矽肺纤维化体外细胞模型的建立

目的根据SiO2对不同类型细胞的增殖效应,建立矽肺纤维化的体外细胞模型.方法以不同剂量的SiO2刺激SD大鼠肺泡巨噬细胞(PAM)及佛波酯(PMA)诱导分化THP-1(具有PAM特性的人血单核细胞株)细胞的培养上清液,分别作用于中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)和貂肺上皮细胞(CCL-64),采用四唑盐(MTT)比色法测定其增殖效应(以A570nm值表示).结果在0、50、100、200、500μg/ml SiO2浓度范围内,用体积分数为5%的SiO2刺激的PAM和体积分数为10%的SiO2刺激的PMA-primed THP-1细胞上清液分别作用于CHL和CCL-64细胞,均可引起细胞增殖,200、500μg/ml SiO2剂量组与对照组的差异有显著性,并存在剂量-效应关系(CHLr1=0 914,P＜0.05;r2=0.980,P＜0.01.CCL-64r1=0.975,P＜0 01;r2=0.956,P＜0.01).以体积分数为10%的SiO2刺激PAM的上清液分别作用于CHL和CCL-64,50μg/ml SiO2组的A570nm值为CHL0.66±0.05,CCL-640.21±0.04,与对照组(CHL0.74±0.04;CCL-640.26±0.04)的差异有显著性(P＜0.05),均表现为抑制增殖作用.结论利用体积分数为5%的SiO2刺激的PAM上清液和体积分数为10%的SiO2刺激的PMA-primed THP-1细胞上清液作用于CHL和CCL-64建立的体外细胞模型在矽肺纤维化发生和矽肺相关肺癌的研究中有应用前景.     

实验性大鼠矽肺纤维化中核转录因子Sp1的表达及作用

目的初步探讨核转录因子Sp1在实验性矽肺发生发展中的作用。方法复制SD大鼠矽肺模型,用免疫组织化学法检测体内SiO2刺激的肺巨噬细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞等肺纤维化效应细胞中核转录因子Sp1蛋白表达的定位和动态变化。结果大鼠实验性矽肺模型中,SiO2刺激组与空白对照组相比,肺巨噬细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞、肺间质细胞中转录因子Sp1蛋白表达上调,于染尘后第14天达高峰。结论SiO2能上调肺内多种细胞Sp1的表达,Sp1可能在矽肺的发生发展过程中起重要作用。     

可溶性细胞间黏附分子-1在矽肺患者血清中的表达

应用酶联免疫吸附试验分别检测100例非矽肺接尘工人,54例Ⅰ期矽肺患者血清中可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的含量.经成组设计:检验,两组研究对象在年龄及接尘工龄上,差异无统计学意义(P>0.05),sICAM-1的含量在Ⅰ期矽肺患者血清中显著高于非矽肺接尘工人(P<0.05).提示sICAM-1可能是参与矽肺发生发展的重要免疫指标,且在矽肺形成早期即呈现高表达.     

细胞间隙连接通讯研究动态与矽肺纤维化发生的展望

细胞间隙连接通讯是细胞增生与分化的重要调节机制。目前研究表明，矽肺纤维化发生的主要因素是尘细胞产生的一系列细胞因子，如ＰＤＧＦ－ＡＡ，ＩＧＦ－１，ＦＧＦ－ＥＧＦ等；而这些细胞生长因子是通过何种途径发挥细胞增殖效应？是否与增加释放的细胞因子介导肺成纤维细胞ＧＪＩＣ功能下调有关？本文就细胞ＧＪＩＣ功能改变与在久肺纤维化发生的关系作一综述，推论，为矽肺发病机制及治疗学研究提出新的思路。     

缺氧引起肺血管重构的细胞及分子机制

慢性缺氧改变肺动脉的结构和肺血管各种细胞(从肺门至肺泡壁最外周的血管)的生化和功能表型改变。改变的程度和改变谱取决于种系、性别和缺氧的不同阶段。此外,不同部位的缺氧改变不同,较大血管的重构过程与较小的血管重构不同。     

二氧化硅刺激肺成纤维细胞间隙连接功能下调的研究

目的　探索矽肺发病过程中二氧化硅(SiO     

组织基质金属蛋白酶、细胞间黏附分子-1表达与子宫内膜异位症的相关性研究

目的:研究组织基质金属蛋白酶(MMP)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达与子宫内膜异位症的相关性。方法:选取2012年1月~2013年9月该院收治的60例子宫内膜异位症患者为观察组,并选取同期的60例子宫肌瘤手术患者为对照组,然后将两组患者组织基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-12(MMP-12)及ICAM-1阳性率进行比较,并以Logistic分析上述组织指标与疾病的关系。结果:观察组患者组织MMP-1、MMP-9、MMP-12及ICAM-1阳性率均高于对照组,且分期较高者的阳性率高于分期较低者,差异均有统计学意义(均P<0.05),Logistic分析显示其均与疾病有密切的关系。结论:子宫内膜异位症患者组织中MMP、ICAM-1呈现较高的水平,与疾病有密切的关系。     

煤工尘肺患者血清中基质金属蛋白酶-9及其抑制因子水平的变化

目的 探讨煤工尘肺患者血清中基质金属蛋白酶(MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-9)水平的变化及意义.方法 采用双抗体夹心ELISA法检测188例煤工尘肺(煤肺组53例,煤矽肺组67例,矽肺组68例)、57例0期(0~+期组)、64例接尘对照组和50例健康对照组血清中MMP-9及TIMP-9含量;分析血清中MMP-9和TIMP-9水平在各煤工尘肺组及各对照组间的变化,以及二者的相关性;并根据煤工尘肺期别、是否有并发症以及接尘年限等因素进行分析.结果 煤肺组血清中MMP-9水平为17.16 ng/ml、煤矽肺组为15.14ng/ml,矽肺组为17.50 ng/ml,与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)与接尘对照组、0~+组比较,均呈降低趋势,其中矽肺组及煤矽肺组差异有统计学意义(P<0.05).3组煤工尘肺患者血清中MMP-9水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);煤肺组、煤矽肺组和矽肺组血清中TIMP-9水平分别为(330.00±108.42),(312.044±120.09),(366.81±135.50)ng/ml,均低于健康对照组,其中矽肺组和煤肺组血清中TIMP-9水平较接尘对照组、1~+组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),3组煤工尘肺组间比较,矽肺组血清中TIMP-9水平较煤矽肺组升高,差异有统计学意义(P<0.05).3组煤工尘肺患者血清中MMP-9和TIMP-9水平按不同的疾病分期、是否有并发症以及接尘年限进行分析,差异均无统计学意义(P>0.05);矽肺组血清中TIMP-9水平与年龄呈正相关(r=0.249,P<0.05),血清中MMP-9和TIMP-9水平在接尘对照组中呈正相关(r=0.294,P<0.05),其他组中未发现相关性.结论 血清中MMP-9与TIMP-9水平变化与粉尘对机体的损害程度有关,MMP-9与TIMP-9共同参与了煤工尘肺的病理生理过程;动态观察0~+期及健康煤矿工人血清中MMP-9和TIMP-9水平,可为煤工尘肺的预防及早期诊断提供参考.     

矽肺大鼠差异表达基因的筛选与验证

目的 筛选矽肺大鼠肺组织与正常大鼠肺组织的差异表达基因,并对差异表达基因基质金属蛋白每-12(MMP-12)和组织蛋白酶E(Cathepsin E)进行鉴定,探讨其在矽肺发病中的作用.方法 将健康SD大鼠随机分为模型组(24只)和对照组(6只),采用非气管暴露法建立雄性SD大鼠矽肺模型,HE染色和VG染色进行肺组织病理观察.对染尘60d的大鼠肺组织,应用基因芯片筛选大鼠肺组织中的差异表达基因.选择明显上调的MMP-12和Cathepsin E基因,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫组织化学法及蛋白质印迹(Western blot)法进行鉴定.结果 从26 962个基因中共筛选出模型组和对照组的差异表达基因338个,其中上调基因267个,下调基因71个.经RT-PCR验证,染尘后30、60、90d时,模型组大鼠肺组织中MMP-12 mRNA表达的吸光度值分别为对照组的4.306、5.338、6.713倍,Cathepsin E分别为1.434、2.974、3.889倍.经免疫组织化学法验证,染尘后30、60、90 d时,模型组大鼠肺组织中MMP-12蛋白表达的平均吸光度值分别为对照组的1.435、1.746、2.069倍,Cathepsin E分别为1.372、1.663、2.103倍.经Western blot法验证,染尘后30、60、90d时,模型组大鼠肺组织中MMP-12蛋白表达的平均吸光度值分别为对照组的1.214、1.531、1.959倍,Cathepsin E分别为1.262、1.828、1.907倍.与对照组相比,模型组大鼠肺组织中MMP-12和Cathepsin E mRNA和蛋白表达量明显上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 应用基因芯片筛选出矽肺大鼠肺组织差异表达基因并得以验证,MMP-12和Cathepsin E可能通过降解肺泡壁基底膜及参与免疫应答等参与矽肺的发生发展过程.     

SiO_2刺激矽肺肺泡巨噬细胞上清介导的人胚肺成纤维细胞基质金属蛋白酶-2/9的表达

目的 探讨SiO_2体外刺激矽肺患者的肺泡巨噬细胞(AM)培养上清对人胚肺成纤维细胞(HELF)基质金属蛋白酶(MMP)-2/9的表达的影响.方法 将矽肺患者的AM在体外经SiO_2刺激24 h后收集其培养上清,与HELF共同孵育12、24、36、48、72 h,用免疫细胞化学方法检测各时间点HELF中MMP-2/9蛋白表达;明胶酶谱法检测各时间点HELF培养液的MMP-2/9活力的表达.结果 经SiO_2刺激后,实验组HELF在24、36、48、72 h MMP-2活力的表达增强,分别为1.572±0.104、1.786±0.125、1.987±0.130、2.147±0.156,与同期对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).实验组HELF在24、36、48、72 hMMP-9活力的表达增强,与同期对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).实验组HELF在24、36、48、72 h MMP-2蛋白的表达增强,分别为0.171±0.018、0.200±0.018、0.221±0.023、0.212±0.020,与同期对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);实验组HELF在24、36、48、72 h MMP-9蛋白的表达增强,与同期对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 SiO_2可通过AM介导促进HELF中MMP-2和MMP-9蛋白及活力表达.     

碳纳米管诱导肺纤维化的机制研究进展

碳纳米管（carbon nanotubes, CNTs）作为一种新型的纳米材料,近年来在工业和商业领域大量应用,但其对人体的影响也引起了广泛重视,如皮肤接触引起过敏,呼吸道吸入可能导致肺纤维化、肉芽肿或间皮瘤甚至肺癌的形成等。CNTs诱导的肺纤维化病理生理机制尚未得到完全研究和阐明。据此,对CNTs如何发挥其促纤维化作用做了综述,将CNTs诱导的肺纤维化分为两个阶段和四种重要机制：急性炎症早期阶段通过激活炎症小体与NF-κB信号通路产生IL-1β、IL-18和OPN等炎症因子促进炎症发展;炎症晚期肺纤维化阶段可以激活TGF-β1与Erk信号通路来促进纤维化的形成。通过将CNTs诱导肺纤维化的四种重要机制进行衔接与梳理,以期为临床肺纤维化的治疗提供新思路。     

牛磺酸的抗肺纤维化效应及机制

间质性肺纤维化是许多肺部疾病的最终结局 ,主要以肺组织细胞外基质的过度沉积为特征。在博莱霉素等致纤维化因素的作用下 ,肺组织产生的氧、氮等自由基使细胞膜发生脂质过氧化 ,损伤DNA和信号转导蛋白 ,使肺泡上皮遭到不可逆的破坏。同时肺细胞启动损伤修复机制 ,分泌转化生长因子 β1(TGF β1)等大量细胞因子 ,调控肺间质成纤维细胞异常增生 ,过量胶原在肺组织沉积 ,形成纤维化。肺内的细胞外基质蛋白分为胶原、蛋白聚糖及糖蛋白三大类。其中成纤维细胞分泌的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白在肺纤维化的形成中占主导地位[1 3 ] 。牛磺酸 ,即 2 氨基…     

丹芍化纤胶囊对肺纤维化干预作用及机制

目的 探讨calpain-2与caspase-3在肺纤维化中的变化及丹芍化纤胶囊对肺纤维化的干预作用机制.方法 选取SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和丹芍组,每组各10只,模型组和丹芍组气管内一次性灌注博来霉素5 mg/kg诱导肺纤维化,丹芍组于造模第2d给予丹芍化纤胶囊混悬液灌胃(0.8 g/kg),于实验第28 d处死大鼠;采用免疫组织化学方法检测肺组织中calpain-2与caspase-3蛋白的表达情况;运用荧光实时定量PCR( real-time PCR)检测肺组织中calpain-2及caspase-3 mRNA的表达变化.结果 模型组大鼠肺组织中calpain-2,caspase-3的蛋白及mRNA表达分别为(0.35±0.06)、(0.41±0.12)、(210±86)、(614±106),明显高于对照组(P＜0.01);经丹芍化纤胶囊干预后,肺组织中calpain-2蛋白(0.18 +0.03)、mRNA(97±71)及caspase-3蛋白(0.22±0.04)、mRNA(315±92)的表达较模型组明显减少(P＜0.05或P＜0.01).结论 calpain-2及caspase-3在肺纤维化的发生发展中作用明显,丹芍化纤胶囊干预肺纤维化的机制可能与减少肺组织中calpain-2与caspase-3的表达有关.     

姜黄素对大鼠肺间质纤维化影响的机制研究

目的 研究姜黄素对大鼠肺间质纤维化的治疗作用及其可能机制.方法 健康雄性SD大鼠80只,随机分为对照组、模型组、泼尼松组和姜黄素组,每组20只.除正常对照组外,其余各组大鼠气管内一次性注入博来霉素诱导肺纤维化.造模后第15天起,姜黄素组和泼尼松组分别给予姜黄素（300 mg/kg）和泼尼松（5 mg/kg）每日灌胃一次,其余两组每日给予1%羧甲基纤维素钠（10 ml/kg）灌胃一次.各组动物分别于造模后第21、28、42及56天随机处死5只,取肺组织行HE、Masson染色评价肺组织病理变化,消化法测定肺组织羟脯氨酸（HYP）含量,免疫组化法测定肺组织转化生长因子β1（TGF-β1）、血小板源性生长因子（PDGF）的表达.结果 姜黄素组肺纤维化程度,肺组织HYP含量在第42和56天显著低于同期模型组[42 d：1.28±0.61 vs 2.28±0.39,P〈0.01;（1.73±0.22）mg/g vs（2.50±0.37）mg/g,P〈0.01;56 d：1.00±0.59 vs 1.73±0.36,P〈0.05;（1.57±0.36）mg/g vs（2.20±0.42）mg/g,P〈0.01],第42天姜黄素组HYP含量显著低于同期泼尼松组（P〈0.05）,肺组织TGF-β1、PDGF蛋白表达于造模后第28、42及56天显著低于模型组（28d：TGF-β1：3642.05±839.31 vs 5067.35±738.39,P〈0.05;PDGF：2957.55±739.16 vs 4457.75±568.39,P〈0.05;42 d：TGF-β1：2689.73±529.22 vs 4089.50±619.37,P〈0.01;PDGF：2834.46±567.16 vs 3239.52±628.26,P〈0.01;56 d：TGF-β1：1968.57±408.36 vs 2968.20±498.42,P〈0.01;PDGF：1083.36±381.35 vs 2019.40±412.36,P〈0.01）,第42、56天显著低于泼尼松组（42 d,TGF-β1：3529.07±981.35,PDGF：2618.34±813.34;56 d,TGF-β1：2530.83±439.37,PDGF：1738.35±536.62,P均〈0.05）,其中第56天时与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 在博来霉素诱导的大鼠肺纤维化形成阶段应用姜黄素于预能有效减轻肺纤维化程度,可能机制为姜黄素抑制了TGF-β1、PDGF蛋白在肺组织的表达.     

姜黄素对大鼠肺间质纤维化影响的机制研究

Objective To observe the possible mechanism and inhibitory effects of curcumin on pulmonary fibrosis induced bleomycin in rats at the fibrosing stage. Methods 80 male Sprague-Dawley rats were random divided into 4 groups (20 rats in each group). Rats in the fibrosis model group, the prednisone group and the curcumin group were induced by instilled bleomycin through tracheal, rats in the control group with same volume normal saline. Since the 15th day after bleomycin administration, the curcumin group and prednisone group were given curcumin (300 mg/kg) or prednisone (5mg/kg) per day by intragastric administration, respectively. The normal control group and the model group were given 1% sodium carboxymethyl cellulose ( 10ml/kg). Six rats of each group were random sacrificed on the 21st, 28th, 42nd and 56th days after bleomycin administration. The histological changes of the pulmonary were evaluated by H. E and Masson dyeing. The expressions of transforming growth factor-β1 (TGF-β1), platelet-derived growth factor (PDGF) and hydroxyproline in the tissue of pulmonary were assessed by immunohistochemistry and digestion method. Results Pulmonary fibrosis and hydroxyproline level in the curcumin group were obviously reduced as compared with the model group on the 42nd and 56th day[42 d:1. 28 ±0. 61 vs 2. 28 ±0. 39,P <0. 01 ;(1.73 ±0. 22)mg/g vs (2.50 ±0. 37) mg/g, P <0.01;56 d:1.00 ±0.59 vs 1.73 ±0.36, P< 0. 05; ( 1.57 ± 0. 36) mg/g vs (2. 20 ± 0. 42) mg/g, P < 0. 01 ], and it was also lower than that in prednisone group on the 42nd day( P < 0. 05 ). The expression of TGF-β1 and PDGF in the curcumin group were obviously lower than that in the model group on the 28th, 42nd and 56th day[28 d:TGF-β1 :3642. 05 ±839. 31 vs 5067. 35 ±738. 39, P <0. 05 ;PDGF:2957. 55 ±739. 16 vs 4457. 75 ±568. 39, P <0. 05;42 d: TGF-β1: 2689. 73 ± 529.22 vs 4089. 50 ± 619. 37, P < 0. 01; PDGF: 2834. 46 ± 567. 16 vs 3239. 52 ±628. 26, P <0. 01 ;56 d:TGF-β1: 1968.57 ±408. 36 vs 2968.20 ±498.42, P <0. 01 ;PDGF: 1083.36 ±381.35 vs 2019. 40 ±412. 36, P <0. 01 ], which was lower than that in prednisone group on the 42nd and 56th day (42 d,TGF-β1 :3529. 07 ±981.35,PDGF:2618. 34 ±813. 34;56 d,TGF-β1 :2530. 83 ±439. 37,PDGF: 1738. 35 ±536. 62, Pall <0. 05 ) , and it had no obvious difference compared with control group on the 56th day ( P > 0. 05 ). Conclusion Curcumin could alleviate bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats at the fibrosing stage by inhibiting the expressions of TGF-β1 and PDGF.     

Five-year follow-up pulmonary function studies in patients with anti-trypsin deficient pulmonary emphysema]

Five-year follow-up study was carried out in pulmonary emphysematous patients with intermediate antitrypsin deficiency. The examinations showed no deterioration in the clinical state of the patients but in some parts of the controlled functional parameters a statistically significant worsening was found in this period of study.     

法尼醇Ｘ受体激动剂奥贝胆酸抑制百草枯诱导的肺纤维化机制研究

目的探讨法尼醇X受体激动剂奥贝胆酸抑制百草枯诱导的肺纤维化机制,为其临床应用提供理论依据。方法细胞实验选择人肺成纤维细胞(HFL1细胞),分为空白组、百草枯组、百草枯+奥贝胆酸组,染毒1 d后采用Elisa方法对转化生长因子β1 (TGF-β1),a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)及Smad3、Smad2蛋白的表达进行检测。动物实验选用健康清洁级SD大鼠60只,随机分为空白组、百草枯组、百草枯+奥贝胆酸组,采用Elisa方法对染毒第1、3、7、14、21天大鼠血浆中TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达进行检测。采用Western Blotting方法对第21天大鼠肺组织中TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达进行检测。HE染色观察第1、3、7、14、21天大鼠肺组织病理变化。结果细胞实验和动物实验中百草枯组均随着中毒时间延长,TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达逐渐升高,各时点均明显高于空白组(P0. 05)。百草枯+奥贝胆酸组TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达各时点均明显低于百草枯组,但仍高于空白组,差异有统计学意义(P0. 05)。结论奥贝胆酸可通过抑制TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达来抑制百草枯诱导的肺纤维化。     

细胞自噬与肺纤维化疾病

肺纤维化是多种肺疾病常见的终末期病理学改变,其发生发展是由多种细胞、细胞因子、蛋白酶共同参与控制。研究表明,细胞自噬在肺部炎症和纤维化过程中发挥着重要作用,可以通过抑制炎性细胞因子和促纤维化因子的分泌、降解成纤维细胞中的胶原蛋白以及抑制上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程,达到减轻肺纤维化的作用。本文就细胞自噬在特发性肺纤维化(IPF)、肺囊性纤维化(PCF)和矽肺所致肺纤维化(silicotic pulmonary fibrosis)中的作用及机制进行简要归纳,为今后工作提供参考。