猴,兔角膜细胞成分原代培养的研究

目的 建立从同一角膜上上分离培养角膜上皮,基质和内皮细胞的方法。方法 采用消化法培养猴角膜内皮细胞,上皮细胞和兔角膜上皮细胞,组织块培养法培养角膜基质细胞和兔角膜内皮细胞,结果 猴,兔角膜内皮细胞培养１周后,均能形成细胞单层,猴角膜上皮细胞培养３－４天生长旺盛,但难以形成细胞单层,兔上皮细胞生长旺盛,１周后已达融合状态,细胞呈膜状伸出板层伪足,猴,兔基质细胞易培养,１周后融合成单层细胞,结论 从同     

兔角膜内皮细胞体外原代培养及形态学观察

目的：研究培养兔角膜内皮细胞,为实验提供基础。方法：通过改良的细胞收获,培养技术,在体外进行兔角膜内皮细胞的培养,细胞的类型由电镜证实,观察hEGF不同时间点对角膜内皮细胞生长状态的影响。结果：未加入任何促细胞分裂剂的情况下,细胞在体外生长良好,约一周左右形成密集状态,形态类似天然细胞,经倒置显微镜和电镜证实为角膜内皮细胞。在有hEGF存在时,细胞生长迅速3－4天形成单层,各个时间点EGF组的细胞数高于对照组,结论：该技术可为角膜内皮细胞的研究提供较多的纯内皮细胞。     

不同染色剂对兔眼角膜内皮细胞影响的研究

目的 观察并比较荧光素钠、吲哚靛青绿，台盼蓝，亚甲蓝，龙胆紫5种不同的前囊膜染色剂对兔眼角膜内皮细胞的影响。方法 新鲜离体兔眼角膜内皮滴入各实验试剂，0.25%台盼蓝，0.2%茜素红双重染色，光镜下观察角膜内皮细胞的活性，计数内皮细胞的死亡数，透射电镜检查，观察角膜内皮细胞超微结构的变化。结果 1%亚甲蓝组角膜内皮细胞失去正常的六边形结构，可见较多着色死亡细胞，细胞的死亡率与对照组相比，有统计学差异（P〈0.01）。电镜下，1%亚甲蓝组可观察到内皮细胞的胞膜不完整，胞浆内有空泡形成等变化。结论 1%亚甲蓝溶液对兔眼角膜内皮细胞的损伤作用。     

免角膜细胞的原代培养实验研究

报告了兔角膜三种细胞的体外培养技术，成功地建立了角膜上皮、基质和内皮细胞的原代纯培养且形成良好的细胞单层，可用于对角膜组织细胞的体外实验研究。     

改良兔角膜上皮细胞原代培养及纯化的方法

目的 改良原代培养及纯化兔角膜上皮细胞的方法,提高角膜上皮细胞原代培养的成功率.方法 采用全角膜组织培养法培养兔角膜上皮细胞,利用机械刮除和差速贴壁法进行纯化并传代,通过倒置显微镜对细胞进行形态学观察并应用免疫组织化学的方法对细胞进行鉴定.结果 兔全角膜24 h贴壁,48 h后即可见有细胞自角膜缘爬出,5d后细胞大量爬出可见成纤维细胞和角膜上皮细胞共存,界限明显;角膜上皮细胞复层生长.在界限融合前刮除成纤维细胞,角膜上皮细胞继续旺盛生长,10 d后达到融合.兔角膜上皮细胞传至第4代后细胞体积明显变大,传至第5代,细胞衰老、凋亡.兔角膜上皮细胞免疫组织化学显示PCK单克隆抗体阳性.结论 改良原代培养及纯化兔角膜上皮细胞的方法简单、经济、有效,并可获得具有良好生物学特性的角膜上皮细胞,为角膜及角膜疾病的研究奠定实验基础.     

兔角膜内皮、上皮及基质细胞体外培养扩增的研究

目的 建立角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养扩增的简单稳定的方法，为组织工程化角膜的构建提供种子细胞。方法 内皮细胞与后弹力层在培养基中孵育后消化法获原代细胞，胰酶消化去除表层上皮后取角膜缘，组织块法培养角膜缘上皮细胞，基质细胞应用胶原酶消化法获原代培养，各细胞融合后胰酶消化依次传代培养。结果 原代内皮细胞4—5d融合成单层细胞，可连续传6—7代。上皮细胞1周左右生长融合，连续传3—4代后细胞形态改变。基质细胞接种6—7d后近融合，传代后增殖明显，可连续传10代。结论依据角膜组织特征选择合适的方法体外分离、培养角膜3种细胞成分，可获连续传代扩增的角膜细胞。     

rhEGF滴眼液促进兔眼角膜内皮细胞损伤修复的实验研究

目的：观察rhEGF滴眼液对兔角膜内皮细胞损伤修复的作用。方法：36只新西兰白兔机械性破坏双眼内皮细胞,每只兔的两侧眼随机分为实验组和对照组。实验组点用100μg/ml的rhEGF滴眼液4次／日,对照组点用赋型剂4次／日。在选定时间分别观察内皮损伤愈合率、角膜厚度、内皮细胞密度及形态,并作内皮细胞有丝分裂的测量。结果：①术后第2、4天,实验组的内皮损伤愈合率明显快于对照组;第7天两组的内皮损伤区域几乎完全愈合。②术后第7天实验组的角膜厚度明显小于对照组,第10、14天两组无明显差异。③术后第14天和第21天实验组的角膜内皮细胞密度明显高于对照组。④实验组^3H-HDR标记的细胞核数明显多于对照组。     

应用干燥保存猴角膜对猴眼部分穿透角膜移植实验研究

用干燥保存10～57d 猴角膜,对10只猴(10眼)进行同种异体部分穿透角膜移植。共观察了9眼,最短者1个月,最长11个月以上。结果透明愈合者3眼,半透明2眼。对维持透明8个月的植片,行茜素红和台盼兰联合染色,内皮细胞层呈正常形态。提示:干燥保存角膜内皮细胞,可能并非死细胞。在活体房水培育和再水合作用下,经过一段复苏过程,可以恢复其正常形态和功能。     

Proteoglycan biosynthesis in cultures of corneas and corneal stroma cells from adult rabbits

The biosynthesis of proteoglycans has been follwed by [³H]glucosamine incorporation into rabbit corneal organ cultures and confluent cell cultures of stromal fibroblasts. Proteoglycans were extracted with guanidinium chloride, purified by chromatography on DEAE-cellulose and characterized by gel chromatography.The cell cultures accumulated polysaccharides linearly over 48 hr. Ninety per cent of the polysaccharide material was secreted into the medium. The main part of this constituted high-molecular weight hyaluronate but a proteoglycan fraction containing mostly dermatan sulphate was also found. The cells contained proteoglycans which mainly contained heparan and dermatan sulphates. The amount of keratan sulphate was insignificant in the cell cultures.The time course of synthesis in the organ cultures showed a discontinuous pattern with a rapid initial phase during the first two hours and after that a slower incorporation. The organ cultures synthesized proteoglycans containing equal amounts of chondroitin sulphate and a fraction which was presumably keratan sulphate (the two dominating polysaccharides of normal cornea). However, even these cultures synthesized mainly heparan sulphate and dermatan sulphate proteoglycans. Less proteoglycan material was secreted into the medium than in the cell cultures. The changes in the biosynthetic pattern when corneas are cultivated in vitro have certain features in common with those occurring in injured corneas.     

长期干燥保存角膜穿透移植实验与应用

利用干燥保存７～５７天及１６～３０个月的兔用膜，行同种异体部分穿透角膜移植后，前者３７眼中，透明愈合８眼，后者９眼中，透明愈合３眼。保存１０～５７天猴眼角膜移植后，观察的９猴（９眼）中，透明愈合３眼，半透明２眼。用干燥保存４个月～４年９个月人角膜，行挽救眼球穿透移植的６眼中，观察２６天到１年６个月，透明愈合２眼，半透明３眼。提示：在临床上，干燥保存角膜有可能作为穿透角膜移植材料应用。     

实验动物兔角膜Orbscan-Ⅱ检测

目的了解兔眼角膜的解剖学特征，为眼的动物实验提供参考数据。方法对46只新西兰白兔的92只眼角膜行Orbscan-Ⅱ检测，并分析各项检查参数。结果兔眼的平均角膜直径为（11．72±0．65）mm；平均角膜中央厚度为（391．91±21．78）μm，角膜最薄点厚度平均为（371．57±22．27）μm；兔眼的平均前房深度为（2．41±0．29）mm；兔眼角膜3mm光学区的平均屈光力为（46．53±2．02）D，5mm光学区的平均屈光力为（46．16±1．88）D；兔眼角膜前后表面高度图按形状可分为中央岛、不完全桥、规则桥、不规则桥及未分类型；兔眼Kappa角为（6．59±3．26）。。结论兔眼的上述测量参数多与人眼接近，但角膜厚度比人眼薄，角膜屈光力大于人眼，可作为眼表疾病和部分角膜屈光手术的实验动物。     

HAI EB-3000XYZ型眼库内皮显微镜对供体角膜内皮的评估

目的 评价HAI EB-3000XYZ型眼库内皮显微镜对供体角膜内皮细胞检测的可靠性。方法 选取供体角膜材料35例,年龄11～50岁;按供体死亡时间分为3组:A组≤6h;B组7～12h;C组>12h。术前分别对3组行内皮显微镜检查,PKP术后对剩余角膜环行台盼蓝-茜素红联合染色。对两者所测得的内皮细胞密度进行比较;对内皮显微镜测得的内皮细胞六边形比例和染色测得的活性率行相关分析。结果 在A、B两组中,内皮显微镜检测得的内皮细胞密度与染色结果无明显差别;C组两者之间的差别有显著统计学意义(P=0.000)。3组的内皮细胞六边形比例与活性率之间均没有明显的相关性。结论 HAI EB-3000XYZ型眼库内皮显微镜对死亡时间在12h以内的供体角膜内皮细胞密度检测较为准确,而对死亡12h以上的供体材料的检测则存在一定误差。     

兔晶状体不同部位上皮细胞体外培养的比较研究

目的　了解不同部位晶状体上皮细胞在增殖速度、潜力及细胞形态上有无差异。方法　将成年家兔的晶状体中央区、赤道前区及赤道区的前囊膜分别进行植块培养,测定晶状体上皮细胞增殖速度,观察增殖细胞的形态特征。结果　植块种植后３ｄ,囊膜边缘出现增殖细胞并迅速向四周延伸,但细胞增殖速度在２ｗｋ 后开始下降,至第４ｗｋ 时增殖完全停止。来自不同部位的晶状体上皮细胞其增殖速度和形态结构无明显差异（Ｐ＞ ０．０５）。结论　该结果提示白内障囊外摘出术中截囊部位的不同对术后后发障的发生率无明显影响。     

自体骨髓干细胞促进角膜苯酚烧伤愈合的实验研究

目的:了解自体骨髓干细胞促进兔角膜苯酚烧伤后愈合的作用。方法:将10只家兔双眼角膜用300g/L的苯酚棉签烧伤后,随机一眼用自体骨髓干细胞滴眼,另一眼为对照眼,用无细胞的培养液滴眼,观察双侧角膜愈合时间,进行的统计学的配对分析t检验。结果:在自体骨髓干细胞滴眼的干预下,角膜烧伤的愈合时间平均为3.2d,对照眼的愈合时间平均为7.2d,根据统计学检验,两者具有显著性差异(P<0.05)。结论:局部应用自体骨髓干细胞滴眼,对于角膜苯酚烧伤的愈合具有明显的促进作用。     

葡萄糖酸氯己定滴眼液在兔角膜中药代动力学的研究

目的研究滴用葡萄糖酸氯己定滴眼液后不同时间兔角膜中药物的含量及其药代动力学参数。设计实验性研究。研究对象24只新西兰白兔眼角膜。方法0.02%葡萄糖酸氯己定滴眼液兔双眼点药2次(每次50μl),于点眼后5、10、15、20、30、50、90、120min(随机分8组,每组3只)分别取角膜组织,采用高效液相色谱法分析测定角膜中的药物含量,利用3p87软件拟合药代动力学参数。主要指标药代动力学参数。结果0.02%葡萄糖酸氯己定在兔角膜中的理论达峰时间(tmax)为13.75min、达峰浓度(Cmax)为0.713μg·g-1、药物分布半衰期(t1/2α)为2.65min、药物消除半衰期(t1/2β)为48.72min、药物吸收半衰期(t1/2ka)为2.67min,清除率(CL)为1.64min-·1μg·g-1。结论0.02%葡萄糖酸氯己定滴眼后在兔角膜中呈一级吸收,开放式二室模型,实测值在15min时达高峰,其达峰浓度为(1.218±0.157)μg·g-1。这些参数对于指导临床用药具有一定意义。(眼科,2006,15:184-186)     

准分子激光对角膜内皮细胞影响的实验研究

目的 观察激光角膜光学切除术（ｐｈｏｔｏｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ ｋｅｒａｔｅｃｔｏｍｙ,ＰＲＫ）对角膜内皮细胞损伤的可能性。方法 采用有血清和无血清培养正常兔角膜和ＰＲＫ切削深１５０μｍ角膜１ｗｋ后,观察内皮细胞形态和内皮细胞密度。结果 ＰＲＫ切削深１５０μｍ无血清培养１ｗｋ后,角膜内皮细胞形态、大小不一,部分细胞边界染色较宽,内皮细胞密度明显低于对照组（Ｐ〈０．０５）。ＰＲＫ切削深１５０μｍ有血清