中国人丙型肝炎病毒2a型基因组C区基因cDNA的克隆及序列分析

测定陕西地区丙型肝炎病毒的Ｃ区基因序列，为进一步研究ＨＣＶ的流行病学和开展ＨＣＶ的诊治打下基础。方法；自行设计合成了两条正向引物和两条反向引物，用反转录ＰＣＲ法从陕西地区１例ＮＡＮＢ型肝炎患者血清中扩增出４３６ｂｐ的片段，将此片段克隆于ＰＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）中用全自动序列分析仪测序。     

HCV广东株5‘NCRcDNA的克隆及序列测定

从广东省１例慢性丙型肝炎病人血清中提取ＨＣＶＲＮＡ，随机引物逆转录为ｃＤＮＡ后用ＨＣＶ５’端非编码区（５’ＮＣＲ）特异引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增产物３０２ｂｐ，经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒，获得的重组质粒ｐＵＮ采用双脱氧链终止法测定核苷酸序列，与国内外多相株比较，核苷酸同源性介乎９２．６９％～１００％，其中与ＨＣＶⅡ（１ｂ）型的同源性最大，本文的测序结果可为引物设计提供依据，获得的Ｈ     

日本血吸虫中国大陆株32ku抗原cDNA的克隆及其核苷酸序列分析

目的　研究日本血吸虫重组疫苗，表达和制备血吸32ku抗原重组疫苗。方法　根据Merekelbach等报道的日本血吸虫中成虫32ku抗原完整编码序列设计引物，以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板，采用逆转录—聚合酶链反应技术，扩增其32ku抗原完整编码区cDNA。将cDNA重组于pGEM-T easy载体上，转化大肠杆菌。结果　重组质粒经测序进行鉴定，结果与Merckelbach等报道的32ku抗原编码区cDNA进行比较，二序列一致。结论　32ku抗原在不同的地区异株间的32ku蛋白进化上存在高度保守性，因此32ku抗原可以作为重组疫苗的候选抗原。     

HCVNS3区C33c抗原基因cDNA的克隆及序列分析

自上海市及江苏省慢性丙型肝炎患者血清中分离丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，采用自行设计的引物，经逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），获得长为６９４ｂｐ的Ｃ３３ｃ抗原基因ｃＤＮＡ，将其克隆于表达载体并作序列分析。结果表明，上海株ＨＣＶ－Ｓ１及江苏株ＨＣＶ－Ｓ２该区域核苷酸水平有很高的同源性（＞９９％），上海及江苏株ＨＣＶ与美国原型ＨＣＶ－１、日本株ＨＣＶ－Ｊ及河北株ＨＣＶ－ＨＢ在该区域核苷酸水平的差异分别为１８．６４％、５．５５％及８．０１％～８．１７％，氨基酸水平的差异在２．３１％～６．０２％之间。上海株同一份血清三个独立克隆间核苷酸水平有０．６％～０．９％的差异。本实验为进一步表达Ｃ３３ｃ蛋白作好了准备。     

甲型肝炎减毒活疫苗（H2减毒株）口服免疫反应的研究

选自５个幼儿园和１个小学１０个班级ＳＧＰＴ值正常，抗甲肝病毒（ＨＡＶ）抗体阴性３－９岁儿童１９３名，进行８个不同批号的甲肝减毒活疫苗（Ｈ２减毒株），疫苗剂量为１０６．５ＴＣＩＤ５０，口服途径和皮下注射途径免疫的比较，８周血清检测结果表明：口服途径免疫组１０１名儿童全部未检测到甲肝抗体。皮下注射免疫组的９２名儿童中８８名（９５．５％）有甲肝抗体反应。１９３名儿童８周ＳＧ－ＰＴ值全部正常。口服途径不感     

一株TT病毒中国分离株结构区全基因的克隆及序列测定

目的 克隆和序列测定ＴＴ病毒（ＴＴＶ）中国分离株全国基因。方法 采用长片段ＰＣＲ技术从一例临床非甲－非庚型肝炎病人血清中扩增ＴＴＶ全基因,获得３个互相重叠的片段,分别为１９９、３２６９和４３４ｂｐ。用标准分离子生物学方法测定这３个片段的序列,从而得到全长ＴＴＶ基因序列。结果 ＴＴＶ中国分离株全基因长３７３９个核苷酸,含两个开放读码框架。第一个ＯＲＦ位于５８９至２９０１位核苷酸,编码７７０个氨基酸;     

饰胶蛋白（Decorin）基因的cDNA克隆与表达

目的 通过基因克隆技术获得饰胶蛋白基因ｃＤＮＡ克隆并表达。为研究饰胶蛋白的生物学功能及应用打基础。方法 应用ＰＣＲ技术从Ｔ细胞ｃＤＮＡ文库获得饰胶蛋白全长基因ｃＤＮＡ片段。并克隆到ｐＵＣ１９载体中,采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测定全部ｃＤＮＡ序列,将测序正确的饰胶蛋白ｃＤＮＡ序列插入ｐＧＥＸ－４Ｔ－１表达载体中,经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后１．２％凝胶电泳鉴定,ＩＰＴＧ诱导表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。结果 克隆的饰胶蛋白ｃＤＮＡ序列与ＧｅｎＢａｎｋ中ＡＦ１３８３００记载的序列完全一致,所表达的融合蛋白质分子量与理论计算值（６５．６ＫＤ）也一致并为可溶性蛋白。结论 本研究成功地克隆了饰胶蛋白基因和表达了ＧＳＴ－Ｄｅｃｏｒｉｎ融合蛋白。     

人Hrs cDNA的克隆与序列分析

以小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ为探针从人胎盘ｃＤＮＡ文库中克隆出人ＨｒｓｃＤＮＡ，其全长为２９１０ｂｐ，所编码的蛋白质含７７７个氨基酸。人ＨｒｓｃＤＮＡ与小鼠ＨｒｓｃＤＮＡ间高度保守。推定的氨基酸序列含有锌指样结构域、脯氨酸丰富区及脯氨酸、谷氨酰胺丰富区。     

一株鸭乙型肝炎病毒DHBV全基因的克隆和序列分析

目的 从本地樱桃谷鸭血清中克隆鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA，并进行序列分析。方法 用PCR扩增HBV全基因．连接至T载体上，挑选克隆进行测序分析，与GenBank中16株：DHBV全基因组进行同源性比较，并进行分子进化树分析。结果 24-18与16株DHBV基因组比较，核苷酸同源性介于89．4%-99．3％之间，各开放阅读框氨基酸同源性比较显示差异显地方位于P区。结论 24-18属于DHBV西方基因型中的一个亚型。     

Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒E2/NS1基因的克隆与序列分析

目的构建插入Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因片段的真核表达载体，分析该基因片段的核苷酸一级结构。方法利用逆转录套式ＰＣＲ扩增Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２／ＮＳ１基因片段，通过定向克隆将其克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上，采用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列。结果构建出含有Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因片段的克隆，该区基因片段的核苷酸一级结构和Ⅲ型日本株ＨＣＶ（ＨＣ－Ｊ６）的同源性为８８．３７％，Ⅱ型中国株ＨＣＶ（ＨＣ－Ｃ２）的同源性为７０．６９％，其推定的氨基酸同源性分别为８９．２９％和７５．５５％。结论基因的核苷酸一级结构在同一基因型中有较高的同源性，而不同基因型之间的同源性则相对较低。对不同基因型之间Ｅ２／ＮＳ１基因一级结构的研究将有助于ＨＣＶ疫苗的研制。     

人卵巢颗粒细胞雌激素β型受体cDNA的克隆和序列分析

目的 测定和分析人卵巢颗粒细胞中雌激素β型受体（ＥＲβ）ｃＤＮＡ的核苷酸序列结构。方法 采用ＤＭＥＭ培养基、以ＰＥＲＣＯＬＬ方法从人体外受精卵泡液中制备颗粒细胞。根据ＴＲｌｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ试剂盒方法抽提ＲＮＡ,并在Ｄｉｓｐｏｃｏｌｕｍｎ柱中用寡聚（ｄＴ）纯化ｍＲＮＡ。用ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐ＾ＴＭⅡＲＴ试剂盒反转录ＰＣＲ合成ｃＤＮＡ。扩增产物与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接,并转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕ     

Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒E2／N21基因的克隆与序列分析

目的 构建插入Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因片段的真核表达载体,分析该基因片段的核苷酸一级结构。方法 利用逆转 录套式ＰＣＲ扩增Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２／ＮＳ１基因片段,通过定向克隆将其克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上,采用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列。结果 构建出含有Ⅲ型中国株丙型肝炎病毒Ｅ２／ＮＳ１基因片段的克隆,该区基因片段的核苷酸一级结构和Ⅲ型日本株ＨＣＶ（ＨＣ－Ｊ６     

甲型肝炎病毒H2株减毒活疫苗与乙型肝炎血源疫苗同时接…

本文报道了对学龄前儿童进行甲肝减毒活疫苗（Ｈ２株）和乙肝血源疫苗同时接种的免疫效果观察。投苗前１周通过血清学检测筛检出３００名地ＨＡＶ，ＨＢＶ易感的健康儿童，分为三组观察，即单独接种甲肝疫苗的Ｉ组，单独接种乙肝疫苗的Ⅱ组和同时接种甲，乙肝疫苗的Ⅲ组。甲肝疫苗接种后１个月，Ⅰ组和Ⅲ组的血清抗体阳转率分别为８７．３９％和９０．１４％；而７个月后分别为９８．３１％和１００％，抗－ＨＡＶ滴度在１：１－１：     

人绒毛膜促性腺激素β亚基cDNA的克隆初步报告

用新鲜的人绒毛膜组织，抽提组织总ＲＮＡ并通过逆转录反应合成ｃＤＮＡ第一链。利用人工合成的一对寡核苷酸引物，采用ＰＣＲ技术特异性地扩增ｈＣＧ－β ｃＤＮＡ。琼脂糖凝胶电泳结果显示扩增片段大小为５００ｂｐ，同预计的片段长度相符。将此片段利用Ｔ－Ａ载体克隆至ＰＣＲⅡ质粒上并进行全序列分析，结果显示克隆片段包含ｈＣＧ－β ｃＤＮＡ５＇端和３＇端非编码区及完整的编码区。     

人源性肝细胞生长刺激因子cDNA克隆和序列分析

目的：阐明人源性肝细胞生长因子(HDSSF)的本质，为进一步基因克隆奠定基础。方法：以简并PCR扩增获取目的基因片断；杂交筛选人胎肝cDNA文库；末段终止法进行HDSSF核苷酸序列分析。结果：简并PCR扩增出接近HDSSF分子量600bp片断；人胎肝cDNA文库经初筛和复筛获得含有目的基因的单克隆噬斑；测定了HDSSF基因序列，其cDNA链为748bp，含有594bp的完整开放读码框架和5′及3′末端非编码区序列。序列分析显示HDSSF应为一含有198个氨基酸残基的新的促肝细胞生长物质。结论：本研究成功获得目的基因HDSSF克降．人HDSSF克隆成功为开展人源性HDSSF的重组产品研制奠定了基础。     

H2株甲肝减毒活疫苗免疫持久性研究

本文对Ｈ２株甲肝减毒活疫苗流行病学效果，初免和再免后免疫应答及其持久作了研究。结果发现疫苗５年保护率达１００％。接种者初免后４周血清抗ＨＡＶ－ＩｇＧ阳转率为９３．６８％。初免后２年抗体ＧＭＴ阳转率有所下降，但到第５年又有明显升高，初免５年内抗体相对稳定。部分接种者２年后再免，抗体均有升高，其上升水平与再免前抗体滴度高低呈正相关。再免后４周抗体水平较初免后４周有明显升高，但３年后又降至原有水平。初免