免疫佐剂增强乙型肝炎核心抗原核酸疫苗免疫应答的小鼠初步实验

目的 观察小鼠实验中免疫佐剂QS－21对乙型肝炎核心抗原（HBcAg)核酸疫苗免疫应答的增强作用。方法 基因枪轰击法接种HBcAg核酸疫苗或对照质粒,皮内注射法给予QS－21;间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠血清抗－HBc(IgG及IgG亚类）水平;^51 铬释 放法检 小鼠脾 细胞特异性CTL杀伤活性。结果 Balb/c和C57BL／6小鼠单用疫苗组和疫苗加QS－21组的血清抗－HBc 终点滴度均分别为1:328050和1:984150;两组的-HBc-I gG亚类均以IgG2a略占优势;当效：靶比为12：1时,Balb/c小鼠单用疫苗组和疫苗加QS－21组的特异性CTL杀伤活性分别为51.1%和63.6%;C57BL／6小鼠两组的CTL杀伤活性分别为53.1%和68.1%。结论 QS－21对HBcAg核酸疫苗所诱导的小鼠特异性抗体及CTL应答均有增强作用。     

多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗诱生免疫应答的实验研究

目的观察多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗免疫BALB/c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法30只BALB/c小鼠随机分成3组:Ⅰ组,肌注空质粒(pcDNA3.1)100μg/鼠;Ⅱ组,肌注多房棘球绦虫elp基因真核表达重组质粒(pcD-ELP)100μg/鼠;NS组,肌注等体积生理盐水。每2周免疫1次,共3次。ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG1,IgG2a和IgG 2 b水平。双抗体夹心ELISA法检测免疫鼠脾脏单个核细胞(PMNC)在受到特异抗原刺激后,产生IL-4I、L-12和IFN-γ的能力,3H-TdR掺入法检测脾淋巴细胞的增值能力。结果首次免疫后4周,Ⅱ组小鼠血清可检测到特异性IgG1I、gG2a和IgG2b抗体,随免疫时间和免疫次数的增加3种特异性抗体的OD值逐渐增高,实验结束时(首次免疫后7周)3种特异性抗体OD值均最高。Ⅰ组和Ⅱ组小鼠脾PMNC培养上清中IFN-γ浓度分别为50 pg/ml和55 pg/ml,受特异抗原刺激后分别为44 pg/ml和101.5 pg/ml。NS组IFN-γ及各组IL-4和IL-12均未检出。Ⅰ组和Ⅱ组小鼠脾淋巴细胞增殖能力增高,其淋巴细胞CPM值分别为NS组的85倍和123倍,受到特异抗原或刀豆素刺激其淋巴细胞增殖更明显。结论多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗可刺激BALB/c小鼠同时产生很强的细胞免疫和体液免疫应答。     

幽门螺杆菌疫苗口服免疫小鼠后胃肠免疫应答研究

目的 观测Hp全菌抗原和粘膜佐剂LT口服免疫Balb/c小鼠后的胃肠免疫反应。方法 采用ELISPOT和ELISA法检测了胃粘膜、PP结抗原特异性形成细胞(AFC)和小肠粘液sIgA。结果 抗原免疫组、抗原 佐剂组胃肠粘膜抗原特异性sIgA-AFC、IgG-AFC数量明显增加,尤以sIgA-AFC为甚,并且抗原 佐剂组明显高于单纯抗原组和对照组;小肠粘液特异sIgA两免疫组明显高于对照组。结论 口服免疫可有效诱导胃肠道粘膜免疫,局部sIgA可能在抗Hp感染中具有重要作用。     

幽门螺杆菌核酸疫苗的研究

幽门螺杆菌(H.pylori)与多种胃肠道疾病密切相关，在人群中的感染率较高，目前的“三联”或“四联”抗H.pylori治疗由于治疗费用、抗生素耐药等受到一定限制，为了有效控制H.pylori感染，疫苗尤其是核酸疫苗的研制逐渐成为该研究领域的热点，被认为是防治H.pylori最有前景的方法。     

乙型、丙型肝炎DNA疫苗单次联合接种后小鼠的免疫应答

目的：观察由编码ＨＢｓＡｇ与ＨＣＶ－ＣＥ２抗原的两种重组真核细胞表达质粒制备的ＤＮＡ疫苗联合接种ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后,其施生行异性免疫应答的规律和相互影响。方法：应用上述２种ＤＮＡ疫苗单次联合免疫小鼠,动态观察血中特生抗体水平;并完成稳定转染,表达相应抗原的ＳＰ２／０骨髓瘤细胞的建株,采用ＣＴＬ杀伤活性体内诱生实验的方法建立观察ＤＮＡ疫苗免疫保护与治疗泊动物模型。结果：两种ＤＮＡ疫苗单次联合免疫小鼠     

新型乙型肝炎核酸疫苗pVAX1-C3d-S2S的免疫预防效应

既往的乙型肝炎（乙肝）血源疫苗和目前使用的基因工程多肽疫苗已在很大程度上控制了乙肝的流行。众多研究表明，接种乙肝核酸疫苗后能长时间诱导特异性抗体的产生和较强的细胞毒T淋巴细胞（CTL）应答，有望用于HBV感染的预防和治疗。但目前仍存在一些问题，如血源疫苗的安全性，现有基因工程多肽疫苗的部分接种者无应答，以及所诱导的免疫应答效率偏低等。     

微粒包裹型幽门螺杆菌疫苗口服诱导小鼠粘膜免疫应答的研究

幽门螺杆菌（Helocobacter pylori,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌,为分析Hp超声上清经微粒包裹后对小鼠的口服免疫效果,采用ELISA法检测血清、唾液、肠粘液的抗体改变情况,ELISPOT法分析派伊尔氏结（PP结）抗原特异性抗体形成细胞（ASC）的数量增减。发现微粒包裹型Hp疫苗免疫后可诱导较高的唾液sIgA水平和肠道sIgA反应,PP结抗原特异性抗体形成细胞（ASC）数量与肠道sIgA水平密切相关。     

乙型及丙型肝炎DNA疫苗联合重复接种小鼠的免疫应答

目的 :观察由编码 HBs Ag与 HCV- CE2 抗原的两种重组真核细胞表达质粒制备的 DNA疫苗重复联合接种 BAL B/c小鼠后 ,其诱生的特异性免疫应答反应。方法 :应用上述两种 NDA疫苗重复联合免疫小鼠 ,动态观察血中特异性抗体水平、特异性细胞毒性 T淋巴细胞 (CTL )体外杀伤活性 ,并进行 CTL杀伤活性活体诱生实验。结果 :两种 DNA疫苗联合重复免疫小鼠 ,能够诱生机体特异性体液免疫及细胞免疫完全应答。其小鼠荷瘤表达目的抗原的靶细胞后 ,生存率明显高于未免疫鼠 (P <0 .0 5 )。结论 :乙型及丙型肝炎联合 DNA疫苗的重复接种 ,可有效地诱生小鼠机体特异性免疫应答反应。 DNA疫苗诱生的 CTL应答可与体液免疫应答分离存在 ,可能是 DNA疫苗免疫保护的更重要方面。     

汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫小鼠效果的实验

目的　观察汉滩病毒DNA疫苗滴鼻免疫诱导机体产生的免疫应答 ,探索汉滩病毒DNA疫苗新的免疫途径。方法　用重组质粒PcDNA3 1B -S1 3 经滴鼻接种BALB/c小鼠 ,采用ELISA、淋巴细胞转化试验及流式细胞仪等方法检测了其诱导的系统和粘膜免疫反应。结果　免疫小鼠血清IgG及粪便IgA明显增高 (P <0 0 1) ,且IgA增幅较大 ;实验组淋巴细胞增殖反应明显 ,刺激指数 (SI)显著增大 (P <0 0 5 ) ;免疫后CD+ 4 、CD+ 8T细胞均增加 (P <0 0 1) ,而CD+ 4 /CD+ 8T细胞比值无显著变化 (P >0 0 5 )。结论　汉滩病毒重组质粒滴鼻免疫能诱导机体产生了特异的系统免疫和较强的粘膜免疫 ,滴鼻的疫苗免疫途径有着潜在的应用价值。     

快速乙型肝炎疫苗接种程序分析

目的:观察快速乙肝疫苗接种方案对标准方案无反应者的免疫效果.方法:健康受试者分快程序组(n=53)和时照组(n=48),分别按d0,7,14程序和标准程序(mo 0,1,6)三角肌内接种30μg CHO乙肝疫苗,于首针接种后1,3,7,12,24和36 mo分别查抗-HBs滴度等.结果:首针接种后1,3和7mo组1血清抗-HBs阳转率(64.2%,66.0%,61.5%)和抗-HBs保护率(54.7%,54.7%,47.3%)分别显著高于组2(0%,16.7%,52.1%;0%,4.1%,40.1%)(P<0.01):组1全程接种完成率和血清抗-HBs几何平均滴度(GMT)显著高于组2 (100% vs 60.4%;66.8,68.2 IU/L vs 0,5.4 IU/L,P<0.01).3针完成后1 mo无及弱反应者追加1针后两组均为保护反应(100%),组1和组2无反应者分别有54.5%和50.0%阳转.结论:d0,7,14方案接种方便;全程接种完成率高;抗-HBs阳转和GMT峰值出现早.对标准程序弱或无反应者接种4针可提高反应率.     

按标准方案和加强方案接种重组乙型肝炎疫苗后AIDS病人的免疫应答

目的比较艾滋病（AIDS）病人按标准方案和加强方案接种重组乙型肝炎（乙肝）疫苗后免疫应答的差异。方法 CD＋4T淋巴细胞计数〈200个/μL、抗乙肝病毒表面抗原抗体（抗-HBs）阴性的AIDS病人89例,其中55例（A组）按标准方案分别在0、1、6个月肌内注射重组乙肝疫苗20μg,34例（B组）按加强方案分别在0、1、2、6个月肌内注射重组乙肝疫苗40μg。两组在首剂注射后1个月及7个月时检测抗-HBs滴度,≥10mIU/mL即为阳性。结果 A组在首剂注射后1个月及7个月时,抗-HBs阳转率分别为40.00%（22/55）、50.91%（28/55）,B组分别为35.29%（12/34）、67.65%（23/34）。两组在首剂注射后1个月时及7个月时,抗-HBs阳转率差异均无统计学意义（χ2=0.197、P=0.657;χ2=2.406、P=0.121）。首剂注射后7个月时,A组抗-HBs滴度的中位数为10.44mIU/mL,B组抗-HBs滴度的中位数为57.73mIU/mL,两组比较差异有统计学意义（Z=-2.018、P=0.044）。结论CD＋4T淋巴细胞计数〈200个/μL、抗-HBs阴性的AIDS病人,按加强方案接种重组乙肝疫苗后,血清抗-HBs阳转者抗-HBs滴度高于标准方案,但抗-HBs阳转率两种方案无差异。     

乙型肝炎病毒基因疫苗诱导小鼠产生免疫应答的效应

目的 :构建编码乙型肝炎病毒 (HBV)表面蛋白S的重组质粒pCR 3 .1 S,将之直接肌肉注射balb/c小鼠 ,观察小鼠HBV特异的免疫应答。方法 :以ELISA法检测小鼠血清 ,3H TdR掺入法测定淋巴细胞增殖 ,51 Cr 4h释放法检测淋巴细胞杀伤功能。结果 :与空载体对照组相比较 ,基因疫苗诱发小鼠产生良好的抗HBs反应及HBV特异的细胞免疫应答 (P <0 .0 5)。结论 :基因疫苗pCR 3 .1 S可诱导balb/c小鼠产生全面的免疫应答     

汉滩病毒核酸疫苗滴鼻及皮肤划痕免疫小鼠的比较研究

目的观察汉滩病毒的DNA疫苗滴鼻及皮肤划痕免疫诱导机体产生的免疫应答,探索汉滩病毒DNA疫苗新的免疫途径。方法采用不同剂量50μg、10μg、1μg的裸露质粒pcDNA3.1B-S1,3分别进行滴鼻及皮肤划痕免疫小鼠,采用ELISA方法分别检测血清及粪便中特异性抗体变化,观察其诱导的系统和黏膜免疫反应的差异。结果用汉滩病毒核酸疫苗免疫小鼠,通过表皮划痕方式其诱导体液免疫在50μg剂量时与滴鼻途径相当,在10μg及1μg低剂量时优于滴鼻途径,但在黏膜免疫方面,其明显不如滴鼻途径。结论滴鼻免疫对特异的黏膜免疫激发作用明显优于皮肤划痕,疫苗的滴鼻免疫途径较皮肤划痕有着明显的优势。     

幽门螺杆菌核酸疫苗的研究

幽门螺杆菌(H.pylori)与多种胃肠道疾病密切相关,在人群中的感染率较高,目前的"三联"或"四联"抗H.pylori治疗由于治疗费用、抗生素耐药等受到一定限制,为了有效控制H.pylori感染,疫苗尤其是核酸疫苗的研制逐渐成为该研究领域的热点,被认为是防治H.pylori最有前景的方法.     

旋毛虫DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的研究

目的　观察旋毛虫DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法　将旋毛虫肌幼虫编码 31kDa抗原结构基因真核表达质粒pcDNA3-TspE1分别用肌肉注射和基因枪免疫BALB/c小鼠 ,免疫血清用旋毛虫肌幼虫冰冻切片及石蜡切片抗原进行IFAT检测 ,并用旋毛虫肌幼虫可溶性抗原进行Westernblot分析。结果　IFAT表明 pcDNA3-TspE1接种BALB/c小鼠后产生的免疫血清与旋毛虫肌幼虫可产生阳性反应 ,在肌幼虫冰冻及石蜡切片上均显示黄绿色荧光。Westernblot检测结果显示 ,pcDNA3-TspE1接种小鼠后产生的免疫血清只能识别旋毛虫肌幼虫可溶性抗原中的 31kDa抗原组分 ,而 pcDNA3质粒接种小鼠后的血清不能与旋毛虫肌幼虫可溶性抗原发生免疫反应。结论　旋毛虫DNA疫苗 pcDNA3-TspE1能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。     

关于核酸疫苗治疗病毒性乙型肝炎的研究

本世纪以来,疫苗免疫接种经历了两次重大变革。第一次是由 Pasteur 等研制开发的减毒或灭活的疫苗,第二次是使用完整生物体的天然成分即亚单位疫苗。虽然在一定程度上提高了免疫效应,但安全性不够,尤其在免疫功能低下患者,风险较大。基因工程疫苗不能真实的反映抗原蛋白的空间结构,故仅能诱导体液免疫应答,而对预防某些微生物感染有重要意义的细胞免疫应答,难以诱导。核酸疫苗是现代疫苗研究的新热点,它通过质粒或逆转录病毒载体把病毒基因运送入宿主细胞,在细胞内部加工合     

幽门螺杆菌ureI核酸疫苗免疫活性的初步研究

目的 观察幽门螺杆菌ureI核酸疫苗诱导C57BL/6小鼠产生体液免疫应答及细胞免疫应答水平.方法 重组质粒pcDNA3.1(+)/ureI、空质粒pcDNA3.1(+)及PBS分别肌注免疫C57BL/6小鼠.ELISA法检测小鼠血清中特异性IgG抗体水平以及脾淋巴细胞培养上清中IL-4和IFN-γ含量,MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应,PCR和免疫荧光组化法检测ureI基因和蛋白表达.结果 pcDNA3.1(+)/ureI能够诱导小鼠产生特异性IgG抗体,该组小鼠脾淋巴细胞经UreI重组蛋白刺激后,其刺激指数和培养上清中IL-4、IFN-γ含量明显升高; ureI基因可在小鼠肌细胞中有效表达.结论 pcDNA3.1(+)/ureI核酸疫苗能刺激C57BL/6小鼠产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答,为进一步研究该疫苗的免疫保护作用奠定了基础.     

日本血吸虫副肌球蛋白全基因核酸疫苗在小鼠诱生的保护性免疫力

目的： 研究日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗免疫Ｃ５７ ＢＬ／６ 及ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠诱生的保护性免疫力。方法： 将构建的日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗 （ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７） 经后腿胫前肌免疫Ｃ５７ＢＬ／６及ＢＡＬＢ／ｃ小鼠, 共免疫３ 次, 每次间隔３ ｗ ｋ。末次免疫后３ ｗ ｋ 以血吸虫尾蚴攻击感染, ６ ｗｋ 后计数成虫负荷及肝、脾、肠组织虫卵数。设不含ＳｊＣ９７ 编码基因的空载体质粒免疫组为对照组。结果： ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７ 免疫Ｃ５７ ＢＬ／６ 小鼠主要诱生ＩｇＧ２ａ 和ＩｇＧ２ｂ 亚类, 而免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠除诱生ＩｇＧ２ａ 和ＩｇＧ２ｂ 亚类外, 还诱生ＩｇＧ１。ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７ 免疫Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠诱生较明显的减虫率 （３５．５％ ～４１．１％ ） 和减卵率 （肝、脾及肠组织减卵率分别为４４．５％ ～５９．６％ 、５６．７％ ～８２．４％ 及５７．９％ ）, 而对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠未诱生保护性。结论： ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７ 核酸疫苗能对Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠诱生较明显保护性免疫力, 而对ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠未诱生免疫保护力