癫痫大鼠边缘系统神经元凋亡研究

颞叶癫痫是症状性癫痫中最常见者，与其解剖和病理密切相关的大脑边缘系统一直是癫痫研究者关注的重点。海人藻酸（KA）是谷氨酸结构类似物，脑内或系统给予，可选择性激活边缘系统诱发癫痫（EP）发作，由于其致痫后癫痫发作行为和病理学改变与人类颞叶癫痫的相似性，被广泛接受作为人类颞叶癫痫的急性模型。证据表明，持续癫痫后的神经元损伤存在细胞凋亡的过程，但多数报道局限于海马区。实际上痫性抽搐所致脑组织损伤累及皮层及边缘系统的大部分脑区。本研究用TUNEL标记技术观察实验性癫痫鼠边缘系统敏感脑区细胞凋亡的分布和时程变化。 材料与方法 雄性Wistar成年大鼠28只，分KA致痫组20只，对照组8只。 一、动物模型制备：大鼠乙醚麻醉置于立体定位仪，致痫组于双侧脑室分别注入0.5μl（含0.3μg）KA以制造癫痫模型。KA注射后10min癫痫发作，持续3h停止。分别于术后6h、1d、3d、7d各处死5只，快速取脑，－20℃储存备用。对照组双侧脑室注入等量生理盐水（NS），于上述相同时程各处死2只，取脑。 二、TUNEL原位末端标记：脑行冠状冰冻切片，片厚14μm，取背侧海马、杏仁体、背侧丘脑、下丘脑、梨状皮层为观察部位。凋亡细胞原位末端标记试剂盒购于Roche公司。切片用4％多聚甲醛固定1h后，参照手册步骤进行凋亡细胞染色标记，DAB显色，HE复染后封片镜检。 三、结果分析和统计处理：每只大鼠取同一观察部位切片四张（间隔60μm），用40X显微镜计数每一时程观察脑区单位平方毫米mm２阳性细胞数，并平均之作为本时程组鼠切片中阳性细胞数。实验数据以均数±标准差（±s，n／mm２）表示，用SPSS统计软件包对实验数据进行One-Way Anova分析。 结果 一、行为学观察：侧脑室注射KA 10min后均出现癫痫发作，持续3h停止。根据Racine癫痫行为分级，KA注射组动物达到四级或五级，符合癫痫模型要求。 二、光镜结果：TUNEL阳性细胞表现为细胞核呈棕黄色，核固缩呈圆形或不规则形；高倍镜下可见染色质深染聚集成块或碎裂，核边聚等，符合凋亡细胞形态变化。在注射NS组中，未见凋亡细胞的形态学改变。KA致痫组凋亡细胞在边缘系统分布与时程变化见表1。     

癫痫大鼠海马内谷氨酸含量与神经元凋亡的相关性

目的 研究癫痫大鼠大脑海马组织CA3区中谷氨酸(Glu)含量与神经元凋亡的相关性.方法 SD大鼠随机分成两组:海人酸(KA)致痫组大鼠海马杏仁核注射KA 2μg/kg后分为6 h、1 d、3 d、7 d组,每组8只;对照组注射与致痫剂等容量生理盐水.采用高效液相色谱(HPLC)测定大鼠海马组织CA3区中Glu含量变化,流式细胞术及原位末端标记法(TUNEL)测定相应区域神经元凋亡情况,对海马组织CA3区中Glu含量与神经元凋亡数据进行相关性分析.结果 致痫组6 h后海马组织出现神经元凋亡,Glu含最增加,两者在3 d时达到高峰,7 d时出现下降.海马组织CA3区中Glu含量与神经元凋亡组间有统计学相关性.结论 急性期癫痫大鼠海马组织神经元凋亡增多,提示早期使用抑制Glu增加的药物可能会减少脑损害.     

加巴喷丁对癫痫持续状态大鼠海马区神经元凋亡的影响

目的研究加巴喷丁(GBP)对癫痫持续状态(SE)大鼠海马区神经元凋亡的影响。方法SD大鼠48只随机分为对照组、戊四氮致痫组(PTZ组)、GBP组、GBP干预组(干预组),每组12只。戊四氮溶液60 mg.kg-1.d-1腹腔注射诱发SE。干预组致痫后给予GBP 600 mg.kg-1.d-1;GBP组仅给予GBP 600 mg.kg-1.d-1;对照组和PTZ组给予0.9%氯化钠溶液灌胃。采用头皮针状电极单极导联法观察大鼠痫性放电的脑电图。缺口末端标记法(TUNEL)检验凋亡阳性细胞。结果 TUNEL阳性细胞在PTZ组显著高于对照组(P<0.01);GBP组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);干预组表达低于PTZ组(P<0.05)。结论戊四氮致SE大鼠海马CA1和CA3区神经元TUNEL阳性细胞显著增加,GBP能显著减少TUNEL阳性细胞。     

p-Nonylphenol通过内质网应激介导具有神经元特性的pc12细胞凋亡

p-nonylphenol是内分泌激素断裂化合物（EDCs）的一种,能够结合雌激素受体而表现出雌激素的效应。p-nonylphenol又是塑料生产中的增塑剂,也是由环境去污剂中产生的一种烷基酚,因此p-nonylphenol广泛存在环境中。最近的研究表明p-nonylphenol能够诱导衍生于滋养层的绒毛膜癌细胞系的凋亡。实验选用神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）诱导分化的具有神经元特性的pc12细胞系,研究p-nonylphenol对神经细胞的促凋亡机制。当把终浓度为56μmol／L的p—nonylphenol加入到分化的pc12细胞中时,     

TRESK介导mTOR信号通路对大鼠脊髓神经元细胞凋亡的影响

目的 探究双孔钾离子通道(TRESK)介导的mTOR信号通路对大鼠脊髓神经元细胞凋亡的影响.方法 培养100例SD大鼠的脊髓原代神经元细胞,分为4组,每组各25例,A组采用TRESK siRNA、mTOR特异性抑制剂、谷氨酸处理,B组采用mTOR特异性抑制剂、谷氨酸处理,C组不进行任何处理,D组仅进行谷氨酸处理.对比各...     

无镁诱导癫痫海马神经元模型线粒体膜电位和凋亡的变化

目的:观察无镁诱导癫痫海马神经元模型线粒体膜电位和凋亡的变化.方法:利用无镁诱导海马神经元制备癫痫样模型,应用流式细胞仪分别观察正常对照组、模型组海马神经元细胞线粒体膜电位和凋亡率.结果:模型组海马神经元细胞线粒体膜电位明显下(P＜0.01),凋亡率增加(P＜0.05).结论:无镁诱导癫痫海马神经元出现线粒体膜电位及凋亡的改变,提示线粒体膜电位降低可诱导海马神经元凋亡.     

TNFα在类风湿关节炎中的作用及抗TNFα药物的进展

肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNFα)是一种具有多效生物活性的细胞因子,能够引起细胞凋亡、细胞增殖、分化、促炎症反应和免疫调节等作用.TNFα在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的致病机制中起关键作用.TNFα与TNF受体结合,能够引起细胞内的信号传导,通过复杂的级联反应和信号网络,激活转录因子核因子-κβ(nuclear factor-kappa B,NF-κβ)和活化蛋白-1(acti-vator protein-1,AP-1),调控目的基因的表达,造成炎症反应和骨关节损伤.而以TNFα为靶位的药物已经被开发并应用于RA的临床治疗,通过阻断TNFα引起的信号传导来降低炎症反应被证明是安全有效的.此文就TNFα在RA病理机制中的作用及抗TNFα药物的进展作一综述.     

5种TNFα单抗及其类似物的TNFα杀伤抑制活性的比较

目的:比较5种以TNFα为治疗靶位的治疗性单抗及其类似物的TNFα杀伤抑制活性。方法:以Anti-TNFαrhmMcAb为参比品,采用TNFα杀伤抑制法测定其他4种制品的TNFα杀伤抑制活性,剂量-反应曲线进行四参数拟合后,测定抑制1.0 ng·mL-1TNFα杀伤的半数有效浓度(EC50)。以Anti-TNFαrhmMcAb的EC50值除以待测样品EC50值计算样品的相对活性。结果:相对于Anti-TNFαrhmMcAb,TNFαⅡR-Fc、Anti-TNFαrhuMcAb、Anti-TNFαsrhmMcAb和Anti-TNFαarhuM-cAb的TNFα杀伤抑制活性分别为4860%,248%,505%,90%。结论:TNFα杀伤抑制方法可以快速测定治疗性抗TNFα单抗及其类似物的TNFα杀伤抑制活性,不同制品的测定结果之间具有一定可比性,可以根据测定结果对不同制品的生物学活性进行评价和比较。     

细胞内RT-PCR法测定TNFαmRNA

细胞内ＲＴ┐ＰＣＲ法测定ＴＮＦαｍＲＮＡ李树新库宝善李昌龙１林志彬（北京医科大学药理学系，北京１０００８３）１９９６－０８－１６收稿１９９７－０３－１２修回１卫生部老年医学研究所生化室，北京作者简介：李树新，男，３０岁，现在美国进修学习；库宝善，男，...     

坏死性凋亡介导化学性缺氧引起的HT22海马神经元损伤和炎症

目的探讨坏死性凋亡(necroptosis)是否参与化学性缺氧诱导的小鼠HT22海马细胞损伤和炎症。方法采用化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl_2)作用HT22细胞建立化学性缺氧损伤的细胞模型。蛋白质免疫印迹法测定受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein 3,RIP3)的水平;应用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)测定海马细胞的存活率;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测细胞培养液中的LDH活性;罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成水平;ELISA法检测细胞培养液中白介素-1β(IL~(-1)β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果 600μmol·L~(-1)CoCl_2作用HT22细胞36 h可产生明显的细胞毒性作用,使细胞存活率降至(52.0±2.65)%,成功建立化学性缺氧损伤的海马细胞模型;此外,CoCl_2可引起HT22细胞的多种损伤和炎症,表现为培养液中LDH活性升高,ROS过度生成,MMP丢失以及炎症因子(IL~(-1)β和TNF-α)分泌均增多。40~100μmol·L~(-1)坏死性凋亡抑制剂necrostatin-1(Nec-1)共处理可抑制CoCl_2引起的HT22细胞存活率降低,其中80μmol·L~(-1)时对细胞毒性的抑制作用最明显。同时,80μmol·L~(-1)Nec-1可对抗CoCl_2可引起HT22细胞的上述多种损伤和炎症。此外,CoCl_2处理HT22细胞6~48 h可促进RIP3的表达水平,Nec-1可明显抑制CoCl_2对RIP3表达的上调作用。结论坏死性凋亡介导化学性缺氧诱导的HT22海马神经元损伤和炎症。     

松果菊苷对TNFα诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的　探讨肉苁蓉提取物松果菊苷对TNFα诱导的SH SY5Y细胞凋亡的保护作用。方法　用MTT法检测细胞存活率,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,并用荧光酶标仪测定caspase 3的活性。结果　100μg·L-1 TNFα处理细胞 36h显著降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达37%;细胞内活性氧水平及caspase 3的活性升高;而线粒体膜电位却明显降低,红 /绿荧光强度的比值由正常的 5 97降低为 0 35左右。而预先给予 1, 10或者 100mg·L-1浓度的松果菊苷处理细胞 2h,可提高细胞存活率;并可有效抑制DNAladder的发生;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到25 9%, 18 3% 和 8 2%;激光共聚焦显微镜结果显示松果菊苷可明显抑制细胞内活性氧产生;并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;caspase 3的活性不断降低,并呈现了一定的剂量依赖性。结论　松果菊苷能抑制TNFα诱导的SH SY5Y细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平,抑制caspase 3的活性和维持线粒体膜电位的高能状态有关。     

神经元凋亡相关基因的研究进展

目的 通过查阅近几年来国内外神经元凋亡的相关文献,总结近几年神经元凋亡的关联基因以及其信号通路研究情况,明确神经系统性疾病的药物治疗靶点.     

神经元凋亡相关基因的研究进展

目的通过查阅近几年来国内外神经元凋亡的相关文献,总结近几年神经元凋亡的关联基因以及其信号通路研究情况,明确神经系统性疾病的药物治疗靶点。     

TNF-α在丙泊酚诱发的神经元凋亡及认知功能障碍中的作用

目的探讨TNF-α在丙泊酚诱发的海马神经元凋亡及远期认知功能障碍中的作用。方法 7 d龄(P7)SD大鼠随机分为3组:Control组,无任何处理;P(single)组,腹腔注射丙泊酚50 mg·kg~(-1);P(repeated)组,腹腔注射丙泊酚50mg·kg~(-1),每天1次,共7次。丙泊酚两组于麻醉结束后2 h(对照组则分别对应上述两时间点)采用Western blot法检测海马组织TNF-α含量。另取P7大鼠随机分为5组:Control组;P(single)组;P(repeated)组;P(single)+ETN组,腹腔注射丙泊酚50 mg·kg~(-1)前30 min侧脑室注射依那西普0.4 mg·kg~(-1);P(repeated)+ETN组,腹腔注射丙泊酚50 mg·kg~(-1),每天1次,共7次,第1次和第4次丙泊酚注射前30min侧脑室注射依那西普0.4 mg·kg~(-1)。于P7、P13、P21、P35时间点,各组采用免疫组化法检测海马CA1区神经元凋亡。剩余大鼠于P36-P41行Morris水迷宫实验。结果丙泊酚单次或多次暴露均使海马组织TNF-α含量明显高于同期对照水平(P<0.05,P<0.01);P(single)组中,活化caspase-3阳性神经元于P7较对照组同时间点明显增多(P<0.05),而于其它时间点差异无显著性(P>0.05),逃避潜伏期和穿越平台次数与对照组比较均无差异(P>0.05);P(repeated)组中,P13、P21、P35时间点活化caspase-3阳性神经元均明显高于同期对照组水平(P<0.01),逃避潜伏期从d1~d5均明显高于对照组同期水平(P<0.01),且穿越平台次数明显低于对照组(P<0.01);依那西普侧脑室注射后,丙泊酚麻醉后各时点的活化caspase-3阳性神经元、逃避潜伏期及穿越平台次数与对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。结论 TNF-α介导了丙泊酚诱发的发育期海马神经元凋亡和远期认知功能障碍,而远期认知功能障碍可能与持续性神经元凋亡有关。     

oridonin部分通过TNFα信号转导途径诱导小鼠成纤维L929细胞凋亡

目的比较冬凌草甲素(oridonin)和TNFα诱导小鼠成纤维L929细胞凋亡的分子机制。方法MTT法、Hoechst33258荧光染色、DNA片断化分析和Western blot分析法。结果Oridonin和TNFα均能诱导L929细胞发生凋亡,其半数有效抑制浓度IC50分别为(24·8±1·2)μmol·L-1和(20·9±1·9)μg·L-1。Oridonin和TNFα均能引起L929细胞凋亡形态学变化,TNFα处理过的细胞在琼脂糖凝胶电泳上可见典型的凋亡DNA梯状条带,但是oridonin处理的细胞却不能,称之为非典型凋亡;caspase-3,-8抑制剂和caspase家族抑制剂能明显得促进25μmol·L-1oridonin和20μg·L-1TNFα诱导的L929细胞凋亡,caspase-9抑制剂只能促进oridonin诱导的L929细胞凋亡;ERK的抑制剂PD98059能明显的抑制oridonin和TNFα诱导的L929细胞凋亡,但是p38的抑制剂SB203580只能抑制TNFα诱导的L929细胞凋亡;在L929细胞中oridonin能促进内源性pro-TNFα的表达和其上游蛋白IκB的磷酸化。结论Oridonin通过激活转录因子NF-κB而促进内源性pro-TNFα的表达,并且部分通过细胞因子TNFα信号转到途径诱导L929细胞凋亡。     

CHF患者血液单核细胞TNFα升高

Shui-ping zhao等研究充血性心力衰竭(CHF)患者外周血液单核细胞(PBMC)所产生的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化,并测定113例各种心脏病患者血浆和PBMC培养上清液的TNFα浓度。结果表明,CHF患者[50例,(13.36±6.09)pg/ml]和恶病质CHF患者[26例,(19.20 10.42)pg/ml]的血浆TNF_2水平明显高于对照者[37例,(6.73±3.91)pg/ml]。CHF患者培养的PBMC上清液TNF_2(PBMC-TNFα)水平[(5.77±2.11)ng/ml]明显高于对照者[(2.27±     

恶性肿瘤血清TNF—α测定的临床意义

目的 观察肿瘤患血清TNF-α的变化及临床意义。方法 应用放射免疫测定法对20例健康对照和70例肿瘤患进行了血清TNF-α含量测定。结果 对照组血清TNF-α的含量较低，肿瘤患明显升高（P<0.01)；肿瘤转移和／或复发时无进一步上升，而肿瘤合并胸腹水和恶液质时ＴＮＦ－α上升明显。结论 肿瘤患血清的TNF-α水平明显高于对照组，随着肿瘤的局部控制及消退，体内TNF-α含量呈下降趋势，因此，TNF-α含量的变化对肿瘤患病情变化及预后的判定，具有一定的参考价值。     

TNFα抑制剂治疗强直性脊柱炎研究进展

生物制剂如肿瘤坏死因子α（TNFα）抑制剂已在国内外用于强直性脊柱炎（AS）的临床研究,并取得明显疗效,对疾病活动性、患者的功能和生活质量改善明显.因有少量证据提示,TNFα抑制剂具有减慢AS患者放射学进展的作用,有学者建议应尽早使用,但目前关于该类药物的用药指征、疗效与不良反应等还存在一些争论,现对2种TNFα抑制剂英利昔单抗和依那西普治疗AS的临床研究进展及不良反应等进行综述.