手机辐射对离体精子质量及DNA甲基化的影响

目的:研究手机辐射对男性离体精液的影响及其相关机制。方法:依照WHO《人类精液检查与处理实验室手册》第5版的标准,随机选择97例精液常规参数正常的男性作为研究对象,并将每例研究对象的精液一式2份为对照组和辐射组。辐射组与对照组相比,除了给予一定剂量(1 950 MHz,SAR 3.0 W/kg,时间3 h)的辐射外,其他条件和处理均相同。从精液常规参数、顶体反应能力、精子凋亡程度以及DNA甲基化水平方面,综合分析手机辐射对精液质量的影响。结果:与对照组相比,辐射组前向运动精子百分率显著降低[(36.64±16.93)%vs(27.56±16.92)%,P<0.01],精子活率显著降低[(63.72±16.35)%vs(54.31±17.35)%,P<0.01],精子头部缺陷率显著升高[(69.92±4.46)%vs(71.17±4.89)%,P<0.05],而顶体反应率无统计学差异[(66.20±6.75)%vs(64.50±3.47)%,P>0.05]。与对照组相比,辐射组精子早期凋亡率显著升高[(4.44±5.89)%vs(6.89±9.84)%,P<0.05]。辐射对精子的父源印记基因H19印记基因的印记控制区域及母源印记基因Kv DMR1的DNA甲基化丢失率[(0.60±0.02)%vs(1.40±0.03)%,(0.00±0.00)%vs(1.80±0.03)%,P均>0.05)]均无显著影响。结论:手机辐射可致前向运动精子百分率、存活率显著降低,精子头部缺陷率和精子早期凋亡率显著升高。     

男性不育患者精子DNA完整性与精浆氧化应激水平的关系及其对体外受精的影响

目的:探讨男性不育患者精子DNA完整性与精液常规参数、精浆氧化应激水平的关系,以及对体外受精(IVF)结局的影响。方法:采用精子染色质扩散法(SCD)检测433个IVF周期中精子DNA损伤性,根据精子DNA碎片指数(DFI)的不同,分为低DFI组(DFI30%)、高DFI组(DFI≥30%),比较2组精子浓度、前向运动精子百分率、快速前向运动精子百分率、精浆丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAC)水平及受精率、卵裂率、优胚率的差异。结果:高DFI组与低DFI组比较,前向运动精子百分率及快速前向运动精子百分率显著降低[(29.2±16.8)%vs(48.6±16.7)%、(9.4±6.6)%vs(19.0±9.1)%,P0.01],高DFI组精子浓度与低DFI组相比差异无显著性[(52.3±32.4)×106/ml vs(51.4±30.9)×106/ml,P0.05];高DFI组精浆中的MDA含量明显高于低DFI组[(2.28±0.26)nmol/L vs(0.95±0.18)nmol/L,P0.01],高DFI组精浆中的TAC含量明显低于低DFI组[(10.2±3.5)U/L vs(33.2±7.9)U/L,P0.01];高DFI组IVF受精率明显低于低DFI组[(58.9±30.0)%vs(77.2±25.0)%,P0.01],两组间卵裂率[(70.7±35.6)%vs(80.4±15.6]、优胚率[(40.4±31.3)%vs(41.7±29.4)]比较差异均无显著性(P均0.05)。结论:精子DNA损伤与氧化应激有关,同时精子DNA损伤可降低IVF受精率,影响IVF结局。     

乙肝病毒携带者不育男性精液质量分析

目的:分析携带乙肝病毒(HBV)的不育男性的精液质量,探讨HBV感染对男性精液质量的影响。方法:选择2018年门诊初诊的782例不育男性,年龄25~35岁,根据HBV感染情况分为小三阳组(血清学检查乙肝表面抗原、e抗体、核心抗体阳性,n=286)和大三阳组(血清学检查乙肝表面抗原、e抗原、核心抗体阳性,n=230),以未感染者作为对照组(n=266),对上述3组进行精液常规、精子顶体酶活性及精子染色质结构分析,比较3组结果是否有差异。结果:①小三阳组精子浓度[(71.49±60.03)×10^6/ml]、前向运动精子百分率[(30.70±14.79)%]、精子活率[(42.67±17.23)%]、精子存活率[(81.07±10.19)%]、正常形态精子百分率[(5.72±3.47)%]均低于大三阳组[(88.20±82.62)×10^6/ml、(34.88±15.60)%、(45.77±16.58)%、(82.55±7.55)%、(6.93±4.45)%]和对照组[(89.29±53.80)×10^6/ml、(37.82±13.63)%、(48.16±14.03)%、(85.26±6.39)%、(7.27±4.43)%],除精子存活率以外差异均有统计学意义(P<0.05);大三阳组精子浓度、前向运动精子百分率、精子活率、精子存活率、正常形态精子百分率均低于对照组,其中前向运动精子百分率、精子存活率的差异有统计学意义(P<0.05);②小三阳组的精子顶体酶活性[(57.07±26.38)μIU/10^6精子]显著低于大三阳组[(63.03±28.75)μIU/10^6精子,P<0.05]和对照组[(78.00±33.49)μIU/10^6精子,P<0.01];大三阳组的精子顶体酶活性显著低于对照组(P<0.01);③小三阳组精子DNA碎片指数[DFI,(14.79±9.46)%]和高可染性[HDS,(9.62±6.20)%]均高于大三阳组[(12.95±7.29)%、(8.43±4.72)%]和对照组[(11.60±5.98)%、(8.41±4.59)%],差异有统计学意义(P<0.05);大三阳组的DFI和HDS均高于对照组,仅DFI的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HBV携带者的男性精液质量显著低于未感染者,HBV感染可能是引起男性生育力降低的原因之一。     

高原环境对世居藏族与移居汉族男性精液特征的影响

目的:探讨世居高原藏族和移居高原汉族生育与不育人群精液参数特征,分析高原环境对男性生育力的影响。方法:从不育门诊收集男性不育人群1 563例,其中世居藏族698例,移居汉族865例;生育人群为西藏阜康妇产儿童医院员工,共56例,其中世居藏族33例,移居汉族23例。行精液常规分析、精子DNA完整性检测、外周血生殖激素测定,分别比较世居藏族及移居汉族不育人群生育力特征和生育人群主要精液参数和生殖激素水平。结果:在两组不育人群中,世居藏族较移居汉族人群无精子症、严重少精子症、精液粘稠度异常发病率显著增高(分别为5.87%vs 2.89%、3.15%vs 1.73%,P0.05;43.12%vs 25.89%,P0.01),而精液参数正常者和少精子症、严重弱精子症、严重畸形精子症患者百分率无明显差异(分别为81.08%vs 87.39%、5.44%vs3.93%、4.44%vs 4.04%、4.58%vs 6.59%,P均0.05)。在已育人群中,世居藏族与移居汉族在年龄[(32.42±4.82)岁vs(34.57±6.01)岁]、精子浓度[(143.69±85.74)×106/ml vs(155.11±82.56)×106/ml]、直线运动速度(VSL)[(25.74±3.94)μm/s vs(27.24±3.46)μm/s]、正常形态精子百分率[(8.22±4.35)%vs(7.28±2.46)%]、精子DNA碎片指数(DFI)[(25.49±7.88)%vs(24.52±11.86)%]、TT[(17.97±2.98)nmol/L vs(15.72±6.38)nmol/L]、FSH[(5.51±1.62)IU/L vs(4.17±2.08)IU/L]等方面均无统计学差异(P均0.05);移居汉族男性精子活动率明显高于世居藏族男性[(79.75±14.67)%vs(66.58±17.21)%,P0.05],而曲线运动速度(VCL)[(60.97±2.71)μm/s vs(71.14±82.13)μm/s,P0.05)]、LH[(4.28±1.20)IU/L vs(5.84±1.15)IU/L,P0.05]均较世居藏族低。结论:移居高原汉族人群在习服高原低氧环境过程中,其精子浓度、精子活力等发生适应性改变,且无精子症、严重少精子症等发病率低于世居藏族。     

精子CMA3阳性率与IVF受精率的相关性研究

目的探讨精子色素酶A3(CMA3)阳性率与IVF受精率之间的相关性。方法收集2015年4月至2016年7月因单纯输卵管性不孕在我院生殖医学科行常规IVF助孕的156个周期,以受精率<25%为低受精,根据受精率不同分为正常受精组(134个周期)和低受精组(22个周期)。取卵日,将授精后剩余的洗涤精液行精子浓度和活动率分析,并将精子进行CMA3染色。比较两组优选后的精子参数,分析IVF受精率与精子参数及CMA3阳性率的关系。结果与正常受精组比较,低受精组精子CMA3阳性率显著升高[(20.0±4.2)%vs.(30.7±2.3)%],优选后前向运动精子的百分率显著降低[(90.4±4.8)%vs.(74.3±3.4)%](P<0.05);两组精子浓度比较无显著性差异(P>0.05)。IVF受精率与优选后的前向运动精子百分率呈正相关(r=0.76,P<0.01)。精子CMA3阳性率与优选后前向运动精子百分率(r=-0.82,P<0.01)及IVF受精率(r=-0.83,P<0.01)呈显著负相关,与精子浓度则无显著相关性(P>0.05)。结论精子CMA3阳性率与IVF受精率负相关,但其具体机制尚需进一步研究探讨。     

精索静脉曲张不育患者氧化应激水平和精子DNA完整性及精液参数的相关性分析

目的:分析精索静脉曲张(VC)不育患者氧化应激同DNA完整性及精液参数的关系。方法:采用前瞻性研究,纳入98例患者,根据活性氧水平(ROS)将VC不育患者分为ROS低水平组(54例)及高水平组(44例),分析两组精子DNA碎片指数(DFI)、精子活力、形态等参数的差异,并分析它们之间的相关性。结果:ROS高水平组DFI显著高于ROS低水平组[(34.49±6.05)%vs(27.38±8.10)%,P=0.039]。与ROS低水平组比较,ROS高水平组精子活力[(25.21±18.22)%vs(36.16±22.83)%,P=0.017]、前向运动精子百分率[(16.34±9.22)%vs(23.34±11.53)%,P=0.041]、曲线速率[(20.62±4.38)%vs(27.03±6.21)%,P=0.013]及直线性率[(18.30±7.93)%vs(29.75±8.24)%,P=0.024]均显著降低,而精液白细胞数显著升高[(0.86±0.41)×106/ml vs(0.65±0.15)×106/ml,P=0.022]。Spearman相关性分析表明ROS水平同精液白细胞数(r=0.41,P0.01)及DFI(r=0.21,P=0.006)呈显著正相关,同曲线速率(r=-0.24,P=0.017)、直线性率(r=-0.24,P=0.021)、精子活力(r=-0.31,P=0.002)及前向运动精子百分率(r=-0.41,P=0.012)呈显著负相关。DFI同精子活力(r=-0.29,P0.01)、前向运动精子百分率(r=-0.34,P0.01)呈显著负相关。结论:精浆ROS水平同VC不育患者DFI显著正相关。氧化应激及DNA完整性可影响患者的精子参数。     

IVOS Ⅱ与SCA精子质量分析仪对精液检测结果的比较研究

目的:比较Hamilton-Thorn IVOSⅡ全自动精子质量分析仪(IVOSⅡ)及西班牙SCA全自动精子质量分析仪(SCA)的计算机辅助精液分析(CASA)系统对精液参数检验结果的差异性。方法:收集2018年9～10月99例就诊患者的精液标本,根据精子浓度分为3组:A组(15×10~6/ml)、B组[(15～50)×10~6/ml]和C组(50×10~6/ml)。采用IVOSⅡ、SCA及显微镜人工方法对同一精液标本同时检测,比较IVOSⅡ和SCA对精子浓度、前向运动精子百分率及活率检测的一致性以及重复性。结果:IVOSⅡ与SCA对A组精子浓度的检测结果显著高于显微镜人工方法[(10.24±4.60)×10~6/ml、(10.20±5.11)×10~6/ml vs(8.45±4.15)×10~6/ml,P0.05],但是IVOSⅡ与SCA对B组[(30.95±11.84)×10~6/ml、(31.81±12.90)×10~6/ml vs(29.14±10.65)×10~6/ml]以及C组[(102.14±45.97)×10~6/ml、(109.48±46.32)×10~6/ml vs(104.74±41.87)×10~6/ml]精子浓度的检测结果与显微镜人工方法相比无统计学差异(P0.05)。IVOSⅡ与SCA分别对B组的前向运动精子百分率[(24.21±14.62)%vs(23.92±15.42)%]与活率[(37.48±19.34)%vs(37.69±16.61)%]以及C组的前向运动精子百分率[(30.80±12.06)%vs(32.98±16.10)%)]与活率[(44.50±15.62)%vs(47.26±17.46)%)]的检测结果差异无统计学意义(P0.05),然而IVOSⅡ对A组的前向运动精子百分率[(18.54±12.96)%vs(22.90±12.88)%]与活率[(26.97±14.05)%vs(34.90±15.18)%]的检测结果显著低于SCA(P0.05)。SCA及IVOSⅡ对精子浓度、前向运动精子百分率、活率检测结果均具有良好的重复性(CV值均15%)。结论:IVOSⅡ与SCA精子质量分析仪对精子浓度、前向运动精子百分率和活率的检测结果均有较好的一致性,但对于低浓度精液的精子浓度、前向运动精子百分率和活率的检测结果可比性较差。     

冷冻保存对人类精子线粒体DNA的影响

目的探讨常规精液冷冻技术对人类精子线粒体DNA的影响。方法收集符合精子库捐精条件的正式志愿者精液样品,将每份样品分为2份:1份进行精液冷冻复苏处理,为实验组;1份新鲜精液,为对照组。采用Markler计数板联合CASA法评估冷冻复苏前后精子活力;两组精液均采用实时荧光定量PCR和长链PCR技术,分别检测精子线粒体DNA的拷贝数和完整性。结果共收集22份精液标本,纳入志愿者年龄为(27.8±3.0)岁,禁欲天数(6.1±0.9)d;精液体积(5.0±1.5)ml,精子浓度(75.8±15.8)×106/ml,前向运动精子百分比为(68±6)%,总活动精子复苏率为(72±8)%。冷冻保存后,精子活力显著降低:前向运动精子百分比减少[(49.0±6.5)%vs.(68.0±6.1)%,P0.05),平均路径速率(VAP)[(35.8±6.8)vs.(46.8±9.5),P0.05]、直线速率(VSL)[(27.3±3.3)vs.(35.1±8.3),P0.05]和曲线速率(VCL)[(57.6±6.9)vs.(91.8±10.2),P0.05]较前下降。与新鲜精液相比,冷冻复苏后精子的线粒体DNA拷贝数显著增加[(10.12±8.41)vs.(5.66±5.53),P0.05],完整性比较无统计学差异[(29.69±15.04)vs.(32.78±16.0),P=0.077]。结论在正式捐精志愿者人群内,常规精液冷冻技术降低精子活力,增加人类精子mtDNA的拷贝数,但未显著改变mtDNA的完整性。     

精子DNA冷冻损伤易感性与精子活动力相关性

目的研究不同活动力精子其核DNA对冷冻损伤的易感性。方法选取来本中心行精液常规分析,精子浓度5×106/ml、精子正常形态率4%者63例为研究对象。精子冷冻前后均采用染色质扩散(SCD)实验分析核DNA完整性,分别比较高活力组(d级30%,n=28)及低活力组(d级≥30%,n=35)精子在冷冻前后DNA完整性的差异。结果精液标本(n=63)经冷冻后,精子DNA碎片指数(SDF)较冷冻前显著升高[(23.1±12.5)%vs.(19.9±11.6)%,P0.05],其中代表精子DNA完整性较好的大晕轮精子比例显著降低[(71.9±13.3)%vs.(75.8±12.2)%,P0.05],而小晕轮精子比例则显著升高[(10.2±5.7)%vs.(8.2±3.9)%,P0.05]。在低活力组,精子SDF及大晕轮、小晕轮精子比例在冷冻前后亦差异显著(P0.05);而在高活力组,冷冻后仅小晕轮精子比例较冷冻前显著升高[(8.3±3.4)%vs.(6.8±3.0)%,P0.05],SDF及大晕轮、中晕轮、无晕轮的精子比例在冷冻前后均无显著差异(P0.05)。结论相比高活力组精子,低活力组精子核DNA冷冻耐受力较差,更易受损。     

自制金属冷冻板法冷冻人附睾精子的实验研究

目的:研究一种新型人精子冷冻方法对精子复苏率的影响,以探索人附睾精子、睾丸穿刺精子的最佳冷冻方法。方法:选取76例梗阻性无精子症患者的附睾穿刺(PESA)标本,按照自制金属冷冻板法和传统冷冻法分两组冷冻。采用计算机辅助精液分析系统检测冷冻前、后前向运动精子百分率,并对比两种方法对精子膜功能、DNA碎片指数(DFI)、顶体酶活性和精子畸形百分率的影响。结果:复苏后自制金属冷冻板法和传统冷冻法前向运动精子百分率[(12.0±7.5)%vs(8.0±5.1)%,P0.05]和低渗肿胀精子百分率[(22.0±17.5)%vs(18.0±20.5)%]比较有显著性差异(P0.05),均较冷冻前[(20.7±8.8)%和(30.0±13.5)%]显著下降(P0.05)。自制金属冷冻板法复苏后精子顶体酶活性显著高于传统冷冻法[(75.2±9.5)μIU/10~6精子vs(55.7±8.3)μIU/10~6精子,P0.05],均较冷冻前(120.0±10.5)μIU/10~6精子显著下降(P0.05)。两种方法复苏后畸形精子百分率和DFI无显著差异[(98.7±8.8)%vs(98.5±9.2)%,P0.05]和[(38.2±8.5)%vs(39.5±10.2)%,P0.05],并均较冷冻前[(97.2±9.5)%和(30.8±9.7)%]显著升高(P0.05)。自制金属冷冻板法和传统冷冻法冷冻复苏率[(65.2±12.0)%vs(52.3±18.0)%]有显著性差异(P0.05)。结论:自制金属冷冻板法是一种经济高效、操作简单的精子冷冻方法且能最大限度的节约精子;复苏后可以保证较好的精子复苏率、活动力和顶体酶活性。