黄芪液拮抗乳酸盐腹透液对人腹膜间皮细胞的损伤作用

目的 :研究黄芪液对乳酸盐腹透液致腹膜间皮细胞增殖及损伤作用的影响。方法 :采用胰蛋白酶 -ED TA消化法 ,从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,并建立体外人腹膜间皮细胞 (HPMC)培养模型。以MTT法测定HPMC增殖程度 ,采用自动生化分析仪检测 ,培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)水平示细胞损伤程度。结果 :2 .5 %乳酸盐腹透液中加用黄芪液 (1mg/ml)与HPMC作用 4 5min ,其培养液中LDH水平较腹透液对照组明显降低(P <0 .0 1) ,HPMC增殖能力明显增强 (P <0 .0 1)。结论 :黄芪液能拮抗乳酸盐腹透液致HPMC的损伤。     

高糖对人腹膜间皮细胞生成活性氧的影响

[目的]研究不同浓度的葡萄糖对人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells,HPMCs）生成活性氧的影响。[方法]HPMCs体外培养并进行免疫组化鉴定,取第3代细胞用于实验。分别按照不同的实验要求将细胞分组。不同葡萄糖浓度干预组：①空白对照组;②1．5％葡萄糖组;③2．5％葡萄糖组;④4．25％葡萄糖组。不同作用时间组：①空白对照组;②2．5％葡萄糖组。两组细胞分别培养12、24、48h。应用流式细胞仪检测细胞对氧化剂敏感的2．7-二氢二氯荧光素（2’,7’-dichlorodihydrofluorescein,DCFH）发生氧化所产生的荧光量,从而间接的反映细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的水平,观察随葡萄糖浓度变化及不同作用时间对人腹膜间皮细胞产生活性氧的影响。[结果]（1）与空白对照组比较,高糖干预人腹膜间皮细胞后,其细胞内平均荧光强度明显升高（P〈0．05）,并且随葡萄糖浓度升高而逐渐增高,其中4．25％葡萄糖组最高。（2）与空白对照组比较,随着时间的延长,高糖作用下细胞内平均荧光强度明显升高（P〈0．05）,培养48h其水平最高。[结论]高糖可刺激体外培养的人腹膜间皮细胞ROS的生成。     

黄芪甲苷抑制高糖腹透液诱导HMrSV5氧化应激与EMT的实验研究

目的 观察黄芪甲苷（Astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ）对高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞HMrSV5氧化应激及EMT的影响,探讨ROS在EMT中的作用及AS-Ⅳ干预机制。方法 采用葡萄糖腹透液诱导建立HMrSV5氧化应激模型,相差显微镜观察细胞形态变化,MTT检测AS-Ⅳ及葡萄糖腹透液对细胞活力的影响;予40μg/mL AS-Ⅳ干预HMrSV5氧化应激,DHE荧光探针检测药物作用前后ROS生成水平变化,Western blot检测EMT相关蛋白变化;与ROS清除剂NAC作对照,观察AS-Ⅳ干预HMrSV5氧化应激EMT指标及Smads蛋白的变化。结果 ①40、50μg/mL AS-Ⅳ干预后细胞活力稍有上升（P<0.05）;随腹透液作用时间的延长及葡萄糖浓度提高,细胞活力明显抑制,以4.25%高糖腹透液干预48h最明显（P<0.05）,细胞拉伸变长;②40μg/mL AS-Ⅳ作用细胞能抑制形态改变,降低模型组ROS的生成（P<0.05）,上调E-cadherin、ZO-1表达,下调α-SMA表达,并抑制Smad2/3磷酸化;③5mmol/L NAC产生类似调控作用。结论 高糖腹透液可抑制PMCs细胞活性,增加ROS生成,导致PMCs EMT,其分子机制可能与ROS参与调控的Smads通路激活有关,而AS-Ⅳ可能通过减少ROS生成,抑制Smad2/3磷酸化,阻抑PMCs EMT。      

高糖对人腹膜间皮细胞氧化应激的影响

目的研究不同浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)氧化应激的影响。方法HPMC体外培养并行免疫组化鉴定,取第2代细胞用于实验。将不同浓度葡萄糖干预HPMC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力;采用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内的荧光强度而测得细胞内活性氧(ROS)水平。分析不同浓度葡萄糖及不同作用时间对HPMC细胞活力及ROS水平的影响。结果高糖明显抑制HPMC细胞活力(P<0.05),随着葡萄糖浓度增加及作用时间的延长,抑制率呈上升趋势。高糖干预HPMC后,细胞内的平均荧光强度明显升高。结论高糖导致细胞发生氧化应激,其对细胞的损伤作用可能与氧自由基生成过多及ROS蓄积有关。     

高糖对人腹膜间皮细胞氧化应激的影响

目的 研究不同浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)氧化应激的影响.方法 HPMC体外培养并行免疫组化鉴定,取第2代细胞用于实验.将不同浓度葡萄糖干预HPMC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力;采用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内的荧光强度而测得细胞内活性氧(ROS)水平.分析不同浓度葡萄糖及不同作用时间对HPMC细胞活力及ROS水平的影响.结果 高糖明显抑制HPMC细胞活力(P＜0.05),随着葡萄糖浓度增加及作用时间的延长,抑制率呈上升趋势.高糖干预HPMC后,细胞内的平均荧光强度明显升高.结论 高糖导致细胞发生氧化应激,其对细胞的损伤作用可能与氧自由基生成过多及ROS蓄积有关.     

氟伐他汀对高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞纤维连接蛋白表达的影响

目的:探讨氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对高糖腹透液(high-glucose peritoneal dialysate,HGPDS)诱导人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响?方法:体外培养HPMCs,同步化24 h后,分为正常对照组?HGPDS组?HGPDS+Flu组?单纯氟伐他汀组?DMSO对照组,各组分别刺激不同时间后,噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的活力,RT-PCR检测FN的mRNA表达,ELISA法检测上清液FN蛋白表达的变化?结果:与正常对照组比较,HGPDS明显抑制细胞活力,HGPDS联合Flu共同培养24?36 h,细胞活力有所恢复,其中,1 × 10-6 mol/L Flu作用24 h,细胞活力改善差异有统计学意义(P < 0.05);与正常对照组比较,HGPDS明显增加人腹膜间皮细胞FN mRNA及蛋白表达(P < 0.05),并呈时间依赖性,其中FN mRNA于6 h达高峰,FN蛋白于24 h达高峰?Flu 可抑制HGPDS诱导的FN的高表达(P < 0.05),并呈浓度依赖性?结论:HGPDS诱导体外培养人腹膜间皮细胞FN表达增加,此作用可被Flu 抑制?     

线粒体在高糖损伤人腹膜间皮细胞中的作用

目的:探讨高浓度葡萄糖损伤人腹膜间皮细胞的机制。方法:(1)分离培养人腹膜间皮细胞,以细胞形态、免疫细胞化学染色作细胞鉴定;(2)第2代人腹膜间皮细胞分别经含1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖的M199培养基培养48h后(以正常M199培养基和含4.25%甘露醇的M199培养基为对照),检测间皮细胞线粒体膜电位、凋亡率和caspase-3活性;(3)分别用0.1μmol/L和0.01μmol/L环孢菌素A(CsA)与4.25%葡萄糖共同刺激体外培养的人腹膜间皮细胞(以4.25%葡萄糖为对照),检测间皮细胞凋亡率和caspase-3活性。结果:(1)1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖组线粒体膜电位丧失的细胞百分率显著高于M199对照组(P<0.05)且随着葡萄糖浓度增加,线粒体膜电位丧失的细胞百分率增加,4.25%葡萄糖组线粒体膜电位丧失的细胞百分率显著高于甘露醇对照组;(2)2.5%葡萄糖组和4.25%葡萄糖组间皮细胞caspase-3活性和凋亡率显著高于M199对照组(P<0.05),而1.5%葡萄糖组及4.25%甘露醇组间皮细胞caspase-3活性和凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。且随着葡萄糖浓度增加,间皮细胞caspase-3活性和凋亡率上升,4.25%葡萄糖组caspase-3活性和凋亡率显著高于4.25%甘露醇组(P<0.05);(3)随着葡萄糖浓度增加,线粒体膜电位丧失的间皮细胞百分率与间皮细胞凋亡率、caspase-3活性呈显著正相关(P<0.01);(4)0.1μmol/L CsA组间皮细胞凋亡率和caspase-3活性显著低于高糖对照组(P<0.05)。结论:(1)高浓度葡萄糖能以剂量依赖的方式诱导人腹膜间皮细胞线粒体膜电位丧失、caspase-3活化和凋亡;(2)高糖诱导人腹膜间皮细胞caspase-3活化和凋亡可能依赖于线粒体活化。     

黄芪注射液拮抗腹膜透析液诱导腹膜间皮细胞凋亡的研究

目的:了解黄芪注射液对体外培养的人腹膜间皮细胞凋亡的影响。方法:培养液中添加含不同浓度黄芪注射液的1.5%葡萄糖腹膜透析液(PDS),观察细胞caspase-3活性变化,应用Annexin V/PI双染色流式细胞仪方法以及末端标记技术(TUNEL)观察各组腹膜间皮细胞凋亡的情况。结果:以对照组caspase-3活性为1,PDS组细胞caspase-3相对活性为3.26±0.91,显著高于黄芪一组(1.87±0.43)和黄芪二组(1.67±0.32),P<0.05。An-nexin V-FITC/PI双标记结果显示,PDS组细胞凋亡率和死亡率分别为(46.8±14.2)%和(25.7±12.4)%,显著高于对照组的(9.04±4.86)%和(7.96±4.28)%,P<0.05;黄芪一组和黄芪二组的细胞凋亡率和死亡率显著低于PDS组(P<0.05)。TUNEL研究结果显示,PDS组细胞凋亡明显高于对照组、黄芪一组和黄芪二组。结论:黄芪注射液可抑制PDS诱导的腹膜间皮细胞凋亡的发生。     

黄芪甲苷改善过氧化氢诱导的人主动脉内皮细胞氧化应激损伤的研究

目的：研究黄芪甲苷（astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ）对过氧化氢（H2O2）诱导的人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）氧化应激损伤的改善作用。方法：体外培养的HAECs经饥饿处理后分为对照组、H2O2损伤组及AS-Ⅳ治疗组。H2O2损伤组细胞经H2O2（400 μmol/L)持续损伤36 h,AS-Ⅳ治疗组细胞经H2O2损伤12 h后加入含50 μg/mL AS-Ⅳ的培养基继续干预处理24 h。观察AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤及线粒体功能损伤的修复作用。结果：H2O2损伤后HAECs 丙二醛（MDA）含量、NADPH氧化酶活性及线粒体活性氧（ROS）水平显著增加,超氧化物歧化酶（SOD）和锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）活性及线粒体膜电位显著降低;H2O2损伤的HAECs 经AS-IV治疗后,HAECs的MDA含量、NADPH氧化酶活性及线粒体ROS含量明显降低,SOD和Mn-SOD活性及线粒体膜电位显著增高。结论：AS-Ⅳ对H2O2诱导的HAECs氧化应激损伤具有保护作用,提高线粒体的抗氧化功能是其可能的机制之一     

含糖腹透液对大鼠腹膜间皮细胞功能的影响

目的 探讨含糖腹透液对大鼠腹膜间皮细胞功能的影响.方法 体外培养的大鼠腹膜间皮细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,同时观察细胞内游离钙的水平和ICAM-1表达水平.结果 腹膜透析液刺激1 h后,体外培养的大鼠腹膜间皮细胞早期凋亡率增高;随着腹透液中糖浓度越高,刺激时间越长,凋亡率增高越明显,ICAM-1表达显著增加,细胞内游离钙水平下降.结论 高糖腹透液可以增加腹膜间皮细胞其凋亡率,降低细胞游离钙水平和增加ICAM-1的表达,这些改变可能是长期腹透病人腹膜纤维化和发生失超滤的原因.

Abstract：

Objective To investigate the effects of peritoneal dialysis solution (PDS) on apoptosis and intracellular free calcium ([Ca~(2+)]i), cell surface ICAM-1 expression of rat peritoneal mesothelial cells (RPMCs). Methods The RPMCs apoptosis rate were determined by flow cytometry. [Ca~(2+)]i in the cells were monitered the fluorescence at 528 nm by confocus laser microscopy. Cell surface ICAM-1 expression were detected by flow cytometry. Results After PDS treatment for 1 h, the RPMCs apoptosis rate were increased. Such increase was more manifest with higher glucose concentration in PDS and longer treatment time of the cells. At the same times, after 3 hours, ICAM-1 expressions of the PDS containing glucose and mannitol are all increased. With the increase of glucose concentrations, the descend of [Ca~(2+)]i levels were aggravated.Conclusion PDS containing high- concentration glucose can induce significant apoptosis of RPMCs in vitro. This may be related with the enhanced level of ICAM-1 expressions and the decreased level of [Ca~(2+)]i. Which may due to the occurrence of peritoneal fibrosis and ultrafiltrate failure in patients suffering long term peritoneal dialysis.     

腹透液相关浓度葡萄糖对体外腹膜间皮细胞的影响

目的 研究腹透液相关的三种浓度葡萄糖（1．5％、2．5％、4．25％）对体外培养的腹膜间皮细胞凋亡及其形态的影响。方法 胰蛋白酶消化法从腹膜组织中分离间皮细胞，建立体外培养模型。采用Hoechst 33258荧光染色法及流式细胞仪技术测定体外培养的腹膜间皮细胞在腹膜透析液相关浓度葡萄糖作用下的凋亡率；采用透射电子显微镜技术观察高浓度葡萄糖对体外培养的腹膜间皮细胞形态学的影响。结果Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞仪结果显示：与对照组比较，1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖均能引起明显的腹膜间皮细胞的凋亡（P〈0．05），三种浓度葡萄糖组间也有显著的差异（P〈0．05），4．25％甘露醇能引起明显的凋亡（P〈0．01），4．25％葡萄糖与4．25％甘露醇比较，前者能引起明显的凋亡（P〈0．05）；与正常对照组比较，1．5％葡萄糖分别作用于腹膜间皮细胞24h、72h、120h，各时间组均出现明显的凋亡（P〈0．05）。腹膜间皮细胞的凋亡率与葡萄糖浓度和作用时间呈正相关（r〉0．7．P〈0.05）。透射电子显微镜观察4．25％葡萄糖作用72h后大鼠腹膜间皮细胞的形态变化：细胞表面的微绒毛倒伏、脱失；细胞质内出现线粒体空泡样变；细胞核内的染色质浓缩、边集；出现凋亡小体。结论 腹膜透析液相关的三种浓度葡萄糖和4．25％的甘露醇均能引起腹膜间皮细胞的凋亡；葡萄糖诱导的腹膜间皮细胞凋亡具有浓度和时间依赖性；葡萄糖引起的细胞凋亡不仅与其渗透压有关，还与葡萄糖代谢有关；葡萄糖引起的细胞形态改变有：腹膜间皮细胞表面的微绒毛倒伏、缺失；细胞质内的线粒体出现空泡样变：细胞核内出现染色质浓缩、边集的改变。     

高浓度葡萄糖损伤人腹膜间皮细胞分子机制的研究

目的：探讨高浓度葡萄糖损伤人腹膜间皮细胞的机制。方法：（1）人腹膜间皮细胞分别经含1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖的M199培养基培养48小时后，检测间皮细胞线粒体膜电位（Ψ）、凋亡率、caspase-3活性、bax和bcl-2基因mRNA表达；（2）分别用0．1μmol／L和0．01μmol／L环孢素A（CsA）与4．25％葡萄糖共同作用人腹膜间皮细胞，检测细胞凋亡率和caspase-3活性。结果：（1）随着葡萄糖浓度增加，Ψ丧失的细胞百分率、bax mRNA表达量、caspase-3活性、凋亡率增加（P〈0．05），而bcl-2 mRNA表达量减少；（2）随着葡萄糖浓度增加，bax mRNA的表达量与皿丧失的间皮细胞百分率呈显著正相关（P〈0．01）；bcl-2 mRNA的表达量与Ψ丧失的间皮细胞百分率呈显著负相关（P〈0．01），Ψ丧失的间皮细胞百分率与间皮细胞凋亡率、caspase-3活性呈显著正相关（P〈0．01）：（3）0．1μmol／L CsA组间皮细胞凋亡率和caspase-3活性显著低于高糖对照组（P〈0．05）。结论：（1）高糖可能通过上调bax基因表达和下调bcl-2基因表达，诱导人腹膜间皮细胞线粒体活化、caspase-3活化和凋亡。（2）高糖诱导人腹膜间皮细胞caspase-3活化和凋亡可能依赖于线粒体活化。     

腹透液对大鼠腹膜间皮细胞凋亡和增殖的影响

目的探讨腹透液对腹膜间皮细胞凋亡和增殖的影响。方法采用MTT比色法测定腹透液对体外培养的大鼠腹膜间皮细胞增殖的影响．同时应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果腹透液刺激1h后，体外培养的大鼠腹膜问皮细胞增殖抑制率、G0/G1期细胞比例、早期凋亡率均增高；腹透液中糖浓度越高，刺激时间越长，以上3个指标增高越明显。含4．25％葡萄糖的腹透液刺激3h后，细胞增殖抑制率达44．12％，G0/G1期细胞占71．95％，早期凋亡率达23．59％，远远高于不含糖的阴性对照组和含1．5％糖腹透液组（P〈0．001），也高于4．25％甘露醇组（P〈0．05）。结论高糖腹透液诱导体外培养的腹膜间皮细胞凋亡．抑制其增殖。     

黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 观察黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-pl/Smads信号蛋白的影响,探讨黄芪对腹膜纤维化的阻抑作用与机制.方法 实验分为5组,每组10只.阴性对照组:每日腹腔注射生理盐水20 mL/只,共35d;模型组:每日腹腔注射4.25％葡萄糖腹透液20 mL/只,共35 d;黄芪低、中、高剂量组:于造模第16天开始每日腹腔注射黄芪腹透液(腹透液中加入黄芪注射液,分别含黄芪生药终浓度10、20、40 mg/mL)20 mL/只,共20d.HE染色观察腹膜病理改变;快速免疫组化法检测腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN、E-cadherin、α-SMA的表达;Western blot检测腹膜组织TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad2/3、p-smad2/3、Smad7蛋白的表达;RT-PCR检测TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad7mRNA表达.结果 ①模型组PMCs呈圆形或柱形,有脱落,间皮下基质增生,大量成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润,纤维素样物质沉积,腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN表达上调,黄芪各干预组上述变化有改善,以高剂量组作用较为明显;②模型组EMT标记蛋白α-SMA表达上调,E-cadherin表达下调,高、中剂量黄芪组能一定程度地逆转腹膜组织E-cadherin表达下降与α-SMA高表达;③模型组Samds信号蛋白p-smad2/3、Smad7表达上调,黄芪可不同程度地下调p-smad2/3高表达,增强Samd7的表达,高剂量组作用较为显著.结论 高糖腹透析液可促使PMCs EMT的发生,黄芪很可能通过抑制TGF-β1,并作用于Smads信号转导通路正、负反馈环路中的Smad2/3、Smad7关键信号蛋白,阻抑PMCs EMT的发生.     

高糖对人腹膜间皮细胞间隙连接蛋白的影响

目的研究高糖对人腹膜间皮细胞间隙连接蛋白（connexin43）表达的影响。方法分离培养人腹膜间皮细胞,细胞分为3组：正常糖组（含5．5mmol／L葡萄糖）、高糖组（含140mmol／L葡萄糖）和渗透压对照组（含5．5mmol／L葡萄糖加24．5mmol／L甘露醇）,培养24、48h后,应用Northernblot、Westernblot方法检测connexin43mRNA和蛋白质表达,比较3组之间的差异。结果正常糖组腹膜问皮细胞表达丰富的connexin43,高糖环境下培养的腹膜间皮细胞connexin43mRNA和蛋白质表达均较正常糖组显著下降（P〈0．05）。渗透压对照组与正常糖组之间无明显差异（P〉0．05）。结论高糖可抑制腹膜间皮细胞connexin43mRNA和蛋白质表达,可能为腹膜透析（PD）中腹膜间皮层完整性损伤的机制之一。     

几丁糖对高糖腹透液刺激大鼠腹膜间皮细胞TGF-β1表达的影响

目的 探讨高糖腹透液(4.25%)对大鼠二代腹膜间皮细胞TGF-β1表达的影响及几丁糖(chitosan)的干预作用.方法 取第2代鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells, RPMC)(经细胞形态和免疫组化鉴定),随机分为4组(n=4),A组即对照组:DMEM/F12培养基培养;B组:DMEM/F12培养基中加入4.25%葡萄糖透析液;C组:DMEM/F12培养基中加入4.25%葡萄糖透析液+几丁糖1.2 mg/L;D组:DMEM/F12培养基中加入4.25%葡萄糖透析液+几丁糖0.4 mg/L.培养24 h收集细胞提取RNA,48 h收集细胞提取蛋白,RT-PCR检测腹膜间皮细胞TGF-β1 mRNA的表达.Western印迹检测TGF-β1的蛋白表达.结果 ①RPMC经高糖腹透液(4.25%)刺激后,TGF-β1 mRNA和蛋白的表达均上升,与0 h比较,TGF-β1 mRNA和蛋白的表达分别于24、48 h时达到高峰, A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.05);②24 h时,几丁糖使TGF-β1 mRNA的表达下降明显(P<0.05),B组分别为A组的2.51倍、C组的2.13倍、D组的1.68倍,D组为C组的1.26倍且抑制程度与几丁糖浓度呈正相关(r=0.948, P<0.01).48 h时,几丁糖使TGF-β1的蛋白水平下降明显,B组分别为A组的1.85倍、C组的1.52倍、D组的1.24倍,D组为C组的1.23倍.C、D两组分别与B组比较差异有统计学意义(P<0.05),且抑制程度与几丁糖浓度呈正相关(r=0.831, P<0.05).结论 ①高糖腹透液可刺激RPMC TGF-β1 mRNA和蛋白表达上调;②几丁糖可抑制腹膜纤维化的中枢性因子TGF-β1表达的活性.     

黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 观察黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGFβ1/Smads信号蛋白的影响,探讨黄芪对腹膜纤维化的阻抑作用与机制。方法 实验分为5组,每组10只。阴性对照组：每日腹腔注射生理盐水20mL/只,共35d;模型组：每日腹腔注射4.25%葡萄糖腹透液20mL/只,共35d;黄芪低、中、高剂量组：于造模第16天开始每日腹腔注射黄芪腹透液（腹透液中加入黄芪注射液,分别含黄芪生药终浓度10、20、40mg/mL）20mL/只,共20d。HE染色观察腹膜病理改变;快速免疫组化法检测腹膜组织TGFβ1、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ、FN、Ecadherin、αSMA的表达;Western blot检测腹膜组织TGFβ1、Ecadherin、αSMA、Smad2/3、psmad2/3、Smad7蛋白的表达;RTPCR检测TGFβ1、Ecadherin、αSMA、Smad7mRNA表达。结果 ①模型组PMCs呈圆形或柱形,有脱落,间皮下基质增生,大量成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润,纤维素样物质沉积,腹膜组织TGFβ1、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ、FN表达上调,黄芪各干预组上述变化有改善,以高剂量组作用较为明显;②模型组EMT标记蛋白αSMA表达上调,Ecadherin表达下调,高、中剂量黄芪组能一定程度地逆转腹膜组织Ecadherin表达下降与αSMA高表达;③模型组Samds信号蛋白psmad2/3、Smad7表达上调,黄芪可不同程度地下调psmad2/3高表达,增强Samd7的表达,高剂量组作用较为显著。结论 高糖腹透析液可促使PMCs EMT的发生,黄芪很可能通过抑制TGFβ1,并作用于Smads信号转导通路正、负反馈环路中的Smad2/3、Smad7关键信号蛋白,阻抑PMCs EMT的发生。     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液改善脂多糖-高糖腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞损伤的实验研究

目的 评估丹参酮ⅡA磺酸钠注射液（STS）减轻脂多糖-高糖腹膜透析液（LPS-PDS）诱导的人腹膜间皮细胞（HPMCs）损伤以及抑制腹膜纤维化的作用。方法 HPMCs来自腹腔外科手术患者腹膜细胞的原代培养。以LPS-PDS诱导的HPMCs损伤为模型,通过观察STS对HPMCs增殖活性、转化生长因子-β（TGF-β1）分泌、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、组织基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP1）等的影响,阐明STS对HPMCs的保护作用及抗腹膜纤维化的机理。结果 LPS-PDS可造成HPMCs损伤,表现为活性下降,STS可明显减轻LPS-PDS对HPMCs的毒性,改善其造成的细胞活性下降,减轻LPS-PDS诱导的TGF-β1、TIMP1 mRNA上调和MMP-9 mRNA表达下降。结论 STS可以减轻LPS-PDS诱导的HPMCs损伤,可能是通过调节TGF-β1、TIMP1、MMP-9等蛋白的表达,发挥保护腹膜细胞和拮抗腹膜纤维化的作用。      

黄芪甲苷调控Akt信号通路阻抑人腹膜间皮细胞间充质转化的实验研究

目的 观察黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对TGF-β1诱导人腹膜间皮细胞HMrSV5 EMT及β-catenin的影响,探讨Akt信号通路的作用及AS-Ⅳ干预机制。方法 采用TGF-β1诱导建立HMrSV5 EMT模型,Western blot检测不同浓度TGF-β1对EMT标记蛋白、β-catenin及Akt信号蛋白的影响;予不同浓度AS-Ⅳ干预HMrSV5 EMT模型,Real-time PCR检测EMT相关基因及β-catenin mRNA水平,Western blot检测Akt信号蛋白表达;与Akt通路抑制剂MK2206、雷帕霉素及激动剂Insulin作对照,观察AS-Ⅳ干预HMrSV5 EMT指标及β-catenin蛋白的变化。结果 ①TGF-β1诱导HMrSV5细胞发生EMT、上调β-catenin水平,激活Akt信号通路;②AS-Ⅳ能不同程度改善TGF-β1诱导的HMrSV5 EMT、降解β-catenin,并在一定程度上抑制Akt信号通路活化;③Akt通路参与调控HMrSV5 EMT及β-catenin,其抑制剂MK2206、雷帕霉素的调控作用与AS-Ⅳ类似;④Akt通路激动剂Insulin明显减弱AS-Ⅳ对EMT及β-catenin的抑制效果。结论 TGF-β1可诱导HMrSV5 EMT,上调β-catenin,AS-Ⅳ可能通过抑制Akt信号通路活化,阻抑HMrSV5 EMT,降解β-catenin。      

高糖对人腹膜间皮细胞的增殖和损伤及分泌细胞因子的影响

目的：探讨高糖介导腹膜纤维化的可能机制。方法：原代培养的第3代人腹膜间皮细胞（HPMCs）分为不同时间（24,48h）的对照组（F12）和高糖组（F12＋4％葡萄糖）。用MTT法测定细胞增殖,乳酸脱氢酶（LDH）法观察细胞损伤程度,采用酶联免疫法（ELISA）测定纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）蛋白水平以及采用RT-PCR测定FN,TGF-β1和纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）mRNA表达。结果：①高糖明显抑制细胞增殖,24h和48h高糖组与同一时间点对照组比较,MTT吸光度值均明显下降（P〈0．001或P〈0.01）;②高糖明显导致细胞损伤,24h和48h高糖组与同一时间点对照组比较,培养液中LDH含量均明显增加（均P〈0.001）;③高糖培养24,48h均使FN,CTGF和TGF-β1蛋白表达增加（P〈0．05或P〈0.001）;④高糖使FN,TGF-β1和PAI-1 mRNA表达均上调。结论：高糖能够抑制HPMCs增殖,损伤HPMCs,并刺激HPMCs分泌更多的TGF-β1,CTGF,FN和PAI-1,从而使HPMCs细胞外基质生成增多、降解减少,最终导致腹膜纤维化的形成。