L7811白血病细胞线粒体膜流动性的测定

本文用DPH荧光探剂标记线粒体膜和荧光偏振技术,对正常615小鼠胸腺淋巴细胞和脾细胞的线粒体膜及其L_(7811)白血病鼠腹水细胞和脾细胞的线粒体膜流动性进行测定。结果表明,L_(7811)白血病鼠腹水细胞及其脾细胞的线粒体膜的荧光偏振度比正常小鼠明显降低,微粘度降低,而流动性增大。     

不同生长时期L7811鼠腹水肿瘤细胞~(31)P-NMR及HPLC的研究

L_(7811)白血病腹水肿瘤鼠是中国医科院血液病研究所建立的白血病模型动物,即将L_(7811)鼠腹水细胞接种给615成鼠,接种后3天出现愎水,7～8天时腹水肿瘤鼠死亡。利     

角质细胞生长因子在白血病小鼠异基因脐带血移植中的作用

目的 探讨角质细胞生长因子(KGF)在白血病小鼠异基因脐带血移植(UCBT)中的作用及机制.方法 C57BL/6胎鼠外周血作为脐带血移植物.BALB/c小鼠随机数字表法分为7组,每组12只.对照1组:单纯接种白血病;对照2组:全身辐射(TBI)前第4天(-4d)接种白血病,单纯TBI处理;对照3组:不接种白血病,TBI处理后输注2×106个脐带血总有核细胞数(TNC);对照4组:不接种白血病,自TBI-3 d起每日皮下注射磷酸盐缓冲液(PBS)连用7d,TBI后输注脐带血TNC,移植后第8天(+8 d)予输血小板支持;对照5组:TBI-4 d接种白血病,自TBI-3 d起每日皮下注射PBS连用7d,TBI后输注2×106个脐带血TNC,移植+8d予输血小板支持;实验1组:不接种白血病,自TBI-3 d起每日皮下注射KGF 1 mg/kg连用7d,TBI后输注脐带血TNC,移植+8d予输血小板支持;实验2组:接种白血病,自移植-3d起每日皮下注射KGF 1 mg/kg连用7d,TBI后输注脐带血TNC,移植+8d予输血小板支持.以生存期、病理组织学变化、脾脏淋巴细胞亚群、胸腺输出功能为观察指标并作组间比较.结果 对照1组,12只小鼠全部死于白血病,小鼠生存时间为(11.1±1.5)d;对照2组,小鼠单纯TBI处理后12只全部死于造血衰竭,生存时间为(11.5±2.5)d;对照3组,5只(5/12)小鼠生存期超过100 d,7只小鼠20 d内死于内脏出血;对照5组,白血病小鼠脐带血移植后4只(4/12)生存期超过100 d;实验2组,白血病小鼠9只(9/12)生存期超过100d.实验2组与对照5组白血病小鼠生存时间比较差异有统计学意义(Log-rank检验,x2=4.996,P=0.0254).移植后对照4组小鼠脾脏T、NK和B细胞数分别为(9.32 ±0.48)×106、(1.59 ±0.11)×106、(18.74±2.01)×106个;实验1组小鼠脾脏T、NK和B细胞数分别为(13.20±1.14)×106、(1.75±0.12)×106、(20.36±0.86)×106个,实验1组T细胞、NK细胞数均高于对照4组(均P＜0.05).实验1组信号结合T细胞受体删除DNA环(sjTREC)水平明显高于对照4组[(228±24)拷贝/105脾细胞比(167±17)拷贝/105脾细胞,P =0.002].结论 足月胎鼠外周血富含造血干祖细胞.KGF输注减少小鼠异基因脐带血移植后白血病复发,其机制为促进胸腺输出功能恢复.     

实验性白血病动物胸苷激酶活力的观察

本文对胸苷激酶(TK)检测法进行了改良,并观察了实验性淋巴细胞白血病L_(615)、L_(7811)小鼠血浆和细胞TK活力的变化。结果表明,血浆胸苷激酶(s-TK)对白血病的早期诊断和病情监测具有重要意义。     

可移植性小鼠腹水型白血病模型(L7811)的建立及其生物学特性

可移植性小鼠腹水型白血病模型(L7811)来自马利兰诱发615系小鼠白血病的转变,至今已保种2年半,传代91代,生长稳定,具有移植成功率高(100％),无自发缓解,接种瘸细胞在21～17l×10~4/只范围内存活时间一致,腹水量较多,瘤细胞浓集,细胞成分单一等特点,是进行白血病实验研究的有用工具。根据疾病发展后期接种瘤细胞能进入血行及在骨髓内生长等特性,表明与一般腹水瘤所致类白血病反应不同。此外,L7712白血病由615系小鼠自发白血病移植而来,免疫交叉试验初步表明不同于L7811白血病。     

白血病小鼠(L7811)红细胞膜Na~+、K~+、Mg~(++)-ATP酶活性的测定

我们对白血病小鼠(L_(7811))及其接种传代的正常615纯系小鼠红细胞膜Na~+、K~+、Mg~(++)-ATP酶催化ATP生成ADP产生的无机磷进行测定比较,发现L_(7811)小鼠红细胞膜Na~+、K~+、Mg~(++)-ATP酶活性明显低于正常     

移植前输注供体细胞的小鼠单倍体相合骨髓移植实验

目的建立小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,探讨移植前输注供体细胞的造血干细胞植入效果。方法以CB6F1雌性小鼠为受鼠,C57BL/6雄性小鼠为供鼠,移植前3d经尾静脉输注供鼠脾细胞或骨髓细胞3×107,输注细胞后24h和48h分别通过腹腔注射阿糖胞苷0.015g/d,移植前1d予450cGy全身照射（TBI）,移植当天输注供鼠骨髓有核细胞5×107/只。监测受鼠白细胞恢复、Y染色体性别决定基因（SRY）以及外周血供鼠CD3＋细胞嵌合状态。结果单纯给予TBI小鼠均存活,且移植后30d白细胞恢复正常,TBI＋骨髓细胞移植（TBI＋BMT）组移植后14、30、60d时外周血SRY基因PCR检测结果均阳性,60d供体CD3^＋细胞嵌合率达54.4%。移植前输注供体脾细胞组嵌合率最高,移植后60d达93.5%±4.8%,优于移植前输注供体骨髓细胞组（P〈0.05）。结论 450cGy TBI的非清髓性预处理可以成功建立非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,移植前输注供体脾细胞可促进造血干细胞植入。     

狼毒浸出液抗白血病作用的实验研究

用小鼠T淋巴细胞白血病(L_(615))为实验动物模型,对狼毒浸出液(YF-1)的抗白血病作用进行了初步研究.结果表明,实验组和对照组的平均存活时间分别为16.3d和9.5d,实验组明显长于对照组(P<0.01);中和试验实验组和对照组的平均存活时间分别为19.3d和9.9d,对照组中没有长期存活的小鼠,实验组则有40%的小鼠长期存活,两组比较有显著性差异(P<0.01).提示YF-1对L(615)细胞有较强的抑制或(和)杀伤作用,能够对抗和抑制白血病的发生与发展.     

小鼠网织细胞肉瘤L_Ⅱ移植到近交系小鼠后生长特性和转移规律观察

小鼠网织细胞肉瘤L_(11)1964年在远交群昆明(km)小鼠建株后,已传代和冻存近30年。本实验将L_(11)实体瘤分别移植到近交系615小鼠皮下和腹腔内,接种成活率为100％,无自发消退现象,肿瘤的组织学结构和细胞形态仍保持了原L_(11)瘤株的特点,其生长特征为:(1)皮下移植组:荷瘤小鼠寿命21～63d,平均寿命39.3d,中间存活时间39d;淋巴道转移率为95.7％,肺转移率为60.9％,肿瘤移植后21d首先出现肺转移,最早于第28d发现淋巴结转移。(2)腹腔内移植组:荷瘤小鼠寿命9～15d,平均寿命13.1d,中间存活时间13d,有2只动物出现肺转移,但未见到浅表淋巴结转移。     

三种国产血卟啉衍生物和Photofrin Ⅱ 生物学活性的比较

本文比较了三种国内血卟啉衍生物(HpD)试制的生物学活性。采用了L_(1210)细胞生长率,L_(1210)和B_(18)细胞的台盼蓝排斥率,L_(1210)细胞的集落形成能力,L_(1210)细胞的DNA和RNA合成率,615小鼠在接种L_(615)白血病细胞后的存活时间,以及注射HpD后小鼠Lewis肺癌中荧光强度等七种指标。结果一致地表明,Y-HpD和LF-019在体外对癌细胞的光动力学杀伤作用显著高于HpS。而HpS活性略高于美国生产的第二代HpD PhotofrinⅡ。荧光强度的测定表明,这四种HpD在Lewis肺癌中的浓度无明显差别。     

Graft-versus-leukemia effects from donor lymphocyte infusion after nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantation in mice

Background Nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantation has been used since the 1990s as a new hematological stem cell transplantation strategy for treating hematological diseases. The purpose of this study was to explore the graft-versus-leukemia (GVL) effects of donor lymphocyte infusions (DLIs) after nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantations, while assessing the declines in treatment-associated morbidity, mortality, and graft-versus-host disease (GVHD).Methods A total of 615 (H-2k) mice were injected with L615 tumor cells and received 500 cGy (60Coγ-ray) irradiation three days later, followed by an allogeneic bone marrow transplantation (allo-BMT). The allo-grafts consisted of 3×10（7） bone marrow cells and 1×10（7） spleen cells from BALB/C (H-2d) donor mice. Two days after the allo-BMT, the recipient mice were given 200 mg/kg of cyclophosphamide. Subsequently, recipient mice were infused with either donor spleen cells ［2×10（7）］ on day 14 or 21, or donor spleen cells ［5×10（7）］ pretreated with hydrocortisone and cyclosporin A (CsA) in vitro on day 14 post-BMT.Results The median survival time of mice that received DLI on day 21 and pretreated DLI on day 14 post-BMT was longer than that of controls and the day 14 DLI group (P&lt;0.01). No evidence of severe GVHD was observed in the day 21 DLI group nor in the day 14 treated DLI group. Mixed chimerism was confirmed in the day 14 DLI group, the day 14 treated DLI group, and the day 21 DLI group on the thirteenth day post-transplantation; full donor chimerism was observed two weeks after DLI.Conclusion Donor lymphocyte infusion after nonmyeloablative bone marrow transplantation may reduce transplantation-associated morbidity and mortality while strengthening graft-versus-leukemia effects.     

L_(615)白血病的病理组织学及电镜观察

<正> L615白血病模型自建立以来,在国内已广泛应用于抗癌药物的筛选、实验治疗及肿瘤发病机理等方面的研究,但病理学方面的报道较少。我们为了观察此白血病的发病和病变发展规律以及白血病细胞的分化程度,进行了此实验,作为将来研究L615白血病细胞恶性度转变的基础。     

TJU103对小鼠同种异基因造血干细胞移植模型GVHD的预防作用

目的探讨TJU103对小鼠同种异基因造血干细胞移植模型移植物抗宿主病(GVHD)是否起预防作用。方法(1)用单向混合淋巴细胞培养方法检测TJU103对T淋巴细胞增殖的影响;(2)以BALB/c(H-2d)、CB6F1(H-2d/b)分别作为完全异基因移植和半相合基因移植的受鼠,给予9.0Gy全身照射后4h,单纯照射组经尾静脉注射0.3mlD-Hank's液,不进行细胞移植;对照组经尾静脉注射C57BL/6小鼠混合细胞悬液(4.5×106骨髓细胞 3.0×107脾细胞),但不进行其他治疗处理;实验组经尾静脉注射C57BL/6小鼠混合细胞悬液(4.5×106骨髓细胞 3.0×107脾细胞) TJU103(终浓度25μg/ml),此后腹腔注射TJU10350μg/d,共7d,然后观察其造血恢复、植入及GVHD的情况。结果(1)TJU103可以显著抑制T细胞活化增殖,其抑制作用呈剂量依赖性,在25μg/ml浓度时,可以抑制83%细胞增殖。(2)由于没有给予GVHD防治措施,对照组受鼠GVHD的发生率和死亡率分别为10/10和10/10;而完全异基因移植实验组小鼠GVHD发生率仅为2/10,30d生存率增加至8/10(P<0.01),中位生存期延长至30d以上(P<0.01);半相合基因移植实验组小鼠GVHD发生率为1/10,30d生存率增加至9/10(P<0.01),中位生存期延长至30d以上(P<0.01)。结论TJU103不仅可以显著抑制体外T淋巴细胞增殖效应,而且可显著降低小鼠同种异基因造血干细胞移植模型GVHD的发生率。     

PROPHYLACTIC EFFECT OF ACTIVE IMMUNIZATION WITH CURCUMA AROMATICA TREATED TUMOR CELLS——EXPLORATION OF MECHANISM OF ACTION OF CURCUMA AROMATICA

Immunization of inbred strain 615 mice with oleum curcuma aromatica treated L615 leukemic cells provided significant protection against subsequent challenge with alive L615 leukemic cells. It was found that such acquired antitumor immunity was apparently tumor specific, rather stable and could be passively transferred to recipient L615 mice by injection of spleen cell suspension of actively immunized mouse. Our study provided some experimental evidence for the possible mechanism of antitumor action of curcuma aromatica and also raised the possibility of using tumor cells pretreated with Chinese herbal antitumor agents in immunotherapy of cancer.     

Fetal liver transplantation in mice: tolerance induction by portal venous inoculation with allogeneic cells followed by injection of cyclophosphamide]

BALB/C mice (H-2d) receiving allogeneic C57 mice (H-2b) spleen cells via the portal vein (PV), followed by administration of cyclophosphamide (CY), abrogated the capability of rejecting allogeneic EL-4G- tumor cells (C57 origin). BALB/C mice received this combined treatment and BALB/C mice untreated or treated with either PV presensitization or CY injection were all exposed to 7.5 Gy total body irradiation, which was confirmed to be a lethal dose for BALB/C mice, then given intravenously 2 x 10(7) fetal liver cells from C57 mice (FLC57). The results indicated that the survival times of grafted BALB/C mice combined treatment were longer than those of untreated or either PV or CY treated, (PV + CY + 7.5Gy + FLC 57: MST = 99.5 +/- 12.6 day), v(N + 7.5GY + FLC57: MST = 36.5 +/- 9.8 day; PV + 7.5Gy + FLC57: MST = 12.2 +/- 0.2 day; CY + 7.5Gy + FLC57: MST = 27.6 +/- 5.5 day). The difference was statistically significant. The spleen cells from the grafted mice were assessed by indirect immunofluorescence with anti-C57 serum. The spleen cells from BALB/C mice with survival time over 100 days after grafting of FLC57 in combined treatment group were about 70-80 percentage of C57 positive cells.     

小鼠非清髓性半相合骨髓移植造血的重建

目的：探讨在非清髓性预处理条件下,纯化的供鼠NK细胞对MHC半相合小鼠骨髓移植（BMT）造血重建的影响。 方法：以CB6F₁^H-2d/b（BALB/c^H-2d×C57BL／6^H-2b）小鼠为受者,C57BL／6^H-2b小鼠为供者。60只受者小鼠根据不同照射剂量及不同NK细胞输注量随机分为10组,每组6只,经9.0、7.0、6.0 Gy 3个剂量⁶⁰Co照射。经9.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅰ）、半相合BMT组（Ⅱ）。经7.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅲ）、半相合BMT组（Ⅳ）、NK细胞移植1组（Ⅴ）和NK细胞移植2组（Ⅵ）。经6.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅶ）、半相合BMT组（Ⅷ）、NK细胞移植1组（Ⅸ）和NK细胞移植2组（X）。在照射后4 h移植供鼠骨髓细胞,其中NK细胞移植1组（Ⅴ、Ⅸ）每只受鼠移植前输注纯化供鼠NK细胞1×106,NK细胞移植2组（Ⅵ、X）每只受鼠移植前输注供鼠NK细胞5×10⁵。以血常规、体重、生存期等变化为指标,观察60 d。 结果：①生存期：Ⅰ组为（5.83±0.98）d,其他组小鼠生存期均大于60 d。②移植后第10天时白细胞及血小板计数：Ⅴ、Ⅵ组WBC和PLT分别为（1.05±0.30）×10⁹•L^-1、（53.50±12.11）×10⁹•L^-1及（0.95±0.26）×10⁹•L^-1、（47.17±11.82）×10⁹•L^-1,明显高于Ⅲ、Ⅳ组（P<0.01）;Ⅸ、X组WBC和PLT分别为（0.98±0.34）×10⁹•L^-1、（50.67±12.58）×10⁹•L^-1及（0.88±0.29）×10⁹•L^-1、（45.33±14.36）×10⁹•L^-1,明显高于Ⅶ、Ⅷ组（P<0.05）。 结论：MHC半相合BMT小鼠移植前输注纯化的供鼠NK细胞促进其造血重建。     

基质金属蛋白酶9在粒细胞集落刺激因子诱导的造血干/祖细胞动员中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)在粒细胞集落刺激因子(G-CSF)诱导的造血干/祖细胞(HSPC)动员中的作用。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法测定了健康供者稳态及G-CSF动员第5天骨髓、外周血MMP-9蛋白及mRNA水平的变化,比较富含MMP-9的细胞系HT1080无血清培养上清孵育前后CD34+细胞表面CXCR4表达及对基质细胞衍生因子1(SDF-1)的迁移能力的变化,将rhMMP-9与rhSDF-1孵育后应用Western印迹检测MMP-9对SDF-1的降解作用,观察注射MMP-9化学抑制剂(MPI)ο-邻二氮杂菲对G-CSF动员BALB/c小鼠外周血成熟白细胞计数(WBC)和干/祖细胞的数量的影响。结果G-CSF动员第5天,骨髓上清MMP-9浓度增加了6.6倍(P<0.01),骨髓组织表达MMP-9的中性粒细胞明显增多。动员后骨髓单个核细胞MMP-9mRNA表达水平上调(P<0.05)。rhSDF-1与rhMMP-9短期孵育后可被后者降解。HT1080无血清培养上清液能够上调脐血和动员外周血富集的CD34+细胞的CXCR4表达水平(均P<0.05)及增强CD34+细胞向SDF-1浓度梯度迁移能力(均P<0.05),该效应可被MPI阻断(P<0.05)。与G-CSF共注射MPI后BALB/c小鼠外周血成熟WBC(12.3×106/L±1.2×106/L)和造血祖细胞集落形成单位(69U/2×105MNC±3U/2×105MNC)数量显著低于对照组(P<0.05)。结论MMP-9可能通过裂解SDF-1、上调CD34+细胞表面SDF-1特异性受体CXCR4的表达及增强CD34+细胞迁移能力在G-CSF介导的HSPC动员中发挥重要作用。     

17a α-D- 高 炔雌二醇-3-乙 酯联合环磷酰胺对 L615白血病小鼠的实验研究

目的观察17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯（DHEA）联合环磷酰胺（CTX）对接种L615白血病细胞小鼠的治疗作用。方法将接种L615白血病细胞的小鼠分为对照组、CTX组、DHEA（低、中、高）剂量组、DHEA（低、中、高剂量）联合化疗（CTX）组,连续给药9、12d后分别检测肿瘤抑制率、外周血细胞数、骨髓有核细胞数、胸腺与脾指数等指标。结果DHEA低、中、高剂量组,CTX组以及DHEA（低、中、高剂量）联合CTX组瘤重均低于对照组,抑瘤率分别为45．40％、67．94％、50．48％、70．48％、69．21％、75．87％及72．06％．与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0．01）。DHEA中剂量组瘤重均低于DHEA低剂量组及DHEA高剂量组,差异有统计学意义（P〈0．05）。DHEA低、中、高剂量组的白细胞数[（15．87±3．32）×10-9、（17．92±1．79）×10-9、（18．55±3．21）×10-9／L）]及DHEA联合CTX各组的白细胞数[（16．72±2．67）×10-9、（18．98±2．34）×10-9、（19．65±2．79）×10-9／L）]均高于对照组[（13．32±2．56）×10-9／L],差异有高度统计学意义（P〈0．01）。DHEA低、中、高剂量组及DHEA联合CTX各组的白细胞数均高于CTX组[（10．56±1．83）×10-9／L],差异有高度统计学意义（P〈0．01）。DHEA低、中、高剂量组的骨髓有核细胞数[（8．28±2．12）×10-9、（9．93±1．36）×10-6、（8．22±1．91）×10-6／股骨]及DHEA联合CTX各组的骨髓有核细胞数[（7．55±1．13）×10-9、（8．67±2．21）×10-9、（7．96±1．46）×10-6／股骨]均高于对照组[（6．34_±1．21）×10-6／股骨],差异有统计学意义（P〈0．05）。DHEA中剂量组的骨髓有核细胞与CTX组[（7．92±0．89）×10-6／股骨]比较差异有高度统计学意义（P〈0．01）。DHEA低、中、高剂量组及DHEA联合CTX各组的胸腺和脾脏指数均高于对照组,与对照组比较差异均有高度统计学意义（均P〈0．01）。结论DHEA及联合化疗对L615白血病细胞有抑制作用,对化疗后荷瘤小鼠造血系统具有一定的保护作用。     

Enhancing effects of silkworm expressed recombinant human macrophage colony-stimulating factor on hematopoietic recovery of irradiation-injured mice

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｅｎｈａｎｃｉｎｇｅｆｅｃｔｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ（ｒｈＭＣＳＦ）ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｓｉｌｋｗｏ...