西曲瑞克的固相合成

目的 优化西曲瑞克的固相合成条件及纯化方法。方法 采用Fmoc固相合成法,以Rink Amide-AM Resin为固相载体,以DIC/HOBt或DIC/HOAt为缩合剂,采用制备型反相高效液相色谱法进行纯化。 结果 合成西曲瑞克粗肽,粗品纯度为94.8%。粗肽经制备型反相高效液相色谱纯化,所得精肽的纯度高达99%,总收率为62%。结论 该合成方法简单易行,产品纯度及收率都很高,适合用于西曲瑞克的工业化生产。     

缩宫素的制备

以Rink Amide树脂为载体,Fmoc保护的氨基酸为原料,采用Fmoc/tBu固相多肽合成法,按缩宫素的肽序列合成还原型缩宫素粗肽,环化后经制备型RP-HPLC纯化得纯度为99％的缩宫素,总收率34.0％.     

普兰林肽的固相合成

目的:探索普兰林肽的固相合成、氧化条件及纯化方法。方法:采用Fmoc固相多肽合成法,以Rink Amide-AM树脂做载体,HBTU/HOBt/DIEA做缩合剂,逐步缩合得到全保护线性普兰林肽树脂,以TFA/苯甲硫醚/苯酚/H2O/EDT/TIS配比的裂解液脱除保护基团,分别采用空气,二甲基亚砜,双氧水氧化两个半胱氨酸的巯基形成一对二硫键,半制备反相高效液相色谱法纯化。结果:合成含37个氨基酸以及一对二硫键的普兰林肽经RP-HPLC和MALDI-TOF-MS确证,粗品纯度在50.0%以上,粗品经半制备型反相高效液相色谱纯化,所得精肽的纯度大于95.0%,总收率为30.5%。结论:该方法简单,合成的产品成本低,纯度高,可为工业化生产提供借鉴。     

醋酸阿托西班制备工艺的研究

目的探讨醋酸阿托西班的固相合成工艺及纯化方法,以得到高纯度醋酸阿托西班。方法采用Fmoc氨基酸为原料,采用固相合成方法,以Rink-AM树脂为载体,TBTU/HOBt为缩合剂催化合成直链肽,以碘/乙醇液为氧化剂,采用固相环化,两个游离单巯基的氧化生成二硫键而得到目标环肽,体积比例为95/2.5/2.5裂解液TFA/EDT/Water裂解,制得阿托西班粗品,液相分析粗品的纯度为86.24%,制备反相高效液相色谱法纯化,制得醋酸阿托西班,纯度〉98%。结果合成醋酸阿托西班粗品,经制备反相高效液相色谱纯化,纯度〉98%。结论该方法简单,合成成本低,纯度高,可用于工业化生产。     

固相合成法制备环肽Hymenistatin-1及其含statine的类似物

目的研究固相合成法制备Hymenistatin-1[HS-1,序列为cyclo-(-Pro-Pro-Tyr-Val-Pro-Leu-Ile-Ile-)]及其statine类似物的工艺步骤和影响因素。方法采用Fmoc或Boc保护α-氨基,以HBTU/NMM为缩合剂进行直链肽接肽反应、以BOP/HOBt/DIEA为缩合剂进行环化固相合成HS-1及其类似物。用色谱仪和质谱仪对合成的环肽及其杂聚肽类似物进行纯化鉴定。结果多肽合成收率可达65%,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱对合成的多肽进行纯化后纯度均达到90%以上,通过基质辅助激光解吸附电离飞行质谱仪(MALDI-MS)检测所合成的环肽及环肽类似物的分子质量与理论分子质量相符。结论成功合成出了较高纯度的目标多肽化合物。     

脊髓肽MP-2的Fmoc法固相合成、HPLC纯化及其活性检测

目的：用固相法合成脊髓肽MP02并验证其生物活性。方法：采用Fmoc固相法对脊髓肽MP02进行仪器自动合成，通过正交实验对反应条件进行了优化，肽-树脂复合物酸裂解后获得小肽粗品。用高效液相色谱法对所得粗品纯化制备，并利用LC—Ms色谱仪确定目标产物，最后对纯品的生物活性进行检测。结果：通过正交实验优化PSSM08多肽合成仪合成MP02的反应条件，粗品得率达到82％，HPLC峰归一化法检测纯度为62．9％，中压柱制备后纯品纯度达到96．7％。纯品对S180肿瘤细胞进行抑瘤试验，证明MP-20．25mg·kg-1对S180有明显抑制作用，抑瘤率50．4％，且毒性低，不影响动物的发育生长。结论：合成实验证明，Fmoc固相合成法合成脊髓肽MP-2，操作条件温和且粗品得率较高，质谱检定主峰为目标峰后中压柱进行制备，分离操作简单，可以进行小批量生产；活性试验证明MP-2具有抑制肿瘤S180生长的效果，为进一步进行药效学验证提供了初探基础。     

ACE抑制肽的合成及其活性研究

为研究血管紧张素转换酶 (angiotensin converting enzyme, ACE) 抑制肽体外抑制ACE活性以期筛选出有降压作用的先导物, 采用Fmoc固相合成法合成ACE抑制肽, 经反相高效液相色谱法 (RP-HPLC) 分离纯化, 采用质谱对其进行鉴定, 并使用RP-HPLC法直接测定ACE抑制肽对ACE的体外抑制活性。合成的6个八肽经RP-HPLC纯化后, 质谱分析结果与理论值一致。活性评价结果表明6号八肽 (抗SARS肽) 对ACE的抑制作用最明显, 其IC₅₀为3.4×10⁻⁵ mol·L⁻¹, 由此可见抗SARS肽 (AVLQSGFR-OH) 是一个具有降压作用的先导物, 具有进一步研究的意义。     

RP-HPLC法测定人血浆中血管紧张素Ⅱ的浓度

目的:建立以反相高效液相色谱(RP-HPLC)-荧光法检测人血浆中血管紧张素Ⅱ浓度的方法。方法:采用固相萃取法纯化血浆样本,以荧光胺柱前衍生后进样测定。以乙腈-10mmol·L-1三羟甲基氨基甲烷盐缓冲液(pH8.5)作为流动相,梯度洗脱,流速为1mL·min-1,色谱柱为LunaC5,激发波长为273nm,发射波长为476nm。结果:血管紧张素Ⅱ血药浓度在10～200ng·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9995),最低检出限(S/N=3)为5ng·mL-1,日内、日间RSD分别为1.65%和4.20%。结论:本方法快速、灵敏、准确、重复性好,可用于血浆中血管紧张素Ⅱ浓度的检测。     

胸腺五肽合成工艺的研究

采用固相合成法进行了胸腺五肽的合成研究,以Fmoc-Tyr(But)-Wang Resin为载体,所有氨基酸衍生物都采用Fmoc氨基酸保护系统,并以BOP-HOBT活化酯法偶联形成肽键,以20%哌啶/DMF为脱Fmoc试剂,以三氟乙酸(TFA)为脱氨基酸衍生物侧链保护基团和从树脂上切下肽试剂.经冷乙醚沉淀得粗品,以RP-HPLC纯化后得TFA型TP-5,经醋酸转型后冷冻干燥行TP-5白色粉末状物质.     

抗肝癌药物酪丝亮肽的工艺研究

［摘要］目的 探索一类抗肝癌新药酪丝亮肽的固相合成路线,并与申报的液相合成路线进行优缺点比较. 方法 采用Fmoc/Wang树脂固相合成方法,逐步接肽,然后用裂解液（TFA：Tis:H2O,95.0：2.5：2.5）从树脂切割得到粗品,最后制备液相纯化脱盐,冻干得到产品. 结果 终产品经质谱、磁共振检测确证,纯度为99.5%,产率为82.0%. 结论 Fmoc固相合成方法可以得到与液相合成一致的产品,相比液相路线,该合成方法便捷易操作,生产周期短,产率高,但是成本相对较高.     

47肽的微波辅助固相合成工艺研究

目的合成一长链肽47肽。方法采用Fmoc/t-Bu正交保护多肽固相合成策略,使用9-芴甲氧羰基(Fmoc)保护氨基酸的α-氨基,用Liberty微波多肽合成仪,每个耦合循环用20%哌啶脱除Fmoc保护基团,连续添加氨基酸,并用茚三酮法检测反应终点,有效检测反应的进度,最后用82.5%的三氟乙酸将多肽从树脂上切割下来,得到47肽粗品。经过反相高效液相制备系统纯化得到多肽纯品,用反相高效液相分析仪和傅里叶高分辨质谱仪验证该产物。结果高分辨质谱仪验证了该产物,纯品质量分数达98%。结论微波可促进多肽特别是长链肽的合成。     

鳖甲抗肝纤维化活性多肽的固相合成

目的固相合成鳖甲抗肝纤维化活性多肽,为开发抗肝纤维化多肽药物提供结构明确的受试品。方法采用固相合成法,以Fmoc保护氨基酸和Wang树脂为原料,经1 氧 3 双二甲胺羧基苯骈三氮唑四氟化硼盐、N 甲基吗啡啉缩合,以20%哌啶的N,N 二甲基甲酰胺溶液进行脱保护,用三氟乙酸切割试剂将多肽粗品从Wang树脂上切割下来。结果经反相高效液相色谱分析纯化,可得纯度>98%的目的肽,经质谱鉴定其相对分子质量与理论值一致。结论该合成方法条件温和、副反应少,操作简便,纯化效率高,可用于大规模合成目的肽。     

人体抑制素α亚基片段的合成及活性研究

用固相多肽合成法的Fmoc**化学合成了4个人抑制素α亚基片段,经三氟醋酸裂解、高效液相纯化,产物总收率20%～63%。考察人工合成的四种抑制素α亚基肽片段对大鼠离体培养黄体细胞孕酮分泌的影响,结果表明4种抑制素α亚基肽片段均显著抑制大鼠黄体细胞的基础孕酮分泌。     

新型黑皮素类似物的固相环肽合成

目的：采用新的固相方法合成黑皮素环状类似物。方法：选用MBHA树脂和Fmoc/t-Butyl策略完成所有氨基酸缩合,利用4 mol•L-1 HCl/Dioxane对成环的氨基酸Asp(OtBu) 和Lys(Boc)侧链保护基进行脱除,在缩合剂作用下,裸露的氨基和羧基偶联成环。结果：利用此法成功地合成了MT-II及其三个全新的环肽类似物。结论：该方法操作简单,成本低;得到的产品纯度较高,易于纯化。     

人胸腺肽α1的固相合成及体外活性研究

目的对胸腺肽α1的固相合成工艺进行研究,并对合成产物进行活性评价.方法采用对碱敏感的Nα-芴甲氧羰基(Fmoc)作为α-氨基的保护基,以Fmoc-Asn(Trt)-Wang Resin为起点,逐个延伸固相合成法合成胸腺肽α1.与Nα-Fmoc-基团配套的保护策略还有:叔丁氧羰基(Boc)保护Lys的侧链氨基,叔丁酯基(OtBu)保护Asp、Glu的侧链羧基,叔丁氧基(tBu)保护Ser、Thr的侧链羟基,三苯甲基(Trt)保护Asn的侧链酰胺基.采用DCC-HOBt缩合剂法进行接肽反应,茚三酮定性显色法和水杨醛定量自由氨基检测法控制反应进程,肽段最后用TFA-DCM(V∶V=1∶1)定量地从树脂上切除.结果胸腺肽α1总产率为33.2%.纯化后的产物,经SDS-PAGE和RP-HPLC鉴定,纯度为98.8%以上,活性与日达仙对照品相当.结论 Nα-芴甲氧羰基保护策略的固相合成方法操作简便、条件温和、副反应少,产品纯度高、收率高.     

蓝贻贝抗凝肽的合成及活性初步研究Δ

目的采用多肽固相合成法合成蓝贻贝抗凝肽MEAP(Blue mussel Mytilus edulis anticoagulant peptide),初步研究其抗凝活性。方法 以2-CTC树脂为载体, Fmoc保护氨基酸为原料,按照蓝贻贝抗凝肽的序列从C端向N端逐步偶联氨基酸,裂解后得到粗肽,经半制备液相纯化后测定精肽的凝血酶时间(TT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)。结果 合成的蓝贻贝抗凝肽粗品的纯度为65.5%,经半制备纯化后的精肽纯度为95.5%;抗凝活性实验显示APTT、TT具有显著的延时作用(P<0.01)。结论 固相合成的蓝贻贝抗凝肽具有抗凝活性。     

天然环肽auyuittuqamide A的全合成研究

目的用Fmoc固相直链合成和液相环合的方法合成天然环肽auyuittuqamide A。方法以2–氯三苯甲基氯(CTC)树脂为固相载体,1,3–二异丙基碳二亚胺(DIC)和1–羟基苯并三氮唑(HOBT)为缩合剂,9–芴基甲氧基羰基(Fmoc)保护的氨基酸,按照序列依次缩合,以三氟乙醇(TFE)作为切割试剂,获得全保护直链肽。以六氟磷酸苯并三唑–1–基–氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)和1–羟基苯并三氮唑(HOBT)为环合试剂,全保护直链肽在二氯甲烷(DCM)溶液中环合,以三氟乙酸(TFA)为脱保护试剂,获得天然环肽auyuittuqamide A。用高效液相制备色谱进行纯化,采用HR-Q-TOF-MS,500MHz ¹HNMR进行表征分析。结果获得纯度大于95%的天然环肽auyuittuqamide A,总收率5.48%。结论此法合成步骤简单,产率较高,首次建立天然环肽auyuittuqamide A的全合成方法,为auyuittuqamide A的进一步研究奠定基础。     

血管紧张素Ⅱ受体拮抗药对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的利用血管紧张素Ⅱ受体拮抗药洛沙坦、PD123319研究血管紧张素Ⅱ2型受体对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法将含有血管紧张素Ⅱ2型受体cDNA的质粒转染入培养的大鼠主动脉平滑肌细胞后,实验组分为血管紧张素Ⅱ处理组(组1)、血管紧张素Ⅱ和洛沙坦处理组(组2)、血管紧张素Ⅱ和PD123319处理组(组3)。检测核增殖抗原表达、细胞数目及一氧化氮合酶含量的变化。结果组2细胞数目为(4.17±0.15)×105个,核增殖抗原平均光密度为0.2026±0.0076,较组3细胞明显减少(P＜0.01);而组2细胞一氧化氮合酶平均光密度为0.0275±0.0021,明显高于组3细胞(0.0169±0.0020)(P＜0.01)。结论血管紧张素Ⅱ可能通过其2型受体表现为抑制血管平滑肌细胞增殖、拮抗1型受体的作用,血管紧张素Ⅱ2型受体的这种作用可能与增强一氧化氮合酶活性,使细胞合成、释放一氧化氮增多有关。     

固相片段法合成利拉鲁肽

目的 研究利拉鲁肽的固相合成。方法 通过汇聚式合成策略，利用固相片段缩合法制备利拉鲁肽。以芴甲氧羰基(Fmoc)保护的氨基酸为原料，分别合成4个全保护多肽片段，依照肽序依次偶联得到全保护利拉鲁肽主链[GLP-1(7-37)],经缩合反应在第20位赖氨酸引入侧链N^α-棕榈酰基-L-谷氨酰基，最后将其从树脂上切割并脱保护得到利拉鲁肽。结果与结论利拉鲁肽粗肽收率为25.65%,纯度为52.35%。采用制备型反相高效液相色谱技术进行分离纯化后，利拉鲁肽纯度为98.42%。该合成工艺反应条件温和、操作简单、合成周期短，是实验室规模下较好的利拉鲁肽制备方法。     

以精子抗原肽为抗原的抗精子抗体ELISA检测方法的建立

目的建立组合多个精子抗原肽为抗原的检测抗精子抗体的酶联免疫吸附测定(ELISA)法。方法用PS3全自动多肽合成仪合成4个特异精子肽,并经反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化和质谱鉴定。用ELISA检测4个合成肽的抗原性,基于对这些合成肽抗原活性的评价,将4个精子抗原肽混合后(组合肽)作为抗精子抗体(AsAb)检测用抗原。结果合成了实验所需要的抗原性肽段,RP-HPLC结果显示纯度达95%以上。以组合肽为抗原建立的检测AsAb的间接ELISA方法,与商品化试剂盒相比符合率为95.6%。结论固相多肽合成技术可用于合成高纯度的精子抗原肽,以组合的精子抗原肽作为包被抗原建立的ELISA方法可提高AsAb检测的灵敏度。