食管癌患者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞检测及其临床意义

目的:通过检测食管癌患者外周血中CD4 CD25 Foxp3 调节性T细胞的变化,观察其与临床及病理特征之间的关系,探讨其临床意义。方法:采用流式细胞术检测30例食管癌患者及16例健康志愿者外周血单个核细胞中CD4 CD25 Foxp3 T细胞占CD4 T细胞的比例;收集食管癌患者的临床及病理资料,分析研究Treg细胞变化与临床及病理特征之间的关系。结果:流式细胞术检测显示食管癌患者外周血PBMC中CD4 CD25 Foxp3 T细胞占CD4 T细胞的比例为(3.72±1.39)%,高于对照组(1.15±0.36)%,P<0.01;食癌管患者外周血中Treg细胞比例与患者的年龄、性别、肿瘤的位置无明显相关性(P>0.05),而与淋巴结转移情况及TNM分期有明显的相关性(P<0.05)。结论:CD4 CD25 Foxp3 调节性T细胞可能在食管癌免疫耐受中发挥重要作用,检测其比例对于判断食管癌的病期及预后有一定价值。     

哮喘患儿外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的测定及临床意义

目的：探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞在哮喘儿童外周血中的比例改变,并探讨其临床意义。方法150例哮喘患儿按临床表现分为急性发作组（50例）、临床缓解期组（50例）和咳嗽变异性哮喘组（50例）,另选择50名健康儿童为正常对照组。应用流式细胞仪检测上述各组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞占CD4＋T细胞的百分比。结果急性发作期组患儿外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞水平较缓解组、咳嗽变异性哮喘组及健康对照组明显下降（P〈0.05）,而缓解期组及咳嗽变异性哮喘组与健康对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论CD4＋CD25＋调节性T细胞可能参与了哮喘的发生与发展,哮喘的严重程度可能与CD4＋CD25＋调节性T细胞的水平相关。     

胃癌手术前后外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及临床意义

目的：检测CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）在胃癌手术前后外周血中的变化,探讨Treg在肿瘤免疫中的作用。方法：收集初治胃癌患者38例作为研究对象,同时收集20例健康人外周血作为正常对照组。检测手术前3d和手术后14d外周血中CD4^＋CD25^＋Treg比例及T细胞亚群,将各检测结果结合临床、病理指标进行统计学分析。结果：胃癌患者术前外周血中Treg比例显著高于术后比例以及对照组（P均〈0．01）。胃癌患者术前外周血CD8^＋T细胞比例明显低于术后比例以及对照组（P均〈0．01）。术前外周血CD8^＋T细胞比例与Treg比例呈负相关（P〈0．05）。胃癌患者术前外周血中Treg比例在不同淋巴结转移情况和TNM分期之间差异具有统计学意义（P〈0．05）,其与淋巴结转移和TNM分期呈正相关（P〈0．01）。胃癌患者手术后Treg比例较术前下降,且下降程度与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、分化程度、病理分型以及手术方式无相关性。结论：Treg可能通过抑制CD8^＋T细胞的增殖及功能,促进肿瘤细胞的生长和发展。Treg与肿瘤的侵袭、淋巴结转移有关,提示Treg在一定程度上可作为检测疾病进展的免疫学指标。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在原发性肝癌中的表达及临床意义

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在原发性肝细胞癌肿瘤侵袭性、进展以及预后中的价值。方法应用三色免疫荧光标记法通过流式细胞仪对45例来自不同分期的原发性肝癌患者外周血、肿瘤组织和30例正常人外周血CD4^＋、CD8^＋、CD4／CD8、CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD25^＋CTLA4^＋ -T淋巴细胞亚群的比例进行分析比较,以说明原发性肝癌患者的细胞免疫功能状态。结果①原发性肝癌患者外周血淋巴细胞总数及CD4^＋T细胞比例、CD4／CD8比例低于正常对照组[分别为（1．5±0．4）×10^9,（2．1±0．4）×10^9;（27．6±3．3）％,（32．9±5．8）％;1．02±0．26,1．31±0．42]。②原发性肝癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋ -Treg及CD4^＋CD25^＋CTLA4^＋ -T细胞占CD4^＋T细胞的比例明显高于正常对照组[分别为（19．2±3．3）％,（8．4±2．5）％;（8．6±2．2）％,（2．1±0．8）％]。原发性肝癌患者不同分期之间上述比例差异有统计学意义（P〈0．05）。③肿瘤组织中CD4^＋CD25^＋CTLA4^＋ -T细胞比例明显高于肿瘤患者外周血中所占的比例（分别为（87．1±4．4）％,（57．3±3．3）％）。结论调节性T细胞在原发性肝癌患者中的数量分布与肿瘤临床分期有明显关系,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数量的增多可以作为判断侵袭性、进展的一个潜在重要指标。     

哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与气道炎症反应的关系

目的 观察哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）数量的改变及其与气道炎症反应的关系。方法健康6周龄SPF级BALB/c小鼠20只,随机分为2组：正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）,B组以卵白蛋白（OVA）致敏激发方法建立小鼠哮喘模型;流式细胞术检测小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞的比例;检测小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）炎症细胞数;BALF炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数分别与外周血CD4^＋CD25^＋Treg作相关分析。结果A组、B组小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞比例分别为（5．81±0．76）％、（3．21±0．74）％,差异有统计学意义（P〈0．05）BALF炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数与外周血CD4^＋CD25^＋Treg呈负相关,相关系数分别为-0．929和-0．920。差异有统计学意义（P〈0．001）结论哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞比例较正常对照组显著减少。且与哮喘小鼠气道炎症反应密切相关。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的研究进展

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是目前免疫学领域研究的热点，对于维持机体免疫耐受和免疫应答稳态具有非常重要的作用。本文就近年在其产生、作用机制及与疾病关系等方面的研究进展进行综述。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在支气管哮喘中的作用

CD4^＋、CD25^＋Treg（regulatory Tcell,Treg）是一种具有独特免疫调节作用的专职免疫抑制T细胞,在支气管哮喘的发生发展中发挥着重要作用。有关CD4^＋CD25^＋Treg在支气管哮喘中的数量和功能改变尚存在分歧,需进一步深入研究CD4^＋CD25^＋Treg在哮喘中的作用机制,为支气管哮喘开辟新的免疫治疗途径。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与皮肤病

0引言调节性T细胞(Treg)即抑制性T细胞,具有免疫调节作用,使机体保持保护性免疫又不发生病理性免疫。效应性T细胞对免疫反应的启动和Treg对免疫反应的下调之间的失衡可导致皮肤慢性炎症或自身免疫。虽然在20世纪70年代就已描述了抑制性T细胞,但由于缺乏识别的标记,对此亚群的认识未有进展。20世纪90年代Sakaguchi等首先描述了一种天然存在于小鼠的表达CD25的CD4 T细胞。动物研究揭示此亚群细胞能抑制抗肿瘤免疫,预防多种自身免疫疾病,包括炎症性肠病和自身免疫糖尿病,并能诱导对皮肤同种移植物的耐受。其后,在人类也描述了此亚群。积累…     

冠心病与外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的关系

目的 探讨不同类型冠心病患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞水平变化,以及CD4＋CD25＋调节性T细胞与冠状动脉粥样硬化严重程度的相关性.方法 选择2012年6月-2012年12月在杭州市第一人民医院心内科住院,经冠状动脉造影术检查及治疗的患者57例,其中造影检查正常对照组13例,稳定型心绞痛组14例,不稳定型心绞痛组15例,急性心肌梗死组15例.采用流式细胞仪检测外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞占CD4＋T细胞比例,评价各组间差异,并对外周血T淋巴细胞亚群与冠状动脉粥样硬化严重程度进行相关性分析.结果 ①外周血CD4＋CD25＋细胞占CD4＋淋巴细胞比例在对照组、稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、心肌梗死组分别为（57.51＆#177;12.62）％、（50.19＆#177;9.27）％、（39.85＆#177;11.88）％和（32.37＆#177;9.56）％;②急性心肌梗死组和不稳定型心绞痛组患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞比例较稳定型心绞痛组和对照组显著减少（P＜0.05）,但是急性心肌梗死组和不稳定型心绞痛组之间,以及稳定型心绞痛组和对照组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）.③外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞与冠状动脉Genisi评分呈显著负相关（r=-0.617,P＜0.01）.结论 CD4＋CD25＋调节性T细胞参与了冠心病的发生发展,是导致动脉粥样斑块不稳定的原因之一,与斑块的不稳定呈显著负相关.     

左归丸对小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的：观察左归丸制剂对小鼠脾细胞中Treg亚群及其相关细胞因子表达的影响。方法：Balb/c小鼠给予不同剂量左归丸处理后，利用流式细胞术检测小鼠脾细胞中Treg亚群（CD4^＋／CD25^＋）的变化；采用RT-PCR法检测小鼠脾细胞中IL-10、TGF-β、IFN-γ及Foxp3的表达水平；采用ELISA法检测小鼠外周血中IFN-γ的分泌水平。结果：小剂量左归丸对小鼠脾脏Treg亚群及相关细胞因子的表达没有显著影响；中剂量左归丸可明显上调小鼠脾脏Treg亚群比例（P〈0．05），提高Treg特异性胞内信号Foxp3及相关细胞因子IL-10、TGF-β的转录水平，同时抑制，IFN-γ的表达；大剂量左归丸可显著降低Treg细胞亚群比例，对Foxp3、IL-10、TGF-β、IFN-γ的表达均有明显的抑制作用（P〈0．05）。随着中、大剂量左归丸处理小鼠IFN-γ的转录下调，血清中IFN-γ的水平也明显下降（P〈0.05）。结论：左归丸可上调Treg细胞及相关细胞因子的表达水平，抑制IFN-γ的表达，但这种免疫效应有剂量限制性，大剂量应用时显示抑制作用，提示左归丸对Treg亚群有剂量依赖性的双向调节作用。     

人天然CD4+CD25+调节性T细胞的体外扩增培养及鉴定

目的：建立有效的体外培养扩增人天然CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的体系,并检测扩 增细胞的表型及体外免疫抑制功能,为Treg应用于临床免疫治疗提供实验基础。方法：免疫磁珠分离(MACS)方法从 人外周血单个核细胞中分离CD4+CD25+Treg,加入抗CD3/CD28包被磁珠刺激扩增;用台盼蓝染色法测定新鲜分选 的和扩增的Treg的数量和活性,用流式细胞法检测新鲜的和扩增的Treg主要表型标志和纯度,用混合淋巴细胞反应 (mixed lymphocyte reaction,MLR)法检测扩增的Treg对羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)标记的自体和异体的 CD4+CD25–T细胞增殖的抑制作用。结果：扩增3周后Treg数目约为新鲜分选细胞数的2 000倍(由5.23×105±1.52×105扩增 至1.02×109±0.20×109),活性>97%。扩增3周后的Treg与新鲜分选细胞保持了相似的表型特征：CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺三阳细 胞约占(94.22±2.12)%,与新鲜分选细胞相似。扩增3周后的Treg对自体和异体的CD4+CD25–T细胞的增殖均有明显的抑 制作用,抑制率随着效靶比浓度的增高而增高(P<0.01),而且其各浓度梯度对自体和异体CD4⁺CD25^–T细胞的抑制率 无明显差异(P>0.05)。结论：创建的分离和体外扩增人CD4⁺CD25⁺Treg的方法,可以大量扩增出高纯度且保留其免疫 抑制功能的Treg,解决了Treg数目少的问题,有利于进一步的免疫研究和治疗。     

抗原特异性CD4+CD25+ T细胞的制备及功能鉴定

目的: 制备供体抗原特异性CD4+CD25+调节性T细胞,并对诱导的细胞进行免疫生物学功能鉴定?方法:分离供体ICR小鼠的脾细胞经尾静脉免疫BALB/cByJ小鼠,每周1次,连续3周?第4周,体外免疫磁珠分离技术(MACS)分选被免疫小鼠CD4+CD25+ T细胞和CD4+CD25-T细胞?混合淋巴细胞反应和ELISA检测细胞的功能?结果:体外共培养实验显示,被免疫BALB/cByJ小鼠的脾细胞呈低增殖反应?CD4+CD25+T细胞能够抑制同种异体抗原刺激的天然(na?觙ve)BALB/cByJ小鼠CD4+CD25-T细胞的增殖反应和γ干扰素(IFN-γ)的分泌?结论:供体特异性脾细胞输注后分选的CD4+CD25+调节性T细胞是抗原特异性的,在体外具有免疫无能性和免疫抑制性?     

大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的分选和提取

目的 分选提取大鼠脾脏和淋巴结CD4+CD25+调节性T细胞并进行纯度和活性检测.方法 用免疫磁珠两步法既阴性选择和阳性选择分选提取大鼠CD4+CD25+调节性T细胞,流式细胞仪检测细胞纯度,台盼蓝染色计算细胞存活率.结果 免疫磁珠分选提取的CD4+CD25+调节性T细胞纯度在86% 以上,并且活性良好,活细胞百分率大于97%.结论 通过免疫磁珠分选能够提取高纯度高活性的CD4+CD25+调节性T细胞.     

人CD4+CD25+调节性T细胞的体外培养扩增

目的 建立人CD4⁺CD25⁺ Treg细胞的分离和体外扩增方法,并检测扩增细胞的表型及体外免疫抑制功能。方法 免疫磁性分离(MACS)方法分离人CD4⁺CD25⁺Treg细胞,加入刺激因子与之共培养扩增,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测细胞的活性和纯度,流式细胞法检测细胞主要表型标记,实时定量PCR检测Treg核心标记Foxp3的表达,混合淋巴细胞反应试验分析其免疫抑制功能,ELISPOT方法检测产生细胞因子的细胞数目。结果 扩增2～3周的CD4⁺CD25⁺ Treg细胞数目达到新鲜细胞的3500倍,活性> 97 %,纯度>96 %;扩增的细胞与新鲜的细胞保持了相似的表型、Foxp3表达,其抑制功能略强于新鲜的CD4⁺CD25⁺ Treg细胞,其差异具有统计学意义（71% vs 51%, P<0.05）,可能与其产生抑制性细胞因子的细胞数目增加有关。结论 本试验室创建的分离和体外扩增人CD4⁺CD25⁺ Treg细胞的方法,可以大量扩增出高纯度、有活力且不影响其抑制功能的Treg细胞,解决了CD4⁺CD25⁺ Treg细胞数目少的问题。     

IL-15诱导CD4+CD25- T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞转化的机制探讨

目的初步探讨IL-15诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)转化的机制。方法采用免疫磁性细胞分离法分离人外周血中的CD4+CD25-T细胞,依据加入细胞因子不同分为4组:对照组、IL-15组、拮抗1组、拮抗2组,其中后3组均于培养的第1天加入IL-15,而拮抗1组和拮抗2组分别于培养第1、3天加入STAT5a封闭性肽。流式细胞仪检测细胞表型变化,3H-TdR掺入法检测IL-15诱导产生的Tregs抑制CD4+CD25-效应T细胞(Teff)增殖的免疫功能,Western blot法检测细胞内p-STAT5的变化。结果与对照组比较,IL-15能诱导CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达上调,IL-15诱导生成的Tregs具有较天然Tregs稍弱的免疫抑制功能。Western blot检测结果显示,IL-15组p-STAT5表达较对照组明显上调。加入STAT5a封闭性肽后,拮抗1组和拮抗2组中CD4+CD25-T细胞中CD25和Foxp3表达下调,但拮抗2组[细胞表型分别为(47.9±6.0)%、(20.7±3.4)%]改变较拮抗1组[细胞表型分别为(30.7±8....     

CD4+CD25+调节性T细胞和感染免疫

免疫抑制是减轻机体免疫损伤的重要机制，近来研究发现，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是免疫抑制系统的关键组分之一。这群细胞具有明显的免疫抑制效能，通过与细胞直接接触发挥作用。本文就CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的生物学特性及其在感染免疫中的作用进行简要综述。     

应用自动磁性细胞分选器分选人CD_4~+CD_(25)~+调节T细胞

目的:建立应用自动磁性细胞分选器(autoMACS)分选人CD4+CD2+5免疫调节T细胞(Tregs)的方法。方法:应用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,应用autoMACS分选其中的CD4+CD2+5T细胞,流式细胞技术检测分选细胞的纯度。结果:分别从5.7×107及5.6×107外周血单个核细胞中分选出6.9×105及6.7×105个CD4+CD2+5T细胞,其纯度>98%。结论:应用autoMACS可高效分选出高纯度的CD4+CD25+T细胞,为深入研究其功能打下了基础。     

CD4+CD25high调节性T细胞与器官免疫耐受

已经证明器官移植受者体内存在抑制性或调节性细胞.能下调抗原特异性的T细胞反应,进而有利于移植物特异性免疫耐受。1995年Sakaguchi首次报道,表达IL-2受体α链(CD25)的CD4~ T细胞亚群的数量的减少和功能的缺陷