ApoE/LDLR双基因突变小鼠肝脏差异表达蛋白组研究

目的：分析脂代谢相关双基因突变(apoE-/-/LDLR-/-)小鼠肝脏蛋白质表达特点，研究差异表达蛋白与基因突变小鼠血脂代谢紊乱和动脉粥样硬化的关系。 方法: 应用双向电泳及质谱技术对5周龄双基因突变和野生型小鼠肝组织差异蛋白进行比较研究。结果: 双基因突变和野生型小鼠肝脏中分别检测到（928±15）和（1 017±50）个蛋白点（n=3），两者之间的平均匹配率分别为78.7%和83.2%。双基因突变小鼠有108个蛋白点未能与野生型小鼠匹配，相差5倍以上的上调点和下调点分别为10个和45个，取其中6个点做质谱分析，鉴定为endoplasmin precursor,acidic leucin-rich nuclear phosphoprotein 32 family member A,serotransferrin precursor,stress-70 protein precursor,fibronectin precursor,complement C3 precursor,fibrinogen gamma polypeptide 7种蛋白质。 结论: 双基因突变小鼠与野生型小鼠的肝脏蛋白表达谱有明显差异，推测这些蛋白在脂代谢相关双基因突变引发的小鼠血脂代谢紊乱在动脉粥样硬化的发生发展中可能发挥重要作用。     

脂代谢相关基因在低密度脂蛋白受体基因缺失幼龄小鼠肝脏中的表达分析

目的 探讨脂代谢相关基因在低密度脂蛋白受体(LDLR)基因缺失(LDLR-/-)小鼠肝脏中的表达特征及其与血脂紊乱和动脉粥样硬化早期病变的关系.方法 应用RT-PCR技术分析14、30、60和90天龄LDLR-/-与野生型(WT)小鼠靶基因表达差异,并进行血生化及主动脉形态学检测.结果 与同龄WT小鼠相比,LDLR-/-小鼠肝脏中载脂蛋白AⅣ、脂肪酸转运酶和肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ的mRNA水平在14天龄时即显著下调(P＜0.05);30天龄时载脂蛋白A Ⅰ显著上调,载脂蛋白F则显著下调(P＜0.05);60天龄时肝X受体α显著升高(P＜0.05),酰基辅酶A氧化酶1在90天龄时显著下调(P＜0.05);载脂蛋白A Ⅴ、载脂蛋白E、过氧化物增殖物激活受体α和血管生成素样蛋白3差异无统计学意义(P＞0.05).血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白C含量从14天龄起均显著高于同龄WT小鼠(均P＜0.05),并随年龄增长持续升高.结论 上述脂代谢相关基因在幼龄小鼠即发生表达水平的改变,与血脂紊乱及主动脉病变发生过程呈正相关,说明其可能共同参与幼龄小鼠的脂质代谢紊乱,进而影响动脉内皮细胞功能改变乃至动脉粥样硬化早期病变的发生.     

apoE基因敲除小鼠主动脉尾加压素Ⅱ受体GPR14表达的变化

目的：观察apoE敲除小鼠主动脉组织尾加压素Ⅱ受体-GPR14表达的变化，以探讨UⅡ及其受体系统在动脉粥样硬化发病中的作用。 方法： 取不同周龄（18、28 和38周）的apoE基因敲除及同龄对照C57BL/6J小鼠（各亚组n=6只），取主动脉，提取mRNA，行竞争RT-PCR。 结果： apoE敲除小鼠GPR14表达分别较同龄对照增加54.2%（18周，P<0.05）、50.0%（28周，P<0.05）、97.0%（38周，P<0.01）。取28周apoE基因敲除及同龄对照小鼠（各8只）主动脉行［125I］-尾加压素Ⅱ放射性配基实验，apoE基因敲除组最大结合力（Bmax）较对照组增大64%（P<0.01），而解离常数Kd值无明显变化（P>0.05）。 结论： 尾加压素Ⅱ/GPR14通路可能参与动脉粥样硬化的发病过程。     

膳食黑米皮对载脂蛋白E基因缺陷小鼠诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨膳食黑米皮对载脂蛋白E基因缺陷小鼠(apoE基因缺陷小鼠)动脉粥样硬化(AS)形成的影响及其作用机制,为AS的膳食防治研究提供理论依据。方法:分离apoE基因缺陷小鼠心脏,用油红O染色法和图像分析法检测小鼠主动脉窦动脉粥样斑块面积的大小。分离小鼠血清,硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO^-₂/NO^-₃)含量;分离小鼠主动脉,抽提总蛋白,放射免疫法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性;抽提总RNA,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测iNOSmRNA的表达。结果:黑米皮组apoE基因缺陷小鼠主动脉窦动脉粥样斑块面积显著低于阳性组和白米皮组(P＜0.01)。黑米皮组与白米皮组血清中NO^-₂/NO^-₃含量并无显著差异(P＞0.05);黑米皮组小鼠主动脉iNOS的活性和iNOSmRNA的表达量显著低于阳性组和白米皮组(P＜0.05)。结论:膳食黑米皮可抑制apoE基因缺陷小鼠iNOSmRNA的表达,这可能是黑米皮抗AS作用的机制之一。     

脂代谢相关三基因突变小鼠肝组织基因表达差异研究

目的研究3个脂代谢相关基因联合突变小鼠与野生型小鼠肝脏基因表达差异及其与血脂代谢紊乱和动脉粥样硬化病变的关系。方法应用BiostarM-40S型小鼠cDNA表达谱芯片检测不同基因型小鼠肝脏基因表达的差异，并观察不同年龄小鼠血浆总胆固醇和甘油三脂的浓度以及主动脉内膜形态变化。结果在被测的4000条基因中，与野生型小鼠比较，5周龄三基因突变小鼠肝脏基因表达上调92条，下调105条，脂代谢相关基因中与胆固醇合成相关的基因表达下调，与甘油三脂代谢相关的肝脂肪酶基因表达水平上调。糖代谢、细胞骨架蛋白和免疫等相关的基因表达也有明显差异。5周龄的三基因突变小鼠血浆总胆固醇和甘油三脂水平明显高于野生型小鼠，伴有主动脉内膜损伤，并随年龄增长而加重。结论三基因突变导致肝脏中与脂类、糖类以及免疫等相关的多种基因表达改变，可能共同参与了血脂代谢紊乱和动脉粥样硬化的发生发展。     

CTLA-4Ig融合蛋白抑制apoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化机理研究

目的探讨CTLA-4Ig融合蛋白抑制高脂饮食饲养的载脂蛋白E基因缺陷小鼠（apoE-／-）动脉粥样硬化（AS）的作用机理？方法30只10周龄apoE-／-小鼠,随机分为3组（每组10只）,高脂饮食饲养,分别采用CTLA-4Ig、IgG1、PBS腹腔注射（每周2次）。12周后取小鼠主动脉进行病理学检查,检测AS病变相关指标,包括斑块面积／管腔面积比、血管内膜／中膜厚度比,斑块内脂质、胶原和平滑肌细胞含量;取血清检测总胆固醇浓度和CRP、sICAM-1、IFN-1、IL-10、TGF—β1浓度。结果高脂饮食饲养12周后,形成明显AS斑块,但CTLA-4Ig组病变最轻。CTLA-4Ig组、IgG1组和PBS组的斑块面积／管腔面积比、血管内膜／中膜厚度比、斑块内脂质含量和胶原含量差异均有统计学意义（P〈0．05）,CTLA-4Ig组斑块面积／管腔面积比、血管内膜／中膜厚度比和斑块内脂质含量均显著低于IgG1组和PBS组（P〈0．05）,其斑块内胶原含量高于IgG1组和PBS组（P〈0．05）,而后2组间上述指标的差异均无统计学意义（P〉0．05）;3组间斑块内平滑肌细胞含量差异不具有统计学意义（P〉0．05）。CTLA-4Ig组、IgG1组和PBS组的血清总胆同醇浓度差异不具有计学意义（P〉0．05）,3组的血清CRP、sICAM—1、IFN-γ、IL-10、TGF—β1水平差异均有统计学意义（P〈0．05）,CTLA-4Ig组m清CRP、sICAM-1、IFN-1水平降低,血清IL-10、TGF-β1水平升高,而后2组间上述指标的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论CTLA-4Ig融合蛋向抑制高脂饮食饲养的apoE（-／-）小鼠动脉粥样硬化进程,可能与阻断B7／CD28通路、抗炎作用、促进Th2檄化、及影响凋节性T细胞功能等有关。     

动脉硬化性脑梗塞患者载脂蛋白E基因多态性的研究

动脉硬化性脑梗塞患者载脂蛋白Ｅ基因多态性的研究鄢盛恺周新李秀玲余敦礼哈黛文载脂蛋白Ｅ（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＥ，ａｐｏＥ）是一种含有２９９个氨基酸结合有磷脂的糖蛋白，由位于人第１９号染色体上的单一结构基因所编码。ＡｐｏＥ结构基因具有多态性，同一...     

载脂蛋白E基因敲除小鼠冠状动脉内粥样硬化病灶的研究

目的：研究载脂蛋白E基因敲除( apoE-/-)小鼠冠状动脉内粥样硬化病灶的分布和组成；探讨病灶发生和发展的机理。方法：取60周龄和112周龄的apoE-/-小鼠心脏作连续切片，从冠状动脉在主动脉开口处连续追踪冠状动脉主干和心肌内冠状动脉小分支，行Movat特殊染色，寻找病灶。根据组织切片数计算病灶离冠状动脉开口处的距离和病灶的长度；根据病灶的长度将病灶分为大、中、小3类病灶；用图像分析仪测量血管口径；根据Movat染色结果观察病灶内组成成分。结果：在apoE-/-小鼠冠状动脉内发现从主动脉内直接延续的延伸病灶和在冠状动脉分支内形成的原位病灶；在60周龄和112周龄小鼠冠状动脉延伸病灶的发生率分别为60%和80%；有延伸病灶的冠状动脉外膜有大量炎性细胞浸润。每只apoE-/-小鼠均有原位病灶；原位病灶多发生在左室壁心肌内血管分支处和乳头肌附近；随着原位病灶增大，蛋白聚糖成分减少，细胞内外脂质成分增多；增大的原位病灶可堵塞小血管；在有原位病灶的冠状动脉外膜常可发现有增多的炎性细胞。112周龄apoE-/-小鼠大原位病灶多于60周龄小鼠 (P＜0.05)。结论：apoE-/-小鼠冠状动脉主干和心肌小分支内分别存在着延伸和原位的粥样硬化病灶，随着小鼠周龄增加，病灶增大。动脉外膜炎症和心肌收缩对血管的挤压与病灶的发生和发展有密切关系。     

NK细胞影响T细胞向腺病毒感染的小鼠肝脏聚集的研究

目的 使用腺病毒感染的小鼠模型研究NK细胞向肝脏聚集过程中的作用机制。方法 应用抗NK1.1^ 单克隆抗体来剔除小鼠体内的NK细胞，使用FACS分析腺病毒感染的小鼠模型中肝脏的浸润淋巴细胞，应用RT－PCR检测小鼠肝组织、肝浸润淋巴细胞和脾组织中的趋化因子及其受体的基因表达，同时测定血清ALT来做人估价肝损伤。结果 抗NK1.1^ 单克隆抗体明显干扰了腺病毒感染小鼠模型中的T细胞向肝脏的聚集，抑制了趋化因子IP－10mRNA的表达。同时，与未给予抗NK1.1^ 单克隆抗体的小鼠腺病毒感染模型相比较，其肝脏受损也明显减轻。IP－10的特异性受体CXCR3 mRNA的表达先后分别出现在腺病毒感染后的脾脏和肝脏浸润淋巴细胞中。结论 NK细胞在T细胞向腺病毒感染的肝脏聚集过程中起着关键的作用，这种作用可能与依赖NK细胞的趋化因子IP－10密切相关。     

硫化氢抑制apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化中ICAM-1的表达

目的　探讨硫化氢(H2S)对apoE基因敲除小鼠(apoE-/-小鼠)动脉粥样硬化中细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)的调节作用。方法　6周龄雄性C57BL/6J和apoE-/-小鼠分为C57BL/6对照组、apoE-/-组、apoE-/-+硫氢化钠(NaHS)组和apoE-/-+炔丙基甘氨酸(PPG)组,每组各8只,普通饮食饲养10周。硫电极法测定血清中H2S的含量;ELISA法测定血清中ICAM-1的含量;荧光实时定量RT-PCR法测定主动脉组织中ICAM-1 mRNA的表达。油红O染色观察小鼠主动脉根部斑块面积的变化。结果 与C57BL/6J小鼠相比,apoE-/-小鼠血清中H2S的含量明显下降(P 0.01),血清中ICAM-1的含量和主动脉组织中ICAM-1 mRNA的表达明显升高(P 0.01),主动脉根部出现明显斑块;给予NaHS后,apoE-/-小鼠血清中H2S的含量明显升高(P 0.05),血清和主动脉组织中ICAM-1的表达明显降低(P 0.01和P 0.05),动脉粥样斑块明显缩小(P 0.05);给予PPG后,apoE-/-小鼠血清中H2S的含量明显降低(P 0.05),血清和主动脉组织中ICAM-1的表达明显增高(P 0.05和P 0.01),动脉粥样斑块明显增大(P 0.01)。结论　气体信号分子H2S可明显抑制动脉粥样斑块形成过程中ICAM-1的表达与分泌。     

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化早期血管外膜成纤维细胞增殖活性增强

目的:探讨动脉外膜成纤维细胞增殖与早期动脉粥样硬化病灶形成的关系。方法:选择6周龄载脂蛋白E基因敲除[apoE(-/-)]小鼠和野生型C57BL/6小鼠,高脂喂养2、4和10周后,在各个时点处死动物前24 h经腹腔注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU),后选取升主动脉制备连续切片,通过HE染色观察组织形态学的变化,用免疫组化方法观察不同时点血管外膜及内膜BrdU的表达变化。体外培养高脂喂养2周的apoE(-/-)小鼠和C57BL/6小鼠动脉外膜成纤维细胞,通过BrdU掺入法测定细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞周期。结果:体内实验发现apoE(-/-)小鼠高脂喂养2周后,在无可见内膜病灶形成之前,首先在主动脉外膜发现BrdU标记的阳性细胞,之后才在损伤内膜观察到BrdU标记细胞。而C57BL/6小鼠在任何时点都未检测到BrdU标记的细胞。体外实验观察到apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞BrdU标记的细胞数显著多于C57BL/6小鼠(P0.01),apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞S期及G2/M期所占百分比明显高于对照组(P0.05)。结论:血管外膜成纤维细胞增殖可能参与早期动脉粥样硬化病灶形成。     

Interaction between low density lipoprotein receptor (LDLR) and apolipoprotein E (apoE) alleles contributes to normal variation in lipid level

Subjects drawn from a population-based register were studied with respect to lipid level association. The association of isoforms of apolipoprotein E (apoE) with lipid level in the general population was found to be limited to people with one particular genotype at the low density lipoprotein receptor (LDLR) locus. The results presented in this paper suggest that functional LDLR variants enhance or limit the effect of isoforms of apoE. The association between apoE4 and serum total and LDL cholesterol level may be mediated through the LDL (apoB100, apoE) receptor to a greater extent than previously thought.     

构建不同周龄载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠血脂和病理学观察

背景：载脂蛋白E基因敲除小鼠形成的动脉粥样硬化病变与人类全身动脉粥样硬化好发处相近,是目前建立动脉粥样硬化理想的动物模型。 目的：研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理进程,探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响。 方法：将8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为2组,分别给予高脂饮食和普通饮食喂养8,12,16,20,24周。 结果与结论：血清学指标检测显示,不同周龄的高脂饮食组血清中总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平显著高于普通饮食组(P < 0.05),呈时间依赖性。大体和冰冻切片油红O染色结果显示,高脂饮食组动脉粥样硬化管腔斑块面积显著高于普通饮食组(P < 0.05),呈时间依赖性,此时两组各周龄小鼠管腔斑块面积相比均有显著性意义(P < 0.05),小鼠在高脂饮食16周时主动脉可见明显的脂质斑块。结果表明,实验成功构建了载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠,此模型形成脂质条纹和纤维增生病变的时间较普通饮食组更快。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

Lipoatrophic diabetes in Irs1(-/-)/Irs3(-/-) double knockout mice

Based on the phenotypes of knockout mice and cell lines, as well as pathway-specific analysis, the insulin receptor substrates IRS-1, IRS-2, IRS-3, and IRS-4 have been shown to play unique roles in insulin signal transduction. To investigate possible functional complementarity within the IRS family, we generated mice with double knockout of the genes for IRS-1/IRS-3 and IRS-1/IRS-4. Mice with a combined deficiency of IRS-1 and IRS-4 showed no differences from Irs1(-/-) mice with respect to growth and glucose homeostasis. In contrast, mice with a combined deficiency of IRS-1 and IRS-3 developed early-onset severe lipoatrophy associated with marked hyperglycemia, hyperinsulinemia, and insulin resistance. However, in contrast to other models of lipoatrophic diabetes, there was no accumulation of fat in liver or muscle. Furthermore, plasma leptin levels were markedly decreased, and adenovirus-mediated expression of leptin in liver reversed the hyperglycemia and hyperinsulinemia. The results indicate that IRS-1 and IRS-3 play important complementary roles in adipogenesis and establish the Irs1(-/-)/Irs3(-/-) double knockout mouse as a novel model of lipoatrophic diabetes.     

吡格列酮对尿毒症apoE~(-/-)小鼠调节性T细胞和动脉粥样硬化的影响

目的:观察吡格列酮(Pio)对尿毒症apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠调节性T细胞(Treg)和动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响。方法:ApoE-/-小鼠通过二步外科手术法建立尿毒症模型,对照组行假手术。造模后检测肾功能判断造模是否成功。实验动物分为:尿毒症Pio干预组(UP)、尿毒症安慰剂组(UO)及对照安慰剂组(CO),分别以Pio或安慰剂干预8周。干预结束后检测肾功能、血脂及血糖;血清转化生长因子β1(TGF-β1)及干扰素γ(IFN-γ)浓度;脾脏Treg比率;主动脉叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)、细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)及IFN-γmRNA的表达;主动脉根部AS斑块相对面积。结果:手术后肾功能检测提示造模成功。干预结束后UO组与CO组相比,主动脉根部斑块相对面积显著增大;脾脏Treg比率下降;血清TGF-β1浓度降低、IFN-γ浓度升高;主动脉Foxp3及CTLA-4mRNA表达下调、IFN-γmRNA表达上调。Pio干预能逆转上述指标的改变,即UP组与UO组相比,主动脉根部斑块面积显著缩小;脾脏Treg比率上升;血清TGF-β1浓度升高、IFN-γ浓度降低;主动脉Foxp3及CTLA-4mRNA表达上调、IFN-γmRNA表达下调。结论:Pio可上调尿毒症apoE-/-鼠体内受损Treg的数量和功能,校正Treg/效应性T细胞(effectorTcell,Teff)失衡和延缓其主动脉加速发展的AS,而此作用与改善糖脂代谢无关。     

Effects of an ultra-long-distance (1000 km) race on lipid metabolism

Summary The influence was examined of ultra-long-distance running (1000 km race lasting 20 days) on changes in serum lipids. The 110 participants received two types of diet, a conventional Western diet and a wholesome vegetarian diet. Of the 55 finishers the serum concentration of total cholesterol, low density lipoprotein (LDL)-cholesterol, apolipoprotein B and triglycerides decreased significantly during the first 8 days of the run, but rose again towards the end of the race without reaching pre-race levels. The high density lipoprotein (HDL)-cholesterol increased initially but decreased in the final days of the run. The values for apolipoprotein A-I were not correlated with HDL-cholesterol. The free fatty acids and free glycerol showed marked increases (five times the prerace concentration), falling towards the end of the run. Changes in serum lipids showed no correlation with changes in body mass. Similar changes were observed in both dietary groups.