促红细胞生成素减轻窒息新生儿血清诱导人肾小管细胞损伤

目的 研究促红细胞生成素（EPO）对新生儿窒息后血清导致人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）损伤的保护作用。方法 以HK-2为研究对象，分为对照、窒息和EPO干预组（每组n=8），以200mL／L窒息血清作为攻击因素，观察各组细胞形态、LDH漏出率和细胞存活[四甲基偶氮唑蓝（MTT）法]变化。结果 与对照组比较，窒息组细胞形态发生改变，LDH漏出率增加，细胞存活减少，差异有显著性（P〈0．05）；而与窒息组比较，除EPO 1 IU／mL组外，EPO组细胞形态明显得到改善，LDH漏出率降低，细胞存活增加，差异具有显著性（P〈0．05），且具有剂量依赖性。结论 EPO有减轻窒息后血清所致HK-2细胞损伤作用。     

Na+/H+交换器-1在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤中的作用

目的探讨Na^＋／H^＋交换器-1（NHE1）在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）损伤中的作用。方法以HK-2为研究对象，以200ml/L新生儿窒息后血清作为攻击因素处理HK-2细胞。首先将实验分为2组：对照组和窒息组，通过免疫组织化学方法检测其HK-2细胞在损伤前后胞内NHE1的表达；再分为3组：对照组、窒息组和5-N-乙基-N-异丙基-阿米洛利（EIPA）干预组（每组8个复孔）。倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测HK-2细胞活力，生物化学法检测细胞培养液中LDH漏出率变化。结果与对照组比较，窒息组细胞内和细胞膜上NHE1表达明显增加；与对照组比较，窒息组细胞形态发生改变；窒息组细胞的活细胞数量较对照组明显降低；LDH漏出率明显升高，差异具有显著性意义（Pa=0）；与窒息组细胞比较，EIPA干预组细胞形态明显得到改善，活细胞数量明显增加，LDH漏出率降低，差异具有显著性意义（Pa=0）。结论新生儿窒息后血清诱导HK-2细胞NHE1的表达增强可能是导致HK-2损伤的重要机制之一，通过抑制NHE1活性可使细胞损伤减轻，活性增强。     

二氮嗪对新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨二氮嗪对窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的保护作用.方法 以HK-2为研究对象,以200 mL/L新生儿窒息后血清作为攻击因素处理HK-2细胞.将HK-2细胞分为对照组、窒息组、二氮嗪组.对照组加入100 mL/L胎牛血清培养液;窒息组加入等量200 mL/L新生儿窒息后血清培养液;二氮嗪组将.二氮嗪加入等量200 mL/L新生儿窒息后血清培养液,使终浓度为100 μmol/L.倒置相差显微镜下观察HK-2细胞的形态学改变并照相,四甲基偶氮唑蓝比色法检测HK-2细胞活力,生物化学法检测细胞培养液LDH漏出率.结果 对照组细胞贴壁良好,呈铺路石样,为扁平的多角形,分裂相多,细胞排列紧密,连接成片,数量多.与对照组相比,窒息组细胞受损明显,形态改变,由典型的扁平多角形细胞变为不规则圆形或椭圆形,细胞间空隙加大,连接松散,细胞间可见较多细胞碎片;细胞活力下降,LDH漏出率增加(P<0.05).与窒息组相比,二氮嗪组细胞损伤状况明显得到改善,细胞生长状况明显好转,形态明显变好;细胞活力增加,LDH漏出率降低(P<0.05),但未恢复至对照组水平.结论 二氮嗪具有减轻窒息后血清诱导的HK-2损伤的作用.     

新生儿窒息后血清在诱导人肾小管细胞损伤中的作用

目的研究窒息新生儿血清在诱导人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）损伤中的作用。方法以HK-2为研究对象，实验分为15组：新生儿窒息后d1，d3，d7不同体积分数（2．5％，5.0％，10.0％、20．0％）血清处理HK-2细胞组，每个体数分数组均有相应的空白对照组。倒置相差显微镜下观察HK-2细胞的形态学变化，四唑盐（MTT）比色法检测HK-2细胞活力，生物化学法检测培养液中LDH漏出率。结果实验组细胞受损明显，形态改变，活细胞数量较空白对照组明显降低（P均〈0.05）；10.0％，20．0％血清组LDH漏出率较空白对照组明显升高（P均〈0.05），且以窒息后d1 20．0％组最为明显，差异具有显著性（P均〈0．05）。结论新生儿窒息后不同时间血清可诱导HK-2细胞损伤，以窒息后d1损伤最明显。此细胞模型的建立为进一步研究新生儿窒息后肾损伤的发病机制和防治提供实验基础。     

黄芪减轻窒息后血清诱导HK-2细胞黏附中性粒细胞的作用及机制

目的 研究黄芪减轻新生儿窒息后血清诱导的HK-2细胞黏附中性粒细胞的作用及信号转导机制.方法 以HK-2细胞为研究对象,实验细胞分为对照、窒息和黄芪干预组3组,用含20%(体积比)窒息后血清作为攻击因素.采用倒置相差显微镜下观察HK-2细胞损伤及黏附中性粒细胞的情况,用生化法检测细胞悬液中髓过氧化物酶(MPO)活性;采用流式细胞术检测细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的表达情况.结果 与对照组比较,窒息组HK-2细胞黏附较多中性粒细胞(MPO活性增加),ICAM-1表达增加,差异有统计学意义(P均<0.05);与窒息组比较,黄芪干预组HK-2细胞黏附中性粒细胞较少(MPO活性下降),ICAM-1表达减少,差异具有统计学意义(P均<0.05).结论 黄苠具有减轻窒息后血清诱导HK-2细胞黏附中性粒细胞的作用,其机制可能与抑制HK-2细胞表面ICAM-1表达有关.     

促红细胞生成素对窒息后血清诱导HK-2细胞Omi/HtrA2胞内转位的影响

目的研究促红细胞生成素(EPO)对新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)Omi/HtrA2胞内转位的影响。方法以HK-2为研究对象,分为对照组、窒息组、EPO干预组、EPO+5-羟葵酸盐(5-HD)干预组,以200 ml/L窒息后24 h血清作为攻击浓度。流式细胞仪测定各组细胞凋亡率,观察各组细胞间接免疫荧光双染色Omi/HtrA2在细胞内从线粒体向胞浆的转位。结果与对照组Omi/HtrA2细胞内转位率相比,窒息组细胞凋亡率及Omi/HtrA2的细胞内转位率明显增加;与窒息组相比,EPO干预组细胞凋亡率及Omi/HtrA2的细胞内转位率明显减少;EPO+5-HD干预组细胞凋亡率及Omi/HtrA2的细胞内转位率较EPO干预组有所增加(P<0.05)。结论 EPO可减少新生儿窒息后血清诱导HK-2细胞Omi/HtrA2胞内的转位。     

母体IgG对NMDA诱导的其幼鼠海马神经元损伤的保护作用的研究

目的研究母体免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）对N甲基D天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）诱导的其幼鼠海马神经元损伤的作用及机制。方法通过体外幼鼠海马神经元原代培养,观察海马神经元在NMDA神经毒性作用下的变化,以及给予不同浓度的母体IgG后的影响。通过测定神经元漏出的乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）活力,观察神经元损伤情况,用锥虫蓝染色观察细胞死亡率。结果体外神经毒性损伤后,培养神经元漏出的LDH较NMDA处理前和正常对照组高（P〈0．01）;给予不同浓度的母体IgG（分别为10mg／L、100mg／L）后,LDH漏出较NMDA组低（均P〈0．01）,而且较大剂量比小剂量的保护作用更为显著（P〈0．05）。锥虫蓝染色显示NMDA组神经元死亡率较NMDA处理前和正常对照组高（P〈0．01）;给予不同浓度的母体IgG（分别为10mg／L、100mg／L）,死亡率均比NMDA组低（P〈0．05、0．01）,而且较大剂量比小剂量的保护作用更强（P〈0．05）。结论体外幼鼠海马神经元原代培养结果表明,50μmol／L NMDA可诱导幼鼠海马神经元损伤,母体IgG对NMDA的神经毒性有保护性作用,而且有剂量依赖关系。     

Roles of optic atrophy in human renal tubular cells(HK-2)injured by postasphyxial-serum in neonates and effects of recombinant human erythropoietin on it

目的 探讨视神经萎缩症蛋白(OPA1)在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡中的表达变化及重组人促红细胞生成素(rhEPO)干预的影响.方法 将HK-2分为对照组、窒息组和rhEPO组,以新生儿重度窒息后24 h血清作为攻击因素,光镜及投射电子显微镜下观察HK-2线粒体形态变化,CCK-8法检测HK-2细胞活力,免疫组化检测HK-2的OPA1表达.结果 对照组及rhEPO组HK-2生长良好,窒息组HK-2发生凋亡相关改变.与对照组HK-2的细胞活力(0.74 ± 0.08)相比,窒息组细胞活力(0.41 ± 0.06)明显降低,而rhEPO组细胞活力(0.60 ± 0.08)则较窒息组提高,差异均有统计学意义(P均＜ 0.05).与对照组HK-2的OPA1表达(0.47 ± 0.02)相比,窒息组细胞OPA1表达(0.21 ± 0.02)显著降低,而rhEPO组(0.36 ± 0.02)较窒息组有所升高,差异均有统计学意义(P均＜ 0.05).对照组和rhEPO组HK-2的线粒体结构完整,可见线粒体嵴;窒息组HK-2的线粒体嵴消失,膜肿胀,空泡变性.结论 rhEPO可能通过增加OPA1表达而抑制线粒体分裂,减轻新生儿窒息后血清诱导HK-2细胞凋亡.     

视神经萎缩症蛋白在新生儿窒息后血清诱导HK-2凋亡中的作用及rhEPO干预的影响

目的探讨视神经萎缩症蛋白(OPA1)在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡中的表达变化及重组人促红细胞生成素(rhEPO)干预的影响。方法将HK-2分为对照组、窒息组和rhEPO组,以新生儿重度窒息后24 h血清作为攻击因素,光镜及投射电子显微镜下观察HK-2线粒体形态变化,CCK-8法检测HK-2细胞活力,免疫组化检测HK-2的OPA1表达。结果对照组及rhEPO组HK-2生长良好,窒息组HK-2发生凋亡相关改变。与对照组HK-2的细胞活力(0.74±0.08)相比,窒息组细胞活力(0.41±0.06)明显降低,而rhEPO组细胞活力(0.60±0.08)则较窒息组提高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与对照组HK-2的OPA1表达(0.47±0.02)相比,窒息组细胞OPA1表达(0.21±0.02)显著降低,而rhEPO组(0.36±0.02)较窒息组有所升高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。对照组和rhEPO组HK-2的线粒体结构完整,可见线粒体嵴;窒息组HK-2的线粒体嵴消失,膜肿胀,空泡变性。结论 rhEPO可能通过增加OPA1表达而抑制线粒体分裂,减轻新生儿窒息后血清诱导HK-2细胞凋亡。     

基质金属蛋白酶组织抑制剂1对细胞因子诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的探讨基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）对细胞因子IL-1β、TNF-α和干扰素1（IFN-γ）诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用及其可能机制。方法实验分TIMP-1干预组、细胞因子刺激组和对照组。细胞因子刺激组应用细胞因子（IL—1β 10ug／L，TNF—α 50ug／L，IFN-γ 50ug／L）诱导大鼠胰岛瘤细胞株RINmSF细胞凋亡；TIMP-1干预组在细胞因子刺激前予以TIMP—1（50ug／L）预处理1h；对照组采用无血清培养基同步培养。应用四甲基偶氮唑盐比色法和Caspase-3分光光度法检测各组细胞活力和Caspase-3活性，采用DNALadder进行凋亡鉴定。结果与对照组比较，细胞因子IL-1β、TNF—α和IFN-α联合刺激组细胞活力明显降低，并呈时间依赖性（Pa〈0．05，0．001）；TIMP-1干预组较细胞因子刺激组细胞活力上升约14％，Caspase-3活性下降约38％，二组比较差异有显著性意义（Pa〈0．001）。DNALadder检测，细胞因子刺激组可见特征性的梯状条带，TIMP—1干预组梯状条带不明显，出现与对照组相似的2条基因组大分子条带。结论IL-1β、TNF-α和IFN-γ联合刺激可诱导RINm5F细胞凋亡，TIMP-1对细胞因子诱导的RINm5F细胞的凋亡有一定的保护作用，此作用可能与其抑制Caspase-3活性有关。     

复方丹参注射液减轻缺氧/复氧性HK-2细胞损伤的作用及机制

目的：探讨丹参注射液减轻缺氧/复氧性人肾近曲小管上皮细胞（HK-2）细胞损伤的作用机制。方法：以人近曲肾小管上皮细胞为研究对象,采用液体石蜡覆盖法建立缺氧/复氧模型。实验分为3组：对照组、损伤组和丹参组,每个组均设立7个时间点：缺氧4,12,24 h和缺氧24 h后复氧4,12,24,48 h,其中丹参组设立4个浓度亚组（生药浓度）：0.05%,0.10%,0.15%,0.20%。在倒置相差显微镜下观察细胞的形态学改变,MTT法进行活细胞计数,生化法检测培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）含量,放射免疫法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。结果：缺氧处理后,损伤组在各时间点细胞数量均明显降低,在缺氧24 h达最低值;与损伤组比较,在丹参各组中,HK-2细胞数量较多,其中以0.10%丹参组细胞数量在各时间点均为最高。与对照组比较,损伤组LDH,TNF-α水平升高,在缺氧24 h/复氧4 h达最高值;与损伤组相比,丹参组在缺氧/复氧过程各时间点中LDH,TNF-α水平降低。结论：复方丹参注射液对HK-2细胞缺氧／复氧性损伤具有保护作用,作用机制可能与丹参注射液抑制炎症细胞因子的产生有关。［中国当代儿科杂志,2007,9（6）：559-562］     

地塞米松对内毒素血症幼年大鼠肾脏细胞凋亡超微结构的影响

目的：探讨内毒素血症幼年大鼠肾脏损害的部分机制及地塞米松对其肾脏的保护作用。方法：健康18日龄Wistar大鼠54只，随机分为健康对照组、内毒素（LPS）组和地塞米松治疗组，每组18只。健康对照组腹腔注射9g／L盐水0．1mL；LPS组腹腔注射LPS4 mg／kg；地塞米松治疗组LPS注射后1h腹腔注射地塞米松5mg／kg。分别于注射后6、24和72h处死取出肾脏，利用透射电镜观察各组大鼠肾脏细胞超微结构的改变。结果：注射LPS 6、24h幼年大鼠肾小球基底膜厚薄不均，局部有增厚和足突融合，近端小管上皮细胞内线粒体嵴溶解，远端小管微绒毛减少；注射LPS72h近端小管出现核染色质浓缩、着边及核破碎的凋亡改变。地塞米松治疗组肾脏结构改变明显减轻，凋亡改变消失。结论：内毒素血症肾损伤时存在肾细胞凋亡，地塞米松通过抑制细胞凋亡对肾脏起保护作用。     

Omi/HtrA2在缺氧复氧后人近曲肾小管上皮细胞中的表达及促红细胞生成素对其表达的影响

目的 探讨缺氧复氧(H/R)后人近曲肾小管上皮细胞内Omi/HtrA2的表达变化及促红细胞生成素(EPO)干预的影响.方法 以人近曲肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)为研究对象,将其分为对照组、H/R组及EPO干预组.对照组常规培养;H/R组缺氧24h后复氧6 h;EPO干预组在H/R前加入5 000 U·L-1EPO预处理.倒置显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组织化学检测细胞内Omi/HtrA2表达变化.结果 与对照组比较,H/R组细胞数量减少,细胞形态发生改变,细胞活力下降,细胞凋亡率显著增加,细胞内Omi/HtrA2表达增强,差异均有统计学意义(Pa＜0.05);而与H/R组相比,EPO干预组细胞数量增多,细胞形态明显改善,细胞活力增加,细胞凋亡率下降,Omi/HtrA2表达减弱,差异均有统计学意义(Pa＜0.05).但各指标均未恢复至对照组水平.结论.H/R可通过上调Omi/HtrA2表达而促进肾小管上皮细胞凋亡,EPO对H/R肾小管上皮细胞具有保护作用,其机制可能与抑制Omi/HtrA2表达、减少细胞凋亡有关.     

发动相关蛋白在窒息新生儿血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤中的作用及重组人促红细胞生成素干预的影响

目的探讨发动相关蛋白1(Drp-1)在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤中的作用及重组人促红细胞生成素(rhEPO)干预的影响。方法将培养的HK-2细胞分为对照组、窒息组和rhEPO干预组,以新生儿重度窒息(Apgar评分<4分)后24 h血清(20%体积比)作为攻击因素。光镜下观察其线粒体形态变化,活细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,免疫组织化学检测其Drp-1表达,投射电子显微镜下观察其线粒体的形态变化。结果 1.HK-2细胞形态学变化:对照组及rhEPO干预组细胞生长良好,窒息组细胞发生凋亡相关改变。2.细胞活力变化:与对照组细胞活力(0.74±0.08)相比,窒息组细胞活力(0.41±0.06)明显降低,rhEPO干预组细胞活力(0.60±0.08)较窒息组好转,但未恢复至对照组水平(P<0.05)。3.免疫组织化学法测定Drp-1表达:与对照组(0.24±0.03)相比,窒息组细胞Drp-1表达(0.51±0.03)显著升高,rhEPO干预组(0.38±0.03)较窒息组降低,但未恢复至对照组水平(P<0.05)。4.线粒体形态变化:对照组和rhEPO干预组线粒体结构完整,可见线粒体嵴;窒息组线粒体嵴消失,膜肿胀,空泡变性。结论 rhEPO可减轻新生儿窒息后血清诱导的HK-2细胞凋亡,其机制可能是通过减少Drp-1的表达抑制线粒体的分裂而实现。     

雌二醇对幼兔未成熟心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的　探讨雌二醇对幼兔心肌缺血一再灌注损伤的保护作用。方法　采用离体心脏Langendorff灌注模型。根据停搏液的不同 ,将 32只 3～ 4周龄雌性日本大耳白兔随机分为 4组 (n =8) :①对照组 (C组 ) ,单用StThomasII停搏液 ;②雌二醇组 (E2 组 ) ,StThomasII停搏液中加入 10 -6mol/L 17 β雌二醇 ;③雌二醇受体阻断剂组 (B组 ) ,StThomasII停搏液中加入 10 -6mol/L 17 β 雌二醇受体阻断剂 4 Hydroxy Tamoxifen ;④EB组 ,StThomasII停搏液中加入 10 -6mol/L 17 β 雌二醇和 4 Hydroxy Tamoxifen。心脏停跳 6 0min ,复灌后的不同时间点观察每组心功能各项指标的恢复率、心肌酶等生化指标及心肌超微结构的改变。结果　E2 组冠脉流出量的恢复率从复灌后 6 0min起、左室发展压和左室压最大变化速率的恢复率从复灌后 4 0min起均高于其他 3组 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ,心肌超微结构改变则较其他 3组轻 ,心肌含水量、MDA含量及冠脉流出液心肌酶含量均低于其他 3组(P <0 .0 5 ) ,E2 组心肌组织ATP含量高于C组和B组 (P <0 .0 5 )。结论　雌二醇对幼兔缺血一再灌注损伤心肌有较好的保护作用 ,其保护作用为心肌细胞雌二醇受体介导。     

雌二醇对幼兔未成熟心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的：探讨雌二醇对幼兔心肌缺血一再灌注损伤的保护作用。方法：采用离体心脏Langendorff灌注模型。根据停搏液的不同,将32只3～4周龄雌性日本大耳白兔随机分为4组(n =8) :①对照组 (C组 ) ,单用StThomasII停搏液 ;②雌二醇组(E2 组 ) ,StThomasII停搏液中加入10 -6mol/L 17 β雌二醇 ;③雌二醇受体阻断剂组 (B组) ,StThomasII停搏液中加入10 -6mol/L 17 β 雌二醇受体阻断剂4Hydroxy Tamoxifen ;④EB组 ,StThomasII停搏液中加入10 -6mol/L 17 β 雌二醇和 4 Hydroxy Tamoxifen。心脏停跳6 0min ,复灌后的不同时间点观察每组心功能各项指标的恢复率、心肌酶等生化指标及心肌超微结构的改变。结果：E2 组冠脉流出量的恢复率从复灌后6 0min起、左室发展压和左室压最大变化速率的恢复率从复灌后 4 0min起均高于其他 3组 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ,心肌超微结构改变则较其他 3组轻 ,心肌含水量、MDA含量及冠脉流出液心肌酶含量均低于其他 3组(P <0 .0 5 ) ,E2 组心肌组织ATP含量高于C组和B组 (P <0 .0 5 )。结论：雌二醇对幼兔缺血一再灌注损伤心肌有较好的保护作用,其保护作用为心肌细胞雌二醇受体介导。