋白的表达.结果苏木素伊红(HE)染色显示,模型组大鼠海马CA1-CA4区及齿状回神经元数量较对照组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩;透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强;海马区Caspase-3蛋白的表达明显增加.结论Aβ25-35可在体内诱导大鼠海马神经元凋亡.     

注射Aβ25-35后大鼠海马超微结构及caspase-3表达的改变

目的：探讨大鼠双侧海马注射Aβ25-35后海马组织形态、超微结构及caspase-3表达的改变.方法：采用Aβ25-35双侧海马注射的阿尔茨海默病（AD）大鼠模型,光镜及透射电镜观察海马组织结构,免疫组化法观察caspase-3蛋白的表达.结果：苏木素伊红（HE）染色显示,模型组大鼠海马CA1-CA4区及齿状回神经元数量较对照组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩;透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强;海马区Caspase-3蛋白的表达明显增加.结论：Aβ25-35可在体内诱导大鼠海马神经元凋亡.     

慢性地塞米松对海马神经元损伤及NLRP-1炎症小体激活的影响

目的:研究慢性地塞米松(dexamethasone,DEX)对海马神经元NLRP-1炎症小体激活的影响及在慢性GCs诱导海马神经元损伤中的作用。方法:原代培养海马神经元到第5天,随机分成6组:对照组,DEX(0.1、1.0、5.0μmol·L~(-1))组,RU486(5.0μmol·L~(-1))组和DEX(5.0μmol·L~(-1))+RU486(5.0μmol·L~(-1))组。乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测海马神经元细胞损伤情况;Hoechst 33258染色测定海马神经元凋亡情况;Western blot检测NLRP-1、ASC、Caspase-1、IL~(-1)β的蛋白表达变化;ELISA检测细胞上清液中IL~(-1)β、IL~(-1)8的含量变化;Q-PCR检测NLRP-1、ASC、Caspase-1、IL~(-1)β的m RNA表达变化情况。结果:与对照组比较,DEX 1.0、5.0μmol·L~(-1)处理3 d能明显增加细胞上清液中LDH的含量和凋亡。免疫荧光结果显示,与对照组比较,DEX 1.0μmol·L~(-1)和5.0μmol·L~(-1)处理5 d海马神经元MAP2的表达明显降低;DEX 0.1,1.0和5.0μmol·L~(-1)处理3 d能明显减少海马神经元GR的表达。Western blot结果表明,与对照组比较,DEX 0.1,1.0和5.0μmol·L~(-1)处理3 d能明显减少海马神经元GR的表达以及明显增加NLRP-1和ASC的表达;DEX 0.1μmol·L~(-1)处理3 d能明显减少海马神经元caspase-1和IL~(-1)β的表达,DEX 5.0μmol·L~(-1)处理3 d的海马神经元caspase-1和IL~(-1)β表达明显增加;DEX 1.0μmol·L~(-1)和5.0μmol·L~(-1)处理3 d可明显下调海马神经元NF-κB的表达;与DEX 5.0μmol·L~(-1)组比较,RU486能明显抑制DEX诱导的海马神经元caspase-1和IL~(-1)β表达增高。ELISA结果表明,与对照组比较,DEX 1.0和5.0μmol·L~(-1)处理3 d能明显增加海马神经元细胞上清液中IL~(-1)β和IL~(-1)8的含量,而RU486能明显减少IL~(-1)β和IL~(-1)8的释放。结论:慢性DEX暴露可能通过下调海马神经元GR表达,激活NLRP-1炎性小体,增加海马神经元的炎症反应和诱导海马神经元损伤。     

针刺对AD大鼠海马CA1区内质网应激及凋亡的影响

目的:探讨针刺对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马神经元内质网应激及凋亡的影响。方法:36只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、假手术组和针刺组,模型组和针刺组通过双侧海马CA1区注射Aβ_(1-42)建立AD模型,假手术组以等体积的无菌双氧水注射,空白组不做处置。针刺组于造模后2 d起给予针刺干预,空白组、模型组和假手术组不予针刺仅背侧位捆绑固定,1次/d,连续治疗14 d。疗程结束后通过HE染色观察大鼠海马CA1区神经元形态,Tunel法检测海马CA1区神经元凋亡水平,免疫组化法检测海马CA1区Aβ_(1-42)、GRP78蛋白的表达,Western blot法检测海马CA1区GRP78、Caspase-12蛋白的水平。结果:与空白组大鼠相比,模型组大鼠海马CA1区神经元细胞明显减少,凋亡水平、Aβ_(1-42)、GRP78和Caspase-12蛋白表达水平明显增高,差异具有统计学义(P<0.01)。与模型组相比,针刺组大鼠海马CA1区神经元形态较模型组明显改善,细胞数量明显增多,凋亡水平、Aβ_(1-42)、GRP78和Caspase-12蛋白的表达明显降低,差异具有统计学义(P<0.01)。结论:针刺治疗能够通过抑制内质网应激和细胞凋水平,进而改善海马CA1区神经元形态和抑制Aβ_(1-42)的堆积。     

β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞的炎性上清对神经元凋亡的影响

目的 研究β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞的炎性上清对神经元凋亡的影响.方法 用浓度为125 hmol/L的Aβ1-42诱导的小胶质细胞炎性上清干预神经元,检测Bcl-2、Caspase-3、PARP的表达及神经元凋亡的情况.结果 炎性上清液干预组Caspase-3(14.2±1.8)、Bcl-2阳性细胞数(10.6±0.8)明显高于Aβ1-42干预组(2.2±0.6,5.0±0.3)(P＜0.01),吖啶橙免疫荧光结果显示炎性上清液处理组与Aβ1-42直接干预组48 h和72 h凋亡率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Aβ1-42诱导小胶质细胞的炎性上清可以通过Caspase-3途径诱导神经元凋亡,小胶质细胞活化引起的慢性炎性过程是Aβ引起神经细胞凋亡的重要条件之一.

Abstract：

Objective To study the effects of neuronal apoptosis under the induction of β-amyloid inflammatory supernatant. Methods The neurons were intervened by β-amyloid-induced inflammatory supernatant at the concentration of Aβ1-42 at 125 nmol/L. And the expressions of Bcl-2, caspase-3, PARP and neuronal apoptosis were detected. Results The caspase-3 ( 14. 2 ± 1.8 ), Bcl-2 ( 10. 6 ± 0. 8 ) positive cells of microglia inflammatory supernatant stimulated group were significantly elevated than the control(2. 2 ± 0. 6,5. 0 ± 0. 3, P ＜ 0. 01 ). Nuclear chromatin was uniform yellow-green fluorescent. And there was significant difference of neuronal apoptosis between microglia inflammatory supernatant group and Aβ1-42directly stimulated group. Conclusion Neuronal apoptosis is induced by caspase-3 in β-amyloid inflammatory supernatant. One of the important causes is chronic inflammatory process of activated microglia by Aβ.     

人参皂苷Rb1抗SD大鼠海马神经元的缺氧损伤作用

目的 探讨人参皂苷Rb1对脑缺氧状态下SD大鼠海马神经元的保护作用.方法 以19 d的SD胎鼠脑作为取材对象,经过条件培养基纯化培养,建立海马神经元原代培养体系;选用人参皂苷Rb1作为干预药物,通过MTT法观察缺氧环境对海马神经元生长活力的影响;通过免疫荧光细胞化学法检测胞内caspase-3活性表达;通过TUNEL法观察缺氧环境对海马神经元凋亡的影响;通过化学发光法检测胞内ATP的表达水平.结果 与缺氧组相比,Rb1提高了经缺氧损害致凋亡的海马神经元生长增殖活力;对缺氧诱导的海马神经元caspase-3活性增高有明显的抑制作用;还可减轻因缺氧降低的胞内ATP水平.结论 人参皂苷Rb1能够减轻缺氧诱导的细胞损害和海马神经元损伤程度.     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的保护作用

目的探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β-淀粉样蛋白25~35片断(Aβ25-35)诱导细胞凋亡的影响。方法人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)体外传代培养,细胞进入对数生长期后进行实验。MTT比色法检测不同浓度Aβ25-35作用24 h后细胞活力变化;Hoechst 33258核染色和Western blotting法分别观察和检测20μmol/L Aβ25-35作用24 h后,细胞形态及细胞caspase-3、cleaved caspase-3水平的变化。运用同样方法检测不同浓度Epo预处理3 h,对20μmol/L Aβ25-35作用24 h所致细胞活力、细胞形态以及caspase-3和cleaved caspase-3水平改变的影响。结果结果显示不同浓度的Aβ25-35作用24 h后,SH-SY5Y细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P<0.05);10 UEpo预处理可明显抑制Aβ25-35诱导的细胞活力下降(P<0.05)。Hoechst 33258核染色发现10 UEpo预处理可明显减轻Aβ25-35诱导的细胞凋亡现象(P<0.05);Western blotting检测表明,10 U Epo可显著抑制Aβ25-35诱导的cleaved caspase-3表达增高(P<0.05)。结论Epo通过抑制Aβ25-35引起的cleaved caspase-3表达增高而对其诱导的细胞凋亡发挥保护作用。本实验为研究阿尔茨海默病的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础。     

异氟醚对缺锌APP/PS1转基因阿尔茨海默病模型小鼠海马神经元凋亡的影响

目的：研究吸入麻醉药异氟醚对缺锌APP/PS1转基因小鼠海马神经元凋亡的影响,探讨其相关作用机制。方法：8和9月龄APP/PS1转基因小鼠随机分为常锌组、常锌+异氟醚组、缺锌组和缺锌+异氟醚组,每组24只。常锌组小鼠给予正常锌含量饮食2个月;常锌+异氟醚组小鼠给予正常锌含量饮食2个月后接受1.4%异氟醚麻醉2 h;缺锌组小鼠给予低锌饮食1个月;缺锌+异氟醚组小鼠给予低锌饮食1个月后接受1.4%异氟醚麻醉2 h。分别在麻醉后6和24 h杀鼠取海马组织,采用免疫荧光双染法检测海马神经元凋亡率,Western blotting法检测海马β淀粉样蛋白（Aβ）、活化型半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶3（Cleaved caspase-3）表达水平和Bax/Bcl-2比值。结果：与常锌组比较,常锌+异氟醚组小鼠麻醉后6 h海马神经元凋亡率、Cleaved caspase-3表达水平和Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05或P<0.01）,麻醉后24 h海马神经元凋亡率总Aβ、Aβ40和Aβ42表达水平无明显改变（P>0.05）;缺锌组和缺锌+异氟醚组小鼠麻醉后6和24 h海马神经元凋亡率、Aβ42表达水平、Cleaved caspase-3表达水平和Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05或P<0.01）。与缺锌组比较,缺锌+异氟醚组小鼠麻醉后6和24 h海马神经元凋亡率、Aβ42和Cleaved caspase-3表达水平及Bax/Bcl-2比值进一步升高（P<0.05或P<0.01）。结论：10月龄常锌APP/PS1转基因小鼠给予1.4%异氟醚麻醉2 h能够短暂加重其海马神经元凋亡;1.4%异氟醚麻醉2 h能够明显加重缺锌APP/PS1转基因小鼠海马神经元凋亡,其作用机制可能与促进海马Aβ42聚集、增强Bax表达、抑制Bcl-2表达和激活Caspase-3有关。     

姜黄素对铁负载小鼠脑组织caspase-3、caspase-9和livin蛋白表达的影响及其对神经系统的保护作用

目的：观察姜黄素对小鼠脑组织铁负载后caspase-3、caspase-9和livin蛋白表达的影响,探讨其对铁离子所诱导的中枢神经系统毒性作用的保护机制。方法：将30只CD1小鼠按双盲法随机分为生理盐水对照组、FeCl3 组和姜黄素干预组,每组10只。3组小鼠脑组织分别行尼氏染色观察海马神经元形态,免疫组织化学染色和Western blotting法检测小鼠脑组织caspase-3、caspase-9和livin蛋白表达强度和水平。结果：尼氏染色结果,与对照组比较,FeCl3组小鼠海马出现神经元丢失,明显细胞核浓缩和细胞核裂解消失现象;姜黄素干预组小鼠海马神经元萎缩和核裂解消失现象减少。免疫组织化学染色及Western blotting检测结果,与对照组比较,FeCl3组小鼠脑组织caspase-3、caspase-9蛋白表达水平明显升高,livin蛋白表达水平降低(P<0.05);姜黄素干预组小鼠脑组织,caspase-3和caspase-9蛋白表达水平降低,livin蛋白表达水平增强(P<0.05)。结论：姜黄素对铁离子所致小鼠神经元毒性具有明显抑制作用,其可能机制是抑制了凋亡通路中的caspase-3和caspase-9蛋白,同时激活了凋亡抑制因子livin蛋白。
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丁苯酞对β淀粉样蛋白诱导新生SD大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨丁苯酞对β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)诱导新生SD大鼠海马神经元凋亡的保护作用。方法:将培养的大鼠海马神经元细胞分成Aβ组、Aβ+丁苯酞组和对照组三组,其中Aβ组采用20μmol/L Aβ处理24 h;Aβ+丁苯酞组先采用10μmol/L丁苯酞处理30 min后再加入20μmol/L Aβ处理24 h;对照组不进行任何处理。检测各组海马神经元凋亡、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)表达情况。结果:(1)MTT检测结果:Aβ组和Aβ+丁苯酞组OD_(570)均显著低于对照组(P0.05),Aβ+丁苯酞组OD_(570)显著高于Aβ组(P0.05)。Aβ组和Aβ+丁苯酞组相对于对照组的海马相神经元对存活率分别为48.15%、69.13%。(2)海马神经元细胞凋亡情况:Aβ组和Aβ+丁苯酞组海马神经元细胞凋亡率分别为(50.38±5.32)%和(25.87±2.66)%,均显著高于对照组的(1.24±0.17)%,而Aβ组海马神经元细胞凋亡率显著高于Aβ+丁苯酞组(P0.05)。(3)Western Blotting结果:Aβ组、Aβ+丁苯酞组和对照组i NOS相对表达量分别为(1.92±0.18)、(0.98±0.12)和(0.37±0.08),Aβ组和Aβ+丁苯酞组i NOS相对表达量均显著高于对照组,Aβ组i NOS相对表达量显著高于Aβ+丁苯酞组(P0.05)。结论:丁苯酞能够有效抑制Aβ造成的大鼠海马神经元细胞的凋亡作用,降低i NOS表达水平,减少自由基产生和毒性作用。     

人参皂苷Rg1对寡聚态Aβ1-42增加p38丝裂原活化蛋白激酶活性诱导神经元损伤的可能影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对β-淀粉样蛋白1-42(Aβ_1-42)增加皮质神经元细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)活性、诱导神经元损伤的影响。方法 采用经神经元特异性抗体检测C57BL/6胎鼠来源的皮质神经元为研究对象,运用寡聚态Aβ_1-42诱导神经元损伤,把神经元分为空白对照组、Aβ_1-42单独作用组(模型组)、SB203580处理组、人参皂苷Rg1处理组、人参皂苷Rg1单独作用组。采用Western-blot方法检测p38、磷酸化p38(p-p38)的蛋白水平,采用光学显微镜观察神经元形态,采用TUNEL染色和caspase-3活性检测神经元凋亡相关指标。结果 (1)在寡聚态Aβ_1-42作用5和15 min时,皮质神经元中p-p38蛋白水平均较空白对照组明显升高,差别均有统计学意义(P<0.05)。(2)与模型组比较,人参皂苷Rg1处理组中,不同浓度(2.5、5.0和10.0μmol/L)的人参皂苷Rg1作用后,寡聚态Aβ_1-42诱导升高的p-p38/p3...     

丹参酮ⅡA在体外对海马神经元细胞放射性损伤的保护作用

目的探讨丹参酮ⅡA在体外对海马神经元细胞放射性损伤的影响,以及其在放射性损伤保护过程中的相关机制。方法体外培养海马神经元细胞株HT-22,实验分为对照组(Control)、照射组(RT)、照射+丹参酮ⅡA处理组(RT+Tan)、照射+丹参酮ⅡA+自噬抑制剂3-Methyladenine(3-MA)处理组(RT+Tan+3-MA)。采用MTT法检测各组细胞的存活分数,流式细胞技术检测细胞凋亡,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-I、LC3-Ⅱ的表达水平。结果照射后海马神经元细胞存活分数下降,而丹参酮ⅡA能提高放射线照射后海马神经元细胞的存活分数,并减少细胞凋亡。相对于单纯照射组,RT+Tan组的海马神经元细胞HT-22的自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达上升。而加入自噬抑制剂3-MA后,放射处理后的海马神经元细胞LC3蛋白表达下降,且存活分数明显下降。结论丹参酮ⅡA能明显减轻放射线在体外对海马神经元细胞的放射损伤作用,其保护机制可能与调节放疗过程中自噬相关。