慢病毒介导叉头框转录因子F2过表达抑制子宫内膜癌RL95-2细胞增殖与迁移

目的:探讨慢病毒介导叉头框转录因子F2(FoxF2)过表达对子宫内膜癌RL95-2细胞增殖与迁移的影响。方法:将体外培养的RL95-2细胞随机分为3组:Control、Lv-NC组和Lv-expFoxF2组。分别采用FoxF2过表达的慢病毒颗粒(Lv-expFoxF2组)和空载体对照慢病毒颗粒(Lv-NC组)感染RL95-2细胞,检测各组细胞FoxF2的mRNA和蛋白表达水平和各组细胞的增殖活性、细胞周期及体外迁移能力。结果:与Control组比较,Lv-expFoxF2组RL95-2细胞中FoxF2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P0.001)。与Control组比较,Lv-expFoxF2组的细胞存活率显著降低(P0.05),G_0/G_1期细胞百分比明显增加,S期细胞百分比明显减少(P0.05),体外迁移细胞数显著降低(P0.05)。结论:慢病毒介导的FoxF2过表达可抑制子宫内膜癌RL95-2细胞的增殖和迁移,诱导细胞发生G_0/G_1期阻滞。     

RNA干扰抑制EZH2基因表达对子宫内膜癌细胞上皮-间质转化的影响

目的:利用RNA干扰技术靶向沉默EZH2基因,检测其对子宫内膜癌细胞增殖、迁移能力及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:实时荧光定量PCR、Western blot检测EZH2在子宫内膜细胞ESC及子宫内膜癌细胞株ECC-1、RL95-2中的表达差异。利用化学技术合成小分子siRNA转染子宫内膜癌细胞,靶向抑制EZH2基因表达。CCK-8、Transwell小室检测干扰前后子宫内膜癌细胞株ECC-1、RL95-2增殖、迁移能力变化。Western blot检测干扰前后子宫内膜癌细胞株ECC-1、RL95-2中EMT相关蛋白E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化。结果:(1)EZH2在子宫内膜癌细胞株ECC-1、RL95-2中的表达明显高于子宫内膜细胞ESC(P0.01)。(2)RNA干扰抑制EZH2基因表达后,ECC-1、RL95-2细胞增殖、迁移能力降低(P0.01)。(3)RNA干扰抑制EZH2基因表达后,ECC-1、RL95-2细胞中上皮标志物E-cadherin和α-catenin的蛋白表达水平上调(P0.05),间质标志物N-cadherin和Vimentin的蛋白表达水平下调(P0.01)。结论:EZH2在子宫内膜癌细胞中高表达,siRNA靶向沉默EZH2基因可抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和上皮-间质转化。     

腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞凋亡的影响

目的研究外源性PTEN cDNA的表达对子宫内膜癌细胞凋亡的影响。方法用细菌内同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,蛋白印迹法鉴定转染Ad-PTEN后,子宫内膜癌细胞系RL95-2细胞中PTEN蛋白的表达。将RL95-2细胞随机分成3组: (1)空白对照组:仅用培养基而不加腺病毒;(2)Ad-CMV组:转染复制缺陷型空载体腺病毒Ad-CMV; (3)Ad-PTEN组:转染复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,前两组均为对照组。采用细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻检测、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)测定及染色体DNA片段化检测这3种方法,从不同角度检测PTEN蛋白的表达对RL95-2细胞凋亡的影响。结果经Ad-PTEN介导的PTEN cDNA能够在RL95-2细胞中持续有效地表达。Ad-PTEN组转染后24、48、72、96 h,RL95-2细胞中细胞膜PS外翻细胞分别占(6．09±1．01)％、(9．98±2．17)％、(11．74±2．65)％、(27．69±8．67)％,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0．05);RL95-2细胞中活化caspase-3细胞分别占(2．6±0．5)％、(18．0±4．4)％、(21．8±5．1)％、(33．7±9．9)％,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0．05)。Ad-PTEN转染后48 h,RL95-2细胞中出现特异性的染色体DNA梯状条带。结论腺病毒介导的PTEN cDNA能够有效地在RL95-2细胞中表达,并诱导其凋亡,为子宫内膜癌的基因治疗提供了理论基础。     

SphK2促进人卵巢癌细胞侵袭转移及其机制探讨

目的:研究鞘氨醇激酶2(SphK2)对人卵巢癌细胞系SKOV3和HO8910细胞侵袭和迁移能力的影响,探讨其可能调控机制。方法:设计并体外合成靶向SphK2的shRNA(short hairpin RNA)序列(shRNA SphK2)及阴性对照序列(shRNA NC),并与LV3(H1/GFPPuro)慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,包装shRNA慢病毒颗粒后分别转染SKOV3和HO8910细胞系。分别用Real-time PCR和Western blot法检测shRNA SphK2病毒颗粒转染后在mRNA及蛋白水平的沉默效率。Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力变化;Western blot法检测SphK2敲降后细胞中MMP-9蛋白表达。结果:用构建的shRNA慢病毒颗粒感染SKOV3和HO8910细胞后,SphK2 mRNA和蛋白表达水平显著下降。SKOV3和HO8910细胞中,shRNA SphK2转染组的迁移和侵袭细胞数均显著少于shRNA NC组和未转染组,差异均有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,转染后48h,shRNA SphK2转染组中MMP-9蛋白表达明显下降(P0.05)。结论:SphK2可促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭,其分子机制可能与调节MMP-9表达有关,提示SphK2在卵巢癌的发展转移中起着重要的作用。     

β-连环素对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨信号分子β连环素(β-catenin)在多个卵巢癌耐药细胞系中的表达及其对顺铂耐药性的影响。方法:首先在2个卵巢癌耐药细胞系(C13K,SKOV-3),2个卵巢癌敏感细胞系(OV2008,A2780),A2780顺铂敏感株、A2780-cis顺铂耐药株,COC10顺铂敏感株、COC1-cis顺铂耐药株中检测β-catenin蛋白的水平。通过小干扰RNA(si RNA)介导的RNA干扰技术靶向沉默细胞中β-catenin的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证β-catenin基因沉默效果。台盼蓝染色方法分析β-catenin基因沉默对细胞化疗药物顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测顺铂处理后β-catenin基因沉默细胞的凋亡率。Western blotting筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:β-catenin在2个卵巢癌耐药细胞系C13K,SKOV-3中蛋白水平较敏感细胞系明显上调。与亲本A2780和COC10细胞相比,在耐药株A2780-cis和COC1-cis中表达水平也明显增高。β-catenin si RNA能显著抑制细胞中β-catenin蛋白的水平。β-catenin基因沉默后,卵巢癌耐药细胞C13K,SKOV-3对顺铂敏感性显著增高;流式细胞术进一步分析发现β-catenin基因沉默可以促进顺铂介导的卵巢癌耐药细胞的细胞凋亡。Western blotting发现β-catenin基因沉默后,顺铂处理可以显著上调促凋亡分子p53和caspase-3蛋白水平。结论:β-catenin在卵巢癌耐药细胞系表达明显增高,β-catenin沉默可以促进卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,并同时促进了顺铂介导的细胞凋亡。     

过表达NDRG1通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进滋养层细胞上皮-间质转化

目的:探讨N-myc下游调节基因1(NDRG1)过表达对滋养层细胞上皮-间质转化(EMT)的影响以及对Wnt/β-catenin信号通路的作用。方法:采用携带NDRG1基因的慢病毒感染人胎盘滋养层细胞系HTR-8/SVneo,建立NDRG1基因稳定过表达的HTR-8/SVneo细胞株。qRT-PCR和Western blot法检测慢病毒感染后细胞中NDRG1基因mRNA和蛋白的表达水平,Transwell小室法观察细胞侵袭和迁移能力,免疫荧光实验检测β-catenin蛋白核转位情况,Western blot法分析EMT相关蛋白、Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9等蛋白表达。结果:慢病毒介导NDRG1过表达后,HTR-8/SVneo细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达水平显著上调。NDRG1过表达可显著增强细胞的侵袭和迁移能力,并上调MMP-2、MMP-9、波形蛋白(Vimentin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、β-catenin、Snail1和环氧化酶-2(COX-2)等蛋白的表达水平,下调上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)磷酸化水平,同时促进β-catenin蛋白由细胞质向细胞核转位。结论:NDRG1过表达可促进HTR-8/SVneo细胞EMT过程,提高细胞侵袭和迁移能力,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路转导相关。     

肝素结合表皮生长因子通过诱导人子宫内膜细胞骨桥蛋白的表达促进人滋养层细胞的体外侵袭

目的:探讨肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)对人子宫内膜细胞RL95-2与人滋养层细胞Be Wo体外黏附和铺展的影响及其作用机制。方法:利用免疫荧光法观察骨桥蛋白(OPN)在RL95-2细胞中的表达定位,采用RT-PCR和Western blotting检测HB-EGF对RL95-2细胞中OPN表达水平的影响,并通过黏附和铺展实验观察HB-EGF对Be Wo球状体细胞在RL95-2单层细胞上侵袭活性的影响。结果:OPN在RL95-2细胞膜表面高表达,HB-EGF能诱导RL95-2细胞中OPN的表达,并促进Be Wo细胞球在RL95-2细胞上的黏附和铺展。结论:HB-EGF可能通过上调子宫内膜细胞膜OPN的表达而促进滋养层细胞的体外侵袭活性。     

降表达SFRP2基因对滋养细胞HTR-8侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨SFRP2基因表达降低对人绒毛膜外滋养细胞HTR-8迁移和侵袭能力的影响。方法:利用慢病毒转染技术构建稳定降表达SFRP2基因的稳克隆细胞株,Transwell实验和划痕实验评估细胞的侵袭和迁移能力,Western blot法检测相关蛋白水平,平板克隆实验检测细胞的成球能力。结果:慢病毒转染SFRP2基因后,与HTR-8-vector组相比,HTR-8-shSFRP2-1/2组的穿膜细胞数增多、迁移距离增加; Vimentin、N-cadherin、MMP-9、MMP-2和Nanog、Oct4蛋白表达量明显增高,而E-cadherin蛋白表达量降低;细胞克隆形成数增加(P0.05)。给予Wnt抑制剂XAV 939后,Wnt/β-catenin信号通路的活性受到抑制,HTR-8-shSFRP2-1/2组细胞的侵袭、迁移能力及干性减弱。结论:降表达SFRP2基因可促进人绒毛膜外滋养细胞HTR8的迁移、侵袭能力和干性。     

HPV16 E6小干扰RNA与宫颈癌细胞中E6 p53 p21关系的研究

目的 探讨HPV16E6小干扰RNA（siRNA）与宫颈癌CaSki细胞中E6、p53、p21之间的关系。方法 2004年9月至2005年3月于四川大学华西第二医院,应用化学合成针对HPV16E6的siRNA借脂质体转染CaSki细胞,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术检测E6siRNA转染前后细胞中HPV16E6、p53、p21mRNA及其蛋白表达的变化。结果 转染24h,E6mRNA的表达显著低于空白组（P〈0.05）。各时间点p53、p21mRNA的表达差异无显著性意义（P〉0.05）。转染48h,E6蛋白表达明显下调,p53、p21蛋白表达相应升高。结论 HPV16E6siRNA能特异、高效地沉默宫颈癌细胞E6mRNA的表达,减少对野生型p53的降解,恢复p53蛋白的功能活性。RNA干扰（RNAi）技术可为HPV感染相关性疾病提供一种新的特异性基因治疗方法。     

调控METTL3表达对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 探究靶向调控甲基转移样酶3(methyltransferase like 3, METTL3)表达对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响及相关作用机制。方法 选取子宫内膜癌细胞,经培养后分为对照组、过表达METTL3组、沉默METTL3组,三组细胞分别干预。对三组细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力、METTL3、磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）、Wnt3a、β-连环蛋白（β-catenin）、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）、哺乳动物ATG6同源蛋白（Beclin-1）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)相对表达量进行检测。结果 沉默METTL3组细胞METTL3、p-ERK表达、增殖率、Wnt3a、β-catenin表达、细胞侵袭细胞数、迁移细胞数、PI3K、Akt、MMP-9表达均低于对照组、过表达METTL3组（P <0.05）;细胞凋亡率、LC3-Ⅱ、Beclin-1表达高于对照组、过表达METTL3组（P <0.05）。结论 沉默METTL3表达使凋亡、自噬、侵袭相关蛋白表达受到调控,从而影响子宫内膜癌细...     

米非司酮通过调节岩藻糖基转移酶IV的表达抑制胚胎体外黏附

目的:探讨米非司酮对人胚胎细胞JAR与人子宫内膜细胞RL95-2之间黏附的影响及其调控的分子机制。方法:采用黏附实验分别观察RU486以及岩藻糖基转移酶IV(FUT4)对JAR细胞与RL95-2细胞之间黏附的影响。采用RT-PCR以及Western blotting检测米非司酮对RL95-2细胞以及流产妇女子宫内膜中FUT4表达的调控。结果:①米非司酮抑制JAR细胞与RL95-2单层细胞之间的黏附;②米非司酮抑制RL95-2细胞以及流产妇女子宫内膜中FUT4基因和蛋白的表达;③FUT4质粒转染RL95-2细胞后,调节JAR细胞与RL95-2单层细胞之间的黏附。结论:米非司酮通过调节FUT4的表达抑制胚胎体外黏附。     

HLA-E介导孕激素对绒毛膜癌JEG-3细胞血管内皮生长因子表达的调节作用

目的:研究人类白细胞抗原E(HLA-E)是否参与孕激素对JEG-3细胞VEGF基因表达的调节作用。方法:JEG-3细胞分为5组,接受不同处理:空白对照(组1)、孕激素处理(组2)、转染HLA-E siRNA慢病毒后孕激素处理(组3),HLA-E siRNA慢病毒转染(组4)以及慢病毒阴性对照转染(组5)。48小时后收集细胞,分别采用Real-time PCR和Western blot方法检测JEG-3细胞血管内皮生长因子(VEGF) mRNA及蛋白表达水平。结果:组2 JEG-3细胞的VEGF mRNA和蛋白表达较组1增高,差异有统计学意义(P0.05);沉默HLA-E基因(组4)导致VEGF mRNA和蛋白表达降低,与组1比较,差异有统计学意义(P0.05)。组3 JEG-3细胞经HLA-E siRNA慢病毒转染、沉默HLA-E表达后再接受孕激素处理,VEGF mRNA及蛋白表达水平与组1比较差异无统计学意义(P0.05)。组5与组1比较,VEGF mRNA及蛋白水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:HLA-E介导孕激素对JEG-3滋养细胞VEGF表达的上调,孕激素对JEG-3细胞VEGF的上调作用被HLA-E基因的沉默消除。     

慢病毒介导的EZH2靶向RNA干扰对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的:通过慢病毒介导的EZH2-shRNA干扰载体,沉默人卵巢癌SKOV3细胞中果蝇zeste基因的人类同源物(EZH2)的表达,探讨靶基因EZH2对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:设计含EZH2基因序列的shRNA慢病毒干扰载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞株;利用CCK-8比色法检测EZH2基因沉默后对SKOV3细胞增殖的影响;利用RT-PCR、Western blot分别检测EZH2、PCNA mRNA及蛋白的表达情况。结果:EZH2-shRNA载体感染SKOV3细胞后,可显著抑制SKOV3细胞生长(P<0.05),并下调EZH2、PCNA mRNA和蛋白的表达(P均<0.05),而在空白对照组和空载体转染组中,无抑制作用。结论:沉默EZH2基因可抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖,可能是一种新的基因治疗方法。     

野生型p53抑制宫颈癌HeLa细胞的研究

目的:研究外源性野生型p53(wtp53)基因对宫颈癌HeLa细胞中的致癌基因环氧合酶-2(COX-2)的影响,以及抑制HeLa细胞生长的作用。方法:用脂质体介导的转染技术将野生型p53基因转染到HeLa细胞。实验分为2组,p53转染组(p53-HeLa组)和空白对照组(HeLa组),wtp53表达用逆转录-多聚酶链反应鉴定,并检测p53mR-NA和COX-2mRNA瞬时转染及稳定转染前后表达的变化。CCK-8染色法绘制细胞生长曲线。结果:野生型p53基因转染后HeLa细胞中的p53mRNA表达增加,COX-2mRNA表达减少。通过对细胞生长曲线的分析,转染后与转染前相比,生长明显减慢(P<0.01),wtp53对HeLa细胞有抑制作用。结论:外源性wtp53基因表达可抑制宫颈癌He-La细胞中COX-2mRNA的表达;wtp53可能通过抑制COX-2对宫颈癌HeLa细胞产生抑制作用,进而阻碍肿瘤的生长。     

siRNA抑制卵巢癌SKOV3细胞EPAS1表达及细胞增殖的体外研究

目的:探讨RNA干扰对卵巢癌SKOV3细胞中缺氧诱导因子2(EPAS1)表达及细胞增殖的抑制作用。方法:合成靶向EPAS1的小干扰RNA(siRNA)并进行转染。实验分为实验组、阳性对照组、阴性对照组及空白对照组。采用RT-PCR和western blotting检测各组细胞EPAS1 mRNA和蛋白表达水平,通过MTT法检测各组细胞增殖情况。结果:应用EPAS1-siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞后,实验组的EPAS1mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞增殖明显受限,与其他三组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组基因沉默效率为63.9%,蛋白抑制率为48.1%,细胞增殖抑制率为56.9%。结论:靶向EPAS1基因的siRNA可以抑制卵巢癌SKOV3细胞中EPAS1的表达,从而抑制SKOV3细胞在体外的增殖。     

LncRNA NEAT1通过靶向miR-103a-3p/SDF2轴调节滋养层细胞增殖、凋亡和侵袭

目的:探讨lncRNA NEAT1在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达及对滋养层细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法:qRT-PCR检测lncRNA NEAT1在PE患者胎盘组织中的表达,将人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo随机分为对照(control)组、pcDNA-NC组、pcDNA-NEAT1组、si-NC组、si-NEAT1组、si-NEAT1+inhibitor NC组、si-NEAT1+miR-103a-3p inhibitor组,分别检测各组HTR-8/SVneo细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,Western blot检测SDF2蛋白表达。双荧光素酶报告基因验证LncRNA NEAT1、SDF2与miR-103a-3p的靶向关系。结果:LncRNA NEAT1在PE患者胎盘组织中表达水平升高。与pcDNA-NC组比较,pcDNA-NEAT1组lncRNA NEAT1表达、SDF2蛋白表达、细胞凋亡率显著升高,miR-103a-3p表达及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-NEAT1组lncRNA NEAT1表达...     

慢病毒介导短发夹状RNA沉默生存素基因对人异位内膜细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究慢病毒介导生存素(survivin)基因特异性短发夹状RNA(shR-NA)对人异位内膜细胞中survivin基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向survivin基因的shRNA慢病毒表达载体,将重组慢病毒感染原代培养的异位内膜细胞,以未转染及空载慢病毒感染异位内膜细胞为对照。采用RT-PCR、Western blot法分别检测各组异位内膜细胞中survivin mRNA和蛋白表达的变化,用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增殖,Cy5-Annexin V/PI双染标记流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:与未转染细胞及空载慢病毒转染细胞相比,shRNA慢病毒感染人异位内膜细胞后survivin mRNA及蛋白表达水平明显下降,survivin mRNA及蛋白表达抑制率分别为64%和59%。转染后1～5天实验组细胞生长速度较阴性对照组及空白对照组明显减慢,除第1天外,差异均有统计学意义(P0.01);阴性对照组及空白对照组细胞生长速度的差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞仪分析显示,实验组细胞凋亡率为(41.61±3.64)%,明显高于阴性对照组的(9.14±1.88)%和空白对照组的(7.07±1.16)%(P0.01),后两组的差异无统计学意义(P0.05)。结论:慢病毒介导survivin基因特异性shRNA可有效沉默异位内膜细胞中survivin基因表达,明显抑制异位内膜细胞的增殖并促进细胞凋亡。     

人α1,3-岩藻糖基转移酶VII荧光真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建并鉴定绿色荧光蛋白为报告基因的pIRES2-EGFP-FUT7真核表达载体。方法:采用RT-PCR方法获得α1,3-岩藻糖基转移酶VII(FUT7)全长基因,克隆至pMD18-TSimple载体后,将FUT7亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体并进行鉴定。通过脂质体转染到子宫内膜RL95-2细胞中,荧光显微镜下观察并经RT-PCR检测FUT7的表达。结果:测序及酶切鉴定证明获得人全长FUT7基因,FUT7基因正确插入pIRES2-EGFP中,在荧光显微镜下观察到了绿色荧光蛋白在RL95-2细胞中的表达,半定量RT-PCR检测结果显示FUT7的表达明显增加。结论:成功构建了绿色荧光蛋白为报告基因的FUT7真核表达载体,并检测到在RL95-2细胞中的表达,为研究FUT7及其合成的糖抗原sLex在胚胎着床中的作用奠定了基础。     

单链抗体导向卵巢上皮癌进行靶向基因转移的实验研究

目的 :探讨靶向性基因转移载体—含抗MUC 1单链抗体的慢病毒对MUC 1+卵巢上皮癌细胞系SKOV 3细胞进行基因转移的特异性 ,为卵巢上皮癌的靶向性基因治疗提供实验基础。方法 :将针对SKOV 3细胞上抗原MUC 1的单链抗体基因构建到慢病毒包膜结构质粒 (pM .TC .G) ,以报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)基因作为目的基因。用磷酸钙沉淀法进行Anti MUC 1(ScFv)慢病毒包装 ,感染共培养的卵巢癌细胞SKOV 3(MUC 1+)和正常人成纤维细胞GF(MUC 1- ) ,荧光显微镜下观察感染效果。竞争抑制实验即病毒感染前加入Anti MUC 1单抗是否抑制病毒感染。结果 :荧光显微镜下观察到Anti MUC 1(ScFv)介导的慢病毒对共培养的SKOV 3(MUC 1+)和GF(MUC 1- )细胞的感染有明显差别 ,非Anti MUC 1(ScFv)介导的慢病毒对共培养的SKOV 3(MUC 1+)和GF(MUC 1- )的感染未见显著性差别 ,证明Anti MUC 1(ScFv)介导的慢病毒可对MUC 1+的卵巢细胞靶向性转染。病毒感染前加入Anti MUC 1单抗则可抑制病毒靶向性感染。此竟争抑制实验表明 ,病毒感染是由其抗体组成部分介导 ,故有抗体靶向性。结论 :Ani MUC 1(ScFv)介导的慢病毒可对MUC - 1+卵巢上皮癌细胞靶向性基因转移。     

miR-630在子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、侵袭和迁移中的作用及其机制

目的探讨miR-630对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法将体外培养的Ishikawa细胞分为miR-630 mimics组、mimics-NC组、miR-630 inhibitor组和inhibitor-NC组,采用实时荧光定量PCR检测miR-630表达,MTT实验和克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移。双荧光素酶报告基因实验检测miR-630和BMI1的靶向关系,免疫印迹法检测BMI1蛋白的表达。结果与相应对照组相比,转染miR-630 mimics可使Ishikawa细胞中miR-630表达水平明显升高,细胞OD值和BMI1蛋白的表达水平明显降低,克隆数、侵袭细胞数和迁移细胞数明显减少(P0.05);而转染miR-630 inhibitor引起Ishikawa细胞的变化与转染miR-630 mimics的结果正好相反(P0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实BMI1是miR-630的靶基因。结论 miR-630可抑制Ishikawa细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与靶向调控BMI1表达有关。