聚合酶链反应检测血清丁型肝炎病毒核酸

为建立一种特异性强、敏感性高的检测丁型肝炎病毒感染的方法，提高丁型肝炎的诊断水平。根据ＨＤＶＲＮＡ保宁区设计合成两对引物，采用逆转录－套式聚合酶链反应对３５例肝炎患者血清进行检测。     

实时荧光聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒聚合酶基因变异

目的　建立一种在拉米夫啶治疗过程中的聚合酶酪氨酸 蛋氨酸 天冬氨酸 天冬氨酸(YMDD)基序变异的检测方法。方法　根据寡核苷酸探针与模板结合时 ,不匹配碱基显著影响熔解温度的原理 ,设计合成 2条荧光标记的特异性探针 ,用实时荧光聚合酶链反应 (PCR)方法对 2 97例患者的 35 4份标本进行YMDD变异检测。结果　 35 4份标本中 ,检出YMDD变异株 15 6份 ( 44 1% ) ,其中混合株占 34% ( 5 3/15 6 ) ;有 9份血清标本同时进行了DNA序列分析 ,测序结果同本试验检测的结果完全一致 ;同时发现YMDD变异与血清谷丙氨酸转氨酶异常相关 (P <0 0 1)。结论　本研究建立的实时荧光PCR方法简便、快速、灵敏、经济 ,可用于临床拉米夫啶治疗中YMDD变异的检测。     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的 用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱ－ＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎疾病（ＨＢＶ）的数量和免疫指标以指导临床,方法 设计合成了ＨＢＶＦＱ－ＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本,结果 经ＦＱ－ＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原,ｅ抗原,ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｇ,ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢ     

聚合酶链反应检测献血者血清中的丙型肝炎病毒

聚合酶链反应检测献血者血清中的丙型肝炎病毒３６２０００福建省泉州市中心血站陈惠民泉州市皮肤病性病防治院吴丽惠目前主要用ＥＬＩＳＡ法检测献血者的抗－ＨＣＶ，作为其是否感染上丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的指标，但这不能完全反映献血者的ＨＣＶ感染情况。笔者选用Ｈ...     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的数量和免疫指标,以指导临床。方法设计合成了ＨＢＶＦＱＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本。结果经ＦＱＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原、ｅ抗原、ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢＶＤＮＡ也全部阳性,平均ＨＢＶＤＮＡ拷贝数为１．１×１０８／ｍｌ;９８例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性的标本,其阳性率为７３％（７１例）,平均拷贝数为８．６×１０５／ｍｌ,而常规ＰＣＲ只有３３％的阳性率;６７例ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性标本的平均拷贝数为２．３×１０５／ｍｌ。结论能够避免ＰＣＲ后处理导致的假阳性污染,并实现准确定量。ＦＱＰＣＲ可以检测ＨＢＶ的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的 建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）－凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍＧＤＳ）技术,并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法 用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像,分析,并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较,对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析邮阳性的血清标本,用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果 通过３８份血清标本的检测,发现     

聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用

目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法参照Ｃａｍｐｂｅｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ及临床标本中的肺炎衣原体感染。结果经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣原体ＤＮＡ；１０份模拟标本均扩增出４３７ｂｐ区带；２２份小儿肺部感染的咽拭子标本中有５份为阳性，阳性率为２２．７％，而显微镜检查只有２例可见包涵体；１２份正常小儿咽拭子标本均为阴性。结论ＰＣＲ法检测肺炎衣原体，具有特异、敏感、快速、准确的特点，为肺炎衣原体感染的临床诊断提供了科学的依据     

固相法分离RAN用于丙型肝炎病毒聚合酶链反应检测

寻找一种简便，稳定，敏感性高，特异性强，且易于推广的ＲＮＡ分离纯化方法，用于丙型肝炎的逆转录０聚合酶链反应检测。应用双功能交联剂在乳胶颗粒上交联１段与ＨＣＶ核酸５‘端非结构区序列互补的探针，制备对ＨＣＶ特异的活化乳胶颗粒。将这种活化微粒混悬在６ｍｏｌ／Ｌ硫氰酸胍中，当待测血清与之混合后，病毒ＲＮＡ释放并与微粒上的探针杂交，极易被分离出来。     

逆转录套式聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒

目的 建立敏感，特异的逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法，以检测中国人庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染。方法 根据中国人感染ＨＧＶ者ＮＳ５区部分核苷酸序列分析结果，设计套式ＰＣＲ引物，用于ＨＧＶＲＮＡ的检测，并与用国外报道引物所作的一次ＰＣＲ和套式ＰＣＲ检测结果进行比较。结果 共检测标本１３３份，以国外报道引物作一次ＰＣＲ和套式ＰＣＲ检出率分别为８．３％和１１．３％，作者建立的套式     

荧光定量聚合酶链反应检测丙型肝炎病毒的临床应用

目的：用荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)测定丙型肝炎病毒在临床的应用。方法：用FQ—PCR检测378例怀疑HCV感染的临床标本，并同时采用ELISA检测抗HCV，用生化仪测定ALT水平．了解样本中HCQ-RNA含量与抗HCV及ALT的相关性。结果：378份标本中216份HCV—RNA含量高于10^3拷贝／ml，348份抗HCV阳性，156份ALT异常，经统计分析每两者间其有明显相关性。结论：FQ—PCR技术检测HCV—RNA特异性强。灵敏度高。具有良好的应用价值。     

聚合酶链反应检测肺炎衣原体方法的建立与初步应用

目的 探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术在肺炎衣原体检测中的应用。方法 参照Ｃａｍｐｂｅｌｌ报道的肺炎衣原体全基因序列、Ｇ＋Ｃ比例和次级结构设计一对引物，采用ＰＣＲ法检测肺炎衣原体ＤＮＡ有临床标本中的肺炎衣原体感染。结果 经对肺炎衣原体、沙眼衣原体、大肠埃希菌、溶血性链球菌、白色念珠菌和结核分枝杆菌培养物进行ＰＣＲ扩增，结果只有肺炎衣原体出现单一４３７ｂｐ的扩增区带；敏感性试验可检测出１０ｆｇ的肺炎衣     

固相法分离RAN用于丙型肝炎病毒聚合酶链反应检测

目的寻找一种简便、稳定、敏感性高、特异性强，且易于推广的ＲＮＡ分离纯化方法，用于丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测。方法应用双功能交联剂在乳胶颗粒上交联１段与ＨＣＶ核酸５′端非结构区（５′ＮＣ）序列互补的探针，制备对ＨＣＶ特异的活化乳胶颗粒。将这种活化微粒混悬在６ｍｏｌ／Ｌ硫氰酸胍中，当待测血清与之混合后，病毒ＲＮＡ释放并与微粒上的探针杂交，极易被分离出来。检测临床５０例血清样本，并与经典法、蛋白酶Ｋ法、血清直接扩增法进行比较。结果固相法检出率为４４％，蛋白酶Ｋ法、经典法和直接血清扩增法检出率分别为３６％，３８％和３０％。结论固相法分离核酸用于ＨＣＶ的ＲＴ－ＰＣＲ检测，简便、敏感性高、重复性好，是一种较理想的ＲＮＡ分离技术。     

丙型肝炎病毒不同基因区的聚合酶链反应扩增

探讨提高聚合酶链反应对丙型肝炎病毒病毒血症的检出率和对变异较大区域的扩增效率的方法。方法 分别以ＨＣＶ基因组５‘端非编码区，非结构基因４区及ＮＳ５ｂ区的引物检测ＨＣＶ，并比较双退火温度与单一退火温度对ＨＣＶ基因扩增效率的影响。     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ,ＧＤＳ）技术,并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像、分析,并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较,对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析出阳性的血清标本,用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果通过３８份血清标本的检测,发现用凝胶呈像技术判断的结果比单纯肉眼观察的阳性率高。前者１９份阳性（５０％）,后者１６份阳性（４２．１％）,符合率为９２．１％。经χ２检验（χ２＝０．４７７,Ｐ＞０．０５）,说明两种方法有很好的一致性。凝胶呈像分析为阳性,而肉眼观察阴性的３份血清标本,经定量ＰＣＲ检测为阳性。结论应用凝胶呈像技术比ＰＣＲ产物电泳后紫外灯下肉眼观察的灵敏度高、客观性强,能避免与紫外线接触,并可长期保留检测结果。     

DNA聚合酶链反应检测胃粘膜的乙肝病毒

乙肝病毒(HBV)虽是一种嗜肝病毒,但随着各种检测技术的发展,肝外多脏器感染的报告已遂渐增多。本文旨在探讨以PCR技术检测胃粘膜组织中特异性乙肝病毒基因片断,以探讨乙肝病毒与胃病的关系,更好地指导阻断乙肝病毒医源性传播途径。     

庚型肝炎病毒不同基因区的聚合酶链反应扩增

分别在庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）基因５′端非编码区（５′－ＵＴＲ）、非结构（ＮＳ）３及区非结构（ＮＳ）５区设计套式引物，建立逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）检测血清ＨＧＶ ＲＮＡ。在２９９份不同血汪标本中ＨＧＶ ＲＮＡ阳性者４１例，基于５′－ＵＴＲ、ＮＳ３区及ＮＳ５区引物ＰＣＲ的阳性率分别为８７．８％、８０．５％和９７．６％。本研究结果表明根据中国株ＨＧＶ基因ＮＳ５区部分序列设计引     

逆转录套式聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒

目的建立敏感、特异的逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法，以检测中国人庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染。方法根据中国人感染ＨＧＶ者ＮＳ５区部分核苷酸序列分析结果，设计套式ＰＣＲ引物，用于ＨＧＶＲＮＡ的检测，并与用国外报道引物所作的一次ＰＣＲ和套式ＰＣＲ检测结果进行比较。结果共检测标本１３３份。以国外报道引物作一次ＰＣＲ和套式ＰＣＲ检出率分别为８．３％和１１．３％，作者建立的套式ＰＣＲ检出率为１８．０％，对部分ＰＣＲ产物进行序列分析证实为ＨＧＶ特异性基因。结论建立的方法可在中国人群中显著提高ＨＧＶＲＮＡ检出率。     

聚合酶链反应检测再生障碍性贫血血清中乙型和丙型肝炎病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３７例非肝炎相关再生障碍性贫血（ＮＨＡＡ）和１８例肝炎相关再生障碍性贫血（ＨＡＡ）血清中的乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）、丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）。结果显示：ＮＨＡＡ的ＨＢＶＤＮＡ检出率为１３．５％（５／３７），ＨＡＡ为２２．２％（４／１８），两者比较Ｐ＞０．０５。ＮＨＡＡ的ＨＣＶＲＮＡ检出率为２．７％（１／３７），ＨＡＡ为３８．９％（７／１８），两者比较Ｐ＜０．０１。丙型肝炎相关再生障碍性贫血的预后较差。提示：ＨＣＶ感染与ＨＡＡ关系密切。     

乙型肝炎病毒基因的巢式聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分型及初步应用

目的 用改进的乙型肝炎病毒(HBV)巢式聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)的基因分型方法初探广州地区HBV基因型分布状态。方法 设计巢式PCR扩增前S基因，经限制性内切酶AvaⅡ和DpnⅡ酶切鉴别HBV A—G基因型；并对140份乙型肝炎患者血清进行基因分型，其中随机挑选3份进行克隆测序，并对20份患者血清进行巢式PCR—RFLP重复分型试验，以验证此分型技术的稳定性和特异性。同时采用PCR和巢式PCR对92份乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阴性血清进行HBV DNA阳性率检测比较。结果 基因分型与测序结果一致；基因分型重复试验符合率100％；92份HBeAg阴性血清经PCR和巢式PCR扩增HBV DNA的阳性率分别为20．7％和68．5％。140份乙型肝炎患者血清中HBV基因型以C型(94份)和B型(42份)为主，偶见A型(4份)。结论 巢式PCR—RFLP HBV基因分型方法具有良好的敏感性、特异性、稳定性，且操作简便，适用于临床和流行病学调查研究。     

用重叠延伸聚合酶链反应制备鸭乙型肝炎病毒基因点突变

制备含鸭乙型肝炎病毒前核心区终止密码突变的基因片段，以对此基础突变有关生物学研究。用重叠延伸聚合酶链反应制备含此人工定向点突变的基因片段；用不对称聚合酶链反应制备单链ＤＮＡ模板作测序。凝胶电泳显示ＯＥＰＣＲ产物与克隆ＤＨＢＶ ＤＮＡ酶切片段位置一致，测序证实该点突变存在。