HIV—1感染者外周血单个核细胞缺损病毒基因的研究

目的：研究ＨＩＶ－１感染者缺损ＨＩＶ－１ ＤＮＡ的特性。方法：用长片段ＰＣＲ法９ＬＤ－ＰＣＲ）研究分析ＨＩＶ－１感染者外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ,ＰＢＭＣｓ）和体外培养感染淋巴细胞中ＨＩＶ－１基因特征,使用位于ＨＩＶ－１ ＤＮＡ链两端的ＬＴＲ（Ｕ５）、ＬＴＲ（Ｒ）为引物,插入有全长ＨＩＶ－１片段的大肠杆菌质粒ＰＮＬ４－３等为标准对照,并对部分标本克隆     

抗HIV-1基因治疗新进展

虽然高效抗反转录病毒治疗（highly active anti-retroviral therapy,HAART）取得了显著的成果,但是抗人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）药物治疗仍有其局限性（如引起毒素蓄积和病毒突变）.基因治疗在理论上具有较好的抗HIV能力,可以通过持续干扰病毒复制,提供了阻止HIV进行性感染的希望.本篇综述主要探讨当前多种基因治疗策略及其最新进展.     

中国HIV-1感染者病毒特异性细胞毒性T细胞定量研究

目的对8例HIV长期感染不进展(LTNP)及病程进展缓慢(SP)患者的病毒特异性细胞毒性T细胞(CTL)特征进行研究。方法设立队列研究,从中随机选出8例患者(4例LTNPs,4例SP)。通过采用重叠肽技术组建HIV-1B亚型全序列肽段,组建成三维肽库进行ELISPOT分析8例患者的HIV-1特异性细胞免疫反应。结果在大多数患者中存在较强的T细胞反应,特别对HIV-1病毒的pol、gag、nef蛋白的免疫反应比其他蛋白强。结论病毒特异性CTL免疫反应在HIV-1 LTNPs有较强并且很广泛的反应,这对于有效抑制病毒在人体内的生存有可能起到很大的作用,很可能是这些LTNPs及SP病程进展缓慢的主要原因之一。     

中国部分地区HIV感染者/艾滋病患者外周血单核/巨噬细胞功能与疾病的进展关系

目的 通过对中国HIV感染者／艾滋病（AIDS）患者外周血单核／巨噬细胞标志抗原CD14及其早期活化分子CD69的研究,探讨其外周血单核／巨噬细胞的功能状态与HIV感染者疾病进程的关系。方法采集57例未经抗病毒治疗的HIV感染者／AIDS患者及32例健康人抗凝全血,运用流式细胞分析技术对CD4^＋T淋巴细胞、CD14^＋细胞及其CD69抗原表达情况进行测定,并采用实时荧光定量RT-PCR技术检测患者血浆HIV-1载量。结果（1）HIV感染者／AIDS患者外周血CD14^＋细胞颗粒度SSC值为76±16,CD69分子在CD14^＋细胞的表达率为27％±4％,均明显高于对照组（P〈0．05）,其中AIDS组高于HIV慢性感染（HIV）组及长期不进展（LTNP）组,HIV组高于LTNP组（P〈0．05）,LTNP组与对照组比较差异无统计学意义;外周血CD14^＋细胞比例、CD14抗原水平与对照组相比差异无统计学意义。（2）HIV感染者／AIDS患者外周血CD69分子在CD14^＋细胞的表达率与CD4^＋T淋巴细胞绝对值呈明显负相关（r=-0．872,P〈0．01）,与HIV-1RNA病毒载量呈显著正相关（r=0．697,P〈0．01）。结论中国部分地区HIV／AIDS患者外周血单核／巨噬细胞的活化和吞噬功能较健康对照组有显著上升,且与疾病进展密切相关。     

外周血HIV-1 DNA在艾滋病疗效评估中的应用

目的 通过研究HIV感染者HIV-1 DNA与HIV-1 RNA及CD4+T淋巴细胞间的关系,探讨外周血HIV-1 DNA在艾滋病疗效评估中的应用.方法 筛选2018年6—9月贵州省贵阳市公共卫生救治中心的HIV感染者80例,采用面对面问卷调查收集患者资料,并采集患者K2EDTA抗凝血,完成CD4+T淋巴细胞、HIV-...     

HAART治疗对HIV-1感染者树突状细胞数量与表型及功能的影响

在1996年温哥华第10届国际艾滋病大会上,美籍华裔科学家何大一报道采用高效抗逆转录病毒疗法(highly active anti-retrovirial therapy,HAART)进行抗病毒治疗,显示艾滋病的治疗已进入HAART时代。目前认为HAART治疗可抑制人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)-1复制、缓解病情、减少机会性感染和肿瘤的发生、延长患者生存期,但不能彻底治愈艾滋病。早期的免疫学研究中,人们主要关注于HIV-1特异性免疫,但随     

抗病毒治疗失败的艾滋病患者HIV-1基因型耐药变异的研究

目的 了解高效抗逆转录病毒治疗(HAART)失败的艾滋病患者HIV-1基因型耐药变异的情况,为临床治疗提供实验室参考数据.方法 收集2008年1月至2009年12月在深圳市第三人民医院接受HAART治疗失败的41例艾滋病患者的血浆,采用RT-PCR和套式PCR从血浆中提取病毒RNA,扩增目的基因片段,并对其进行序列测定和分析.结果 共获得38例抗病毒治疗失败者的基因序列,其中有3条序列显示无变异位点,在其他出现耐药变异的序列中K103N、G190A、Y181C、K101P、M184V、D67N、K70R、T215Y及K219R为最常见的变异位点;100%(35/35)治疗失败患者出现了对非核苷类逆转录酶抑制剂NVP或EFV的高中度耐药,超过50%的患者出现了对临床上目前常用的核苷类逆转录酶抑制剂AZT、3TC、IMT及DDI的高中度耐药,仅发现极少数治疗失败患者对蛋白酶抑制剂的高中度耐药;D4T+DDI+NVP治疗方案是最常见出现耐药的治疗组合;病毒耐药变异往往发生在抗病毒治疗后的2～3年.结论 HIV耐药变异株的出现是艾滋病患者临床上抗病毒治疗失败的主要原因,目前引起耐药突变主要是针对NNRTIs或NRTIs药物耐药,而对Pis的耐药在临床上尚比较少见,建议更换治疗组合时多考虑选用含有增强作用的Pis,从而达到更好地病毒抑制效果.     

异源双链泳动分析技术的建立及其在HIV-1基因变异和临床中的应用研究

获得性免疫缺陷综合征(AIDS，艾滋病)是近20年来发现的一种严重危及人体健康的传染病，至今全球艾滋病毒感染者已超过6000万。我国目前HIV感染人数已达100万。     

人类免疫缺陷病毒-1感染者外周血单个核细胞体外培养的免疫学及病毒学特点

目的观察人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者外周血单个核细胞(PBMC)体外培养过程中免疫学及病毒学的动态变化特点,并评价培养的细胞体系抗病毒活性。方法采集14例HIV感染者和6名健康人的PBMC,体外经多种细胞因子诱导培养,每3天观察细胞增殖情况,同时检测细胞表型、上清中细胞因子浓度和病毒载量。结果培养的健康人PBMC在(35±5)d最大增殖(61±8)倍;7例培养成功的HIV感染者PBMC在(21±6)d最大增殖(17±13)倍,另7例HIV感染者PBMC培养失败;同时发现HIV感染者PBMC体外培养最大增殖时间与其培养前外周血基础CD4/CD8比值呈明显正相关(P<0.05)。表型分析发现,培养的PBMC为优先CD8细胞增殖的异质T细胞群,主要由CD4、CD8及CD3CD56细胞组成;部分HIV感染者PBMC培养期间分泌白细胞介素(IL)1α、IL12、肿瘤坏死因子(TNF)α和IL10等细胞因子能力较高;而11/12例HIV感染者PBMC体外培养初期可扩增出大量病毒,但随着培养时间的延长,病毒载量逐渐降低甚至低于检测限。结论体外大量扩增基础CD4/CD8比值较高的HIV感染者外周血PBMC是可行的,扩增的细胞具备较强的Th1细胞免疫反应能力,为进一步开展艾滋病的免疫细胞治疗提供必要的实验数据。     

艾滋病的药物治疗

艾滋病（human immunodeficiency virus，AIDS）的中文全称为“获得性免疫缺陷综合征”。由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起，已知HIV分为HIV-1和HIV-2两个亚型。目前全球流行的主要是HIV-1。HIV-1可进一步分为不同的亚型，包括M亚型组（主要亚型组）、O亚型组和N亚型组，其中M组有A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K11个亚型。     

816例初始抗病毒治疗免疫学和病毒学疗效分析

目的 评价我国现行高效联合抗逆转录病毒治疗(HAART)48周在成人初治HIV/AIDS患者中的免疫学和病毒学疗效.方法 回顾性研究我院初次接受HAART的HIV/AIDS患者816例,分析治疗前后的免疫学和病毒学疗效.结果 816例中男749例(91.8％),女67例(8.2％);年龄19～70岁,平均(32.0±18.8)岁.传播途径以男男同性性行为(681例,83％)为主.在治疗48周后,CD4细胞均值由223个/μl升高至437个/μl,CD4细胞在200个/μ1以下者由39.7％降至12.5％,CD4细胞201～350个/μl者由50.2％降至26.2％,CD4细胞＞350个/μ1者由10.0％增至61.3％.病毒载量平均值由13 490拷贝/ml下降至42拷贝/ml,病毒载量小于50拷贝/ml者占90.9％.结论 现行的艾滋病HAART疗效较好,值得推广.     

HIV-1 B’亚型感染者Nef蛋白CTL表位变异与病毒载量的相关性

目的探讨HIV-1 B’亚型毒株感染者Nef蛋白细胞毒性淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位变异及其与病毒载量的相关性。方法从137例HIV-1 B’亚型毒株感染者的血浆样本中提取病毒RNA,经逆转录及巢式PCR扩增获得Nef基因并测序,将获得的Nef基因序列翻译为蛋白序列,然后与HIV免疫学数据库中经过实验证实的CTL表位进行比对,分析Nef蛋白CTL表位变异与感染者病毒载量的关系。结果与HIV免疫学数据库中CTL表位的比较发现,本研究137例HIV-1 B’亚型毒株感染者病毒Nef蛋白大部分CTL表位相对保守,只有5个表位的变异频率超过10%,CTL表位旁序列的变异程度较锚着位点变异大,表位旁上下游第一位氨基酸的突变频率较高,表位氨基酸总变异频率、锚着位点和表位旁序列的氨基酸变异频率与病毒载量呈正相关,非锚着位点氨基酸的变异与病毒载量无相关性。结论 HIV-1 B’亚型毒株感染者Nef蛋白大部分CTL表位较保守,CTL表位旁序列变异程度较锚着位点大,表位旁上下游第一位氨基酸的突变频率较高,推测表位旁序列氨基酸的变异可能是Nef蛋白CTL逃逸突变的主要方式,Nef蛋白CTL表位变异与病毒适应性损伤的关系还需进一步研究。     

长期不进展者与艾滋病患者HIV-1 nef特异性CD8+ T细胞应答的初步研究

目的　探讨我国HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的特点及其免疫保护作用。方法以长期不进展组 (LTNP) 7例和艾滋病组 9例为研究对象 ,以覆盖HIV 1nef全长的 2 6个重叠肽段组成的 3个肽段库作为刺激原 ,用IFN ELISPOT方法检测LTNP组与艾滋病组患者HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答 ,并测定其CD4 T细胞、CD8 T细胞和病毒载量 ,观察两组间HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的差异及其与CD4 T细胞和病毒载量的相关性。结果　LTNP组和艾滋病组HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的强度分别为 4 0 4± 334和 5 9± 12 1SFC/ 10 6外周血单个核细胞 (PBMC) ,LTNP组显著高于艾滋病组 ;HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的强度与CD4 T细胞计数呈正相关 ,但与病毒载量没有显著的相关性。结论　HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答在艾滋病发病中具有一定的保护作用 ,欧美流行株与我国流行株之间具有免疫交叉反应性     

辽宁省99例人类免疫缺陷病毒1感染者gag-pol区基因序列分析

目的 研究辽宁省人类免疫缺陷病毒／艾滋病（HIV／AIDS）患者gag-pol区的基因序列特征。方法采集辽宁省99例HIV-1感染者外周静脉血,提取前病毒DNA,经巢式PCR方法扩增gag—pol区2．6kb片段,与HIVS序列数据库中亚型参考序列共同构建系统进化树以区分亚型,并计算gag—pol区不同编码区域的基因离散率和Ks／Ka比值。结果 在辽宁省99例HIV-1感染者中发现A、B’、B、C、G5种亚型,循环重组型CRF01_AE、CRF03_AB、CRF06_cpx、CRF07_BC、CRF08_BC5种循环重组型和循环重组型间的重组ICR07／08。以B’亚型最多见,其次为CRF01_AE。在gag—pol区内,p17区、p2-p6区基因离散率高于p24区、蛋白酶及逆转录酶编码区。但B亚型p24区基因离散率处于较高水平。CRF07_BC和CRF08_BC在gag-pol各区基因离散率及同义替换、错义替换普遍处于较低水平。各亚型毒株的p2-p6区的Ks／Ka值最低,其均值〈1,而CRF01_AE毒株RT区的Ks／Ka值高达10．45。结论 辽宁省流行的HIV-1 gag—pol区亚型十分复杂。p24、蛋白酶及逆转录酶编码区是更为保守的区域。B亚型毒株的p24区承受较大的正向选择压力,CRF01_AE毒株RT区承受了较大的负向选择压力。CRF07_BC和CRF08_BC传入辽宁省的时间较短,奠基者效应明显。     

无偿献血人群中HIV-1感染者env基因序列特征研究

目的 分析我国无偿献血人群艾滋病病毒I型（HIV-1）感染者病毒亚型及env基因C2-V4区序列特征。方法 针对我国13个省市献血人群筛选的115例HIV-1阳性标本,扩增HIV-1的env基因C2-V4区片段并测序;构建最大似然树（Maximum Likelihood）分析不同亚型env基因序列的进化关系;分析该基因区序列变异以及2G12、PGT135、PGT128中和表位特征。结果 从115例HIV阳性标本中成功扩增C2-V4区76份,经测序分析发现HIV-1基因亚型7种,其中,亚型CRF01_AE和CRF07_BC所占比例最高,分别占46.0%（35/76）和39.5%（30/76）,其他亚型CRF08_BC、B、CRF65_CPX、CRF59_01B、CRF61_BC所占比例分别为5.3%（4/76）、5.3%（4/76）、1.3% （1/76）、1.3% （1/76）、1.3% （1/76）。V3环顶端四肽存在GPGQ、GPGR、GPGK、GQGR四种类型,辅助受体以CCR5（90.8%）为主。97.1%的CRF01_AE毒株分别缺失2G12和PGT135抗体识别的相关糖基化位点,而CRF07_BC毒株100%缺失2G12抗体识别相关的糖基化位点,80%毒株未缺失PGT135抗体识别相关的糖基化位点。结论 我国献血人群HIV-1感染者以CRF01_AE和CRF07_BC为主要流行毒株;各毒株亚型V3顶端四肽以GPGQ变异型为主,且主要使用CCR5为辅助受体;2G12、PGT135及PGT128中和抗体表位呈现不同程度的变异。该研究为进一步开展针对献血人群的艾滋病预防与控制提供了参考数据。     

以TAR RNA 为靶的HIV-1抑制剂的研究进展

艾滋病病毒于1983年首次由法国巴斯德研究所的Montagnier 教授和美国的Gallo教授研究组同时发现[1],距今已有二十多年的历史了.尽管人们想尽了各种方法、采取了各种手段去对抗艾滋病,但它还是以不可遏制的速度在全球范围迅速蔓延开来.它所引起的危害已经成为21世纪人类面临的最严重的挑战.由于HIV-1本身的特点(快速变异和遗传异质性)使得抗艾滋病药物研制遇到了难以克服的困难.目前临床上使用的抗艾滋病药物主要有蛋白酶抑制剂和逆转录酶抑制剂,这两类药物极易产生耐药性和毒性,所以研制新型的不易产生耐药性的抗艾滋病药物就成为迫在眉睫的任务.这就迫使人们又回到艾滋病病毒的基础研究中去寻找新的不易产生耐药性的靶点--在病毒的生命周期中高度保守的遗传基因以及在病毒转录及翻译中起关键调控作用的蛋白.     

人类免疫缺陷病毒,艾滋病病毒1型艾滋病患者CD4+T淋巴细胞水平与机会感染及病毒载量的相关性分析

目的  分析人类免疫缺陷病毒,艾滋病病毒-1（HIV-1）型艾滋病（AIDS）患者体内CD4+T淋巴细胞水平与艾滋病病毒载量及机会性感染的相关性。方法  通过Real-time PCR OBASAmpliPrep/COBAS TaqMan全自动病毒载量仪（Roche公司）和流式细胞仪（FACSCOUNT）绝对计数法对95例HIV-1型AIDS患者定量检测血浆中HIV-1 RNA和CD4+T淋巴细胞数。结果  低文化程度的35～50岁已婚男性农民是HIV-1型AIDS患者的多见人群,主要通过性传播途径感染;机会感染最常见部位是呼吸系统感染90例次（51.5％）;机会感染发病率最多的是细菌性肺炎48例次（27.4％）;根据CD4+T淋巴细胞计数分层水平分为5组,细菌性肺炎、卡氏肺孢子虫肺炎、肺结核、口腔念珠菌感染、隐球菌脑膜炎、感染性腹泻及单纯疱疹各自在5组间比较差异有统计学意义（P <0.05）,其余机会感染各自在5组间比较差异无统计学意义（P >0.05）;CD4+T细胞计数低于200个/μl时,机会感染发生例次率为97.7%;病毒量<103拷贝/ml的AIDS中,以CD4+T细胞数在200～399个/μl的个体较多（75%）,病毒量≥105拷贝/ml的AIDS中,CD4+T细胞数在<200个/μl的个体45例（73.8%）;CD4+T淋巴细胞值与病毒载量对数值呈负相关（r =-0.34,P <0.01）。结论  AIDS患者机会性感染的发生率高,随病毒载量上升CD4+T淋巴细胞数呈现不同程度的下降趋势,CD4+T细胞计数是AIDS患者发生机会性感染的独立危险因素,加强对患者CD4+T细胞计数观察是预测机会性感染的重要手段。