HLA—G14bp基因多态性及可溶性HLA—G表达水平与儿童特发性哮喘的关系

目的检测儿童哮喘患者人白细胞抗原（HLA）-G14bp插入／缺失多态性及血浆可溶性白细胞抗原G（sHLA—G）水平,探讨其与儿童特发性哮喘发病的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）及电泳技术对儿童特发性哮喘患者（85例）和健康体检儿童（98例）进行了HLA—G14bp插入／缺失多态性基因的检测,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测儿童特发性哮喘患者（60例）和健康体检儿童（70例）血浆中可溶性HLA—G（sHLA—G）水平。结果发现HLA—G14bp插入／缺失多态性基因及基因型频率分布在儿童特发性哮喘患者和正常对照儿童中均无统计学意义（P均〉0．05）,儿童特发性哮喘患者中血浆sHLA—G水平（中位数,177．97U／ml）明显高于对照组（中位数,34．92U／ml,P〈0．001）,哮喘患者的sHLA—G的检测在ROC曲线下面积为0．975,哮喘诊断临界点为158．6U／ml。分析患者及正常对照儿童血浆sHLA—G水平在HLA—G14bp插入／缺失多态性基因型频率分布中的差异,发现均无统计学意义（P均〉0．05）,患者血浆sHLA—G水平与过敏原的种类、总IgE及特异性IgE（slgE）的含量也无相关性（P均〉0．05）。结论HLA—G14bp插入／缺失多态性基因和儿童特发性哮喘的易感性无关,而sHLA—G可能作为儿童特发性哮喘的一个生物标志物,在儿童哮喘的发病机制中发挥重要的作用。     

系统性红斑狼疮患者血浆sHLA-G表达及其影响因素分析

目的 检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血浆可溶性HLA-G(sHLA-G)水平,并分析HLA-G基因多态性、病情及药物治疗对其表达的影响. 方法 酶联免疫吸附法(ELISA)检测其中96例SLE患者及74名正常人血浆sHLA-G水平.聚合酶链式反应(PCR)榆测HLA-G 14bp插入/缺失多态性基因,收集记录SLE疾病活动性指数(SLEDAI)和药物治疗情况,并分析基囚多态性、病情及药物治疗对sHLA-G表达的影响. 结果 血浆sHLA-G水平在SLE患者为230.2±192.2U/ml,显著高于健康体检者的118.3±38.1U/ml(P=0.0001);HLA-G 14bp插入/缺失多态性位点和基因型在血浆sHLA-G水平增高和正常SLE患者中的分布无显著性差异(P>0.05);但血浆sHLA-G水平增高的SLE患者较血浆sHLA-G水平正常患者病情更重(P=0.027),易出现中枢神经系统受累(P=0.007).激素、免疫抑制剂及抗疟药等不同药物治疗在血浆sHLA-G水平增高和正常SLE患者间亦无统计学差异(P>0.05). 结论 SLE患者血浆sHLA-G水平增高,而且与SLE病情较重、中枢神经系统受累有关,提示sHLA-G在SLE病理过程中可能发挥重要作用.     

昆明地区原因不明复发性流产妇女与HLA-G 14bp基因多态性相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原G(human leukocyte antigen,HLA)3'非编码区(UTR)14bp基因多态性与原因不明复发性自然流产的相关性。方法对原因不明复发性流产患者26例和正常妊娠妇女51例静脉采血,提取DNA。用PCR方法检测HLA-G14bp基因多态性。结果-14bp/-14bp缺失纯合子、+14bp/+14bp插入纯合子、-14bp/+14bp缺失/插入杂合子基因型在两组间分布差异无显著意义;-14bp和+14bp等位基因频率在两组间也无显著型差异。结论昆明地区部分原因不明复发性流产患者的病因与HLA-G 14bp基因多态性可能无直接相关性。     

HLA-G基因3’端单核苷酸多态性与广西儿童哮喘的相关性研究

目的探讨HLA-G基因3’端单核苷酸多态性与广西儿童哮喘发病的关联性。方法采用基于基质辅助激光解吸电离．飞行时间质谱技术检测广西儿童支气管哮喘患者84例及正常对照儿童116例的HLA．G基因3’端单核苷酸多态性（rsl704和rsl063320）分型变化,并与HLA—DR基因型进行多元回归分析,寻找易感基因型及单体型。结果rs1063320基因型构成比在哮喘组和对照组差异有统计学意义（P〈0．05）;rs1704和rsl063320位点的14bp缺失．G单体型能明显降低儿童哮喘的发病风险;14bp缺失-G—HLA—DRB1＊15XX单体型是儿童哮喘的保护性单体型,能更明显降低哮喘的发病风险,并使哮喘病人的血清IgE水平降低（P〈0．05）。结论HLA-G基因的3’单核苷酸多态性与广西儿童哮喘的发病相关。rs1704和rsl063320位点的14bp缺失-G单体型是儿童哮喘的保护性单体型。     

HLA-G基因14bp插入/缺失多态性与不明原因复发性流产患者相关性的病例对照研究

目的探讨HLA-G基因3’非翻译区14bp插入/缺失多态性与不明原因复发性流产患者的相关性。方法选择343名不明原因复发性流产患者,按照不同流产次数分为流产2次组(n=152),流产3次组(n=132),流产4次及以上组(n=59);268名正常妊娠妇女作为健康对照组。采用聚合酶链反应(PCR)及8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术检测HLA-G基因14bp插入/缺失多态性位点在不明原因复发性流产患者及正常妊娠组中的基因型频率分布。结果 HLA-G基因14bp插入/缺失多态性位点的基因型频率分布在流产4次及以上组与正常妊娠组差异有统计学意义(χ2=6.941,P=0.031),流产4次及以上组+14bp等位基因频率分布显著高于正常妊娠组(χ2=4.956,P=0.026,OR=1.573,95%CI:1.054～2.349)。结论 HLA-G 14 bp缺失多态性在维持正常的妊娠中可能有重要作用。     

HCMV感染患儿血浆可溶性HLA-G及IL-10检测的意义

目的探讨血浆可溶性人类白细胞抗原-G(soluble human leukocyte antigen-G,sHLA-G)及白细胞介素-10(in-terleukin-10,IL-10)在儿童巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染中的意义。方法分别收集75例HCMV活动性感染患儿的外周血及尿液标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血浆sHLA-G和IL-10水平;采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测尿液HCMV DNA载量。结果 HCMV活动性感染患儿血浆sHLA-G水平[54.91(6.75～282.72)U/ml]明显高于对照组[21.32(1.07～260.35)U/ml],差异有统计学意义(P<0.001);血浆IL-10的水平[9.24(1.61～41.77)pg/ml]明显高于对照组[1.82(1.03～3.98)pg/ml],差异有统计学意义(P<0.001);血浆sHLA-G和IL-10水平与尿液HCMV DNA载量之间无明显相关性(P>0.05)。结论 HCMV活动性感染患儿血浆sHLA-G和IL-10水平显著升高,可作为HCMV活动性感染诊断的指标。     

白细胞介素4启动子区C+33T多态性与血浆IgE水平关系

目的 探讨白细胞介素(IL)-4基因启动子区多态性与湖北汉族儿童哮喘的易感性及血浆IgE水平的关系。方法 用聚合酶链反应和限制片段长度多态性(PCR—RFLP)的方法对湖北汉族115例哮喘患儿及75例非哮喘对照儿童进行了+33位点多态性分析,用化学发光法测定血浆总IgE水平。结果 哮喘儿童血浆平均总IgE为351.21 IU/ml,非哮喘对照儿童血浆平均总IgE为15.48 IU/ml,有极显著性差异(P<0.0001)。哮喘患儿与非哮喘儿童IL-4基因启动子C+33T位点的等位基因频率和基因型频率CC、CT、TT之间有极显著性差异(P<0.0001),且哮喘患儿CT和TT之间均与血浆IgE升高相关(P<0.0001)。结论 IL-4启动子+33位点多态性与湖北汉族儿童哮喘易感性和血浆总IgE水平相关。     

乙型肝炎病毒诱导HLA-G的表达及其临床意义

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）诱导人类白细胞抗原-G（HLA-G）的表达及其临床意义。方法：采用实时RT-PCR的方法检测HBV感染患者外周血中HBV的载量,并采用ELISA法检测HBV感染患者外周血可溶性HLA-G（sHLA-G）的含量。HBV不同载量及多个时间点作用单核细胞（THP-1）,采用RT-PCR和Westernblot法检测HLA-G的诱导表达情况。结果：HBV感染患者外周血sHLA-G表达水平显著高于正常献血员（P＜0.01）。体外研究发现,HBV经1d即可诱导THP-1细胞HLA-GmRNA转录增强以及诱导HLA-G蛋白表达,且在第4天达到最大值。结论：HBV增强单核细胞HLA-G基因转录,诱导单核细胞表达HLA-G蛋白,从而使HLA-G参与调节HBV病毒免疫逃逸。     

人类白细胞抗原-G在急性白血病患者的表达及意义

目的 检测急性白血病患者膜结合型人类白细胞抗原-G(mHLA-G)和分泌型HLA-G(sHLA-G)的表达,探讨HLA-G表达水平的变化对急性白血病发生和发展的影响.方法 采用酶联免疫吸附法和流式细胞术分别检测40例初发、10例难治复发、30例化疗前后患者及10例正常人sHLA-G和mHLA-G的表达情况.结果 正常人血清中sHLA-G的平均水平为5.87±2.07 ng/ml,初发患者为10.05±6.5 ng/ml、难治复发患者为12.32±5.85 ng/ml;正常人mHLA-G的平均水平为(0.29±0.20)%,初发患者(0.60±0.44)%、难治复发患者(0.77±0.41)%.白血病初发患者sHLA-G和mHLA-G水平均显著高于正常人组(P＜0.05),初发与难治复发患者比较无统计学差异(P＜0.05).15例1疗程化疗后获得完全缓解患者sHLA-G和mHLA-G水平显著低于化疗前(P＜0.05),而15例未缓解患者其sHLA-G和mHLA-G水平较治疗前无明显差异(P＜0.05).结论 HLA-G表达水平变化可能与急性白血病的病情发展、疗效以及预后有关.     

白细胞介素-13基因多态性与壮族儿童哮喘易感性及血清IgE、白细胞介素-13水平的关系

目的 探讨白细胞介素-13(IL-13)基因多态性与壮族儿童哮喘发病及血清IgE、IL-13水平的关系.方法 选择112名健康壮族儿童(对照组)和80例壮族哮喘患儿(哮喘组),检测其IL-13基因-1112 C/T和+2044 A/G位点多态性以及血清IgE、IL-13水平.结果 (1)哮喘组和对照组IL-13-1112C/T位点均以CC型为主,等位基因以C为主,两组间基因型、等位基因频率分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组IL-13+2044A/G位点基因型、等位基因频率分布比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中哮喘组以AG型最常见,对照组以GG型最多见,哮喘组A等位基因频率高于对照组(P<0.05).(2)哮喘组、对照组组内IL-13-1112C/T、+2044A/G位点不同基因型之间血清IgE、IL-13水平比较差异均无统计学意义(P>0.05),哮喘组IL-13-1112C/T位点3种基因型患者的血清IgE水平均高于对照组(P<0.05),而两组间IL-13-1112C/T位点3种基因型患者的IL-13水平比较差异无统计学意义(P>0.05);哮喘组IL-13+2044 A/G位点不同基因型患者的血清IgE水平、IL-13水平均高于对照组(P<0.05).结论 IL-13+2044A/G位点多态性与壮族儿童哮喘发生有关,可能与血清IL-13、IgE水平升高有关,是广西壮族儿童哮喘哮喘发病的易感基因;但IL-13-1112C/T位点基因多态性与壮族儿童哮喘的发病无关联.     

人类白细胞抗原G在肾移植受者外周血的表达探讨

目的 探讨人类白细胞抗原(HLA)G的膜型HLA-G(mHLA-G)、胞内HLA-G(iHLA-G)和可溶型HLA-G(sHLA-G)在肾移植受者外周血的表达及其与术后临床相关性.方法 研究对象为2000年2月至2006年6月解放军第三零九医院全军器官移植中心行肾移植的175例受者,根据4周内是否发生排斥反应分为急性排斥反应组(36例)、功能稳定组(139例),30例健康供者作为对照组.应用流式细胞术检测外周血mHLA-GI、iHLA-G1的表达,酶联免疫吸附法检测血浆sHLA-G5的含量.结果 T淋巴细胞CD~+ mHLA-G1~+、CD8~+ mHLA-G1~+、CD4~+ iHLA-G1~+、CD8~+ iHLA-G1~+平均表达率在对照组分别为0.43%±0.19%、1.23%±0.41%、27%±13%、36%±14%,急性排斥反应组分别为:0.57%±0.34%、1.31%±0.56%、26%±8%、37%±17%,功能稳定组分别为0.61%±0.43%、1.39%±0.47%、26%±9%、37%±17%,3组间比较差异均无统计学意义(均P>0.05).外周血浆sHLA-G5表达在对照组为(25±14)ng/ml;急性排斥组术前为(24±15)ng/ml,术后为(34±21)ng/ml;功能稳定组术前为(25±11)ng/ml,术后为(56±32)ng/ml;急性排斥组和功能稳定组术前与健康组比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后功能稳定组明显高于急性排斥组(P<0.05).结论 肾移植受者外周血存在一群比率较低的HLA-G~+ T淋巴细胞,mHLA-G1和iHLA-G1的表达与肾移植术后的排斥反应发生无关,sHLA-G5的高表达与排斥反应发生的减少有关.     

人类白细胞抗原G及其受体在肾移植术后监测的临床意义

目的 探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)作为判断肾移植预后的生物标记物的价值并分析HLA-G受体的表达与HLA-G作用机制的相关性.方法 选取2006年2月至2008年6月解放军第三○九医院全军器官移植中心施行初次肾移植受者215例,根据术后临床状况分为肾功稳定组(n=173)和急性排斥组(n=42),采集外周血用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测可溶性人类白细胞抗原G5(sHLA-G5)表达含量,流式细胞术分析HLA-G受体免疫球蛋白样受体2(ILT-2)在T、B淋巴细胞的表达及杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)2DL4在自然杀伤(NK)细胞的表达.采用受试者工作特征(ROC)曲线运算sHLA-G5阈值,预测肾移植术后排斥反应.运用回归分析验证sHLA-G5与急性排斥反应发生的相关性.结果 sHLA-G5水平预测急性排斥反应组的最适域值为139.0μg/L,其敏感度为63.6%,特异度为82.1%,曲线下面积(AUC)为0.780.二元Logistic回归分析显示sHLA-G5是肾移植术后急性排斥反应发生的独立影响因素(P=0.019,OR=0.039,95%可信区间为2.091～5.661).急性排斥组CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞表面的ILT-2表达均低于肾功稳定组(21%±7%比52%±17%,23%±6%比39%±16%,21%±7%比39%±16%,均P＜0.05).急性排斥组NK细胞表面的KIR2DLA表达也低于肾功稳定组(31%±10%比57%±21%,P＜0.05).结论 sHLA-G5表达水平对预测肾移植术后排斥反应具有较高的敏感度和特异度,HLA-G诱导免疫耐受的机制可能与淋巴细胞表面ILT-2、KIR2DLA的高表达密切相关.     

HLA-G expression in the peripheral blood of live kidney transplant recipients

Background The human leukocyte antigen-G (HLA-G) has been considered to be an important tolerogeneic molecule playing an essential role in maternal-fetal tolerance, upregulated in the context of transplantation, malignancy, and inflammation, and has been correlated with various clinical outcomes. The aim of this study was to investigate the clinical relevance of the expression of membrane HLA-G (mHLA-G), intracellular HLA-G (iHLA-G), and soluble HLA-G (sHLA-G) in the peripheral blood of live kidney transplant recipients.

Methods We compared the expression of the three HLA-G isoforms in three groups, healthy donors (n=20), recipients with acute rejection (n=19), and functioning transplants (n=30). Flow cytometry was used to detect the expression of mHLA-G and iHLA-G in the T lymphocytes of peripheral blood from subjects in the three groups. Enzyme-linked immunosorbent assays were used to detect sHLA-G in the plasma from the three groups.

Results There were no significant differences in mHLA-G and intracellular HLA-G among the three groups, but the sHLA-G plasma level was higher in the functioning group than in the acute rejection or healthy group. We found a subset of CD4+HLA-G+ and CD8+HLA-G+ T lymphocytes with low rates of mHLA-G expression in the peripheral blood of kidney transplantation recipients. Intracellular expression of HLA-G was detected in T lymphocytes. However, there was no correlation between acute rejection and the mHLA-G or intracellular HLA-G expression.

Conclusion sHLA-G was the major isoform in the peripheral blood of live kidney transplant recipients and high sHLA-G levels were associated with allograft acceptance.

     

IL-10基因启动子多态性与小儿哮喘的相关性

目的探讨白细胞介素-10（IL-10）基因多态性、等位基因在儿童哮喘发病机制中的意义。方法采用顺序特异引物聚合酶链反应方法（PCR-SSP）对30例小儿哮喘病儿（哮喘组）及26例非哮喘呼吸道疾病患儿（非哮喘组）作IL-10基因多态性分析。结果两组IL-10基因型、单体型频率、等位基因频率比较，差异均无统计学意义。结论本研究未能证实小儿哮喘易感性与IL-10基因启动子位点上多态性相关联。     

可溶性人类白细胞抗原G与子痫前期的关系

目的：通过检测子痫前期（ PE）孕妇血清中可溶性人类白细胞抗原G（ sHLA-G）水平的变化,探讨其与PE的关系。方法采用ELISA法检测轻度、重度PE及健康孕妇血清中的可溶性HLA-G（ sHLA-G）水平。结果各组孕妇外周血sHLA-G水平：轻、重度PE组孕妇分别为（44．32±10．72） U/ml,（30．08±9．12） U/ml,对照组为（90．52±11．32）U/ml,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0．01）;重度PE组与轻度PE组比较,差异亦有统计学意义（P＜0．01）。结论与健康孕妇相比,sHLA-G在PE孕妇外周血中呈明显低表达,sHLA-G表达水平的异常可能与PE的发病有关。     

HLA-G在异基因造血干细胞移植中诱导免疫耐受

目的 研究供者粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员前后外周血和骨髓中单个核细胞人白细胞分化抗原G(HLA-G)膜表达以及血浆和骨髓液中HLA-G水平,揭示G-CSF动员骨髓移植优于外周血干细胞移植与骨髓中HLA-G有关的机制.方法 流式细胞术检测外周血和骨髓中单个核细胞HLA-G膜表达以及酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆和骨髓液中HLA-G水平.结果 动员后膜结合型HLA-G(m HLA-G)在外周血和骨髓中均显著高于动员前(P=0.001,P=0.000),且动员后骨髓m HLA-G含量较外周血中高(P=0.001).动员后外周血中分泌型HLA-G(s HLA-G)较动员前无明显差异(P=0.279),动员后骨髓中s HLA-G较动员前明显增高(P=0.002),且动员后骨髓s HLA-G较动员后外周血中含量明显增高(P=0.004).结论 HLA-G在G-CSF动员后造血干细胞移植(HSCT)诱导免疫耐受中具有重要作用.     

HLA—G基因14bp插入／缺失多态性与我国汉族类风湿关节炎相关性研究HLA—G基因14bp插入／缺失多态性与我国汉族类风湿关节炎相关性研究

目的探讨HLA—G基因14bp插入／缺失多态性与类风湿关节炎（RA）易感性的相关性,并分析其不同基因型间RA患者临床特点的差异。方法多聚酶链式反应（PCR）检测154例RA患者及367名健康体检者的HLA—G基因14bp插入／缺失多态性,比较不同基因型RA患者间关节肿胀数、关节压痛数、关节晨僵时间、病情活动指数DAS28积分及实验室指标如C反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）、类风湿因子（RF）、抗CCP抗体滴度的差异。结果HLA-G 14bp插入／缺失多态性基因型频率分布在正常人和RA患者均显示Hardy-Weinberg平衡（正常人组：χ^2=0．095,P=0．953;RA组：χ^2=0．533,P=0．766）;HLA—G1 4bp插入／缺失多态性基因和基因型频率与RA易感性均元显著性的相关性联系;与＋14bp／＋14bp和＋14bp／-14bp基因型RA患者比较,-14bp／-14bp纯合子基因型RA患者的压痛关节数（P=0．049）、肿胀关节数（P=0．004）明显增多,病情活动指数DAS28明显更重（P=0．028）,RF滴度更高（P=0．001）。结论HLA-G基因14bp插入／缺失多态性与RA疾病易感性无关,但可影响RA患者的临床表现,HLA-G—14／-14bp纯合子型可能作为预后不良因素参与到RA疾病机制之中。     

高原地区子痫前期患者胎盘及血清HLA-G表达水平及临床意义

目的 探讨青海高原地区子痫前期患者胎盘及血清中人类白细胞抗原G(HLA-G)表达水平及临床意义.方法 收集2010年9月至2011年3月在青海大学附属医院产科分娩的30名子痫前期患者和30名正常妊娠妇女的胎盘组织和血清样品,应用实时定量RT-PCR技术研究HLA-G mRNA在正常妊娠者和子痫前期患者胎盘中的表达差异,并应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中可溶性HLA-G的表达.结果 (1)青海高原地区子痫前期患者胎盘组织中HLA-GmRNA表达水平为1.42±4.92,明显低于正常妊娠组(9.00±9.94),差异有统计学意义(P＜0.01);(2)子痫前期血清可溶性人类白细胞抗原G( soluble HLA-G,sHLA-G)浓度为688.34±181.988 ng/L,明显低于正常妊娠组织(1030.2±238.568ng/L),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 青海高原地区子痫前期胎盘组织HLA-GmRNA表达水平及血清sHLA-G浓度均明显降低,可能与子痫前期的发生有关.     

白细胞抗原G基因14bp插入缺失多态与丙型肝炎病毒慢性感染的关联

目的：研究人类白细胞抗原G（HLA-G）基因14 bp插入缺失多态与丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）慢性感染的相关性.方法：选取HCV慢性感染者243例（感染组）,无血缘关系的汉族健康对照448例（HCV对照组）.采用PCR序列特异引物法检测HLA-G基因第8外显子3＇UTR的1个14 bp插入缺失多态,并比较其在HCV慢性感染人群和健康人群中的分布情况.结果：HLA-G基因14 bp插入等位基因频率在对照组中为0.335,在HCV感染组中为0.348;14 bp插入纯合子基因型频率在对照组中为0.112,在HCV感染组中为0.107.无论是基因型频率还是等位基因频率,在HCV感染组和对照组中均无统计学差异.结论：HLA-G基因14 bp插入缺失多态性与汉族人群中HCV感染的发生无遗传易感染性关联.