N-乙酰半胱氨酸对甲醛致小鼠学习记忆能力下降的拮抗作用

目的探讨 N-乙酰半胱氨酸(NAC)拮抗甲醛(FA)引起的小鼠学习记忆能力的改变。方法将34只清洁级ICR 雄性小鼠随机分为对照组(生理盐水,8只)、FA 组(15 mg/kg,9只)、NAC 组(100 mg/kg,8只)、FA(15 mg/kg) NAC(100 mg/kg)组(9只)。采用腹腔注射染毒,每天上午给药1次,连续给药7 d。第8天采用六臂放射状水迷宫检测小鼠的学习记忆能力。连续检测7 d。结果 FA 组小鼠由染毒早期的兴奋、不安逐渐转变为静卧少动、堆积成簇,而其他各组小鼠无此现象。各组小鼠体重增长之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经重复测量资料方差分析,结果显示,在学习期,FA 组潜伏期[(27.15±2.66)s]长于对照组[(15.83±t.2.82)s]和 FA NAC 组[(14.98±2.66)s],差异均有统计学意义(P<0.01);FA NAC 组的错误次数[(3.41±0.39)次1少于 FA 组[(4.63±0.39)次],差异有统计学意义(P<0.05)。在记忆期,FA 组潜伏期[(24.37±3.20)s]较对照组[(13.32±3.39)s]及 FA NAC 组[(14.14±3.19)s]延长,差异均有统计学意义(P<0.01);4组间小鼠记忆期错误次数间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论甲醛可导致小鼠学习记忆能力下降,NAC 对甲醛引起的神经行为改变有保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸对镉致人胚肾细胞凋亡拮抗作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)对氯化镉所致人胚肾(human embryonic kidney,HEK)细胞凋亡的拮抗作用。方法应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测不同CdCl₂浓度(0,10,20,40,80μmol/L)处理以及不同浓度NAC(1,2,4,8 mmol/L)和镉联合作用对HEK细胞相对存活率和凋亡率的影响。结果单纯染镉时,与对照组(0μmol/L)比较,20,40,80μmol/L CdCl₂3组HEK细胞相对存活率明显降低(P<0.01),HEK细胞凋亡率明显升高(P<0.01);NAC与镉联合作用时,与40μmol/L CdCl₂比较,40μmol/L CdCl₂+4,8 mmol/L NAC2组HEK细胞相对存活率明显提高,40μmol/L CdCl₂+2,4,8 mmol/L NAC3组HEK细胞凋亡率明显降低。结论一定浓度氯化镉可引起HEK细胞凋亡增加,NAC可以拮氯化镉引起的细胞凋亡。     

大剂量N-乙酰半胱氨酸对染尘大鼠模型的抗氧化作用

目的观察大剂量N-乙酰半胱氨酸(NAC)在矽肺形成过程中的抗氧化作用。方法 选取Wistar健康大鼠96只,随机分为模型组、预防治疗组、对照组3组,每组32只。模型组和预防治疗组均以气管滴注二氧化硅混悬液建立染尘大鼠模型,预防治疗组以大剂量N-乙酰半胱氨酸灌胃进行干预治疗,对照组给予等量的生理盐水。分别在染尘后的第3、7、14、28天分批处死大鼠取材。切取肺组织样本作病理切片,分别行苏木精-伊红(HE)染色,Masson染色,观察肺组织病理变化,并对病理切片(14d、28d)肺纤维化进行半定量评分。测定肺组织匀浆羟脯氨酸(Hyp)含量(样本碱水解法)和微量丙二醛(MDA)的含量(TBA法)。结果与模型组比较,大剂量NAC预防治疗组病理显示肺泡炎症和纤维化程度减轻,肺纤维化得分明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组丙二醛的含量各时间点与对照组相比,均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),高峰位于第7天,预防治疗组丙二醛的含量均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。肺匀浆羟脯氨酸的含量比较,模型组在第7天明显升高,高峰位于第28天,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),预防治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 早期应用大剂量NAC可增强肺组织的抗氧化作用,减轻二氧化硅对大鼠肺组织的损伤,部分抑制肺间质纤维化。     

细胞内谷胱甘肽对砷细胞毒性的保护作用

目的研究细胞内谷胱甘肽(GSH)对砷致人永生化角质形成细胞系(HaCaT)毒性的保护作用.方法HaCaT细胞用N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)和丁硫氨酸亚矾胺(L-buthionine-[S'R]-sulfoximine,BSO)预处理后,加入亚砷酸钠(sodium arsenite,NaAsO2)继续作用,用Alamarblue摄入法检测细胞活力,每组4个复孔.结果单独用NaAsO2作用细胞24h后,0.001～10.000 μmol/L组Alamarblue还原率增高(P＜0.05),大于10.000μmol/L时Alamar blue还原率下降(P＜0.01);用NAC预处理24h后再加入NaAsO2,15 μmol/L组Alamarblue还原率比NaAsO2单独作用增加(P＜0.05);用BSO预处理24 h后再加入NaAsO2,15 μmol/L组的Alamarblue还原率均下降(P＜0.05).结论低浓度NaAsO2刺激细胞增殖,高浓度具有细胞毒性;NAC可减轻砷的细胞毒性,而BSO则加重其细胞毒性.     

N-乙酰半胱氨酸对稳定期慢性阻塞性肺疾病的治疗作用

目的：探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对稳定期慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者的治疗效果。方法：选取本院2012年8月-2013年2月确诊为COPD稳定期的60例患者,按照随机数字表法将其分为观察组和对照组各30例。对照组给予常规治疗,观察组在常规治疗基础上联合NAC治疗1年,观察比较两组FEV1%pred、SGRQ评分、急性加重次数及住院次数的差异。结果：两组治疗后与治疗前比较,FEV1%pred明显升高（P〈0.05）,SGRQ评分、急性加重次数、住院次数均明显降低（P〈0.05）;且两组治疗后比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：NAC可以显著改善稳定期COPD患者肺功能、生活质量,并降低急性加重次数、住院次数,值得临床推广。     

N-乙酰半胱氨酸对氟诱导睾丸支持细胞内质网应激的作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸对氟化钠(NaF)介导睾丸支持细胞内质网应激的抑制作用。方法将原代培养大鼠睾丸支持细胞进行分组:0μg/ml NaF(对照组)、6μg/ml NaF组、12μg/ml NaF组、24μg/ml NaF组、N-乙酰半胱氨酸(2 mmol/L NAC)组、6μg/ml NaF+2 mmol/L NAC组、12μg/ml NaF+2 mmol/L NAC组和24μg/ml NaF+2 mmol/L NAC组,各组以相应药物孵育24 h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞生长活性;荧光探针法分析各组细胞内活性氧(ROS)水平;免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关蛋白GRP78、PERK和CHOP的表达。结果 2 mmol/L NAC有效提高了细胞存活率(P0.01);NAC明显抑制了NaF介导的细胞内ROS水平的升高,与NaF组相比,各NAC组的ROS水平均显著降低(P0.01);NaF诱导内质网应激相关蛋白GRP78、PERK和CHOP表达明显上调,经2mmol/L NAC处理后,其有效拮抗了GRP78、PERK和CHOP蛋白表达的上调(P0.01)。结论 ROS激活了内质网应激相关信号通路,而NAC通过减少ROS的产生,拮抗了NaF介导的睾丸支持细胞内质网应激。     

N-乙酰半胱氨酸在COPD治疗中的应用

氧化应激是慢性阻塞性肺疾病(COPD)重要的发病机理之一,抗氧化应激可作为COPD治疗的新思路。谷胱甘肽(GSH)作为体内抗氧化剂,可保护体内细胞不被氧化损伤。因此,可通过提高COPD患者肺内GSH浓度治疗COPD。N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为半胱氨酸的前体参与合成GSH,发挥抗氧化应激的作用,本文综述了NAC在COPD治疗中的应用。     

N-乙酰半胱氨酸在有或无caspase抑制条件下对Cr(Ⅵ)诱导的肝细胞凋亡的拮抗作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)在有或无caspase抑制条件下,对Cr(Ⅵ)诱导的肝细胞线粒体依赖性凋亡的拮抗作用。方法将L-02肝细胞随机分成对照组、Cr(Ⅵ)处理组、Z-VAD-fmk预处理组[Z-VAD-fmk预处理细胞1h,加入Cr(Ⅵ)]、NAC预处理组[NAC预处理细胞1h,加入Cr(Ⅵ)]、联合预处理组[Z-VAD-fmk和NAC分别预处理细胞1h,加入Cr(Ⅵ)],Cr(Ⅵ)终浓度为20μmol/L,处理6h。流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光分光光度法检测线粒体膜电位(△ψm)和通透性转运孔(PTP)的改变,单细胞凝胶电泳法观察细胞凋亡形态及细胞DNA损伤情况。结果终浓度20μmol/L的Cr(Ⅵ),处理6h,可诱导细胞凋亡,在有或无caspase抑制条件下,NAC均明显减轻了Cr(Ⅵ)引起的肝细胞线粒体膜电位下降及PTP孔开放(P<0.05),使细胞DNA损伤程度减轻(P<0.05),从而对细胞凋亡有明显拮抗作用(P<0.05),但与非caspase抑制条件下相比,caspase抑制条件下NAC的保护效果有明显降低(P<0.05)。结论在有或无caspase抑制条件下,NAC对Cr(Ⅵ)诱导的L-02肝细胞凋亡具有重要拮抗作用,caspase在该凋亡过程中不起决定性作用。     

N-乙酰半胱氨酸对甲基汞致大鼠脑皮质氧化损伤的影响

目的 研究甲基汞(methylmereury,MeHg)致大鼠脑皮质的氧化损伤,并探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对甲基汞致大鼠脑皮质氧化损伤的拮抗作用.方法 将32只清洁级健康Wistar大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(生理盐水)组、低剂量(4 μmol/kg)MeHg组、高剂量(12 μmol/kg)MeHg组和NAC(1 mmol/kg)预处理+MeHg(12 μmol/kg)组,每组8只,雌雄各半.NAC预处理+MeHg组皮下注射NAC溶液,对照组和低、高剂量MeHg组均皮下注射生理盐水;注射2h后,采用腹腔注射方式染毒MeHg,连续染毒4周,测定脑组织蛋白质巯基、羰基和丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、三磷酸腺苷(ATP)酶的活力.结果 MeHg染毒大鼠脑皮质中MDA、蛋白质羰基、8-OHdG的含量升高(P＜0.05),蛋白质巯基的含量降低和SOD、GSH-Px、ATP酶的活力降低(P＜0.05);与高剂量MeHg组比较,NAC预处理+MeHg组大鼠脑皮质中上述指标均得到显著改善(P＜0.05).结论 MeHg可导致大鼠脑皮质的氧化损伤;NAC对甲基汞所致大鼠脑皮质氧化损伤有一定的拮抗作用.     

亚砷酸钠对淋巴细胞毒性及抗氧化物拮抗作用

目的研究不同浓度的亚砷酸钠对体外培养的大鼠淋巴细胞活力的影响及亚硒酸钠和抗坏血酸的拮抗作用。方法体外分离大鼠外周血淋巴细胞后，施加处理因素，在37℃条件下恒温培养，用水溶性染料(AlamarBlue)摄入法定量检测淋巴细胞活力。结果亚砷酸钠浓度大于5μmol／L时，AlamarBlue的还原率显著低于对照组，且呈剂量反应关系；用5μmol／L的亚硒酸钠预处理细胞24h后，10μmol／L亚砷酸钠组AlamarBlue的还原率显著增高，接近空白对照组还原率；而用50μmol／L的抗坏血酸预处理后，还原率有所增高，但未达到对照组水平。结论亚砷酸钠可抑制淋巴细胞活力，抗氧化物可一定程度的拮抗三价砷的细胞毒性作用。     

亚砷酸钠联合丁基硫堇亚胺致肝细胞毒性作用

目的 研究亚砷酸钠(sodium arsenite,NaAsO₂)单独、以及与丁基硫堇亚胺(buthionine sulfoximine,BSO)联合对Chang liver细胞毒性作用.方法 常规培养的Chang liver细胞用NaAsO₂单独或NaAsO₂和BSO联合染毒24h,倒置相差显微镜采集细胞图像;四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力.结果 NaAsO₂(0~250μmol/L)明显改变Chang liver细胞的形态并明显降低细胞生存率(P<0.01),且呈剂量-反应关系;NaAsO₂(5,20μmol/L)和BOS(1 mmol/L)联合作用,其细胞生存率明显低于相应浓度的NaAsO₂单独作用组(P<0.01).结论 NaAsO₂具有明显的细胞毒性;NaAsO₂联合BSO能够加重NaAsO₂对Chang liver细胞的毒性.     

砷对人皮肤角质形成细胞抗氧化能力影响

目的 研究亚砷酸钠(NaAsO₂)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)抗氧化能力的影响。方法 用流式细胞仪检测细胞内二氯荧光素(DCF)的荧光强度;用改良硫代巴比妥酸荧光法测定细胞内丙二醛(MDA)含量;用Nitrite-kit法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;用紫外速率直接法测定过氧化氢酶(CAT)的活性。结果 各实验组(2.5,5,10和20μmol/LNaAsO₂)的DCF荧光强度均显著增高(P<0.05),分别是对照组的1.3,1.6,1.7和1.8倍;各实验组的MDA含量显著增高(P<0.05),分别是对照组的1.1,1.4,1.5和2.2倍;10和20μmol/LNaAsO₂组SOD活性显著下降,分别为对照组的78%和61%;10和20μmol/LNaAsO₂组SIOD和CAT活性显著下降,分别为对照组的50%和34%。结论 砷可以引起人皮肤细胞的氧化损伤,降低抗氧化能力。     

谷胱甘肽与蛋氨酸对饮水砷暴露小鼠体内砷化物的分布和甲基代谢的影响

目的探讨外源性谷胱甘肽(glutathione,GSH)和L-蛋氨酸(L-Methionine,L-Met)干预后,对饮水砷暴露小鼠肝、肾和血中化物的分布和甲基代谢的影响。方法将实验小鼠随机分为对照组(Con组)、单纯染砷组(As组)、GSH干预组(GSH组)与L-Met干预组(L-Met组)。小鼠自由饮用含砷50mg/L的水。从第4周起,染砷组同时腹腔注射GSH和L-Met进行处理,共处理7天。末次注射后24h处死小鼠,取其肝、肾和血组织样品。采用氢化物发生-超低温捕集-原子吸收分光光度法分别检测小鼠肝、肾和血中无机砷(inorganic arsenic,iAs)、一甲基胂(monomethylarsenic acid,MMA)和二甲基胂(dimethylarsenic acid,DMA)含量。结果L-Met组小鼠肝中DMA含量和砷二甲基化率(SMI)显著高于As组;GSH干预组小鼠肝中砷一甲基化率(PMI)和SMI显著高于As组。L-Met组和GSH组小鼠血中DMA、总砷含量和PMI均显著高于As组。结论GSH和L-Met对小鼠体内的砷甲基化代谢具有促进作用、可加速无机砷在体内的甲基化过程,最终使砷甲基代谢的终产物DMA含量增加,从而促进了总砷的代谢与排泄。     

低剂量长期砷暴露对HaCat细胞周期及周期蛋白影响

目的探讨低剂量长期砷暴露对人皮肤角质形成细胞系HaCat细胞周期及周期蛋白D1(cyclin D1)和p21影响。方法HaCat细胞暴露于浓度为0、0.05、0.1 μmol/L的NaAsO₂ 15周后,用流式细胞仪测定10 000个细胞的细胞周期分布;用western blot法检测细胞cyclin D1和p21的蛋白表达水平。结果与对照组比较,NaAsO₂染毒组细胞的G₀/G₁期细胞数明显增高,S期细胞数明显降低,而G₂/M期无明显变化;0.05、0.1 μmol/L砷染毒组细胞内cyclin D1表达水平分别为(152.40±8.17)%、(145.59±2.89)%,与对照组[(99.99±1.13)%]比较,均明显增高;0.05、0.1 μmol/L砷染毒组细胞内p21表达水平分别为(64.06±1.62)%、(39.57±1.82)%,均明显低于对照组的(99.9±2.83)%,呈剂量效应关系(P<0.05)。结论长期低剂量砷暴露可诱导HaCat细胞周期异常,cyclin D1表达上升,p21表达下降。     

硒和抗坏血酸对砷致大鼠细胞毒性拮抗作用

目的 观察不同浓度的亚砷酸钠(NaAsO2)对体外培养的大鼠淋巴活性氧群(ROS)和细胞内脂质过氧化物(LPO)含量的影响,并探讨亚硒酸钠(NaSeO3)和维生素C对砷毒性的拮抗作用.方法 体外分离大鼠外周血淋巴细胞后,施加处理因素,在37℃条件下恒温培养,用2'7'-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)染色法检测细胞内的ROS水平,用硫代巴比妥酸荧光法测定细胞内LPO含量.结果 NaAsO2浓度>10μmol/L时,ROS和乙二醛(MDA)含量明显高于对照组;用抗氧化剂预处理使细胞内ROS和MDA含量减少.结论 亚砷酸钠可引起细胞内氧化应激,抗氧化物可一定程度拮抗砷的细胞毒性作用.     

亚砷酸钠对G361细胞ROS水平及TYR影响

目的研究亚砷酸钠(NaAsO2)对人类黑色素瘤G361细胞活性氧自由基(ROS)水平及酪氨酸酶(TYR)活力的影响。方法将体外培养的人类黑色素瘤G361细胞分别暴露于NaAsO2浓度为0.1,0.5及5.0μmol/L2及6h后,测定细胞内ROS水平及TYR活力。结果NaAsO25μmol/L2及6h〔(130.12±3.07)%〕〔(139.55±11.02)%〕染毒组ROS水平明显高于各相应染毒时段对照组水平;染毒2及6h各剂量组TYR活力分别为(99.31±0.81)%,(99.85±1.34)%,(99.52±1.43)%和(99.50±1.88)%,(100.35±1.95)%,(101.68±1.66)%,与各自对照组比较,差异无统计学意义。结论NaAsO2作用下,随着染毒剂量增高,G361细胞内ROS的生成水平增多,呈剂量-效应关系。     

环境砷污染对人体健康影响的研究进展

  目的  从细胞自噬角度探讨亚慢性砷暴露对大鼠肝脏自噬作用的影响及相关分子机制。  方法  40只150～180 g SD大鼠,随机分为对照组、砷暴露高、中、低剂量组（NaAsO₂ 8、4、2 mg/kg）;灌胃给予不同浓度的含砷水,对照组给予等量生理盐水,连续12周,每周6 d。12周后处死大鼠取肝组织与全血。苏木素 – 伊红染色（HE）法观察大鼠肝脏病理变化;透射电子显微镜观察大鼠肝脏细胞超微形态;生化法检测血清谷丙转氨酶（ALT）与谷草转氨酶（AST）含量;Western blot法检测自噬相关蛋白微管轻链蛋白 – 3（LC3）、P62/sequestosome-1（SQSTM1）、哺乳动物雷帕霉素靶点（mTOR）、磷脂酰肌醇3 – 激酶（PI3K）、beclin 1（BECN 1）蛋白表达。  结果  HE染色结果显示,砷暴露可造成肝组织病理损害,其损伤程度呈剂量依赖性;肝组织的超微结构可见砷暴露组大鼠肝脏双层膜自噬小体与自噬空泡明显增多;与对照组比较,高剂量NaAsO₂组ALT、AST [分别为（98.68 ± 22.46）、（125.00 ± 13.34）U/L]活力上升（P < 0.05）;与对照组[LC3-II/LC3-I（1.03 ± 0.02）、P62（1.36 ± 0.29）、beclin 1（1.27 ± 0.13）、PI3K（0.96 ± 0.037）、mTOR（0.97 ± 0.05）]比较,NaAsO₂ 高、中剂量组大鼠肝脏中LC3-II/LC3-I比值[（1.63 ± 0.11）、（2.91 ± 0.05）]升高,beclin 1蛋白表达[（0.84 ± 0.27）、（0.98 ± 0.10）]与mTOR蛋白表达[（0.49 ± 0.02）、（0.56 ± 0.11）]下降（P < 0.05）,高、中、低剂量NaAsO₂组大鼠肝脏中P62蛋白表达[分别为（0.32 ± 0.05）、（0.13 ± 0.01）、（0.34 ± 0.05）]均下降（P < 0.05）。  结论  NaAsO₂暴露可诱导大鼠肝脏细胞自噬的发生,其机制可能与调控PI3K/mTOR信号通路有关。     

多药耐药基因1与人肝细胞耐砷性关系

目的观察多药耐药基因1(MDR1)在耐砷的人肝细胞(L-02)中的表达情况,探讨其与L-02耐砷性的关系。方法培养L-02和耐砷的L-02,用real-time PCR和免疫组织化学法检测细胞MDR1 mRNA和P糖蛋白的表达情况;2种细胞单用亚砷酸钠(NaAsO₂)2.5,5.0,10 mmol/L及NaAsO₂与MDR1抑制剂环胞菌素D衍生物(PSC833)联合作用24 h后收集细胞,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法和石墨炉原子吸收光谱法检测细胞生存率和细胞内总砷浓度。结果MDR1 mRNA及P糖蛋白在耐砷的L-02中的表达强度分别为(8.890±0.968),(68.76±3.81)%,高于L-02的(1.014±0.189),(24.44±4.03)%,差异有统计学意义(P<0.001);NaAsO₂单用时,低、中、高剂量组耐砷的L-02生存率分别为(109.630±0.511)%,(95.469±0.054)%,(78.890±0.024)%,明显高于L-02的(104.841±0.015)%,(91.534±0.026)%,(64.811±0.079)%;而耐砷的L-02内总砷浓度分别为(0.682±0.004),(1.355±0.005),(3.274±0.010)μg/L,明显低于L-02的(1.165±0.010),(3.661±0.002),(7.529±0.006)μg/L,差异有统计学意义(P<0.001);NaAsO₂与PSC833联合作用则可增加细胞内总砷浓度、降低细胞存活率(P<0.001)。结论L-02细胞的耐砷性与MDR1高表达有关,在mRNA和蛋白水平均有体现。     

砷对原代培养海马细胞形态学影响及酶活力研究

研究不同剂量亚砷酸钠对海马细胞活力、形态学改变以及生化指标的影响。采用 0、0 0 8、0 40、2 0 0和 1 0 0 0mg L亚砷酸钠处理海马细胞 6h和 2 4h后 ,观察到海马神经元活力降低 ;细胞浆、核界限不清 ,细胞浆空泡变性 ,细胞突起变细、减少以至消失 ,神经细胞之间网络疏松 ;核染色质凝集、浓缩 ,核边移 ;胞浆内尼氏体减少 ;且呈剂量和时间依赖关系 ;培养上清中乳酸脱氢酶活性增高 ,胆碱酯酶活性降低。实验结果表明不同剂量亚砷酸钠对大鼠海马细胞产生不同程度的毒性作用 ,包括变性、凋亡和坏死。