缓释骨形态发生蛋白-2的壳聚糖温敏凝胶促进牙周组织再生的实验研究

目的观察自制的加载重组人骨形态发生蛋白- 2（rhBMP- 2）的壳聚糖温敏凝胶修复牙周组织缺损的效果。方法选取3只健康雄性杂种犬制备前磨牙区人工Ⅱ度根分叉区组织缺损模型,随机分为空白对照组、空白凝胶组及载药凝胶组,术中先严密缝合组织瓣,然后对空白凝胶组及载药凝胶组区域分别注射先期配制并消毒好的空白凝胶和载药凝胶,术后8周取材行大体及组织学观察。结果载药凝胶组出现明显的牙周组织再生,而空白对照组和空白凝胶组仅有少量的牙周组织再生。载药凝胶组与空白对照组及空白凝胶组均有统计学差异（P<0.05）,空白对照组和空白凝胶组相比,没有统计学差异。结论载rhBMP- 2的壳聚糖温敏凝胶可有效促进牙周组织再生,同时简化手术操作,是一项有潜力的牙周组织再生手段。     

黄芩苷和重组人骨形成蛋白2双缓释制剂促进小型猪牙周组织再生的初步研究

目的:研究黄芩苷和重组人骨形成蛋白2双缓释制剂联合应用对小型猪牙周组织的再生作用。方法:建立小型猪牙周炎动物模型,随机分为4组。双缓组——壳聚糖温敏凝胶+重组人骨形成蛋白液(rhBMP-2)+黄芩苷-明胶微球(GMS),单黄组——壳聚糖温敏凝胶+黄芩苷-GMS,BMP组——壳聚糖温敏凝胶+rhBMP-2液,阴性对照组——空白凝胶。在建模前、后6周,治疗后4周和8周检查牙周病的相关临床指标,龈沟液IL-1β、TNF-α的变化。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析,并于治疗后8周进行组织学观察。结果:(1)各组在治疗4周、8周后,临床检查指标及龈沟液IL-1β、TNF-α检查水平与建模6周相比均有显著差异(P<0.05);双缓组治疗效果优于其他各组(P<0.05),且各项指标呈持续改善状态。X线片显示,治疗8周后,与对照组相比,其他3组骨密度及牙槽骨高度都有所增加,其中,双缓组骨密度及高度增加最为显著。(2)组织学改变:治疗8周后,阴性对照组牙周组织炎症反应明显,无明显修复反应;其他3组可见不同量的新生骨质。其中,双缓组牙周组织炎症程度较对照组明显减轻,修复反应最为明显。结论:黄芩苷和rhBMP-2联合应用能更好地促进牙周组织再生,为黄芩苷和rhBMP-2双缓释体系的临床应用奠定了基础。     

碱性成纤维细胞生长因子/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶促大鼠牙周组织再生的研究

目的 探讨不同种壳聚糖衍生物温敏型复合水凝胶作为支架材料应用于牙周组织工程的可行性。方法制备磺化壳聚糖（SCS）、磷酸化壳聚糖（PCS）及磷酸化磺化壳聚糖（PSCS） 3种具有不同生物学特性的壳聚糖衍生物,构建3种碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶。选取20只雄性wistar大鼠,大鼠双侧上颌第一磨牙近中建立三壁骨袋,随机分为空白对照组、空白凝胶组、bFGF/SCS/胶原温敏型复合水凝胶组、bFGF/PCS/胶原温敏型复合水凝胶组、bFGF/PSCS/胶原温敏型复合水凝胶组,术后6周处死大鼠,采集标本,进行大体、苏木精-伊红染色、Masson染色观察。结果 术后6周,3种bFGF/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶组与空白对照组在相对牙槽骨高度比值、相对上皮根向下移比及牙周组织再生分级计数等方面的差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 bFGF/壳聚糖衍生物/胶原温敏型复合水凝胶在牙周组织工程邻域具有良好的应用前景。     

盐酸米诺环素微球凝胶的制备及对大鼠实验性牙龈炎的抑制作用

目的:制备含盐酸米诺环素微球的功能性壳聚糖温敏凝胶,并观察载药凝胶对大鼠牙龈炎模型的抑菌效果。方法:将小分子药物盐酸米诺环素先制备成微球,共混于温敏凝胶中,观察其理化性质及释药性能;建立大鼠的实验性牙龈炎模型,观察载药凝胶对实验性牙龈炎模型的消炎效果。结果:实验制得的缓释凝胶,T50%可延长至4.24d;动物实验初步结果显示,与对照组相比实验组的牙龈指数和探诊深度有明显的减少,炎症细胞浸润数量少,毛细血管扩张程度轻。结论:加载盐酸米诺环素的缓释凝胶对大鼠实验性牙龈炎有一定的消炎作用。     

黄芩苷和牛血清白蛋白双缓释制剂的制备及释药性能检测

目的:将黄芩苷和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)载入壳聚糖温敏凝胶,构建双缓释体系,检测凝胶对药物的体外释放情况。方法:采用乳化缩聚法制备黄芩苷-明胶微球(gelatin microspheres,GMS);用不同配比的壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠(β-glycerophosphate,β-GP)溶液制备壳聚糖温敏凝胶,观察在37℃的成胶情况,选择最佳配比;在此基础上,将不同浓度的黄芩苷-GMS与BSA共混于壳聚糖凝胶溶液,测定载药后的成胶情况及黄芩苷和BSA的体外释放情况。结果:成功制备了黄芩苷-GMS,载药率5.62%,包封率72.05%;1.8%壳聚糖溶液与9%的β-GP混合10min后可获得状态良好的凝胶;加载两种药物后的凝胶溶液相转变时间未发生改变;30d时低浓度组累积释放了63.79%,两个较高浓度组分别释放了74.86%、77.63%。结论:壳聚糖温敏凝胶可以同时负载黄芩苷-GMS和BSA两种药物,在室温下呈溶液状态,37℃下经过10min可转变成半固体凝胶,在体外释药可达30d。黄芩苷和牛血清白蛋白双缓释制剂的制备和释药性能检测为牙周组织修复再生药物的研制提供了基础。     

煅烧骨复合PRF对牙周骨缺损的实验研究

目的:研究比较异种煅烧骨和Bio-oss骨分别与富血小板纤维蛋白(platdet-rich fibrin,PRF)联合,及其各自单独使用对牙周骨缺损修复的效果。方法:制备煅烧骨,PRF凝胶及其复合物。选54只新西兰大白兔,制备牙周组织缺损模型,随机分成空白对照组、PRF凝胶组、煅烧骨组、Bio-oss骨组、煅烧骨/PRF凝胶组、Bio-oss骨/PRF凝胶组,将这些材料植入牙周缺损区,每组9只兔子。术后4周、8周和l2周处死动物,获取完整标本,观察影像学和组织学。行组织学染色检测,测量新生牙周组织的高度。结果:X线结果表明:4周、8周和l2周煅烧骨/PRF 组和Bio-oss/PRF 组平均密度均明显高于对照组且缺损处骨组织连续。组织学观察:实验组均在牙根面可见新生牙骨质样组织、牙周膜和牙槽骨样组织的形成,随着时间的推移逐渐成熟、增多。12周时,煅烧骨/PRF凝胶、Bio-oss骨/PRF凝胶较空白对照组明显提高,较其他3组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:煅烧骨/PRF凝胶、Bio-oss骨/PRF凝胶复合物可明显促进牙周组织的再生。     

胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜引导牙周组织再生的动物实验研究

目的：将胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜联合应用于修复牙周缺损的动物实验,探讨其用于引导牙周组织再生的可行性。方法：人工构建4只成年Beagle犬下颌后牙区牙周缺损模型,分别随机采用：胶原-羟基磷灰石人工骨/胶原膜、胶原-羟基磷灰石人工骨、空白对照治疗,每组8颗牙,12周后处死动物,进行组织学观察并测量新生组织高度。结果：与单纯植入胶原-羟基磷灰石人工骨组相比,胶原-羟基磷灰石人工骨/胶原膜组获得了更多的新附着,表现为有较多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质样组织生长,2组之间新生组织差异有显著性（P〈0.05）。结论：胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜联合运用修复牙周牙槽骨缺损引导牙周组织再生的效果优于单纯植入人工骨。     

胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜引导牙周组织再生的动物实验研究

人工构建4只成年Beagle犬下颌后牙区牙周缺损模型,分别随机采用:胶原-羟基磷灰石人工骨/胶原膜、胶原-羟基磷灰石人工骨、空白对照治疗,每组8颗牙,12周后处死动物,进行组织学观察并测量新生组织高度。结果:与单纯植入胶原-羟基磷灰石人工骨组相比,胶原-羟基磷灰石人工骨/胶原膜组获得了更多的新附着,表现为有较多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质样组织生长,2组之间新生组织差异有显著性(P<0.05)。结论:胶原-羟基磷灰石人工骨与胶原膜联合运用修复牙周牙槽骨缺损引导牙周组织     

两种消毒方式对壳聚糖水凝胶温敏性能及模型蛋白体外缓释性能的影响

目的探索两种消毒方式对壳聚糖水凝胶温敏性能及缓释性能的影响,为壳聚糖水凝胶临床应用前消毒方式的选择提供依据。 方法在制备壳聚糖温敏水凝胶前,采用两种方式进行消毒处理。（1）传统组：高压蒸汽消毒壳聚糖-醋酸溶液;（2）改良组：高压蒸汽消毒壳聚糖粉末。检测两组凝胶的成胶时间、旋转粘度;扫描电镜观察表面及截面形貌;傅立叶红外光谱检测特征性吸收峰;采用牛血清白蛋白（BSA）作为模型蛋白,观测体外缓释性能;SDS-PAGE检测缓释后的蛋白完整性。结果采用两独立样本的t检验进行统计。 结果37℃时,传统组成胶时间明显长于改良组（t= 61.677,P= 0.000）;改良组的旋转粘度在37℃时达15 000 mPa.s,传统组37℃时粘度为1560 mPa.s,40℃时上升至11 500 mPa.s;两组凝胶表面致密完整,截面均呈三维立体网状多孔结构,传统组孔隙大于改良组;两实验组与未消毒壳聚糖的吸收光谱基本一致;两组均有良好的缓释性能,改良组缓释性能更佳（t= 61.415,P= 0.000）,且释放出的模型蛋白分子结构完整。 结论采用改良消毒方式的壳聚糖水凝胶成胶时间更短,温敏性能更佳,缓释性能良好,且与传统组一样能保持缓释蛋白结构完整性。     

氯化镧对大鼠实验性牙周炎的治疗作用

目的:评估镧盐对大鼠实验性牙周炎临床症状以及骨吸收的影响。方法:选健康SD大鼠68只,用外科缝线结扎左侧上颌第二磨牙(M2)颈部并予10%高糖水每日喂养,诱导形成大鼠牙周炎模型。结扎4周后随机选4只大鼠处死,取左侧上颌M2牙周组织块制作切片,观察牙周炎模型建立情况。将造模成功的大鼠随机分成4组,每组16只:生理盐水冲洗对照组(P组);氯己定冲洗组(P1组);镧盐冲洗组(P2组);镧盐喂养组(P3组)。每4周测量各组大鼠临床指标,与治疗前自身对照。治疗3个月后,处死各组大鼠并取左上颌M2牙周组织块制作标本,用体视镜观察并测量牙槽骨吸收情况。结果:治疗后P1、P2、P3组各临床指标较治疗前均有所下降(P<0.05),P组PD、TM虽有下降趋势,但差异无显著性。各组间比较P3组牙槽骨吸收值与面积值较P组显著减少(P<0.05)。结论:0.12%复方氯己定、0.1 mmol/L镧盐水冲洗及0.01 mmol/L镧盐喂养对大鼠牙周炎临床症状的改善效果明显,镧盐喂养对缓解牙槽骨吸收有一定作用。     

骨形成蛋白-2基因促进犬牙周组织再生的体内研究

目的：观察重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2）质粒对犬牙周骨缺损再生作用的影响.方法：选用6只成年beagle犬,将其下颌两侧的第2、3、4前磨牙（P2、P3、P4）作为实验牙.在每颗实验牙的近中根颊侧制作＂U＂型骨缺损,并随机设计为3组,即pIRES-rhBMP-2组、rhBMP-2组（阳性对照组）和PBS组（空白对照组）.术后第4与第8周分别处死动物.光镜下观察组织学变化,采用Image-Pro-Express系统测量新生牙槽骨和牙骨质的高度、新生结缔组织的附着量.测量结果以SAS 6.12软件包进行Newman-Keulsq检验.结果：实验第8周时,组织学观察可见2个实验组新生牙槽骨接近于正常骨结构,新生牙周纤维稠密,富含血管;空白对照组胶原纤维稀疏,排列不规则.新生组织测量结果显示：2个实验组新生牙槽骨和牙骨质的高度、新生结缔组织的附着量较空白对照组显著增加（P＜0.05,P＜0.01）;但2个实验组间相比无显著性差异（P＞0.05）.结论：pIRES-rhBMP-2有较强的骨诱导活性,能有效促进犬牙周骨缺损的组织再生.     

应用生长因子-支架构建方式的组织工程方法再生牙周组织的实验研究

目的：观察评价生长因子-支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义，探讨纳米羟基磷灰石材料(nHAC)和重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)用于牙周组织工程的可行性。方法：将rhBMP-2与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损，表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜，以卒白对照组和单纯GTR组作为对照。术后8周进行组织学观察和测量，分析评价其牙周组织的再生情况。结果：rhBMP-2-nHAC-膜复合植入组较空白对照组和单纯GTR组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成，且未见上皮长入。结论：应用生长因子-支架构建方式的牙周组织工程方法能更有效地促进牙周组织再生和重建，而rhBMP-2和nHAC有望用作牙周组织工程的生长因子和支架材料。     

Favorable healing following space creation in rhBMP-2-induced periodontal regeneration of horizontal circumferential defects in dogs with experimental periodontitis

BACKGROUND: Recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) is believed to be capable of inducing periodontal regeneration. However, the risk of aberrant healing events, such as root resorption and ankylosis, has been reported. We hypothesized that implantation of BMP-containing carriers directly on the root planed surface may be the cause of unfavorable healing. The purpose of this study was to evaluate the influence of a 1 mm spacer membrane, which separated the rhBMP-2 in polymer-coated gelatin sponge (PGS) and the root surface, on periodontal regeneration of experimentally induced horizontal defects in dogs. METHODS: Horizontal circumferential periodontal defects were surgically created, and experimental periodontitis was induced in 72 maxillary and mandibular premolars of four male beagle dogs. The recipient sites of each quadrant received: 1) rhBMP-2/PGS (B group) (rhBMP-2 at 1.0 mg/ml, total implant volume/ site approximately 7.2 microl) (n = 24); 2) rhBMP-2/PGS with a spacer membrane (PB group) (n = 24); and 3) physiological saline (PS)/PGS as a control (P group) (n = 24). One quadrant was left untreated. Dogs were sacrificed at 12 weeks post-surgery, and healing was evaluated histologically. RESULTS: Both groups treated with rhBMP-2/PGS demonstrated enhanced new bone formation and connective tissue attachment with cementum regeneration when compared to the control group. Sites treated with rhBMP-2/PGS showed a greater degree of bone formation than sites treated with rhBMP-2/PGS and spacer membrane, although the latter sites showed no ankylosis. CONCLUSIONS: Implantation of rhBMP-2/PGS enhances bone formation and connective tissue attachment in horizontal circumferential defects. In addition, the use of a spacer membrane reduces the degree of bone formation, but minimizes ankylosis.     

Periodontal repair in dogs: rhBMP-2 significantly enhances bone formation under provisions for guided tissue regeneration

BACKGROUND: Recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) has been shown to support the regeneration of alveolar bone and periodontal attachment in surgically created periodontal defects and in defects with a history of dental plaque and calculus exposure. Periodontal regeneration has also been shown following guided tissue regeneration using space-providing expanded polytetrafluoroethylene (ePTFE) devices. The objective of this study was to evaluate the influence of rhBMP-2 on regeneration of alveolar bone and periodontal attachment used in conjunction with a space-providing ePTFE device. METHODS: Routine, critical-size, 5-6 mm, supra-alveolar, periodontal defects were created around the third and fourth mandibular premolar teeth in four young adult Hound Labrador mongrel dogs. rhBMP-2 (0.2 mg/ml) in an absorbable collagen sponge (rhBMP-2/ACS) or buffer/ACS (control) implants were randomly assigned to be placed around the premolar teeth in the left and right jaw quadrants in subsequent animals. Space-providing ePTFE devices with 300-microm laser-drilled pores, 0.8 mm apart, were used to cover the rhBMP-2 and control implants. The gingival flaps were advanced for primary wound closure. The animals were euthanized at 8 weeks postsurgery for histologic and histometric analyses. RESULTS: Bone regeneration and ankylosis were significantly increased in jaw quadrants receiving rhBMP-2/ACS compared to control (bone height 4.8+/-0.3 versus 2.0+/-0.2 mm, p=0.001; bone area 10.9+/-1.3 versus 1.4+/-0.1 mm2; p=0.009, and ankylosis 2.2+/-0.2 versus 0.04+/-0.7 mm; p=0.01). No differences between groups were found for cementum regeneration and root resorption. CONCLUSIONS: rhBMP-2 significantly enhances regeneration of alveolar bone in conjunction with a space-providing, macroporous ePTFE device for GTR.     

自体移植冻存骨髓基质细胞修复犬牙周缺损的实验

目的 观察冻存对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)体内形成牙周支持组织能力的影响.方法 在5只Beagle犬的26个实验牙位制备牙周缺损.区组随机法分成3组,空白组(8颗)植入载体胶原膜,未冻存组(9颗)和冻存组(9颗)接种未冻存或冻存细胞与胶原膜复合物,8周后观察牙周组织再生情况.结果 冻存组和未冻存组牙槽骨再生百分比分别为(83.7±10.6)%、(85.0±6.8)%,两组新生牙骨质和牙周膜百分比均为100%,差异无统计学意义(P>0.05);空白组牙槽骨再生百分比为(24.7±9.2)%,牙骨质再生百分比为(21.0±4.8)%,牙周膜再生百分比为(24.8±5.4)%,均较冻存组和未冻存组显著减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 冻存对BMSC体内分化形成牙周组织的能力无显著影响.     

壳聚糖膜对人牙周膜细胞体外增殖的影响

目的　研究壳聚糖膜在体外培养条件下对人牙周膜细胞增殖的影响。方法　制备用于引导性组织再生的壳聚糖膜。体外培养人牙周膜细胞 ,用酶动力学观察在壳聚糖膜、聚四氟乙烯膜、壳聚糖膜浸出液及空白对照 4种条件下 ,人牙周膜细胞增殖的情况。结果　壳聚糖膜组的人牙周膜细胞增殖高于其他组 (P <0 .0 1) ,壳聚糖膜浸出液组人牙周膜细胞增殖高于聚四氟乙烯膜组和空白对照组 (P <0 .0 5 ) ,聚四氟乙烯组与空白对照组差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　体外培养时 ,壳聚糖膜可以促进人牙周膜细胞增殖。     

Periodontal repair in dogs: effect of rhBMP-2 concentration on regeneration of alveolar bone and periodontal attachment

The objective of this study was to evaluate the effect of recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) concentration on regeneration of alveolar bone and cementum, and on associated root resorption and ankylosis. Contralateral, critical size, supra-alveolar, periodontal defects were surgically produced and immediately implanted with rhBMP-2 in an absorbable collagen sponge (ACS) carrier in 8, young adult, male, beagle dogs. 6 animals received rhBMP-2/ACS (rhBMP-2 at 0.05, 0.10, or 0.20 mg/mL; total construct volume/defect approximately 4.0 mL) in contralateral defects following an incomplete block design. 2 animals received rhBMP-2/ACS (rhBMP-2 at 0 and 0.10 mg/mL) in contralateral defects (controls). The animals were euthanised at 8 weeks post-surgery and block sections of the defects were collected for histologic and histometric analysis. Supra-alveolar periodontal defects receiving rhBMP-2 at 0.05, 0.10, or 0.20 mg/ml exhibited extensive alveolar regeneration comprising 86%, 96%, and 88% of the defect height, respectively. Cementum regeneration encompassed 8%, 6%, and 8% of the defect height, respectively. Root resorption was observed for all rhBMP-2 concentrations. Ankylosis was observed in almost all teeth receiving rhBMP-2. Control defects without rhBMP-2 exhibited limited, if any, evidence of alveolar bone and cementum regeneration, root resorption, or ankylosis. Within the selected rhBMP-2 concentration and observation interval, there appear to be no meaningful differences in regeneration of alveolar bone and cementum. There also appear to be no significant differences in the incidence and extent of root resorption and ankylosis, though there may be a positive correlation with rhBMP-2 concentration.     

羊富血小板胶细胞基质在2种牙周缺损模型中的修复效果

目的 探讨羊富血小板胶-牙周膜成纤维细胞基质(PRgel-PDLFs)促进不同原因造成的牙周缺损再生的效果.方法 用新鲜全血制取富血小板血浆(PRP),并加入催化剂与成纤维细胞一起培养合成PRgel-PDLFs基质;然后将24只山羊随机分为急性牙周缺损组和慢性牙周炎缺损组,模型建成后所有动物一侧植入PRgel-PDLFs基质于牙周缺损区,另一侧为手术空白组,术后10周,进行CT影像学检查和组织学测量分析.结果 10周后CT影像学和组织学检查显示:两组均在牙根面见新生牙骨质样组织、牙周膜样组织和牙槽骨样组织,且PRgel-PDLFs组再生的牙周组织明显多于空白组(P＜0.01);急性缺损组和慢性牙周炎缺损组的组织再生量相近,差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 PRgel-PDLFs基质能够促牙周组织再生,且对急性牙周缺损和慢性牙周炎造成的牙周缺损修复效果相近.