高压培养对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制

目的 研究高压培养对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法 利用丝裂素活化蛋白激酶（MAPK)、血小板衍化生长因子（PDGF）和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ）生物活性检测，观察高压培养对平滑肌细胞增殖、PDGF和AngⅡ的影响。结果 高压培养促进血管平滑肌细胞增殖，使MAPK活性增加，同时平滑肌细胞分泌PDGF、AngⅡ增加。结论 高压培养促进血管平滑肌细胞增殖，可能是通过促使血管平滑肌细胞分泌PDGF、AngⅡ增加，进而促进MAPK活性增加途径实现的。     

p38丝裂素活化蛋白激酶介导自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的 研究p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)与血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用.方法 本实验采用体外培养SHR胸主动脉平滑肌细胞,用3H-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法测定细胞增殖状况.用特异性的Phospho-p38MAPK抗体的蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p38MAPK的活性.结果 1)Ang Ⅱ、PDGF成剂量依赖性促进SHR血管平滑肌细胞[3H]-TdR掺入率,当Ang Ⅱ为10-7 mol/L、PDGF为10 ng/L时,[3H]-TdR掺入率显著增加[Ang Ⅱ组:(11 588±1322)比对照组(2546±207)计数/min;PDGF:(5279±391)比对照组(2587±230)计数/min,P＜0.05].p38MAPK选择性阻断剂SB202190(10-9～10-7 mol/L)呈浓度依赖性地降低Ang Ⅱ、PDGF诱导的VSMC增殖活度.2)Ang Ⅱ、PDGF对p38MAPK的磷酸化均有显著增强作用,此作用同样被SB202190抑制.3者作用都呈剂量依赖性.结论 Ang Ⅱ、PDGF能激活SHR血管平滑肌细胞的p38MAPK发生磷酸化,进而导致血管平滑肌细胞增殖.     

p38丝裂素活化蛋白激酶介导自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的研究p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法本实验采用体外培养SHR胸主动脉平滑肌细胞,用3H-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法测定细胞增殖状况。用特异性的Phospho-p38MAPK抗体的蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测p38MAPK的活性。结果1)AngⅡ、PDGF成剂量依赖性促进SHR血管平滑肌细胞[3H]-TdR掺入率,当AngⅡ为10-7mol/L、PDGF为10ng/L时,[3H]-TdR掺入率显著增加[AngⅡ组:(11588±1322)比对照组(2546±207)计数/min;PDGF:(5279±391)比对照组(2587±230)计数/min,P<0.05]。p38MAPK选择性阻断剂SB202190(10-9～10-7mol/L)呈浓度依赖性地降低AngⅡ、PDGF诱导的VSMC增殖活度。2)AngⅡ、PDGF对p38MAPK的磷酸化均有显著增强作用,此作用同样被SB202190抑制。3者作用都呈剂量依赖性。结论AngⅡ、PDGF能激活SHR血管平滑肌细胞的p38MAPK发生磷酸化,进而导致血管平滑肌细胞增殖。     

肾上腺髓质素抑制血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞增生作用

目的　观察肾上腺髓质素 (adrenomedullinADM)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激血管平滑肌细胞增生作用的影响。方法　测定ADM、AngⅡ对细胞3H leu掺入及 (MAPK)和 (PKC)活性的作用。结果　AngⅡ促进细胞3H leu掺入及MAPK和PKC活性增加 ;ADM对细胞3H leu掺入及MAPK、PKC活性均无明显影响 ,但呈浓度依赖方式抑制AngⅡ促细胞3H leu掺入及MAPK活性增加。结论　ADM通过抑制AngⅡ对MAPK的激活 ,拮抗其促血管平滑肌细胞增生作用。     

人白细胞介素10对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察重组人白介素10 (rhIL-10) 对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖及对p44/p42 丝裂素活化蛋白激酶的影响. 方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,采用MTS/PES(methoxyphenyl-tetrazolium salt/phenazine ethosulfate)法确定血管平滑肌细胞的增殖状态.利用p44/p42磷酸化抗丝裂素活化蛋白激酶抗体的蛋白免疫印迹法测定丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达;对照组为未用AngⅡ刺激的血管平滑肌细胞. 结果 AngⅡ对大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用(1.311±0.201 对 0.781 ±0.236, P<0.05).rhIL-10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响(0.783±0.170 对 0.781±0.236, P>0.05).在AngⅡ刺激下,1、10、100 ng/ml的rhIL-10均可抑制血管平滑肌细胞的生长 (分别为0.984±0.172、 0.932±0.134、 0.784±0.097对1.311±0.201, P<0.05).AngⅡ对p44/p42 丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达有显著的增强作用(512±78对100,P< 0.01), 此作用可被rhIL-10抑制 (512±78对329±59, P< 0.01). 结论 rhIL-10可抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖及p44/p42 丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达.     

三七皂苷R1对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响

目的 研究三七皂苷R1(NR1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠主动脉血管平滑肌(MOVAS)细胞增殖、迁移的影响.?方法 将MOVAS细胞分为Control组、NR1组、AngⅡ组、AngⅡ+NR1组.采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测MOVAS细胞的增殖活性,采用Transwell小室和划痕愈合实验检测M...     

血管紧张素-(1-7)在内皮素诱导血管平滑肌细胞增殖反应中的作用

目的　探讨血管紧张素 (1 7) [Ang (1 7) ]在内皮素 1(ET 1)诱导血管平滑肌细胞增殖反应中的作用。方法　在ET 1诱导培养的SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞模型中 ,应用Ang (1 7) ,通过测定3 H 胸腺嘧啶 (3 H TdR)掺入的方法 ,观察血管平滑肌细胞增殖情况。结果　Ang (1 7)呈剂量性抑制ET 1诱导血管平滑肌细胞的DNA合成 ,其作用受体不是血管紧张素Ⅱ受体 1(AT1)或血管紧张素Ⅱ受体 2 (AT2 ) ,而是通过一种特殊受体介导。结论　Ang (1 7)能抑制ET 1诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

人白细胞介素10对血管紧张素II诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的　观察重组人白介素 10 (rhIL 10 )对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖及对 p4 4 /p4 2丝裂素活化蛋白激酶的影响。　 方法　体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS/PES(methoxyphenyl tetrazoliumsalt/phenazineethosulfate)法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。利用 p4 4 /p4 2磷酸化抗丝裂素活化蛋白激酶抗体的蛋白免疫印迹法测定丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达 ;对照组为未用AngⅡ刺激的血管平滑肌细胞。　 结果　AngⅡ对大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用 (1 311± 0 2 0 1对 0 781± 0 2 36 ,P <0 0 5 )。rhIL 10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响 (0 783± 0 170对 0 781± 0 2 36 ,P >0 0 5 )。在AngⅡ刺激下 ,1、10、10 0ng/ml的rhIL 10均可抑制血管平滑肌细胞的生长 (分别为 0 984± 0 172、 0 932±0 134、0 784± 0 0 97对 1 311± 0 2 0 1,P <0 0 5 )。AngⅡ对p4 4 /p4 2丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达有显著的增强作用 (5 12± 78对 10 0 ,P <0 0 1) ,此作用可被rhIL 10抑制 (5 12± 78对 32 9± 5 9,P <0 0 1)。　结论　rhIL 10可抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖及 p4 4 /p4 2丝裂素活化蛋白激酶蛋白的表达。     

血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖和细胞外基质降解作用的研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMCs)基质金属蛋白酶2(MMP2)活性的影响及其与细胞增殖的关系。方法体外培养大鼠主动脉VSMCs,用AngⅡ进行刺激,采用明胶酶图法检测MMP2的活性。结果经AngⅡ处理12、24、48h后,VSMCs的MMP2活性分别为未处理组的237、196、158倍(P<005)。但AngⅡ对VSMCs增殖的促进作用在刺激3h时较明显(P<005)。结论AngⅡ提高VSMCs的MMP2活性晚于促进VSMCs增殖作用,显示AngⅡ这两种作用具有时相差异。     

同型半胱氨酸对大鼠主动脉内皮细胞分泌一氧化氮、血管紧张素Ⅱ、内皮素的影响

探讨同型半胱氨酸(HCY)对大鼠主动脉内皮细胞(EC)分泌一氧化氮(NO)、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和内皮素(ET)的影响.取体重150—200g健康雄性Wistar大鼠的胸主动脉,以组织贴块法进行EC培养,传代至第5代用于实验,各实验组及对照组均为6孔细胞,实验组加入不同浓度的HCY,对照组不加HCY,分别在2、4、6、8、12、24h观察细胞形态并取细胞培养液测定NO含量.一氧化氮合成酶(NOS)活性、AngⅡ和ET含量.HCY可引起EC形态发生变化HCY刺激EC分泌NO、Ang Ⅱ和ET呈时间和剂量依赖性.提示:HCY使EC分泌NO、Ang Ⅱ、ET平衡失调可能是导致动脉粥样硬化的重要原因之一.     

经活化SAPK/JNK和ERK1/2激酶途径上调单核细胞趋化蛋白1表达在介导血管紧张素Ⅱ促进大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的分子机制及生物学功能。方法按指定时间,给予不同浓度AngⅡ处理原代培养大鼠VSMC,运用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)研究AngⅡ对平滑肌细胞增殖的影响,并用MCP-1受体抑制剂(RS102895)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)拮抗剂氯沙坦预处理细胞,观察MCP-1是否参与AngⅡ的促增殖作用;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测MCP-1mRNA和培养基中的MCP-1蛋白含量,并用氯沙坦干预,观察氯沙坦是否具有抗炎作用;免疫印迹法观察不同时间细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径对MCP-1表达的影响。结果 AngⅡ(1μmol/L)作用48h明显促进平滑肌细胞增殖,MCP-1受体抑制剂(RS102895)能抵消该作用。在一定时间内,不同浓度的AngⅡ均上调MCP-1mRNA和蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01),氯沙坦能抵消AngⅡ的上调作用(均P<0.05)。与AngⅡ(1μmol/L)单独孵育12h比较,AngⅡ(1μmol/L)+氯沙坦(10μmol/L)明显抑制SAPK/JNK(0.581±0.037比1.143±0.012)、ERK1/2激酶(0.062±0.020比0.342±0.098,均P<0.05)活化,差异均有统计学意义。此外,SAPK/JNK激酶抑制剂(SP600125)和ERK1/2激酶抑制剂(U0126)分别抑制SAPK/JNK和ERK1/2激酶活性并下调MCP-1表达(P<0.05或P<0.01)。结论 AngⅡ通过AT1R,活化SAPK/JNK和ERK1/2激酶途径上调大鼠VSMCMCP-1的表达,并且MCP-1在一定程度上介导AngⅡ的促平滑肌细胞增殖。     

L-精氨酸和牛磺酸对同型半胱氨酸诱导平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的　观察Ｌ－精氨酸和牛磺酸对同型半胱氨酸（ＨＣＹ）诱导的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响。方法采用同位素技术测定ＶＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ参入。结果ＨＣＹ可促进ＶＳＭＣ增殖。Ｌ－精氨酸及牛磺酸均可呈剂量依赖性抑制ＨＣＹ诱导的ＶＳＭＣ增殖,且合用Ｌ－精氨酸和牛磺酸的对ＶＳＭＣ增殖的抑制作用明显强于单纯应用Ｌ－精氨酸或牛磺酸组。结论Ｌ－精氨酸和牛磺酸均可抑制ＨＣＹ诱导的ＶＳＭＣ增殖。     

苯扎贝特对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖和小凹蛋白1表达的影响

目的 观察苯扎贝特对血小板源生长因子诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及小凹蛋白1表达的影响并探讨其机制.方法 体外植块贴壁法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,噻唑兰比色法检测各组细胞增殖情况,Western Blotting法观察各组小凹蛋白1的表达情况.结果 不同浓度的苯扎贝特对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖均有一定的抑制作用,随浓度增加,其抑制作用增强(P<0.01).血小板源生长因子干预组小凹蛋白1的表达较对照组明显降低(P<0.01),而用不同浓度的苯扎贝特干预后小凹蛋白1的表达明显升高(P<0.01),且随着苯扎贝特浓度增加,小凹蛋白1的表述明显增加.结论 苯扎贝特抑制血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的同时可以上调小凹蛋白1的表述.     

槲皮素对血小板衍生生长因子诱导的血管平滑肌细胞酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响

目的：研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素（quercetin）对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的血管平滑肌细胞（SMC）酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。方法：采用噻唑蓝比色法,流式细胞术分析槲皮素对PDGF诱导的SMC增殖的影响,应用免疫印迹法分析观察槲皮素对PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白表达的影响。结果：与对照组相比,槲皮素处理组可显著地抑制PDGF诱导的SMC增殖及酪氨酸磷酸化蛋白的表达,尤以酪氨酸磷酸化蛋白分子量为85～180kD明显。结论：槲皮素可显著地抑制PDGF诱导的SMC酪氨酸磷酸化蛋白的表达。     

三七总皂甙对血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的探讨三七总皂甙对血小板源生长因子刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响及其可能机制。方法运用血小板源生长因子刺激兔体外血管平滑肌细胞增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术及免疫细胞化学法观察三七总皂甙对其增殖活性、细胞周期及c-myc蛋白表达的影响。结果血小板源生长因子显著刺激血管平滑肌细胞增殖,三七总皂甙呈浓度依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖,对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖亦具有显著抑制作用;三七总皂甙作用下血管平滑肌细胞处于G1/G0期的细胞数增多,而G2/S期的细胞数显著减少,c-myc蛋白的表达亦降低。结论三七总皂甙对基础状态下及血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖均具有显著抑制作用,部分机制与其阻滞血管平滑肌细胞G1/G0期向S期转化以及下调c-myc基因表达有关。     

Wild-type LRP6 inhibits, whereas atherosclerosis-linked LRP6R611C increases PDGF-dependent vascular smooth muscle cell proliferation

Vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation is an important event in atherosclerosis and other vasculopathies. PDGF signaling is a key mediator of SMC proliferation, but the mechanisms that control its activity remain unclear. We previously identified a mutation in LDL receptor-related protein 6 (LRP6), LRP6(R611C), that causes early atherosclerosis. Examination of human atherosclerotic coronary arteries showed markedly increased expression of LRP6 and colocalization with PDGF receptor β (PDGFR-β). Further investigation showed that wild-type LRP6 inhibits but LRP6(R611C) promotes VSMC proliferation in response to PDGF. We found that wild-type LRP6 forms a complex with PDGFR-β and enhances its lysosomal degradation, functions that are severely impaired in LRP6(R611C). Further, we observed that wild-type and mutant LRP6 regulate cell-cycle activity by triggering differential effects on PDGF-dependent pathways. These findings implicate LRP6 as a critical modulator of PDGF-dependent regulation of cell cycle in smooth muscle and indicate that loss of this function contributes to development of early atherosclerosis in humans.     

Hammerhead ribozyme targeting human platelet-derived growth factor A-chain mRNA inhibited the proliferation of human vascular smooth muscle cells

Platelet-derived growth factor (PDGF) A-chain contributes to the pathogenesis of cardiovascular proliferative diseases, such as hypertensive vascular disease, atherosclerosis, and re-stenosis of an artery after angioplasty. To develop a ribozyme against human PDGF A-chain mRNA as a gene therapy for human arterial proliferative diseases, we designed and synthesized a 38-base hammerhead ribozyme to cleave human PDGF A-chain mRNA at the GUC sequence at nucleotide 591. In the presence of MgCl(2), synthetic hammerhead ribozyme to human PDGF A-chain mRNA cleaved the synthetic target RNA to two RNA fragments at a predicted size. Doses of 0.01-1.0 microM hammerhead ribozyme to human PDGF A-chain mRNA significantly inhibited angiotensin II (Ang II) and transforming growth factor (TGF)-beta(1)-induced DNA synthesis in vascular smooth muscle cells (VSMC) from human in a dose-dependent manner. One micromolor of hammerhead ribozyme to human PDGF A-chain mRNA significantly inhibited Ang II-induced PDGF A-chain mRNA and PDGF-AA protein expressions in VSMC from humans. These results indicate that the designed hammerhead ribozyme to human PDGF A-chain mRNA effectively inhibited growth of human VSMC by cleaving the PDGF A-chain mRNA and inhibiting the PDGF-AA protein expression in human VSMC. This suggests that the designed hammerhead ribozyme to PDGF A-chain mRNA is a feasible gene therapy for treating arterial proliferative diseases.     

Novel mechanisms of the antiproliferative effects of amlodipine in vascular smooth muscle cells from spontaneously hypertensive rats.

The calcium channel blocker amlodipine continues to be of interest due to its potential proven ability to hinder the progression of atherosclerosis and reduce the number of clinical ischemic events. Vascular smooth muscle cells (VSMC) from spontaneously hypertensive rats (SHR) are useful in the study of atherosclerosis because they show exaggerated growth with production of angiotensin II (Ang II) by conversion to the synthetic phenotype. To clarify mechanisms of the antiproliferative effects of amlodipine, we evaluated effects of the expression of growth factors, the changes in phenotype, and the proliferation of VSMC from SHR. Amlodipine significantly inhibited basal DNA synthesis and proliferation of VSMC from SHR. Amlodipine also inhibited expression of platelet-derived growth factor (PDGF) A-chain, transforming growth factor beta1 (TGF-beta1) and basic fibroblast growth factor (bFGF) mRNAs in VSMC from SHR. Decreases in levels of PDGF A-chain and bFGF mRNAs in VSMC from SHR were greater with amlodipine than with nifedipine. Amlodipine significantly inhibited expression of the synthetic phenotype markers osteopontin and matrix Gla mRNAs, indicating that it inhibited the exaggerated growth of VSMC from SHR and suppressed the change from the contractile phenotype to the synthetic phenotype. Thus, amlodipine may be a beneficial therapeutic agent for patients with hypertensive vascular diseases.     

同型半胱氨酸促血管平滑肌细胞增殖的机制

目的　研究同型半胱氨酸 (HCY)对血管平滑肌细胞 (VSMC)细胞周期、细胞周期素和 P2 7蛋白表达的影响。方法　用流式细胞技术测定细胞周期、细胞周期素和 P2 7蛋白表达量。结果　 HCY促进 VSMC增殖和细胞 S期合成 ,同时使细胞周期素 D、E、A表达明显增加 ,P2 7蛋白表达下降。结论　 HCY促进 VSMC增殖和细胞 S期合成可能是通过增加细胞周期素 D、E、A的表达 ,抑制 VSMC中 P2 7蛋白的表达来实现的。