激光扫描共聚焦显微镜观察血小板内钙离子浓度的变化

观察血小板内钙离子浓度的变化及细胞外钙离子对其影响，为探讨血小板内Ｃａ＋＋与疾病的关系及阐明药物作用机制提供理论依据。方法用不同浓度的二磷酸腺苷（ＡＤＰ）、５－羟色胺（５－ＨＴ）、花生四烯酸、瑞斯托霉素、胶原、凝血酶诱导血小板，通过激光扫描共聚焦显微镜观察标记了Ｆｌｕｏ－３的单个血小板内钙离子变化，以及细胞外钙离子对其影响。结果（１）除凝血酶外，其余诱导剂均可引起血小板钙离子浓度变化，且随着诱导剂浓度增加，钙波动频率增加，持续时间延长；（２）ＡＤＰ引起的血小板钙波动，在细胞外无钙离子时，只是幅度减少，而无频率变化；（３）５－ＨＴ引起的钙波动，在细胞外无钙时，波动消失。结论（１）ＡＤＰ、５－ＨＴ、花生四烯酸、瑞斯托霉素、胶原可引起血小板产生钙浓度变化。（２）不同诱导剂诱发的钙波动，其钙离子来源不同。     

共聚焦激光扫描显微宫腔镜的设计

本文介绍一种共聚焦激光扫描显微宫腔镜,具体介绍了该宫腔镜的主体内镜和鞘管的设计.本装置能够对患者宫腔内的病变组织进行共聚焦激光扫描显微放大,使医生能够清晰地观察到病变组织的微观结构,并进行实时活体检查.本装置的使用可以克服传统随机活检带来的弊端,有助于提高临床的治疗效果并降低医疗成本.     

共聚焦激光扫描显微镜术简介

共聚焦激光扫描显微镜 (ｃｏｎｆｏｃａｌｌａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ,ＣＬＳＭ )是继电镜之后的形态学先进研究工具 ,虽然有关介绍已不少 ,但是简明地了解其优点和特点 ,应做哪些技术准备 ,仍有必要写给初学者。1　主要组件及其优点主要包括激光发射器、扫描装置、光检测器、中心处理器 ,以及光学显微镜 5个部分。1.1　激光发射器 :ＣＬＳＭ的光源是激光 ,一般激光发射器可用氩、氪、氦、氖。激光优于自然光或灯光 :①普通显微镜使用自然光或灯光 ,均是由多种波长组合的混杂光 ,产生了显微摄影的色差问题 ,激光是波长…     

共聚焦激光扫描显微技术在寄生虫学研究中的应用

共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)是新颖的分子细胞生物学分析仪器,较传统荧光显微镜有着不可比拟的优势。它的高分辨率、无损伤连续光学切片、三维图像重建等功能已广泛应用于医学、细胞生物学的研究,在寄生虫学领域中的应用也正在逐步开展。若结合其他的生物学技术,其应用范围将进一步扩大。因此。了解它的基本性能、特点将有助于更深入的应用。     

激光扫描共聚焦显微镜观察冻存对SHR卵母细胞的影响

目的 冻存未受精的成熟卵母细胞（MII期）比冻存同一品系的处于卵裂期的胚胎更困难。因为卵母细胞的某些内部结构对低温很敏感。本研究的目的是希望能够更有效地观察冻存对卵母细胞的影响。方法 我们运用激光扫描共聚焦显微术（CLSM）的光学切片和三维图像重建技术,研究冻存对自发性高血压大鼠（SHR）卵母细胞的结构,尤其是对纺锤体、染色体的影响,以及冻存对体外受精的影响。结果 我们不仅观察到有的卵母细胞冻存后仍维持着完整的桶状纺锤体以及紧密排列的染色体,而且能观察到卵母细胞内均匀分布着细胞质微管星体。冻存也造成对一些卵母细胞纺锤体和细胞质微管星体的破坏。结论 CLSM能够清晰有效地观察冻存对未受精卵纺锤体、染色体以及胞质微管星体的影响,我们推想冻存后卵母细胞的体外受精率下降与这些结构的受损有关。     

应用激光扫描共聚焦显微技术观察PDT导致癌细胞内钙水平的变化

肿瘤光动力治疗 (photodynamictherapy ,PDT)是现代癌症治疗中一种新的治疗法 ,为了更好地认识光动力诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。方法 :用Fluo 3AM荧光探针负载培养的人肺腺癌GLC 82细胞 ,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞内Ca2 浓度的变化。结果 :激光单独照射前后GLC 82细胞内Ca2 的浓度变化不大 ;在PDT作用下 ,激光照射前GLC 82细胞内Ca2 的浓度变化明显。结论 :本方法灵敏、简单、快速 ,能实时监测细胞内游离钙的变化。     

激光扫描共聚焦显微镜的原理及其在医学研究中的应用

随着科学技术的发展,实验技术已经成为实现实验目的的重要手段,对实验新技术的了解和掌握是科技工作者应具备的技能。激光扫描共聚焦显微镜（Laser Scan-ning Confocal Microscope,LSCM）是当今世界上最先进的分子细胞生物学分析仪器,利用激光、电子摄像和计算机图像处理系统,使用紫外光或可见光激发荧光探针,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像,     

激光扫描共聚焦显微镜在抗肿瘤药物研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜是20世纪80年代发展起来的一项具有划时代意义的高科技新产品，使现代显微镜有能力研究和分析细胞的变化过程和结构。肿瘤已成为人类的三大杀手之一，目前仅我国每年肿瘤的发生人数约200万，死亡人数约140万，抗肿瘤药物的研究已成为当今科研领域的重大攻关项目，激光扫描共聚焦显微镜在该领域的应用在一定程度上推动了抗肿瘤药物的研究进展。     

激光扫描共聚焦显微技术教学方法体会

针对医学研究生《仪器分析》教学要求,通过对激光扫描共聚焦显微技术教学内容和实验方法的改革实践进行总结和分析,建立具有系统的、专业特色与学科前沿并重的教学内容,采用教师授课与研究生实验操作相结合的教学形式,培养研究生的观察及操作能力,克服研究生在传统教学中理解大型仪器理论及其应用常处于被动参与的窘境具有重要意义。     

激光扫描共聚焦显微镜在细胞凋亡研究中的应用

细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)是不同于细胞坏死的一种细胞主动死亡方式 ,并由特定的基因控制。凋亡细胞在形态上出现变圆皱缩、染色质浓缩边集、核碎裂、凋亡小体形成等变化 ,并最终由非炎症过程清除。由于细胞凋亡独特地影响着机体的细胞发育和代谢 ,在监测和清除肿瘤细胞与突变细胞等方面也可能发挥重要的作用 ,近年来受到了细胞生物学、分子生物学、免疫学等多学科的广泛关注。激光扫描共聚焦显微镜 (ｌａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ,ＬＳＣＭ)是 80年代发展起来的一种高精度分子细胞生物学分析仪器 …     

激光共聚焦显微镜法分析载药微球的结构

目的　验证激光共聚焦显微镜 (CL SM)可否作为研究微球结构的工具 ,并用以获取微球内部结构的信息。方法　微球用复凝聚法制备 ,牛血清白蛋白 (BSA)为模型蛋白药物和聚合物 (明胶与阿拉伯胶 )为成球材料 ,在制备微球前均共价标记了荧光物。应用 CL SM将微球在不同荧光通道下呈像 ,并将微球切割成一系列平行切面分别成像 ,对微球进行三维重建和图像分析。结果　在 CL SM下微球中 BSA与聚合物均呈均匀分布 ,加入BSA不影响聚合物的分布。结论　 CL SM可观察载药微球的内部结构 ,而不需事先破坏样品即可获得被包裹药物的定位和成球材料所构成微球的结构资料。     

共聚焦激光扫描显微镜技术在研究大鼠海马神经元胞内钙超载中的应用

目的 观察抑制性氨基酸牛磺酸对兴奋性氨基酸谷氨酸所致胞内钙超载的影响。方法 选择Fluo-3／ AM对培养的海马神经元进行着色后,用共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)实时 扫描,动态显示海马神经元二维图像,以计算机相应软件对胞内钙的荧光强度变化进行分析统计。结果 在 0.5 mmol／L谷氨酸作用下,胞内钙荧光强度迅速升高(P<0.001);0.5 mmol／L谷氨酸与3 mmol／L牛磺酸共同 作用于海马神经元时,胞内钙荧光强度明显降低(P<0.001);灌流液中去除牛磺酸后,胞内钙荧光强度上升(P <0.001)。结论 抑制性氨基酸牛磺酸可抑制由兴奋性氨基酸谷氨酸所致神经元的胞内钙超载;CLSM以其独 特的优势,在高清晰度地显示海马神经元形态的同时,也可动态地观察活细胞在不同环境下胞内钙的快速变化 以及定量分析。该技术在动态观察和二维图像的高分辨率上比传统测钙方法有更大的优越性。     

肿瘤坏死因子诱导内皮细胞Ca2+时空变化的激光共聚焦显微测定

目的研究肿瘤坏死因子(TNFα)对培养的单个内皮细胞内游离Ca     

CLSM检测局灶性脑缺血NF-κB的转录活性

目的: 探讨共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)结合荧光双标技术检测局灶性脑缺血nuclear factor-kappa B(NF-κB)转录活性的方法.方法: 线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型,给予clasto-lactacystin β-lactone抑制NF-κB的转录激活,制作石蜡切片,利用CLSM结合Fluoresceinisothiocyanate(FITC)标记NF-κB p65亚基和Propidium Iodide(PI)标记细胞核的荧光双标技术对NF-κB进行定位和定量分析.结果: 脑缺血再灌注后, NF-κB激活,CLSM显示细胞核中出现代表NF-κB的绿色荧光,NF-κB的转录活性被抑制后,细胞核中的绿色荧光减少,细胞核区绿色荧光与细胞浆区绿色荧光的比值减少.结论: CLSM结合荧光双标技术是定位、定量分析NF-κB转录活性的良好方法.     

双重标记连接蛋白43激光共聚焦显微镜检测方法的研究

目的：探讨激光扫描共聚焦显微镜和荧光双重标记技术对心肌连接蛋白43进行定量和定位研究的方法。方法：应用罗丹明-麦芽凝集素标记心肌细胞膜,FTTC标记连接蛋白43;应用激光扫描共聚焦显微镜的检测器1和检测器2同时分别检测连接蛋白43和细胞膜,应用Image-Analysis程序进行图像分析。结果：在激光扫描共聚焦显微镜下,可以清晰地观察连接蛋白43和细胞膜,应用Image-Analysis程序能对连接蛋白43进行定量研究,连接蛋白43的分布也能同时得到研究。结论：结合应用激光扫描共聚焦显微镜和双重标记技术能对连接蛋白43进行精确的定量和定位研究,是一种先进的方法。     

早期圆锥角膜共焦显微镜形态学研究

目的 了解早期圆锥角膜共焦显微镜的影像特征，评价共焦显微镜（confocal microscopv）对早期圆锥角膜（keratoconus）的临床检查意义和诊断价值。方法 对Orbscan角膜地形图检查诊断为早期圆锥角膜的患者18例（19只眼）进行共焦显微镜检查，同时对正常人14例（28只眼）进行共焦显微镜检查，比较两组之间共焦显微镜形态学特征、角膜基质、内皮细胞的密度以及角膜厚度的差异。结果 共焦显微镜下，早期圆锥角膜患者18例（19只眼），有8例（9只眼）的角膜组织结构出现变化，表现为后基质层出现微小皱折，上皮层、前基质层及内皮层未发现异常改变。与正常组比较，早期圆锥角膜的角膜中央厚度轻度变薄（P=0．000），角膜基质、内皮细胞密度与正常组比较无显著性差异。结论 共焦显微镜可活体检查早期圆锥角膜组织结构和细胞的病理改变，为早期圆锥角膜的诊断及研究提供一个新的手段．     

激光共聚焦显微镜观察神经细胞孤啡肽受体的分布

目的：介绍激光共聚焦显微镜技术及其在观察受体细胞分布实验中的应用。方法：采用原位杂交、免疫荧光双标结合激光共聚焦显微镜技术。结果：孤啡肽受体ORL1在成年大鼠的皮层，海马及下丘脑区域的神经元，星型胶质细胞，小胶质细胞上均有表达。结论：激光共聚焦显微镜技术及免疫荧光双标技术在检测受体的细胞分布方面是一种实用的、简单的方法。     

准分子激光原位角膜磨镶术后早期共焦显微镜研究

【目的】研究激光原位角膜磨镶术(LASIK)矫正屈光不正术后角膜出现的变化。【方法】对屈光不正30例(60只眼)患者在激光原位角膜磨镶术术前行共焦显微镜检查,与术后角膜共焦显微镜检查结果相比较。【结果】术后多数术眼出现前弹力层及浅基质层皱折,层间出现反光较强的颗粒,术后早期基质细胞激活,激活范围与角膜瓣厚度负相关犤(136.2±18.1)μm犦,角膜瓣的实际测量值低于角膜瓣预期值(160μm),手术前后最浅层和最深层角膜基质细胞及内皮细胞密度无差异。【结论】使用共焦显微镜检查发现LASIK术后层间出现微小皱褶和碎屑,角膜瓣实际厚度低于预期值,角膜基质细胞被激活,角膜瓣越薄反应范围越广。     

S-100 和PTA1在垂体前叶共存的形态学证据

目的观察S-100 和血小板-T细胞活化抗原1(PTA1)在正常大鼠垂体前叶细胞的表达和共存. 方法免疫荧光双标记结合激光扫描共聚焦显微镜技术进行观察. 结果首次证实PTA1免疫反应阳性物质主要位于脑垂体血窦壁,与S-100免疫反应阳性细胞密切接触,并有一定程度的共存关系. 结论本结果为进一步明确PTA1分子在体内的分布及其功能提供了形态学依据.     

S－100和PTA1在垂体前叶共存的形态学证据

目的：观察S－100和血小板－T细胞活化抗原1（PTA1）在正常大鼠垂体前叶细胞的表达和共存。方法：免疫荧光双标记结合激光扫描共聚焦显微镜技术进行观察。结果：首次证实PTA1免疫反应阳性物质主要位于脑垂体血窦壁，与S－100免疫反应阳性细胞密切接触，并有一定程度的共存关系。结论：本结果为进一步明确PTA1分子在体内的分布及其功能提供了形态学依据。