荧光染色技术在艾滋病患者活检标本病原学诊断中的应用

目的探讨快速真菌与抗酸分枝杆菌荧光技术在艾滋病患者活检标本病原体诊断中的应用价值及意义。方法选取艾滋病患者500例活检标本,采用快速真菌荧光染色及六胺银、PAS染色对300例可疑真菌感染的活检标本进行检测,采用抗酸分枝杆菌荧光染色及萋尼抗酸染色对200例可疑结核的活检标本进行检测,并对检测结果进行对比。结果（1）快速真菌荧光镜检法检出阳性205例（阳性率68.3%）,六胺银染色法检出阳性209例（阳性率69.7%）,PAS染色法检出阳性97例（阳性率39.5%）,快速真菌荧光染色与六胺银染色检出阳性率差异无统计学意义（P>0.05),但高于PAS染色法;（2）抗酸分枝杆菌荧光染色检出阳性179例（阳性率89.5%）,萋尼抗酸染色法检出阳性117例（阳性率58.5%）,抗酸分枝杆菌荧光染色阳性率高于萋尼抗酸染色法,两者差异有统计学意义（P<0.01）;（3）荧光染色比常规特殊染色操作更快速、简便、显示更清晰。结论艾滋病患者并发机会性感染病原体种类多样,普通的特殊染色阳性率不高并且费时费力,而快速真菌及抗酸荧光染色特别是抗酸荧光染色的阳性率明显增高,为活检组织诊断真菌及结核分枝杆菌感染提供一种快速、准确、经济、对比更清晰的染色方法,能够为真菌感染及结核病患者诊断提供可靠的指导依据,值得在病原体诊断工作中广泛使用。     

霉菌性阴道炎两种特殊染色诊断法的比较

目的对两种不同的真菌染色法在念珠菌阴道炎真菌染色的方法和效果方面予以比较。方法对疑似念珠菌阴道炎患者阴道脱落上皮细胞涂片50张,随机抽取25张作六胺银染色,另25张做过碘酸雪夫(pas法)染色。结果六胺银染色方法显示:芽生孢子和假菌丝呈黑褐色,背景橙黄色,阳性率为76%;过碘酸雪夫染色法显示:芽生孢子和假菌丝红色,背景紫蓝色,阳性率为80%。结论过碘酸雪夫染色法简便易行,着色鲜亮,试剂配制简单,成本较低,真菌染色阳性率较高,是诊断念珠菌阴道炎非常好的实验方法,值得推广。     

高碘酸作为氧化剂在六胺银染色中的应用

真菌感染是临床上较常见的感染性疾病,近年来,随着抗生素、免疫抑制剂和激素等的广泛应用,真菌感染有不断上升的趋势,因而快速准确检出真菌对明确诊断、指导临床用药治疗及改善预后有着重要意义。对于石蜡组织切片内的真菌,常规苏木精-伊红(HE)染色着色较浅或者不着色,因此观察真菌比较困难,特别是真菌数量较少、菌体较小的时候更难辨认,所以我们采取特殊染色的方式对真菌进行观察和诊断。六胺银染色法和过碘酸雪夫染色(PAS)法均对真菌有良好的显色效果,而六胺银染色比PAS染色的效果更敏感,对各种霉菌均着色,使菌丝和孢子呈明显的黑褐色,颜色形态对比清晰,在镜下极易辨认,也有利于长久保存。六胺银染色法和PAS染色法中第一步也是关键一步是使用氧化剂将真菌细胞壁内的多糖氧化成醛基,这决定了染色效果的好坏。目前临床上常用的氧化剂是5%铬酸水溶液,铬酸的配制需要用到三氧化铬,然而三氧化铬为高毒致癌物,危险性极大,吸入后可引起急性呼吸道刺激症状,严重者甚至发生化学性肺炎;口服则刺激和腐蚀消化道,引起恶心、呕吐、腹痛、血便等,重者出现呼吸困难、紫绀、休克、肝损害及急性肾功能衰竭等;长期接触三氧化铬会接触性皮炎、铬溃疡、鼻炎、鼻中隔穿孔及呼吸道炎症等。此外,三氧化铬作为助燃物极易引起燃爆,并且对水体容易造成污染,危害环境[1]。为了寻求更好的氧化剂替代,故本实验探索将高碘酸作为氧化剂使用时的实验条件。     

真菌荧光染色在侵袭性真菌感染病理学诊断中的应用研究

目的：评估真菌荧光染色法在侵袭性真菌感染（IFIs）石蜡包埋组织病理切片中的应用价值。方法：经真菌培养确诊，同时行组织病理学检查的55例真菌感染患者，其中马尔尼菲篮状菌感染30例，取其石蜡包埋切片分别行过碘酸—希夫（PAS）染色、六胺银（GMS）染色及真菌荧光染色，采用McNemar检验对3种染色方法的检出率进行比较分析。结果：55例样本中，真菌荧光染色检出43例（78.2%）,GMS染色检出37例（67.3%）,PAS染色检出23例（41.8%），真菌荧光染色检出率显著高于GMS染色及PAS染色（P<0.01）;30例马尔尼菲篮状菌感染中，真菌荧光染色检出21例（70.0%）,GMS染色检出14例（46.7%）,PAS染色检出6例（20.0%），真菌荧光染色检出率显著高于GMS染色及PAS染色（P<0.01）。结论:真菌荧光染色在IFIs真菌病理学诊断中检出率高于PAS染色和GMS染色，是组织病理学诊断IFIs的快速、高效的方法。     

在宫颈液基细胞学中检测念珠菌的染色方法比较

目的比较在宫颈液基细胞学（TCT）中检测阴道念珠菌的三种病理学染色方法。方法采用巴氏染色、PAS染色、六胺银染色对本院21例念珠菌性阴道炎的宫颈液基薄层细胞片进行染色对比。结果上述三种方法均可显示宫颈液基薄层细胞片中的念珠菌,其中巴氏染色中念珠菌呈现隐约的嗜伊红色到灰棕色,较难辨别;PAS染色法显示的念珠菌呈紫红色;六胺银染色显示的念珠菌呈黑褐色,在镜下极易辨认。结论六胺银法是显示宫颈液基薄层细胞片中阴道念珠菌的最佳方法。     

几种显示新型隐球菌的组织病理学染色方法的应用比较

目的 比较几种显示新型隐球菌的组织病理学染色方法.方法 采用苏木精-伊红染色(HE)法、PAS染色法、阿尔辛蓝染色法和六胺银染色法对我院尸体剖验的7例新型隐球菌病病例的肺、脑组织进行了染色.结果 上述方法均町显示肺、脑组织中的新型隐球菌,其中在HE染色中,新型隐球菌旱现隐约的淡粉红,轮廓不很明显,较难发现;阿尔辛蓝法显爪的新型隐球菌夹膜呈蓝色;PAS法显示的新型隐球菌呈紫红色;六胺银法显示的新型隐球菌呈黑褐色,菌壁四周深黑,中间为空白区,镜下极易辨认.结论 六胺银法是显示新型隐球菌效果最好的方法.     

六胺银神经纤维染色法的探讨

本文报道以六胺银替代氨银液的六胺银染神经纤维的新方法。在5μm的薄切片上神经纤维呈黑色,染色鲜艳,层次分明,对比度高,背景清晰,比氨银溶液较稳定。     

肾基底膜六胺银染色方法的改进

目的　改进基底膜染色效果 ,提高肾小球疾病的正确诊断水平。方法　运用改良六胺银染色方法。结果　以高温低浓度下之切片 ,肾基底膜结构层次清晰 ,染色效果最好。结论　本方法染色效果优于传统的六胺银染色法 ,改进了基底膜染色效果 ,值得推广应用     

一种新型阳性对照在病理特殊染色中的尝试

目的探索避免用归档蜡块做病理特殊染色阳性对照以节约资源，同时也能获得可靠染色结果的方法。方法在过碘酸希夫染色和六胺银染色中，用酵母菌和蛋清混合物制成蜡块，作为显示真菌的特殊染色的新型阳性对照。结果新型阳性对照镜下真菌分布合理，染色鲜艳，背景干净清晰。结论新型阳性对照具有来源广泛，制作快速、简便，不消耗归档蜡块等优点，适合作为病理真菌染色的阳性对照。     

自控微波技术在肾穿刺活检六胺银染色中的应用

【目的】应用MICROMED自控微波仪以缩短六胺银染色法显示肾小球毛细血管或肾小球囊壁基底膜的染色时间 ,提高染色质量。【方法】对 46例肾穿切片染色实验分别采用自控微波仪和家用微波炉的处理作对照 ,以此促进六胺银染色 ,显示肾小球毛细血管或肾小球囊壁基底膜。【结果】应用家用微波炉加热的在 5次实验中 ,每次都出现六胺银染液变黑 ,所有的六胺银染液均不能重复使用 ,其中 2 9例有不同程度的银沉淀和银膜背景 ,优质片为 37% ( 17/ 4 6 )。应用自控微波仪对上述 46例肾穿的连续切片染色的实验中 ,均没出现银沉淀或银膜背景 ,优质片为 10 0 % ( 46 / 4 6 )。六胺银工作液染色常规需用 90min缩短至 6min。【结论】应用自控微波处理仪促进肾穿活检快速基底膜染色 ,较家用微波炉不仅可以大大加快染色速度 ,而且节省试剂 ,染色质量更加稳定可靠 ,是目前最为理想的一种快速染色方法。     

病理组织学证实的深部皮炎芽生菌病一例

一例深部霉菌感染,根据真菌在组织内的形态、病理改变、组织化学反应及荧光显微镜检查,可确诊为皮炎芽生菌病。镜下见异物巨细胞型肉芽肿形成。异物巨细胞内、外均有大量真菌细胞,直径8～15μm,双层壁,有1～4个核,单个出芽,牙颈粗短。PAS梁色及Grocott六次甲基四胺银染色为阳性,Alcian blue及Mucicarmine染色为阴性,少数呈弱阳性。荧光显微镜下菌体具明显自发荧光,暗视野下可见多个核。     

艾滋病合并皮肤马尔尼菲青霉感染4例

目的探讨艾滋病（AIDS）合并皮肤马尔尼菲青霉感染的临床及实验室特征。方法分析2005年1月至2006年6月本院收治的明确诊断为AIDS合并皮肤马尔尼菲青霉感染的4例患者临床特征;取皮损、血和骨髓分别在25℃和37℃进行真菌培养。观察菌落形态、显微镜下特征;对皮肤活检组织行HE及六胺银染色。观察镜下皮损组织学及马尔尼菲青霉的特征。结果AIDS合并皮肤马尔尼菲青霉感染伴多系统损害。皮损特征：早期表现为淡红色丘疱疹、糜烂性丘疹,继而为坏死性丘疹、传染性软疣样丘疹、皮肤溃疡及血痂。37℃培养呈酵母相,25℃呈菌丝相。皮肤病理活检六胺银染色（＋）。使用二性霉素B、伊曲康唑治疗。3例临床症状缓解、皮疹消退出院。1例死亡。结论AIDS合并皮肤马尔尼菲青霉感染皮损特征：坏死性丘疹、传染性软疣样丘疹。皮损25℃、37℃真菌培养结合皮肤病理活检是确诊的关键。二性霉素B、伊曲康唑是目前治疗AIDS合并皮肤马尔尼菲青霉感染的首选药物。     

肾小球基底膜六胺银染色及复染经验

肾小球基底膜六胺银染色及复染经验张晶，王泰龄（病理科）很多肾脏疾病的诊断依赖于病理形态观察。肾小球微细病变肾脏穿刺活检用六胺银染色较ＰＡＳ染色所显示的更加精细，如再附加三色染色，能更清晰地分辨出肾小球基底膜系膜的改变、细胞增生及管内物质沉积的程度。１...     

改良六胺银套马松三色染色在肾穿刺活检组织染色中的应用

免疫复合物在肾小球基底膜中沉积的形态和定位在各种肾小球肾炎和肾小球病的鉴别诊断中很重要,传统的六胺银染色是用HE染色复染的,不利于观察肾小球中的免疫复合物的形态和定位［1］,六胺银套马松（PASM-Masson）三色染色能在同一切片上既显示肾小球基底膜,又可观察免疫复合物的沉积,因此PASM-Masson染色是肾穿刺活检病理组织切片染色中最为重要的染色之一。我们使用改良PASM-Masson染色,结果较为满意,现介绍如下。     

PAS联合六胺银染色诊断局限性马尔尼菲青霉菌感染的应用

目的 探讨建立快速诊断局限性马尔尼菲青霉菌感染的方法,以期早期诊断,降低死亡率.方法 采用高碘酸-无色品红(PAS)染色联合六胺银染色对4例非AIDS马尔尼菲青霉菌感染者活检组织进行马尔尼菲青霉菌的特殊染色,分析感染者的临床表现和病理组织学诊断特点.结果 患者均为广东本地居民,属局限性马尔尼菲青霉菌感染.除1例有发热外,临床上未见以发热、失重、贫血、白细胞增高为主的马尔尼菲青霉菌感染症状以及多器官损害症状.HE染色显示病理组织学类型为肉芽肿型和化脓型.病变组织经PAS染色与六胺银染色后,在油镜下增生的泡沫状巨噬细胞胞浆内,呈现大量红色或黑色的卵圆形及腊肠状酵母样青霉菌孢子,无荚膜,在腊肠状菌体中可见马尔尼菲青霉菌特有的裂殖时出现的横隔膜.结论 PAS联合六胺银染色清晰显示组织中马尔尼菲青霉菌的特征性结构和形态,结合病理组织学特点、中国南方地区生活或旅游史,可以快速诊断局限性马尔尼菲青霉菌感染.     

大鼠肺孢子虫肺炎动物模型建立及病原学病理学观察

纯系Wistar大鼠皮下注射醋酸可的松25mg/次,每周2次,用药7周即可成功诱发大鼠肺孢子虫肺炎。相差显微镜直接镜检、姬姆萨氏染色(Giemsa's stain)、六亚甲基四胺银染色(GMS stain)和亚甲胺蓝染色(TBO stain)均可检出包囊。其中六亚甲基四胺银染色可显示囊壁特征性的括弧样结构,具有确诊价值。病理改变主要为肺泡间隔增厚和淋巴细胞、单核细胞浸润,肺泡中少量蜂窝状渗出物。对肺孢子虫的滋养体、囊子前期和囊子的超微结构进行了电镜观察     

快速鉴定卡氏肺孢子虫

本方法是一种检测卡氏肺孢子虫快速简便的方法,有利于卡氏肺孢子虫肺炎的诊断和治疗。采用过碘酸钠、GMS工作液染色,将经典的六亚甲基四胺银染色步骤简化为二步,染色时间缩短到几分钟,染色效果良好,卡氏肺孢子虫囊壁上的特征性括弧样结构很易察见。     

肺孢子虫六胺银染色方法的改进

目的改进肺孢子虫染色效果,提高肺孢子虫肺炎的诊断水平.方法给SD大鼠皮下注射地塞米松磷酸钠建立肺孢子虫动物模型,制作肺组织印片,采用改良六亚甲基四胺银进行染色,油镜观察.结果染色效果良好,肺孢子虫包囊结构清晰可辨.结论本方法改进了肺孢子虫染色方法,操作简便易行,效果良好,值得推广应用.     

真菌荧光染色在侵袭性真菌病中的应用价值

目的 评估真菌荧光染色在侵袭性真菌病诊断中的临床价值。方法 选取2018年1月至2021年12月宁波大学医学院附属医院呼吸与危重症科收治的高度怀疑侵袭性肺部真菌感染的住院患者资料170例,回顾性分析患者肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）经真菌荧光染色、氢氧化钾湿片法、革兰染色的检测结果,分别计算3种方法的检出率和阳性率;回顾性分析血清（1,3）-β-D葡聚糖检测（G试验）、肺泡灌洗液半乳甘露聚糖（galactomannan,GM）试验和肺泡灌洗液隐球菌荚膜多糖抗原检测的敏感度、特异性、阳性和阴性预测值,并与真菌荧光染色进行对比。结果 170例患者中,90例被临床诊断为侵袭性肺部真菌感染,80例为非侵袭性肺部真菌感染。真菌荧光染色的检出率和阳性率均高于氢氧化钾湿片法和革兰染色;其中有136例患者同时进行了肺泡灌洗液真菌荧光染色和血清G试验,敏感度分别为51.5%、14.7%,特异性分别为88.2%、92.6%;66例患者同时进行了肺泡灌洗液真菌荧光染色和GM试验,敏感度分别为64.1%、38.5%,特异性分别为85.2%、59.3%;76例患者同时进行了肺泡灌洗液真菌荧光染色和隐球菌荚膜多糖抗原检测,敏感度分别为27.9%、81.4%,特异性分别为97.0%、97.0%。结论 真菌荧光染色在侵袭性真菌病的诊断中具有重要的临床价值。     

用六胺银法的改良法显示组织胞浆菌

组织胞浆菌病是流行于北美的一种真菌传染性疾病。国内于1958年首次报道一例,至今仅有9例报道,但未见有关技术方面的专门报道。为此,我们用Grocott-Gomori六胺银法改良法显示该菌,取得了满意的结果. 材料来源于本室的尸体解剖,肺、肝、肠、心、肾和气管组织,常规制片。用改良的Grocott-Gomori六胺银法显示,用PAS、AB和粘液卡红法作比较。