黄芪多糖对2型糖尿病KKAy小鼠早期肾脏病理改变的影响

目的:探讨黄芪多糖(APS)对2型糖尿病小鼠(KKAy)早期肾脏病理改变的影响。方法:雌性KKAy小鼠和C57BL/6J小鼠随机分为:糖尿病组(DM,n=8)、糖尿病黄芪多糖治疗组(DA,n=8)、正常对照组(C,n=10)和黄芪多糖对照组(CA,n=10)。定期监测体重、血糖、血胰岛素水平、计算HOMA-IR指数;观察肾小球病理变化。结果:KKAy鼠较C57BL/6J鼠体重、血糖、血胰岛素及HOMA-IR均显著升高(P<0.01)。DM组小鼠肾小球面积较C组增大,系膜基质增加、肾小管管腔扩大、管壁变薄、肾小球基底膜(GBM)增厚、蛋白管型明显。经APS治疗后,以上指标均明显改善(P<0.01)。结论:APS可降低血糖,增强机体对胰岛素敏感性,对2型糖尿病小鼠早期肾脏病理改变具有良好的治疗作用。     

2 型糖尿病动物模型KKAy小鼠肝、肾的病变

目的 研究2型糖尿病动物模型KKAy小鼠的糖尿病肝、肾的病变过程,探索KKAy小鼠作为2型糖尿病并发多脏器病变模型的价值.方法 9～11周龄雄性KKAy小鼠(n=20)和对照组的雄性C57BL/J小鼠(n=25),测量14、16、20、24、28周龄小鼠空腹血糖和体重.两组动物分别于24、28周处死,测定血清肌酐、尿素;胆固醇、甘油三酯;丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST).光镜观察两组小鼠肾脏、肝脏的病理改变.结果 ①KKAy小鼠体重、血糖比同龄对照组C57BL/J小鼠高(P<0.01).②24、28周龄KKAy小鼠血脂均较对照组高(P<0.05);24周龄KKAy小鼠肌酐,ALT比对照组高(P<0.05);28周龄KKAy小鼠的肌酐、ALT及AST比对照组高(P<0.05).③24、28周龄KKAy小鼠肾脏系膜基质增多,肾小管上皮细胞胞质出现明显空泡,肾问质有纤维化;肝脏结构紊乱,肝细胞胞质有明显空泡,肝细胞脂肪变.结论 KKAy小鼠14周龄以后可出现明显肥胖,高血糖,24周龄、28周龄出现高脂血症,有肝、肾形态和功能的损害,是较好的研究2型糖尿病病变过程及并发症的动物模型.     

2型糖尿病小鼠(KKAy)动物模型的鉴定和早期肾脏病理改变

目的：探讨KKA^y小鼠作为2型糖尿病动物模型在肾脏病研究方面的价值。方法：8周龄的雄性KKA^y小鼠（n=15)和C57BL－J小鼠（n=18),于16,20,24周处死动物。尾静脉取血测血糖（血糖仪试纸法）,全自动生化分析仪测定血LDL,TG,CHO,Cr,BUN,放免方法测血胰岛素水平。用三氯醋酸比浊法测定24h尿蛋白浓度,不同病理染色方法了解其肾脏病理改变与蛋白尿的关系。用北京航空航天大学计算机中心提供的医学彩色图象分析软件分析。结果：不同周龄手KKA^y小鼠的体重,血糖（P＜0．01）,血浆胰岛素水平,血甘油三酯,胆固醇和低密度脂蛋白水平都比同龄C57BL小鼠高（P＜0．05）。而血肌酐,尿素氮差异无 。20,24周时KKA^y小鼠的尿蛋白浓度较同龄C57BL小鼠也显著升高（P＜0．005）。KKA^y小鼠的肾小球面积普遍比C57BL小鼠大,系膜基质增加,肾小管腔扩大,管壁变薄,肾小球基底膜增厚,还可以见到蛋白管型,小管灶状萎缩。结论：KKA^y小鼠16周龄以后出现高血糖,高胰岛素血症,高脂血症,伴有尿蛋白增加,和肾小球系膜基质增加,肾小球基底膜增厚和小管扩张,是较好的研究2型糖尿病肾脏早期发病的动物模型。     

自发2型糖尿病模型KKAy小鼠脑微血管病变的研究

目的 研究KKAy小鼠的脑微血管病变,明确糖尿病脑络病理变化的具体表现.方法 9～11周龄雄性KKAy小鼠和对照组的雄性C57BL/J小鼠,测量16、20、24、28周龄小鼠空腹血糖和体重.28周时处死动物,测定血清6-Keto-PGF1α和TXB2含量.光镜和电镜观察脑组织病理形态.结果 KKAy小鼠体重、血糖比同龄对照组C57BL/J小鼠高,血清TXB2含量增高,6-Keto-PGF1α降低.KKAy小鼠脑微血管内皮细胞核肿大,管腔狭小,腔内有红细胞、血小板淤滞.神经细胞胞核疏松肿胀,线粒体轻微肿胀,粗面内质网较瘦小,核糖小体减少.结论 在高血糖和异常6-Keto-PGF1α和TXB2含量的毒性作用下,KKAy小鼠脑组织微血管内皮细胞结构和功能均有损伤,最终导致神经细胞结构破坏.     

2型糖尿病小鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制物-1表达

目的探讨2型糖尿病动物模型KKAy小鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和组织纤溶酶原激活物(tPA)mRNA表达与肾脏细胞外基质蓄积的关系.方法选取8周龄雄性KKAy小鼠和C57BL-J小鼠,分别于16、20和24周处死.采用发色底物法检测不同周龄的KKAy小鼠及参照组C57BL/J小鼠的血浆PAI-1活性,RT-PCR法检测小鼠肾皮质tPA mRNA表达,原位杂交法检测肾皮质PAI-1 mRNA水平,免疫组织化学和免疫印迹法检测肾皮质层粘连蛋白表达.结果不同周龄KKAy小鼠肾皮质层粘连蛋白表达均高于同龄对照组(P＜0.05).2型糖尿病KKAy小鼠与C57BL/J小鼠血浆PAI-1活性的差异没有显著性(P＞0.05);但肾皮质tPA mRNA水平却显著降低,以16周时最为显著,仅为C57BL/J小鼠的47%,随周龄的增加,其差异逐渐减小.原位杂交显示KKAy小鼠PAI-1mRNA可在肾脏多部位表达,并以近端小管上皮细胞内的表达为主,且明显高于同龄C57BL小鼠.结论2型糖尿病KKAy小鼠早期肾病时,细胞外基质蛋白的蓄积可能和tPA mRNA表达下调及PAI-1 mRNA表达上调所致的纤溶酶降解细胞外基质作用降低有关.     

葛根素对KKAy小鼠肝脏损害的保护作用

目的观察2型糖尿病动物模型KKAy小鼠肝脏的病理变化及葛根素对其肝脏损害的保护作用,探寻糖尿病治疗新思路——保护肝脏的结构和功能。方法9～11周龄雄性KKAy小鼠随机分为模型组和葛根素组,对照组9～11周龄雄性C57BL/J小鼠,每组20只,测量16、20、24、28周龄小鼠体重,24、28周龄空腹血糖。3组动物分别于24、28周处死,测定甘油三酯(TG)、胆固醇(TCHO)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)数值。光镜观察3组小鼠肝脏的病理改变。结果24周龄前,葛根素可以有效控制小鼠体重的增加(P<0.05);28周龄葛根素组小鼠的TCHO、血清ALT和AST比同龄模型组有所降低(P<0.05);普通光镜观察,发现28周龄模型组小鼠肝脏结构紊乱,肝细胞胞浆有明显空泡,肝细胞脂肪变。结论早期应用葛根素,可以改善糖尿病小鼠肝脏结构及功能,对糖尿病造成的肝脏损害具有较好的保护作用。     

IRS-1的表达和泛素化在KKAy及C57BL/6J小鼠糖尿病发展过程中的意义

目的:探讨胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白表达和泛素化水平在糖尿病发展过程中的作用。方法:20只8周龄C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(正常饲料喂养,n=10)和胰岛素抵抗组(高脂饲料喂养,n=10)。8周龄KKAy小鼠8只,高脂饲料喂养,为2型糖尿病组。检测各组小鼠体重、血糖和血胰岛素水平。12周后免疫印迹检测各组动物肝组织IRS-1的表达量,同时采用剥离免疫印迹法检测肝组织IRS-1的泛素化水平。结果:高脂喂养12周后C57BL/6J小鼠出现胰岛素抵抗,KKAy小鼠出现肥胖和糖尿病。2型糖尿病组IRS-1的表达显著低于正常对照组和胰岛素抵抗组(P<0.05),而IRS-1的泛素化水平则显著高于胰岛素抵抗组(P<0.05),与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论:2型糖尿病时IRS-1的表达下调,IRS-1泛素化水平增加是导致胰岛素信号转导障碍的重要原因。     

糖尿病大鼠禁食性尿白蛋白对评价早期糖尿病肾病的意义

目的 探讨糖尿病大鼠禁食性尿蛋白对评价早期糖尿病肾病的意义.方法 成年雄性Sprague-Dawley大鼠57只,随机分为早期糖尿病肾病组(n=33)和对照组(n=24).早期糖尿病肾病组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素建立模型.2组大鼠分别于第4周、8周、12周、16周禁食24 h,留取禁食状态下24 h尿液.放免法检测尿白蛋白,计算24 h尿蛋白、尿白蛋白排泄率和尿白蛋白/肌酐比值,同时检测肾脏内生肌酐清除率、肾肥大指数、肾小球细胞外基质堆积指数.电镜观察肾小球基底膜厚度.结果 早期糖尿病肾病大鼠不同时间点的24 h尿蛋白、尿白蛋白排泄率和尿白蛋白/肌酐比值均显著高于对照组大鼠(P＜0.05),组间差异与时间变化无交互作用(P＞0.05);这3项指标均与内生肌酐清除率、肾脏肥大指数呈正相关(P＜0.05).结论 禁食性24 h尿蛋白、尿白蛋白排泄率和尿白蛋白/肌酐比值均是评价早期糖尿病大鼠肾病有价值的指标.     

黄芪和葛根素对2型糖尿病KKAy小鼠的肾脏保护作用及纤黏连蛋白表达的影响

目的 从肾功能和肾组织形态改变方面观察黄芪注射液联用葛根素注射液对2型糖尿病KKAy小鼠肾脏的保护作用及二者对肾组织纤黏连蛋白(fibronectin,FN)的表达影响.方法 将雄性KKAy小鼠分为模型组、黄芪注射液联合葛根素注射液治疗组,同龄雄性C57BL/6J小鼠为正常对照组.定期监测血糖、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、血清尿素及尿酸,HE及Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化观察肾组织FN表达情况.结果 从20周龄开始,模型组小鼠空腹血糖、血脂、血清尿素及尿酸较正常组明显升高,治疗组小鼠上述指标较模型组明显改善.HE及Masson染色见模型组肾小球硬化,肾小管上皮细胞胞浆空泡明显,肾间质胶原组织增多,治疗组小鼠以上病变明显减轻;免疫组化显示模型组FN表达较正常组明显升高,治疗组各周龄小鼠肾脏组织FN的表达与模型组比较均减少.结论 黄芪注射液联用葛根素注射液能改善2型糖尿病KKAy小鼠的肾功能,减轻肾脏的病理改变,减少系膜区FN的表达,具有保护肾脏作用.     

黄芪注射液联合葛根素注射液对糖尿病肾病KKA~y小鼠78kD-葡萄糖调节蛋白的影响

目的观察黄芪注射液联合葛根素注射液对糖尿病肾病KKAy小鼠78k D-葡萄糖调节蛋白(GRP78)表达的影响,为中医药治疗糖尿病肾病提供实验依据。方法雄性KKAy小鼠饲养至12周龄时随机分为模型组和黄芪注射液联合葛根素注射液治疗组;同龄雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照组。观察小鼠日常状态,并于16周龄处死小鼠,取血清检测空腹血糖、尿素、肌酐、甘油三酯、总胆固醇,并取肾脏观察肾组织病理形态学变化,免疫组织化学法检测小鼠肾组织中GRP78的表达。结果模型组小鼠空腹血糖、尿素、肌酐、甘油三酯、总胆固醇较对照组明显升高(P0.01);治疗组小鼠空腹血糖、尿素、肌酐较模型组降低(P0.05或P0.01)。形态学观察可见模型组小鼠肾小管上皮细胞胞浆出现空泡;经治疗后,肾小球、肾小管结构完整,病变不明显。免疫组化显示治疗组GRP78表达较模型组明显减少(P0.01)。结论黄芪注射液联合葛根素注射液可在一定程度上抑制KKAy小鼠肾组织中GRP78表达,减轻内质网应激,保护2型糖尿病KKAy小鼠的肾功能。     

黄芪多糖对KKAy小鼠骨骼肌蛋白激酶B丝氨酸磷酸化的影响

目的:观察胰岛素刺激下蛋白激酶B(PKB)丝氨酸磷酸化水平在遗传性2型糖尿病小鼠(KKAy)骨骼肌组织的变化及黄芪多糖(APS)对其影响。方法:选取雌性KKAy16只,随机分为2组:糖尿病组和糖尿病黄芪多糖治疗组;选取雌性C57BL/6J小鼠20只作为对照组,随机分为正常对照组和黄芪多糖对照组。于黄芪多糖治疗前后观察体重、血糖、血胰岛素水平、胰岛素抵抗指数及口服葡萄糖耐量试验,治疗8周后用免疫印迹法检测骨骼肌组织胰岛素刺激的丝氨酸磷酸化PKB表达。结果:KKAy小鼠体重、血糖及胰岛素抵抗指数均显著高于C57BL/6J组,同时伴有明显的糖耐量异常(P<0.01),经APS治疗8周后,各项实验指标均明显降低(P<0.01)。KKAy小鼠骨骼肌组织胰岛素刺激的丝氨酸磷酸化PKB表达水平显著低于C57BL/6J小鼠(P<0.01),黄芪多糖可明显提高KKAy小鼠骨骼肌丝氨酸磷酸化PKB表达(P<0.05),但对C57BL/6J小鼠各项指标无显著影响。结论:胰岛素刺激下的PKB磷酸化障碍是2型糖尿病胰岛素抵抗的重要机制之一,黄芪多糖可增强胰岛素刺激的丝氨酸磷酸化PKB表达水平,从而改善KKAy小鼠胰岛素抵抗。     

黄芪注射液对KKA~y小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨黄芪注射液治疗肾间质纤维化的作用机制,为临床中药治疗糖尿病肾间质纤维化提供实验依据。方法将16只2型糖尿病模型KKAy小鼠随机分为模型组和黄芪注射液治疗组,另取8只C57BL/6J小鼠作为正常组,治疗组小鼠14周龄开始腹腔注射黄芪注射液。于24周龄处死小鼠,取肾脏分别观察肾组织病理形态学变化,免疫组织化学法检测小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白、钙依赖性跨膜糖蛋白和转化生长因子β1的表达。结果可见模型组发生明显的纤维化改变,而经黄芪注射液治疗后,小鼠肾间质基质轻度增多,病变较轻微。治疗组KKAy小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1的表达较模型组减少,钙依赖性跨膜糖蛋白的表达增多。结论黄芪注射液可在一定程度上减少α-平滑肌肌动蛋白的表达,抑制KKAy小鼠肾脏组织中转化生长因子β1表达,上调钙依赖性跨膜糖蛋白的表达水平,阻断并逆转肾小管上皮-间质转化的过程,延缓肾小管上皮细胞转分化的发生发展进程。     

黄芪甲苷对糖尿病KKAy小鼠肾组织TGF-β1、SMAD2/3及α-SMA表达的影响

目的 观察黄芪甲苷对糖尿病KKAy小鼠肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、SMAD2/3、q-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨其延缓肾脏纤维化的可能机制.方法 雄性C57BL/6J小鼠10只作为对照组,20只2型糖尿病模型KKAy小鼠予以高脂饮食至14周,随机数字法分为模型组和黄芪甲苷组,每组10只,黄芪甲苷组给予黄芪甲苷40 mg·kg-·d-1,模型组与对照组给予等量生理盐水.实验期间,各组动物自由饮食、饮水.血糖仪测量16、20、24周龄时各组小鼠的血糖水平.24周时处死,观察各组小鼠肾的病理学变化,免疫组织化学法测定TGF-β1、SMAD2/3、α-SMA的表达.结果 (1)血糖:与对照组相比,14周龄的KKAy小鼠血糖明显升高,模型组血糖在16、20、24周时血糖明显升高(P＜0.05),黄芪甲苷组与其相比,血糖下降(P＜0.05).(2)肾组织形态学:对照组肾小球及肾小管结构清晰,未出现肾间质纤维化,模型组肾小球系膜基质增宽,系膜细胞增多,肾小管上皮细胞细胞质空泡样变性,肾间质炎性细胞增多,黄芪甲苷组肾小管上皮细胞细胞质较少,未呈现明显的纤维化.(3)肾组织TGF-β1、SMAD2/3、α-SMA的表达:对照组TGF-β1表达微弱,而模型组TGF-β1显著表达于肾小管上皮细胞细胞质(P＜0.01);与模型组相比,黄芪甲苷组TGF-β1、α-SMA表达明显下调(P＜0.05);对照组肾小管与肾小球细胞核有少量磷酸化的SMAD2/3表达,模型组表达增加(P＜0.01),与模型组相比,黄芪甲苷组表达减少(P＜0.05).结论 黄芪甲苷通过影响TGF-β/SMADS信号通路,下调TGF-β1、α-SMA表达,改善糖尿病小鼠肾脏纤维化.     

Phosphatase and Tension Homolog Overexpression in Insulin Resistant Diabetic Adipose Tissue

Objective To investigate the expression of phosphatase and tension homolog （PTEN） in adipose tissue of KKAy diabetic mice, a mouse model of type 2 diabetes. Methods KKAy diabetic mice were fed with high fat diet for 4 weeks. After blood glucose met the criteria of diabetes （over 16.7 mmol/L）, mice were randomly divided into 3 groups： a control group （without any treatment）, a rosiglitazone group （treated with rosiglitazone 12.5 mg/kg·d once per day）, and a metformin group （treated with metformin 3 g/kg·d twice daily）. After 4 weeks, we then determined the expression of PTEN and phosphoserine 473-Akt （pS473-Akt） in the epididymal adipose tissue with Western blots. The mice in each group were further divided into the insulin （-） subgroup and insulin （＋） subgroup, which were intraperitoneally injected with saline and insulin （5 mU/g body weight）, respectively. Results The expression of PTEN was elevated in the epididymal adipose tissue obtained from KKAy diabetic mice compared with that from the C57BL/6J mice （P〈0.001）. In accordance with the enhanced expression of PTEN, the level of pS473-Akt stimulated by insulin was decreased in the adipose tissue of KKAy mice compared to the C57BL/6J mice （P〈0.001）. Treatment with the insulin-sensitizing agents, rosiglitazone and metformin did not inhibit the elevated expression of PTEN in adipose tissue of KKAy diabetic mice. Conclusion PTEN may play an important role in the development of insulin resistance in adipose tissue of type 2 diabetes mice model.     

大黄素改善KKAy糖尿病小鼠胰岛素敏感性的实验研究

目的 探讨大黄素改善KKAy糖尿病小鼠胰岛素抵抗的作用机制.方法 将SPF级KKAy小鼠50只按血糖值随机分为模型组,大黄素低、中、高治疗组按12.5、25、50mg/(kg·d)剂量灌胃,吡格列酮治疗组按1.95mg/(kg·d)剂量灌胃,并选C57BL/6J小鼠为正常对照组,连续灌胃给药8周.8周后测定空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(Fins)并计算胰岛素敏感指数(ISI)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),游离脂肪酸(FFA),超敏C反应蛋白(hs-CRP)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α).结果 大黄素可以降低KKAy糖尿病小鼠空腹血糖、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、FFA、hs-CRP及TNF-α,并能改善胰岛素敏感性.结论 大黄素能降低血糖及肿瘤坏死因子-α并改善KKAy糖尿病小鼠的胰岛素敏感性.