γδ^＋T细胞在抗感染免疫中的作用

γδ^ T细胞是一个重要的T细胞亚群，近年研究表明在各种感染性疾病中，γδ^ T细胞数明显增加，尤其在消除癌细胞、细菌、病毒、寄生虫等感染免疫方面起重要作用，本文就γδ^ T细胞在抗感染性疾病研究进展包括γδ^ T细胞的组织分布、抗原特性和功能等综述如下。     

γδT细胞在感染性疾病中的研究进展

T细胞免疫应答在感染性疾病中发挥着抗感染和清除外来病原微生物的重要作用.根据TCR两条肽链构成的不同,可将T细胞分为αβT细胞和γδT细胞,αβT细胞在获得性免疫应答中发挥重要作用;而γδT细胞由于其分布特点和应答的非MHC限制性,在固有性免疫中发挥着独特的作用.随着研究的深入,其在获得性免疫应答中的作用也逐渐被揭示.γδT细胞是具有原始受体的第一线防御细胞和进程效应细胞,它在微生物感染免疫中的作用日益受到重视.我们就γδT细胞在细菌,病毒和寄生虫等病原体感染性疾病的研究进展做一综述.     

产生IL-17的γδT细胞概述

IL-17是一类重要的促炎症因子,近年由于Th17细胞这种以产生IL-17为主的CD4+αβT亚群的发现而备受关注。然而大量研究发现γδT细胞也是IL-17的重要来源。在多种疾病的小鼠模型中,γδT细胞的某些亚群能通过早期产生大量IL-17,在感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等的发生发展中扮演重要角色。有趣的是,γδT细胞经历了异于Th17细胞的胸腺内发育发育过程,未经胸腺内抗原致敏的γδT细胞即能分化为产生IL-17的功能亚群。最近有研究证实人类的γδT细胞也能产生的IL-17。下面就产生IL-17的γδT细胞的特征,发育及生物学作用等方面作一简短综述。     

急性髓细胞白血病患者外周血淋巴细胞亚群的特征及临床意义

目的通过检测急性髓细胞白血病患者外周血各淋巴细胞亚群的分布,探讨该类患者免疫功能状况。方法通过流式细胞术检测健康对照组(n=20)、急性髓细胞白血病初发患者(n=31)及完全缓解期患者(n=31)外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞、TCRγδ+T细胞、CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、CD16+CD56+NK细胞比例;通过细胞杀伤实验分析NK细胞和γδT细胞的杀伤活性以及与Treg的关系。结果与对照组相比,初发白血病患者和完全缓解患者外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞比例无明显差异,但CD4+CD25+Treg比例明显增高,TCRγδ+T细胞和CD16+CD56+NK细胞比例明显下降。初发病患者NK细胞和γδT细胞具有杀伤活性,但Treg能明显抑制其杀伤活性。结论急性髓细胞白血病患者外周血γδT和NK细胞虽具有杀伤功能,但比例明显下降,Treg对其杀伤功能具有抑制作用。     

磷酸脂配体体外激活人外周血γδT细胞的研究

人γδT细胞可识别非肽类的磷酸脂分子。本研究用非肽类磷酸脂配体MEP在体外选择性扩增人外周血γδT细胞。MEP激活的PBMC中主要为CD3+ CD45RO+ γδTCR+ 细胞群。激活的γδT细胞可分泌IFN γ ,但不分泌IL 4,因此激活的γδT细胞可能分泌Thl型细胞因子。MEP激活γδT细胞需要有辅佐细胞的存在 ,但不需要抗原的处理和递呈 ,并且激活的γδT细胞对多种肿瘤细胞具有非MHC限制性的细胞毒作用。以上结果提示MEP可有效激活γδT细胞 ,使其表现出独特的免疫学特征和生物学功能。     

人T细胞抗原受体基因的命名

<正>人T细胞抗原受体(TCR)是由二硫键连接的二条多肽链(αβ或γδ)经组成的异二聚体,属lg基因超家族,每条链具有与lg分子相似的V区、D区(仅对β和δ链)J区和C区.根据TCR的不同,可将T细胞分为αβ~+T细胞和γδ~+T细胞.人外周血中95%的T细胞为αβ~+TCR,其配体是MHC-抗原肽复合物;而γδ~+TCR一般仅表达于CD4~-CD8T细胞,这些γδ~+T细胞识别的抗原结构目前尚不清楚,但在机体抗感染免疫和抗肿瘤免疫中发挥着重要的作用.从胸腺内的发育过程来看,αβ~+T细胞和γδ~+T细胞可能来源于同一祖先,而且γδTCR的表达要早于αβTCR,分别相当于妊娠第九周和第十周.     

神经酰胺在γδ+T细胞活化及活化诱导的细胞死亡信号传导过程中的作用

目的研究神经酰胺在γδ+T细胞活化及活化诱导的细胞死亡信号传导过程中的作用。方法用结核杆菌耐热性多肽抗原(Mtb)刺激正常人PBMC,并用磁珠阳性分选 法获得γδ+T细胞。通过MTT试验观察Mtb、神经酰胺、鞘磷脂酶以及FumonisinB1对γδ+T细胞的活化作用;FACS检测其对γδ+T细胞活化诱导的细胞死亡作用。结果Mtb刺激获得的γδ+T细胞可达73％,磁珠分选后可高达98％;高浓度Mtb、神经酰胺及鞘磷脂酶能抑制γδ+T细胞的活化增殖,而出现活化诱导的细胞死亡,FumonisinB1则对γδ+T细胞的活化增殖及活化诱导的细胞死亡无明显影 响。结论Mtb可有效地调节γδ+T细胞活化及活化诱导的细胞死亡,水解鞘磷脂产生的神经酰胺参与了γδ+T细胞活化及活化诱导的细胞死亡信号传导。     

多色流式细胞术检测人外周血BCG特异性效应型记忆γδT细胞的表型特征

目的检测卡介苗(BCG)刺激后,PPD+正常人外周血中分泌IFN-γ的TCRγδ亚群及其表型特征。方法分离PPD+正常人外周血单个核细胞(PBMCs),用多色流式细胞术检测TCRγδ亚群;BCG刺激PBMCs后检测γδT细胞IFN-γ分泌水平,并分析BCG特异性γδT细胞表型特征。结果依据PBMCs中TCRγδ和δ2的表达,可将γδT细胞分为3个亚群,即δ2high、δ2low和TCRγδ中非δ2T细胞(non-δ2-γδT)细胞。其中,δ2high和δ2lowT细胞几乎全部(>98%)为CD45RO+,而non-δ2-γδT细胞中只有少部分表达CD45RO,其余大部分不表达CD45RO。δ2high和δ2lowT细胞表型类似,主要为CD45RO+CD62L-CD27-,而non-δ2CD45RO+细胞主要为CD62L-CD27+,non-δ2CD45RO-细胞几乎全部为CD62L-CD27-。BCG刺激PBMCs后,可诱导γδT细胞分泌IFN-γ,且主要为δ2high和δ2low细胞,而non-δ2-γδT几乎不产生IFN-γ。进一步分析BCG特异性γδT细胞的表型特征,结果表明,δ2high-CD45RO+IFN-γ+和δ2lowCD45RO+IFN-γ+细胞主要为CD62L-CD27-和CD62L-CD27+,为效应型记忆细胞。结论 BCG刺激PPD+正常人外周血PBMCs后,主要诱导δ2T细胞分泌IFN-γ,且该细胞表现出CD45RO+CD62L-效应型记忆细胞特征,可能在预防结核早期感染中发挥重要作用。     

人γδT细胞表型与功能特征的探讨

目的比较观察人外周血PBMCs和CBMCs中αβT和γδT细胞的表型与功能特征,进一步了解γδT细胞在免疫应答中的作用。方法分离正常人PBMCs及脐带血CBMCs,检测表面分子的表达。PMA+Ionomycin刺激PBMCs或CBMCs后,利用流式细胞术(FCM)检测其细胞因子的产生以及初始/记忆细胞标记的表达。结果与αβT细胞相比,γδT细胞高表达CD45RO,低表达CD25和CCR7;与CBMCs中γδT细胞相比,PBMCs中γδT细胞表达CD45RO升高,CD45RA与CD25降低。细胞因子表达的结果表明,与αβT细胞相比,γδT细胞分泌大量IFN-γ和TNF-α,较少分泌IL-2,且IFN-γ+细胞主要为CD45RA-CD62L-CCR7-;与PBMCs中γδT细胞不同,体外刺激CBMCs中γδT细胞后,表达IFN-γ数量较低,且IFN-γ+细胞主要为CD45RA+CD62L-CCR7-/+。结论PBMCs与CBMCs中αβT和γδT细胞的表型与功能均存在差别,记忆性γδT细胞的增加可能与其活化和免疫应答的作用相关。     

C57BL/6小鼠γδT细胞的组织器官分布和功能特点

目的 比较C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结中γδT细胞占所分离的淋巴细胞及其CD3+T细胞的百分比、表型和功能的特点.方法 分离正常C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结的淋巴细胞,应用细胞表面分子染色的方法,使用流式细胞仪观察γδT细胞占从不同组织分离的淋巴细胞及CD3+T细胞的百分比及其表型的特点.细胞经PMA和离子霉素刺激后,应用细胞内细胞因子染色的方法,通过流式细胞仪观察γδT细胞产生IFN-γ、IL-4、IL-9和IL-17细胞因子的情况.结果 γδT细胞占分离淋巴细胞中的百分含量在肝脏明显高于肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结(P＜0.05),而γδT细胞在肠系膜淋巴结CD3+T细胞的百分含量要显著的低于其他脏器(P＜0.05).不同组织器官中γδT细胞以CD4-CD8-表型为主,还存在少量CD8+ γδT细胞.在肠系膜淋巴结γδT细胞中CD4+细胞的量明显高于其他器官,且明显可见一群CD4+ CD8+细胞.不同组织中γδT细胞中IL-17+的细胞量要明显高于IFN-γ+和IL-4+细胞.γδT细胞基本不分泌IL-9.肺脏的γδT细胞分泌细胞因子的能力最强,其IL-17+细胞的量达到(26.6±12.1)％.IFN-γ+细胞的量在肝脏和肺脏中较高,分别为(1.36±0.37)％和(1.6±0.7)％.结论 C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结γδT细胞的含量、表型和功能方面存在显著性差异.     

γδT、CD4 +CD25 +T细胞在HIV感染者/AIDS患者外周血的表达及其相关性研究

目的:了解γδT细胞、CD4 +CD25 +调节性T细胞(Treg)在HIV感染者/AIDS患者外周血中的表达水平,探讨γδT细胞、CD4 +CD25 + Treg在HIV感染/AIDS病情进展中的相关性以及可能的作用机制。 方法:采用免疫荧光单克隆抗体标记技术...     

γδ T细胞诱导与分化的初步研究-Ⅰ

目的:探讨在异戊烯焦磷酸(IPP)作用下,健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞的增殖和亚型变化,以期获得足够的具有不同特征的γδT细胞用于后续的实验研究。方法:流式细胞术分析经IPP诱导的单个核细胞表面分子的表达状态,评估其γδT细胞的比例、亚型和表型格局。结果:健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞数量虽占较低比例,但两者的γδT细胞存在显著异质性。健康人外周血γδT细胞主要以Vγ9Vδ2 TCR亚群为主;初始分选的外周血单个核细胞中Vγ9Vδ2T细胞主要为中央记忆型(CD27+CD45RA-)和效应记忆型(CD27-CD45RA-);IPP诱导后,γδT细胞显著扩增,Vγ9Vδ2 T细胞亚群转变为以效应记忆型为主,并高表达HLA-DR和B7分子。而新生儿脐带血来源的γδT细胞却呈现出较为复杂的亚群异质性,其Vγ9Vδ2 T细胞主要为CD27+CD45RA+的幼稚型细胞;经IPP诱导14天后,γδT细胞获得扩增(比例增高)且Vγ9Vδ2 T细胞趋向中央记忆型和效应记忆型分化,但仍以幼稚型为主。结论:健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞在数量、亚群诸方面存在差异;IPP具有诱导和扩增外周血γδT细胞的生物学作用,而脐带血来源的γδT细胞还需相关细胞因子的协同作用,才能呈现出其分化成熟为可用于理论研究和临床实验的效应记忆型γδT细胞的潜能。关于其具有的免疫调节和效应功能将另文报道。     

IL-21增强γδT细胞体外抗肿瘤活性的实验研究

探讨IL-21对人外周血γδT细胞抗肿瘤活性的影响。分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),分别在有或无IL-21参与的条件下,加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)、IL-2或IL-15的RPMI 1640完全培养基中诱导培养γδT细胞。在培养的第10天用台盼蓝染色计数细胞;采用流式细胞术检测各组γδT细胞的纯度及γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达;用CCK-8试剂盒检测γδT细胞对K562细胞的体外杀伤效应。结果显示,不同细胞因子组诱导10d后γδT细胞纯度均达到70%以上,IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和IL-2+IL-15+IL-21组与IL-2、IL-15组相比,细胞纯度和扩增倍数没有显著性变化;IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和IL-2+IL-15+IL-21组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达及对K562细胞的杀伤活性均显著高于IL-2、IL-15单独组。以上结果表明,IL-21可通过上调γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达增强其抗肿瘤活性。     

γδT细胞与病毒免疫

γδT细胞是指在T细胞受体上表达γ和δ链的一类T细胞亚群，已发现其具有抗肿瘤、抗感染、免疫调节等多种生物学活性。在对病毒感染的免疫中发挥重要的免疫监视作用。本文主要从病毒感染后机体内γδT细胞变化，γδT细胞抗病毒的机制，基于γδT细胞免疫的研究和临床应用等几个方面进行综述。     

结核性胸膜炎患者外周血和胸水γδT和Th17细胞的频率变化及其意义

目的通过检测结核性胸膜炎患者抗结核治疗前后胸水和外周血中γδT细胞和Th17细胞的比例,探讨2群细胞在该病的发生及治疗过程中的变化及意义。方法选取结核性胸膜炎患者30例,分别采集患者抗结核治疗前和治疗后(7～10 d)的胸水及外周血,分离单个核细胞,采用流式细胞术检测γδT和Th17细胞的比例,同时设立健康对照组。结果与健康对照组相比,抗结核治疗前结核性胸膜炎患者外周血中CD3+T细胞比例显著降低(P<0.05),而γδT细胞的比例显著升高(P<0.05),表达IFN-γ的CD3+T和γδT细胞比例均显著升高(P<0.01);患者胸水中的CD3+T和γδT细胞比例显著高于患者外周血(P<0.05),胞内IFN-γ水平与2群细胞变化一致。抗结核治疗后患者外周血和胸水中CD3+T细胞比例较治疗前升高而γδT细胞比例下降,胞内IFN-γ的水平较治疗前显著降低(P<0.05)。抗结核治疗前结核性胸膜炎患者外周血中CD4+T细胞比例较健康对照组显著降低(P<0.01)而Th17细胞比例显著升高(P<0.01);患者胸水中CD4+T细胞显著高于外周血(P<0.05)而Th17细胞比例显著降低(P<0.05)。抗结核治疗后患者胸水中CD4+T和Th17细胞比例较治疗前升高但无显著性差异;IL-17+T与Th17细胞之间无显著相关性,而CD4+RORγt+T与Th17细胞之间存在显著相关性(r=0.564,P<0.05)。结论γδT和Th17细胞在抗结核治疗前后具有显著差异提示2群细胞可能在结核性胸膜炎的发病和治疗中发挥重要作用。     

γδT细胞在疾病中的作用

γδT细胞是皮肤表皮内淋巴细胞和粘膜组织上皮内淋巴细胞的主要成分之一,为非特异性免疫细胞。活化的γδT细胞具有较强的杀伤活性,具有抗感染、抗肿瘤作用;γδT细胞还可以维持免疫耐受,调节免疫应签,异常可导致自身免疫性疾病的发生。因此尽管γδT细胞在人类庞大复杂的免疫体系中数量较少,但却具有不可替代的重要功能。     

γδT淋巴细胞产生的抗肿瘤作用相关淋巴因子

目的γδT细胞表达Vγ9Vδ2 TCR,占外周血CD3+T淋巴细胞的1%～10%,大量分布于粘膜相关淋巴组织,是T细胞的一个特殊亚群。其免疫作用介于固有免疫和适应性免疫之间,是MHC非限制性的,具有一定的非特异性杀伤肿瘤细胞的作用,并且有广泛的抗瘤谱。越来越多的对γδT细胞高效抗瘤活性的研究可能使其成为一种非常重要的抗肿瘤免疫制剂。γδT细胞被激活后可产生多种淋巴因子,并增强其抗瘤作用。本文就γδT细胞在抗肿瘤过程中产生的淋巴因子及其作用作一综述。     

蛋白激酶Cθ在γδT细胞表达L-选择素中的调控作用

目的 探讨蛋白激酶Cθ(PKCθ)信号转导途径在γδT细胞表达L-选择素(CD62L)中的凋控作用.方法 用结核分枝杆菌抗原(Mtb-Ag)刺激人外周血单个核细胞(PBMC)并培养6～8 d,获得富含γδT细胞的结核分枝杆菌活化T细胞(MtbAT),作为γδT细胞来源,分别加佛波醇酯(PMA)、PMA+离子霉素(IMN)培养3、6、12、24 h,或用培养8 d的MtbAT细胞分别加入Mtb-Ag、Rot-tlerin+Mtb-Ag、PMA、Rottlerin+PMA刺激4 h,收集细胞用荧光抗体染色后,流式细胞术(FCM)检测CD62L在γδT细胞表而的表达.结果 体外激活培养6～8 d的γδT细胞表面CD62L的表达率为75.0%～87.0%.PMA刺激γδT细胞3～12 h时CD62L表达逐渐下调,表达率为42.3%～23.5%;但在刺激后24 h时,又明显回升至53.2%.而PMA+IMN刺激3、6 h时,γδT细胞CD62L表达也下调,表达率分别为52.1%、39.3%;但在刺激12 h和24 h时CD62L表达率分别为52.9%和35.3%.在PMA刺激γδT细胞同时加入Rottlerin,则CD62L的表达率(47.9%)明显高于PMA单独刺激组(31.8%);MtbAT用Mtb-Ag再刺激4 h后,γδT细胞CD62L的表达率由70.0%降为54.8%,而在Mtb-Ag再刺激时加入Rottlerin,则CD62L表达率增加到63.1%.结论 γδT细胞在PMA或Mtb-Ag刺激后CD62L的表达下调可被PKCθ特异性抑制剂部分阻断,表明CD62L在γδT细胞表面的表达可能与PKCθ信号转导途径的调控相火.     

γδT细胞在类风湿关节炎发病机制中的研究进展

类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种临床常见的以侵犯关节滑膜、软骨及骨骼肌肉等组织，并以关节疼痛、肿胀和畸变为主要临床表现的全身性难治性自身免疫病。其发病率在不同性别、年龄、地区及种族之间有差别。RA的发病原因与机制至今仍不清楚，现多认为可能与感染、遗传及内分泌等因素有关，并可最后归结为个体免疫功能的异常。大量研究证实，自身反应性T细胞在RA的发病机制中起重要作用。根据T细胞抗原受体（Tcellreceptor，TCR）双肽链的不同构成，可以将T细胞分为TCRαβT细胞和TCRγδT细胞。TCRαβT细胞在RA发病机制中的作用已有较深入的研究，然而对于TCRγδT细胞的研究只有十多年的历史。随着研究的深入，人们认为γδT细胞是一种自身反应性细胞，在RA发病机制中发挥着重要作用，但也有持异议者。本文就γδT细胞在RA发病机制中的研究进展作一综述。     

小鼠脾脏来源的调节性表型γδT细胞的存在和体外诱导

目的：研究初始γδT细胞是否存在具有调节细胞表型的亚群,同时是否能够像CD4^＋CD25^-T细胞一样可以在体外诱导产生具有调节表型的γδT细胞。方法：采用流式分选或磁珠分选的方法分离纯化脾淋巴细胞中γδT细胞,通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、实时定量PCR（Real-time PCR）和免疫荧光染色分析初始的γδT细胞以及TGFβ-（5ng/ml）诱导后的γδT细胞中Foxp3及部分调节性T细胞表面分子和细胞因子的表达情况。结果：与CD4^＋CD25^＋T细胞相比,初始的γδT细胞Foxp3表达量很低;活化的γδT细胞经过TGFβ-诱导后Foxp3表达量明显增加,同时与免疫调节相关的表面分子如GITR、CTLA-4和细胞因子TGFβ-、IL-10的表达量也相应增加,IFNγ-的表达有所降低。结论：初始的γδT细胞低表达Foxp3,在体外可经TGFβ-诱导产生具有调节性T细胞表型的亚群。