丙泊酚对大鼠脊髓星形胶质细胞释放兴奋性氨基酸的影响

目的研究被肿瘤坏死因子（TNF-α）刺激的大鼠脊髓星形胶质细胞（AST）在丙泊酚作用下兴奋性氨基酸（EAA）的释放情况。方法体外纯化培养大鼠脊髓星形胶质细胞，分为TNF-α终浓度为1ug／L及丙泊酚终浓度为25umol／L（TP组），TNF-α终浓度为1ug／L（T组），乳剂对照组（Intralipid，0．2ml／L、L组），空白对照组（C组）。用高效液相色谱仪测定各组培养细胞在0、30、60、120min时谷氨酸（Glu），天门冬氨酸（Asp）的释放量。结果与C组相比，L组的Glu、Asp释放量无明显差异（P〉0．05）；T、TP组Glu、Asp释放量随着时间的延长而增加；与T组相比，60、120man时，TP组Glu、Asp释放量明显减少（P〈0．05）。结论TNF-α刺激AST释放EAA，而丙泊酚对此有抑制作用。     

载脂蛋白E基因多态性与星形胶质细胞损伤后兴奋性氨基酸变化的关系

目的探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,蛋白:ApoE,基因:APOE)基因多态性与星形胶质细胞损伤后兴奋性氨基酸(excitatory amino acids,EAAs)变化的关系。方法提取APOE敲除鼠新生2 d内乳鼠大脑皮层星形胶质细胞,并以GFAP-FITC免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。脂质体介导重组体pEGFP-N1-APOEε2、pEGFP-N1-APOEε3、pEGFP-N1-APOEε4分别转染入星形胶质细胞中,RT-PCR鉴定该基因在转染后的细胞中的表达,荧光显微镜观察该基因的亚细胞定位及转染效率。制备3种基因型星形胶质细胞划伤模型,采用氨基酸分析仪分别测其中氨基酸的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果星形胶质细胞划伤后谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)的释放较早,在划伤后30 min即达到高峰,在伤后30、60 min APOEε4型显著高于APOEε2、APOEε3型(P<0.05)。细胞早期凋亡率在24 h达到高峰,在伤后12、24 hAPOEε4型显著高于APOEε2、APOEε3型(P<0.05)。结论 APOE以亚型特异性的方式影响星形胶质细胞创伤后EAAs的释放,APOEε4携带体可能通过EAAs毒性作用导致创伤性脑损伤急性期伤情加重及不良预后。     

慢性束缚应激对小鼠认知功能及海马不同亚区星形胶质细胞的影响

目的 探讨慢性束缚应激(CRS)对小鼠认知功能的影响,观察海马不同亚区(CA1、CA3和DG区)星形胶质细胞(AS)的激活情况,明确慢性应激对海马的损伤是否存在特异性靶点.方法 雄性KM小鼠24只按体质量随机分为对照组和应激组,每组各12只.采用慢性束缚方法建立小鼠CRS模型,利用新异物体识别实验(NORT)和Morris水迷宫(MWM)评测其认知功能,HE染色观察细胞的形态结构变化,免疫组织化学染色法对海马CA1、CA3和DG区AS标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)进行染色,采用显微镜和图像分析软件对海马上述亚区AS进行计数并分析GFAP的表达.结果 与对照组相比,应激组小鼠NORT及MWM实验的成绩均显著下降(P＜0.05),海马神经元形态结构损伤,CA1和CA3区AS细胞数及GFAP表达均显著增加(P＜0.05),DG区两者均无显著变化(P＞0.05).结论 CRS能够导致小鼠认知功能障碍,海马CA1、CA3区AS的活化可能是其机制之一.     

糖尿病小鼠海马星形胶质细胞GFAP表达的变化

目的观察糖尿病小鼠海马星形胶质细胞及胶质酸性蛋白的变化.方法用四氧嘧啶对ICR小鼠造成糖尿病模型,利用免疫组织化学方法结合图像分析仪观察海马CA1、CA2、CA3和CA4区星形胶质细胞数目密度及胶质酸性蛋白表达的变化情况并与生理盐水组对照.结果 GFAP阳性细胞在海马各区均有分布.除CA2区外,糖尿病组GFAP阳性细胞在CA1、CA3和CA4区的密度较生理盐水组增加（P〈0.01）,GFAP阳性细胞的平均光密度值在各区均高于生理盐水组（P〈0.01）.结论糖尿病时海马星形胶质细胞数量及其胶质酸性蛋白表达增加,可能是星形胶质细胞对糖尿病糖代谢改变的一种保护性反应.     

大鼠海马神经元及星形胶质细胞的体外培养

目的：改进大鼠海马神经元、星形胶质细胞及两者混合状态的体外培养方法,获得高纯度的海马神经细胞。方法：选取孕期18~20 d 的SD 大鼠胎鼠作为原代海马细胞培养的材料来源。断头后于冰板上剥离双侧海马,去除表面血管及薄膜,利用眼科剪分离为小块。随后使用冷平衡盐溶液洗涤3 次,将海马组织碎块移入酶消化液中。本方法选择Accutase 和0.1% DNase 作为酶消化液,37 ℃消化 15 min,期间轻柔振动。使用冷平衡盐溶液洗涤3 次,终止消化。0.1% DNase 加入Neurobasal 和B-27 的混合液对消化后的海马组织碎块进行轻柔吹打,获得单细胞悬液。将悬液过200 目筛,进行细胞计数。将过筛的单细胞悬液移入DMEM 培养基（DMEM+10%胎牛血清）中,按照每平方厘米2.5×104 的细胞密度进行接种。经PDL 孵育的塑料片置于培养基底部。细胞于37 ℃、5% CO2 培养箱内培养。4 h 后,依据所需细胞种类的不同,更换相应培养基。海马神经细胞于培养后7~10 d 可用于实验。结果：通过本方法可得到高纯度的大鼠海马神经细胞,且根据实验需求,通过更换培养基,可得到纯神经元、纯胶质细胞及两者混合的三种培养状态。培养的神经元及星形胶质细胞纯度均>98%。结论：该文在传统海马神经细胞体外培养方法基础上,进一步降低了实验操作难度,方法稳定有效。     

胶质细胞活化在慢性前列腺炎大鼠脊髓兴奋性氨基酸变化的作用

目的 探讨胶质细胞活化与慢性前列腺炎疼痛大鼠脊髓兴奋性氨基酸变化的关系.方法 完全福氏佐剂和3%角叉菜胶前列腺内注射造成慢性前列腺炎疼痛模型,胶质细胞活化抑制剂propentofylline脊髓插管给药,干扰慢性前列腺炎疼痛模型大鼠,免疫组织化学方法观察正常组、疼痛组、干扰组脊髓节段(L6和S1)背角的星形胶质细胞和小胶质细胞的活化和谷氨酸的定性定位,并用氨基酸分析仪测量3组脊髓背角谷氨酸和天门冬氨酸的变化.结果 疼痛组脊髓背角星形胶质细胞和小胶质细胞活化明显增强,干扰组明显减弱,谷氨酸明显表达于脊髓背角且疼痛组谷氨酸和天门冬氨酸明显增多,干扰组明显减少.结论 胶质细胞活化是慢性前列腺炎疼痛大鼠脊髓背角兴奋性氨基酸变化的重要原因,胶质细胞活化抑制剂的应用可能是治疗慢性前列腺炎疼痛的新途径.     

Nbn 基因对小鼠海马星形胶质细胞发育的影响

目的 观察Nbn 基因神经特异性敲除(Nbn-CNS-del)小鼠海马星形胶质细胞发育的形态学变化,探讨Nbn 基因在小鼠海马星形胶质细胞发育中的作用。方法 采用星形胶质细胞标记物GFAP,应用免疫组织化学技术和体视学方法对生后（P）7、14、21 d 的Nbn-CNS-del小鼠海马进行系统观察和定量分析,以非基因敲除(Nbn-CNS-ctr)的同窝仔鼠为对照组。结果 P7～21 d,与对照组相比,Nbn-CNS-del小鼠海马CA区及齿状回各层GFAP阳性细胞失去正常星形结构,面数密度减小（P＜0.05）。结论 Nbn 基因神经特异性敲除小鼠海马星形胶质细胞发育障碍,Nbn 基因可能在海马神经胶质细胞发育中起重要作用。     

星形胶质细胞对兴奋性氨基酸神经递质的调控及与癫痫的关系

星形胶质细胞是中枢神经系统中最为丰富的细胞类型,其主要生理功能之一是调控中枢神经递质的稳态,从而在维持中枢神经兴奋性和抑制性平衡中扮演着关键性的角色。星形胶质细胞这种功能对调控胞外兴奋性神经递质谷氨酸和抑制性神经递质γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）尤为突出,即星形胶质细胞可通过谷氨酸-谷氨酰胺-GABA循环对正常状态下抑制性和兴奋性神经递质的循环利用具有重要意义,此外对避免因胞外谷氨酸蓄积造成的兴奋性毒性同样不可或缺。星形胶质细胞功能紊乱如谷氨酸转运体、谷氨酰胺合成酶、谷氨酸脱氢酶的减少可损伤或削弱星形胶质细胞调控神经递质的功能,可表现为胞外谷氨酸水平升高同时伴有GABA水平降低,这种病理改变与癫痫的发生发展密切相关。本文就星形胶质细胞对神经递质的调控及与癫痫的关系进行综述。     

星形胶质细胞在神经再生中的作用研究进展

<正>神经胶质细胞发现距今已100多年,其功能学却是近年随着神经分子生物学的发展才有较为深入的阐明。星形胶质细胞不只是中枢神经系统的"填充物",起支持作用,在神经发育、突触传递、神经组织修复与再生、神经免疫及多种神经疾病中都起着十分重要的作用。近年来,随着成年动物脑内存在神经     

丙泊酚对新生小鼠海马星形胶质细胞和小胶质细胞的影响

目的：观察丙泊酚麻醉对新生小鼠海马星形胶质细胞（AST）和小胶质细胞的影响。方法将健康同窝日龄7d（P7）C57小鼠15只,随机分为丙泊酚高剂量组、低剂量组和10％脂肪乳对照组,每组5只,所有小鼠从P7开始接受药物处理。高、低剂量组分别腹腔注射丙泊酚60、30mg／kg;对照组腹腔注射同等体积的10％脂肪乳。药物处理24h后取材,采用免疫组化方法检测AST标记物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）与小胶质细胞标记物离子钙接头分子（Iba1）在海马内的表达。结果丙泊酚高剂量组小鼠海马齿状回分子层中GFAP标记的AST数量较对照组明显减少（P＜0．01）,低剂量丙泊酚对新生鼠海马中AST数量无显著影响;高剂量和低剂量丙泊酚均显著性降低海马小胶质细胞数量（P＜0．01）。结论丙泊酚抑制新生小鼠海马AST和小胶质细胞的发育,且存在剂量依赖关系。     

实验性癫癎时海马内兴奋性氨基酸受体对内阿片肽基因表达的影响

目的阐明在癫发作与发展中起着重要作用的脑内兴奋性氨基酸类递质和内阿片肽之间的关系。方法应用原位杂交方法观察了青霉素致及海马内微量注射ＮＭＤＡ受体阻断剂ＭＫ－８０１（５－ｍｅｔｈｙ１－１０,１１－ｄｉｈｙｄｒｏ－５Ｈ－ｄｉｂｅｎｚｏ［ａ,ｄ］ｃｙｃｌｏｈｅｐｔａｎ－５,１０－ｉｍｉｎｅｍａｌｅａｔｅ）和非ＮＭＤＡ受体阻断剂ＤＮＱＸ（６,７－ｄｉｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ－２,３－ｄｉｏｎｅ）后,大鼠海马内前脑啡肽原和前强啡肽原ｍＲＮＡ表达的变化。结果在青霉素致４ｈ后,海马ＣＡ１区、ＣＡ３区、齿状回前脑啡肽原ｍＲＮＡ和海马ＣＡ３区、齿状回前强啡肽原ｍＲＮＡ的表达明显增加。在青霉素致前分别在海马内微量注射ＭＫ８０１（６μｇ）和ＤＮＱＸ（４μｇ）,则在减弱发作的同时,海马内前脑啡肽原ｍＲＮＡ的表达明显减少,而前强啡肽原ｍＲＮＡ的表达继续增加。结论青霉素致引起大鼠脑内脑啡肽和强啡肽的变化可能和ＮＭＤＡ受体及非ＮＭＤＡ受体对其基因表达的调节有关     

缺血性脑损伤与兴奋性氨基酸

脑缺血时神经元大量释放的兴奋性氨基酸是引起神经元损伤的重要原因。谷氨酸等是中枢神经系统主要兴奋性氨基酸 (ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙａｍｉｎｏａｃｉｄ ,ＥＡＡ) ,在维持神经元正常信号传递过程中起重要作用 ,但它也有显著的兴奋毒性作用。本文围绕兴奋性氨基酸在缺血性脑损伤中的毒性作用和在这一系列病理过程中采取的脑保护方法作一概述。1　通过抑制突触前Ｎ型钙通道和增加摄取来减轻缺血性脑损伤　　在静息状态下 ,细胞外、突触间隙和突触前囊泡中的谷氨酸含量分别为 1μｍｏｌ/Ｌ、10ｍｍｏｌ/Ｌ、10 0ｍｍｏｌ/Ｌ。这种浓度梯度靠…     

Alteration of Excitatory Amino Acid in Experimental Spinal Cord Injury in Rats

Objective To detect the effect of excitatory ammo add (EAA) in the secondary damage following spinal cord injury (SCI). Methods Glutamate (Glu) and Aspartate (Asp) on the injury site (T8) were studied using a rat SCI model induced by Allen's weight drop method (10g×2. 5cm). The result suggested that Asp and Glu were significantly increased in 10 mm. Results Glu was significantly decreased from 2 h to 24 h,while Asp was a tittle reduced in 2 h,and slightly rose in 4 h as compared with Control Group. Though elevated in 8 h,it dropped again in 24h as compared with Control Group. Conclusion The result indicates that the rise of EAA following SCI could be the cause of the secondary spinal cord damage.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体对清醒大鼠海马谷氨酸释放的调节作用

目的　应用清醒大鼠脑微透析技术 ,通过观察N -甲基 -D -天冬氨酸 (NMDA)受体激动剂和阻断剂对大鼠海马兴奋性氨基酸释放的影响 ,探讨NMDA受体对大鼠海马兴奋性氨基酸释放的自身调节作用。方法　Sprague-Dawley雄性大鼠 ,横跨海马背部植入一自制的透析探头 ,待大鼠清醒后 2 4h用人造脑脊液灌流 ,灌流速度为 5 μl·min-1,每 2 0min收集一次透析液 ,采用邻苯二甲醛 - β -巯基乙醇衍生化反相梯度洗脱荧光检测透析液中谷氨酸的含量。结果　海马内局部灌流NMDA 5 0 0 μmol·L-1可明显增加细胞外基础状态下谷氨酸水平。非竞争性NMDA受体拮抗剂MK - 80 1(10 0 μmol·L-1)可拮抗NMDA引起的谷氨酸释放增加作用。单独应用MK - 80 1(10 0 μmol·L-1)对基础状态下谷氨酸的水平没有影响。局部灌流NMDA受体协同激动剂甘氨酸5 0 0 μmol·L-1也可明显增加细胞外基础状态下谷氨酸的水平。局部灌流NMDA受体上甘氨酸部位的选择性阻断剂 7-氯犬尿烯酸 2 0 0 μmol·L-1可以拮抗甘氨酸引起的谷氨酸释放增加作用。结论　本研究发现兴奋性氨基酸受体NMDA受体的激活可增加海马内兴奋性神经递质的释放 ,这种NMDA受体可能存在于突触前膜 (兴奋性神经末梢膜上 ) ,即自身调节受体正反馈调节兴奋性氨基酸的释放。     

脑梗塞患者血浆一氧化氮及兴奋性氨基酸的临床观察

目的探讨一氧化氮(nitric oxide,NO)和兴奋性氨基酸(excitatory amino     

Effect of Morphine and Naloxone on Release of the Excitatory Amino Acids of Spinal Astrocytes Induced by TNF-α

The effect of morphine and naloxone on release of the excitatory amino acids (EAAs) of spinal astrocytes induced by TNF-α was studied. Astrocytes were purified from 2- to 3-day old SD rats and divided into 8 groups: group 1 (without any stimulatants); group 2 (10 ng/ml TNF-α); group3 (10 ng/ml TNF-α+0.5 μmol/L morphine); group 4 (10 ng/ml TNF-α+1.0 μmol/L morphine); group 5 (10 ng/ml TNF-α+2.0 μmol/L morphine); group 6 (10 ng/ml TNF-α+0.5 μmol/L naloxone); group 7 (10 ng/ml TNF-α+1.0 μmol/L naloxone); group 8 (10 ng/ml TNF-α +2.0 μmol/L naloxone). In group 2, 3, 4 and 5, 0, 0.5, 1.0 or 2.0 μmol/L morphine was added to the cells cultured with serum-free Neurobasal/B27 medium containing 10 ng/ml TNF-α respectively, while in group 6, 7 and 8, 0.5, 1.0 or 2.0 μmol/L naloxone was added respectively to the cells cultured with serum-free Neurobasal/B27 medium containing 10 ng/ml TNF-α. After 30 min incubation, high-pressure liquid chromatography (HPLC) was used to measure the levels of EAAs in all cultured cells. The results showed the level of EAAs in group 2 was significant higher than in group 1 (P<0.01). As compared with group 2, the levels of EAAs in group 3, 4 and 5 were decreased with the difference being significant between group 5 and group 2 (P<0.01) or between group 4 and group 2 (P<0.05). The levels of EAAs in group 6, 7 and group 8 was significantly lower than in group 2 (P<0.05 orP<0.01). It was concluded that TNF-α could promote the release of glutamate and aspartate from astrocytes, and morphine and naloxone might reduce the release of EAAs in cultured spinal astrocytes induced by TNF-α.     

细菌性脑膜炎患儿脑脊液中兴奋性氨基酸的变化及临床意义

目的　探讨细菌性脑膜炎患儿脑脊液中谷氨酸和天门冬氨酸的含量及临床意义。方法　根据细菌性脑膜炎的诊断标准选择 40例细菌性脑膜炎患儿作为细菌性脑膜炎组, 另选择 16例非神经系统疾病的患儿作对照组, 均于入院当天做腰穿留取脑脊液置-30℃冰箱保存待测。用高效液相色谱法测定脑脊液中谷氨酸和天门冬氨酸的含量。结果　细菌性脑膜炎患儿脑脊液中谷氨酸和天门冬氨酸的含量与对照组比较, 差别有显著性意义 (P均 <0。 05)。结论　细菌性脑膜炎的病理生理过程中存在着兴奋性氨基酸的兴奋毒性。兴奋性氨基酸的受体拮抗剂的应用有可能成为一种重要的治疗细菌性脑膜炎的新方法。     

实验性大鼠颅脑损伤后兴奋性氨基酸及脑血流量的变化研究

目的观察流体冲击致大鼠脑损伤后不同时相点脑组织兴奋性氨基酸(excitatory amino acids,EAA)和局部血流量(regional cerebral blood flow,rCBF)的变化,及它们在脑损伤和继发性脑损伤中的作用.方法用流体冲击装置制作中度脑损伤,氨基酸微量分析系统检测谷氨酸(glutamate,Glu)和天门冬氨酸(aspate,Asp)含量,氢清除法检测大脑局部血流量.结果中度脑损伤后rCBF明显低于伤前和正常对照组;脑组织Glu、Asp的含量在伤后30min即可见明显增加,1h有所回落,2h又有所升高,4h至6h趋于稳定.结论结果显示脑损伤后脑血流量的下降可能与氨基酸释放有着一定的关系,氨基酸大量释放可能在脑损伤和继发性脑损伤中起着主要作用.     

应激致免疫功能降低动物模型的建立

目的为探讨应激对免疫系统损伤的作用机制,建立了两种不同的应激导致机体免疫功能降低的动物模型。方法将小鼠分为三组,束缚应激组、热应激组和正常对照组,分别用束缚和高温刺激使小鼠处于应激状态,应激结束后将各组小鼠均分为两部分,一部分感染细菌,比较两种应激状态下小鼠与正常小鼠的死亡率,另一部分摘取脾脏,计算脾脏重量指数,制作脾脏病理切片,观察其组织病理学变化。结果注射大肠埃希菌后束缚应激组和热应激组小鼠死亡率显著高于正常对照组小鼠(P<0.005),束缚应激组和热应激组小鼠死亡率无明显差异(P>0.05)。束缚应激组小鼠和热应激组小鼠脾脏重量指数均较正常对照组明显降低(P<0.05),组织病理学观察显示束缚应激组和热应激组小鼠脾脏切片病理学改变相似,白髓比例减小,脾小体有不同程度的缩小、分布及结构不规则。结论本实验建立的应激导致小鼠免疫功能降低的动物模型,其免疫功能降低与脾脏变化间存在构效关系,与应激的类型关系不大。