壳聚糖固定α-淀粉酶的研究

目的　从虾蛄壳提取壳聚糖 ,将α-淀粉酶固定在壳聚糖上。　方法　以自制壳聚糖为载体 ,一氯乙酸或三氯乙酸为交联剂 ,将α-淀粉酶固定化。　结果　三氯乙酸是较好的交联剂。固定化酶与原酶的最适 p H及最适温度基本相同 ,均为 6.5 ,5 0℃ ;固定化酶在 65℃仍有较高热稳定性 ,而原酶活力明显下降 ;固定化酶的表观米氏常数 Km =0 .6× 10 -2 g/ml,原酶 Km =1.1× 10 -2 g/ml;一定浓度 Cl-、Br-离子有助提高固定化酶活力。　结论　该固定化酶活力较高 ,热稳定性和贮存稳定性好 ,是良好的检测试剂。     

壳聚糖固定化胰蛋白酶的研究

目的虾蛄壳提取壳聚糖，将胰蛋白酶固定在该壳体聚糖上，方法以自制壳聚糖为载体，一氯醋酸为交联剂，将胰蛋白酶固定化，结果，固相酶的最适温度为５０℃，原酶为４５℃固相酶最适ｐＨ值为７．０，原酶为８．０，固相酶的表面米氏常数Ｋｍ＝１２ｍｍｏｌ／Ｌ，原酶Ｋｍ＝２３ｍｍｏｌ／Ｌ，结论该固定化酶活力较高，抗酸能力强，热稳定性和储存稳定性好，是良好的检验试剂。     

CoSalphen在壳聚糖上的固定化及对DOPA的催化氧化研究

制备了二氧化硅担载的壳聚糖固定化双水杨叉邻苯二胺合钴配合物，用元素分析，红外光谱，紫外－可见光谱和荧光光谱等方法对固定化配合物的组成和结构进行了表征。结果表明：双水杨叉邻苯二胺合钴是通过其钴离子与壳聚糖的氨基氨配位实现其在壳聚糖的固定化。由于高分子固定化配合物对活性中心的基位隔离效应阻碍了双水杨叉邻苯二胺合钴的二聚体及过氧型载氧体的形成而使其对３，４－二羟基苯基丙氨酸（多巴）的催化氧化活性远大于相     

碘－淀粉吸光系数标准化法检测α－淀粉酶的实验研究

为达到α－淀粉酶（α－ＡＭＳ）测定的最好的准确性和精密度，最大线性范围及与酶法的可比性，进行了碘－淀粉吸光系数标准化法测定淀粉酶的实验研究。底物浓度改为０．７９ｇ／Ｌ，底物缓冲液以Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．０，３７℃，５０ｍｍｏｌ／Ｌ）为缓冲剂，并加入２．５ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２和１００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ以保证对α－ＡＭＳ的激活作用，酶促反应时间选为５ｍｉｎ，测定波长选定为７００（或８００／７００）ｎｍ。本法线性测定范围达２０００ＩＵ／Ｌ以上，标本溶血、黄疸及乳糜对测定结果无影响；本法与酶法相关关系密切（ｎ＝２３，ｒ＝０．９９８８，Ｙ＝１．０１６ｘ－１９），并以一定的关系式求得酶法（ＰＮＰＧ７法）测定值（ＩＵ／Ｌ）做报告；实验参数可手法操作及自动分析两用，适于各型医院实验室推广应用。本法参考值：血清（ｎ＝１１３）α－ＡＭＳ＜９３．４ＩＵ／Ｌ，尿液（ｎ＝１４２）α－ＡＭＳ＜６２２ＩＵ／Ｌ。     

胶原凝胶固定化α-糜蛋白酶的研究

目的采用化学交联方法将α-糜蛋白酶固定化于胶原蛋白凝胶.方法以戊二醛促进提取的I型胶原蛋白与α-糜蛋白酶形成西夫碱,从而生成固定化糜蛋白酶,并计算固定化效率,观察pH、温度对酶活性影响及固定化对胶原蛋白生物学特性的影响.结果作出pH、温度等外界因素对固定化酶活性的影响曲线,并得到具一定活性的固定化α-糜蛋白酶.结论已成功地制备以胶原固定化α-糜蛋白酶的创面外用膜片,可作进一步研究.     

几种α-淀粉酶校准品和质控品的互换性研究

目的探讨几种α-淀粉酶校准品和质控品是否具有互换性。方法采用临床实验室标准化委员会推荐的方法,测定20份血清和欲评测的校准品和质控品中的α-淀粉酶活性。结果德赛校准品、和光校准品、朗道正常值校准品、朗道高值校准品、朗道正常值质控品、朗道高值质控品、和光正常值质控品、和光高值质控品以及2个批号的卫生部质控品具有互换性;其他3个批号的卫生部质控品不具有互换性。结论使用德赛校准品和朗道质控品,和光校准品和和光质控品可以保证测定结果的准确性;3个批号的卫生部质控品因不具有互换性,因此它们作为室间质量评价的物质是不合适的。     

甲醛活化壳聚糖制备固定化l—天冬酰胺酶

研究了以甲醛活化的壳聚糖为载体固定化ｌ－天冬酰胺酶，其活力回收可达到１１３％，比用以戊二醛为交联剂进行固定化的活力回收要高出五倍多。分别从缓冲液的ｐＨ值及甲醛用量等方面进行了固定化ｌ－天冬酰胺酶的条件优化，并且对固定化酶的性质作了探讨。     

高产α—淀粉酶菌株分离培育的初步研究

用常规的细菌培养法从土壤中分离选育出产α—淀粉酶的菌株,再对该菌进行热以及紫外线照射,最后筛选出高产α—淀粉酶的生产用菌株。     

不同条件下唾液斑α－淀粉酶表型可测期限的研究

目的探讨不同温度条件下尼龙织物、纱布和滤纸唾液斑淀粉酶的可测期限。方法应用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦及银染方法检测４℃、室温（１８～２５℃）及３７℃条件下保存的尼龙织物、纱布及新华滤纸上唾液斑淀粉酶表型的可测期限。结果尼龙织物唾液斑４℃保存６周，室温保存４周，３７℃保存６天，纱布唾液４℃７周、室温５周、３７℃７天，滤纸唾液斑４℃４周、室温２周、３７℃５天，均可正确检出α－淀粉酶表型。结论纱布唾液斑淀粉酶表型的可测期限比尼龙织物和滤纸唾液斑的长；４℃保存的唾液斑淀粉酶表型的可测期限比室温及３７℃条件下保存的长。     

壳聚糖固定胰蛋白酶的研究

目的：从蟹壳中提取壳聚糖，将胰蛋白酶固定在从蟹壳中提取的壳聚糖上。方法：以自制壳聚糖为载体，戊二醛为双官能团交联剂，将胰蛋白酶固定化。结果：０．２ｇ壳聚糖（干）与４％戊二醛交联后再与５．０ｍｇ胰蛋白酶固定结合，效果较好。固定化酶的表现米氏常数Ｋ′ｍ＝１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，而天然酶Ｋｍ＝７．６ｍｍｏｌ／Ｌ；固定化酶最适温度为８０℃，比天然酶提高了２０℃；固定化酶最适ｐＨ为７．０．而天然酶为８．０。该载体来源广，易提取，固定化酶的贮存稳定性很好，２个多月重复使用，酶活力未见明显下降     

乙二胺羟丙基壳聚糖固定化天门冬酰胺酶的研究

研制了新型壳聚糖胺基衍生物-乙二胺羟丙基壳聚糖（EDA-HPCS）,并将其用于固定天门冬酰胺酶,分别考察了甲醛活化载体和戊二醛活化载体对固定化酶活力的影响,结果表明,在适当的固定化条件下,甲醛活化EDA-HPCS的固定化酶活力约为30U/g载体,而戊二醛活化EDA-HPCS固定化酶活力约为16U/g载体。     

固定化脂肪酶的动力学研究

以壳聚糖为载体，用物理吸附固定化脂肪酶，对影响固定化过程的各种因素进行了考察，确定了最优条件，并比较了游离酶和固定化酶的最适温度、pH、酶的热稳定性以及表观Km。固定化酶水解的最适pH(pH7．0)稍低于游离酶(pH8．0)，最适温度为50℃(游离酶为40℃)。固定化酶在50℃的半衰期(0．96h)是游离酶(0．32h)的3倍，在4℃的冰箱中贮存3个月活力变化很小。     

聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶的工艺研究

采用交联法制备了聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)载体，并将其用于固定化L-天门冬酰胺酶。研究了聚乙二醇浓度、交联剂戊二醛浓度、活化剂甲醛浓度、酶溶液浓度等因素对PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶活力的影响。结果表明：在适当的条件下，PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶的活力可达20～40U／g，并且PEG-CS固定化L-天门冬酰胺酶具有良好的生化性质。     

AMY1基因编码α淀粉酶在体外培养大鼠颌下腺细胞中的表达

目的:检测大鼠颌下腺(SMG)AMY1基因编码α淀粉酶(α-Amy)在体外培养颌下腺细胞中的表达,鉴定细胞来源和检测体外培养细胞的功能。方法:分别进行培养大鼠细胞RT-PCR检测淀粉酶的基因表达;免疫印迹法(Western blotting)检测淀粉酶蛋白质。结果:大鼠SMG组织和培养细胞检测在474bp处显示有一相同的带。表明大鼠培养SMG细胞RT-PCR产物与大鼠SMG组织α-淀粉酶mRNA表达相同。免疫印迹结果显示大鼠SMG组织与培养细胞分别出现了一单独的α-淀粉酶免疫活性蛋白电泳带,其分子大小为50kDa,两者免疫活性蛋白泳带一致。结论:大鼠SMG组织和培养细胞淀粉酶mRNA表达相同,大鼠培养SMG细胞与大鼠SMG组织具有同源性。体外培养SMG细胞通过AMY1基因编码α-淀粉酶表达。     

高活性α-淀粉酶的分离与纯化

目的研究高活性α-淀粉酶分离与纯化的新方法。方法运用吸附树脂和离子交换的方法,分离纯化α-淀粉酶。结果吸附树脂分离纯化所得α-淀粉酶的活性约为60000U/g,DEAE-纤维层析所得α-淀粉酶的活性在吸附树脂法的基础上提高了约1倍。结论该方法分离纯化α-淀粉酶简便,成本低,便于工业化生产。     

一株黑曲霉所产α-淀粉酶的提取及其特性研究

目的研究一株黑曲霉所产α-淀粉酶的提取方法及特性。方法 黑曲霉在米曲培养基中培养一段时间,粗提酶液经不同方法进行分离提取,并比较了各方法的得率。并对通过酶的干燥得到粗酶制剂成品的性质进行进一步的分析。结果 该黑曲霉α-淀粉酶最适反应温度为60℃,最适pH为5．0。Ca^2＋表现出明显促进作用,Fe^3＋、Zn^＋强烈抑制酶活力。结论 该菌株是一株具有应用价值的优良生产菌株。     

大豆异黄酮对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用

[目的 ]研究大豆异黄酮类对α 葡萄糖苷酶 (EC 3.2 .1.2 0 )和α 淀粉酶 (EC 3.2 .1.1)的抑制作用 ,以期为揭示大豆异黄酮类在糖尿病中的作用及机理提供依据 .[方法 ]以C18柱层析和高效液相色谱法分离大豆异黄酮类 ,以薄层色谱法、高效液相色谱法和核磁共振检测各组分 ,并用比色法测定各单体组分对酵母α 葡萄糖苷酶和猪α 胰淀粉酶的抑制活性 .抑制酶活性 5 0 %时所需的抑制剂浓度定义为半抑制浓度 .[结果 ]大豆异黄酮具有很强的α 葡萄糖苷酶抑制作用 ,其半抑制浓度值为 2 0～ 15 0μmol/L,其中金雀异黄素的为最强 ,而大豆异黄酮葡萄糖苷形式对α 葡萄糖苷酶的抑制活性较其游离配糖体形式为弱 ,其半抑制浓度值为 2 0 0～ 6 0 0 μmol/L .大豆异黄酮及其糖苷形式均具有α 淀粉酶抑制作用 ,当抑制剂浓度为 1g/L时 ,对α 淀粉酶的抑制率为 10 %～ 2 0 % .大豆异黄酮的丙二酰葡萄糖苷形式则无α 葡萄糖苷酶和α 淀粉酶抑制作用 .[结论 ]大豆异黄酮类具有α 葡萄糖苷酶和α 淀粉酶抑制活性 ,且呈剂量依赖性 .表明 ,食用富含异黄酮类的大豆及其制品对改善非胰岛素依赖型糖尿病症状、防止血糖升高有利     

气功对小麦α-淀粉酶生物合成的诱导效应初探

通过对小麦萌发过程不同时间的淀粉酶活力测定,认为外气可以影响其中的α-淀粉酶的活力,这种作用与赤霉素对α-淀粉酶合成的诱导相似。     

聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶反应性质研究

研究了聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)固定化L-天门冬酰胺酶催化缓冲液中天冬酰胺的反应过程,考察了底物浓度、给酶量、温度、搅拌速率等条件对固定化酶在缓冲液中间歇催化反应过程的影响;以及底物浓度、流量、温度、床层高度等因素对固定化酶在缓冲液中连续催化反应过程的影响。实验结果表明:在适当的反应条件下,聚乙二醇改性壳聚糖固定化L-天门冬酰胺酶可以很好地水解缓冲液中的天冬酰胺。