基于网络药理学的气滞胃痛颗粒治疗胃炎作用机制探讨和实验验证

目的 采用网络药理学的方法预测气滞胃痛颗粒治疗胃炎主要活性成分的作用靶点及其作用机制,并采用细胞实验对部分主要靶点进行实验验证。方法 在中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）和网络药理学在线数据库（TCMID）中获得气滞胃痛颗粒组方中药柴胡、白芍、枳壳、香附（炙）、延胡索（炙）、甘草（炙）的化学成分,并在TCMSP和PharmMapper数据库中收集活性成分对应的靶点,在药物靶标数据库（TTD）和人类孟德尔遗传数据库（OMIM）数据库中搜索与胃炎相关的蛋白和基因,建立胃炎靶点数据库;通过DIP数据库将成分靶点和疾病靶点进行关联,建立化合物-靶点-疾病网络。将气滞胃痛颗粒治疗胃炎的相关靶点输入STRING数据库中构建靶点之间的蛋白质相互作用（PPI）关系;使用DAVID数据库对靶点进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析,使用Cytoscape3.5.1软件自带的GlueGO插件进行基因本体论（GO）生物功能注释;通过人类基因和基因表型综合数据库（OMM）筛选炎症相关细胞相关的基因和蛋白靶点,对气滞胃痛颗粒治疗胃炎的靶细胞进行富集。体外细胞实验以巨噬细胞RAW264.7为对象,采用1μg·mL^-1脂多糖（LPS）和0.2μg·mL^-1γ干扰素（IFN-γ）制备细胞模型,以含有最大无毒剂量气滞胃痛颗粒内容物的培养基处理RAW264.7模型细胞,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法测定各组RAW264.7细胞中环氧合酶2（COX-2）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA表达。结果 网络药理学预测得到气滞胃痛颗粒治疗胃炎的主要潜在的活性成分25个,重要靶点20个,其中关键靶点包括COX-2、iNOS、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、丝裂原活化蛋白激酶14（MAPK-14）、表皮生长因子受体（EGFR）等,作用机制可能与调节TNF信号通路、NOD样受体信号通路、VEGF信号通路等与胃炎密切相关的信号通路有关,其药效作用主要表现为对炎症、血管内稳态、免疫、中枢神经及激素调节等生物过程的影响。气滞胃痛颗粒对RAW264.7模型细胞中COX-2、iNOS、IL-6、TNF-α的mRNA表达具有显著抑制作用。结论 气滞胃痛颗粒可能主要通过修复胃黏膜、减轻炎症损伤、消除感染等实现其治疗胃炎作用。     

基于相关性分析的气滞胃痛颗粒挥发油促肠动力谱效关系研究

目的 探讨气滞胃痛颗粒挥发油促肠动力的谱效关系，为气滞胃痛颗粒的质量控制提供实验基础。方法 建立气滞胃痛颗粒挥发油GC-MS指纹图谱；采用半固体糊炭末推进法，以小肠推进率为指标测定挥发油促肠动力的药理药效，灰色关联度分析结合偏最小二乘回归法建立特征指纹峰与促肠动力药效的谱效模型。结果 8个不同配伍组指纹图谱中有44个共有峰，其中辛醛、D-柠檬烯、顺-葛缕醇、香芹酮、cypera-2,4-diene、β-朱栾、香附烯、β-古巴烯、桉油烯醇、6-isopropenyl-4,8a-dimethyl-1,2,3,5,6,7,8,8a-octahydro-naphthalen-2-ol为潜在药效物质。结论 本研究为确定气滞胃痛颗粒复方促肠动力药效质控指标成分提供实验依据。     

西归含药血清对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响研究

目的 研究西归含药血清对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症因子的影响。方法 SD大鼠灌胃给予西归乙醇提取物以制备西归含药血清,采用噻唑蓝（MTT）法观察给予不同浓度的西归含药血清对RAW 264.7增殖的影响;采用1 μg·mL^-1的脂多糖（LPS）建立RAW 264.7 细胞体外炎症模型,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α) 、白细胞介素6(IL-6) 、白细胞介素2(IL-2)的含量。结果 脂多糖刺激细胞后,给药组均引起肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素2的高表达;而西归含药血清干预后,能显著抑制肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的高表达（P<0.05或P<0.01）;但对白细胞介素2没有显著影响。结论 西归具有抗炎的作用,其抗炎作用可能是通过抑制脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应来发挥的。     

基于靶细胞萃取的延胡索药效成分的筛选和含量测定

目的 建立靶细胞萃取延胡索Corydalis Rhizoma中的药效成分并采用HPLC法进行定量分析的方法。方法 选用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为靶细胞,萃取延胡索中的药效成分。在细胞对数生长期加入延胡索冻干粉,孵育2 h收集细胞并用液氮裂解,得到萃取药物后的细胞样品。采用UPLC/Q-TOF-MS对其进行检测,分析萃取进入细胞内的物质,即延胡索中进入细胞进一步发挥药效的有效成分。最后,用HPLC法对进入细胞中的有效成分进行定量分析。结果 HUVEC萃取到5个药效成分,分别为延胡索乙素、四氢小檗碱、延胡索甲素、盐酸小檗碱、去氢延胡索甲素。同时建立5个成分的含量测定方法。结论 靶细胞萃取的分析方法可以通过化合物与细胞之间的相互作用,反映出药物中发挥药效的活性物质,在中药复杂体系的研究中起到重要的作用。     

丹参水溶性成分拮抗脂多糖诱导HTR8/SVneo滋养层细胞凋亡的作用机制

目的 探讨丹参水溶性成分拮抗脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导HTR8/SVneo细胞凋亡的相关作用机制。方法 以不同浓度(0,100,200,400,800,1 600 ng·mL^-1)LPS处理HTR8/SVneo细胞,采用实时定量聚合酶链式反应验证HTR 8/SVneo细胞炎症模型的建立;细胞活力检测试剂盒检测各组细胞活力;划痕试验评估各组细胞向损伤区域迁移能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率并分析各组细胞线粒体膜电位。结果 200 ng·mL^-1 LPS干预后HTR8/SVneo细胞的NLRP3炎症小体指标及炎症因子表达量增高(P<0.05)。与LPS组相比,丹酚酸B(0.08 μmol·L^-1)、丹酚酸C(0.4 μmol·L^-1)、紫草酸(0.08 μmol·L^-1)干预后HTR8/SVneo细胞活性明显升高(P<0.01)。与LPS组比较,丹参水溶物质组凋亡率显著降低(P<0.05或P<0.01),线粒体膜电位水平显著升高。结论 丹参水溶物质能够提高LPS干预后HTR8/SVneo细胞活力,改善细胞迁移能力,提高细胞线粒体膜电位,进而抑制细胞凋亡。     

雷公藤柱层析各段组分对胶原诱导性关节炎模型大鼠细胞因子表达的影响

目的 比较雷公藤柱层析各段组分对Ⅱ型胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）模型大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）表达的影响,初步探讨各段组分中有效成分与药效的关系。方法 HPLC测定各段组分中6个有效成分的含量。在SD大鼠背、尾根及左后足跖多点皮内注射牛Ⅱ型胶原蛋白（BCⅡ）乳液,建立CIA大鼠模型。选取80只成模大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组和各段组分组,每组各8只。免疫20 d后,连续灌胃给药3周,记录大鼠关节炎指数（arthrits index,AI）,通过酶联免疫法检测血清中TNF-α、IL-1β的表达,原位末端转移酶标记技术（TUNEL染色法）检测各段组分对肝细胞凋亡的影响,Western-blot检测大鼠肝组织中caspase-3蛋白表达。结果 中段和末段组分中有效成分的含量差异较大。与模型对照组比较,中段组分的高、低剂量组和末段组分的高剂量组给药3周后均能明显降低AI值（P<0.01）,能明显抑制大鼠血清中TNF-α、IL-1β表达（P<0.01）,也能明显诱导肝细胞凋亡（P<0.01）,明显升高caspase-3活性（P<0.01）。结论 雷公藤柱层析各段组分治疗CIA可能与降低血清中TNF-α和IL-1β表达有关,灌胃后会诱导大鼠肝细胞发生凋亡,上调caspase-3活性,有效成分与药效存在量效关系。     

洋甘菊活性组分对LPS诱导人支气管上皮细胞的保护作用及机制研究

目的 基于驱动蛋白家族 3A 基因（Kif3a）和 Sonic hedgehog（SHH）信号通路探讨洋甘菊活性组分对脂多糖（LPS）诱导的人支气管上皮细胞（16HBE）的保护作用及机制。方法 用LPS诱导16HBE建立哮喘炎症细胞模型。CCK-8法检测不同浓度洋甘菊活性组分对LPS诱导16HBE的增殖的抑制作用，筛选出最佳洋甘菊活性组分给药浓度。将细胞分为空白对照组、LPS模型组、阳性药物组（1 µmol•L^-1地塞米松干预2 h）、洋甘菊活性组分组（200 µg•mL^-1，48 h）。Annexin V/PI结合流式细胞术检测各组的凋亡率。实时荧光PCR法和Western blot法检测Kif3a、SHH、Ptch1和Gli1的mRNA和蛋白表达变化。结果 LPS干预后，可显著降低16HBE活力（P < 0.05），并诱导其细胞凋亡（P < 0.01）。洋甘菊活性组分在浓度200 µg•mL^-1处理48 h时，可以显著逆转LPS对细胞的损伤并促进增殖（P < 0.01），减弱LPS诱导的细胞凋亡（P< 0.01）。与空白对照组比较，LPS诱导的16HBE内Kif3a在mRNA水平和蛋白表达水平显著降低（P < 0.05），SHH、Ptch1、Gli1在mRNA水平和蛋白表达水平显著升高（P < 0.05）；与LPS模型组相比较，洋甘菊活性组分处理后可显著逆转mRNA水平和蛋白表达（P< 0.05），增加Kif3a的mRNA水平和蛋白表达水平，并降低SHH、Ptch1、Gli1的mRNA水平和蛋白表达（P< 0.05）。结论 LPS诱导16HBE损伤，下调Kif3a水平从而上调SHH、Ptch1、Gli1水平，调控SHH信号通路处于异常激活状态。洋甘菊活性组分可显著逆转LPS诱导的细胞炎症损伤，上调Kif3a水平，下调SHH、Ptch1、Gli1水平，通过Kif3a调控SHH信号通路，对LPS诱导的16HBE发挥保护作用，改善哮喘气道炎症。     

姜黄素下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应

目的 研究姜黄素对化学缺氧所致人源性神经星形胶质瘤细胞系U87炎症反应的影响,并探讨相关分子机制。方法 100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞不同时间（1、3、6、12、24 h）,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α） mRNA表达变化。100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞12 h制备化学缺氧模型,同时给予1、5和10 μmol/L姜黄素处理,对照组（不添加CoCl₂）和模型组给予等体积DMSO;qRTPCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达变化;Western Blotting法检测NF-κB/P65蛋白磷酸化水平及核转位。结果 CoCl₂上调U87细胞IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平并呈时间相关性,炎症反应在约12 h达到高峰。与模型组比较,姜黄素显著下调炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平,5和10 μmol/L浓度组差异显著（P<0.05）;显著下调p65的磷酸化水平（P<0.05）;导致细胞核内NF-κB/p65蛋白显著减少、细胞质中NF-κB/p65蛋白显著增加（P<0.05）。结论 姜黄素通过下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应。     

枣仁安神胶囊联合帕利哌酮治疗精神分裂症的临床研究

目的 观察丹蒌片对高脂喂养动脉粥样硬化模型ApoE^-/-小鼠的影响,从菌群失调诱发炎症角度探讨丹蒌片抗动脉粥样硬化的作用机制。方法 采用C57BL/6J野生型小鼠作为对照,高脂喂养ApoE^-/-小鼠24周后随机分为模型组、丹蒌片组,连续ig给药8周后取血测定血脂水平;ELISA法检测血清中脂多糖（LPS）水平;动脉大体油红O及主动脉窦HE染色观察斑块形成;粪便16 S rRNA扩增子测序检测肠道菌群;GC-MS法检测短链脂肪酸;实时荧光定量PCR法检测炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA的表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠血脂水平升高,肠道菌群失调,有害菌增加,有益菌减少,血清LPS水平升高,主动脉周围炎症水平升高;与模型组比较,丹蒌片干预可明显降低小鼠总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平（P<0.01）,有效减少斑块面积;调节肠道菌群,进而降低血清LPS及主动脉周围炎症因子TNF-α、ICAM-1和IL-1β水平（P<0.01）。结论 丹蒌片通过改善菌群结构,降低菌群失调诱发的炎症反应发挥抗动脉粥样硬化作用。     

肺热普清散对斑马鱼炎症模型的抗炎作用及机制研究

目的 探讨藏药肺热普清散对斑马鱼炎症模型的作用及机制。方法 挑选受精后 72 h 斑马鱼随机移入 24 孔板中,分为对照组、模型组和肺热普清散低、中、高质量浓度(3、10、30 mg·L^-1)组,对照组与模型组不加药,肺热普清散与斑马鱼共孵育 1 h 后,除对照组外,其余各组用 20 μmol·L^-1硫酸铜处理 2 h 制备炎症模型。在荧光显微镜下观察绿色荧光标记中性粒细胞的 Tg(Lyz:EGFP)系斑马鱼体内炎症细胞迁移情况;实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测野生型斑马鱼核因子κB2(NF-κB2)、白细胞介素(IL)-1b、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8 mRNA 水平;Western blotting 实验检测野生型斑马鱼 NF-κB、TNF-α 蛋白表达水平;免疫荧光法检测各组鱼尾 NF-κB 表达。结果 对照组斑马鱼荧光细胞主要分布于头部和主动脉部,躯干部位主动脉以上荧光细胞稀少;模型组荧光细胞在各区域均增加,显示出炎症细胞向血管外迁移的明显趋势,躯干侧线以上荧光细胞计数较对照组显著增加(P<0.001);肺热普清散 10、30 mg·L^-1组躯干部荧光细胞计数与模型组比较显著降低(P<0.01、0.001)。与模型组比较,肺热普清散 3、10、30 mg·L^-1 组 IL-1b、TNF-α、IL-8 的 mRNA 水平显著下调(P<0.05、0.01),10、30 mg·L^-1 组 NF-κB2 mRNA 水平显著下调(P<0.01);10、30 mg·L^-1 组 NF-κB、TNF-α 蛋白表达水平显著降低(P<0.01、0.001)。免疫荧光结果显示,模型组躯干部位和鱼鳍 NF-κB 白色荧光点较对照组明显增加,经 10 mg·L^-1肺热普清散处理后的相同部位荧光点减少。结论 肺热普清散对硫酸铜诱导的斑马鱼炎症模型具有抗炎作用,机制与抑制 NF-κB、TNF-α 表达有关。     

综合治疗不射精症临床探讨

目的探讨不射精症的诊断和治疗方法,提高不射精症的诊治水平。方法回顾分析不射精症85例,并结合文献对其发病原因、诊断和治疗进行讨论。结果对85例不射精症患者根据病因不同分别选择心理疏导,药物和物理治疗,治愈42例(49.5%),好转28例(32.9%),总有效率82.4%。结论对不射精症应根据不同病因选择不同的治疗方法,绝大多数特别是功能性不射精症是可以治愈的。     

通络滴丸的质量控制研究

目的:建立通络滴丸的质量控制方法.方法:采用薄层色谱法(TLC)鉴别成方制剂中石斛、金银花、牛膝,以高效液相色谱(HPLC)法测定毛兰素和绿原酸的含量.结果:TLC法可明显鉴别石斛、金银花、牛膝.毛兰素在4.4~66.0 μg·ml^-1内线性关系良好,r=0.999 9,加样平均回收率为93.89%,RSD为2.37%;绿原酸在36.0~540.0 μg·ml^-1内线性关系良好,r=0.999 7,加样平均回收率为94.17%,RSD为1.99%.结论:该方法操作简便,结果准确,重复性好,可用于该制剂的质量控制.     

氨基葡萄糖治疗骨关节炎的现状

骨关节炎 (OA)是临床上最常见的一种关节炎 ,目前尚无根治疗法 ,治疗主要是通过各种措施减轻疼痛和改善关节功能 ,尚不能延缓或阻断病情进展。新近临床试验结果显示硫酸氨基葡萄糖对OA不仅具有肯定的症状改善作用 ,而且能延缓OA的关节结构改变 ,可望成为第一个治疗OA的病情改善药。其总体安全性较好 ,主要是胃肠道及皮肤的不良反应 ,对血糖和动脉粥样硬化的影响尚待进一步观察。     

关于药品委托生产的思考

目的:推动药品委托生产的良性发展。方法:应用供应链委托生产理论,分析目前药品委托生产中存在的种种误区,思考并提出建议。结果与结论:药品委托生产需要前提条件,那就是委托方(制药企业)必须具有药品生产批准文号,并建立自己的核心竞争能力,才可以委托生产,其他任何非生产企业如科研机构、商业企业都不能委托生产。     

可乐定治疗原发性顽固性高血压的疗效观察

目的 观察可乐定治疗原发性顽固性高血压的疗效及安全性.方法 选择原发性顽固性高血压患者为研究对象,入选患者加服可乐定片(75 μg/次,1次/8 h,1周后未达标,改为150 μg/次,1次/8 h),观察治疗前及治疗后每周诊室坐位血压、心率,检测治疗前后动态血压(ABPM)、血常规、肝肾功能、电解质、血脂及尿常规.结果 治疗后4周,诊室血压、ABPM的收缩压和舒张压均显著低于治疗前,差异有统计学意义(P＜0.01);根据诊室坐位血压,总有效率89.4％;根据ABPM,总有效率为80.8％.治疗后可出现心率下降、口干、乏力、嗜睡、便秘等不良反应,但无需停药.结论 可乐定对原发性顽固性高血压降压疗效确切,副反应可接受.同时不影响代谢,安全性好.     

托伐普坦治疗低钠血症的药物经济学评价研究进展

目的:通过文献研究,系统总结托伐普坦治疗低钠血症的药物经济学相关研究结果,为临床应用和政府相关部门提供决策依据。方法:系统检索中国知网、万方、维普、MEDLINE、Web of Science数据库,纳入2009—2016年托伐普坦药物经济学评价相关的中英文文献,并依照Cochrane协作网推荐的评价框架进行文献质量评估。结果:纳入的6篇药物经济学文献中,其中5篇为随机双盲研究,4篇为前瞻性研究,主要研究内容涉及使用托伐普坦治疗与住院时间、节约潜在成本的关系,以及相比安慰剂的临床疗效和成本-效果分析。结论:托伐普坦治疗低钠血症的心衰患者及抗利尿激素分泌异常综合征患者,相较于传统治疗,其临床疗效好并且具有较好的成本-效果优势,且对于严重低钠血症患者,该优势更为显著。     

新生儿氨茶碱药动学研究

本文采用荧光偏振免疫分析法测定１２例新生儿血中茶碱浓度，氨茶碱剂量按５ｍｇ／ｋｇ恒速静脉滴注。经时采样，测得数据，经分析药时曲线拟合呈一室模型，平均清除速度常数０．０３７±０．００８ｈ￣（－１），平均消除半衰期１９±４ｈ，平均表观分布容积０．８２±０．１４Ｌ／ｋｇ，平均清除率３０±５ｍｌ／（ｈ·ｋｇ）。消除半衰期最大相差２．１倍，显示明显个体差异。     

临床药物治疗学教学效果调查和探讨

目的：评估由临床药师承担授课任务的本科临床药物治疗学教学效果,探讨高校与医院合作进行本科临床药物治疗学授课的教学方法。方法：临床药师组成教学团队,对华中科技大学同济医学院药学院2012级本科留学生进行临床药物治疗学全英文授课。采用问卷调查和文献研究方法,对教学内容和效果进行调研分析。结果：现阶段临床药物治疗学课程设置存在章节多、课时少的问题,学生自主学习和实践应用能力有待提高。结论：临床药师应结合医院临床药学工作,引入多元化的授课形式和考核方式,着重培养学生药学实践服务能力,提高临床药物治疗学教学质量。     

美洛昔康凝胶剂中促渗剂的筛选

目的 研究薄荷醇和氮酮在美洛昔康凝胶中对皮肤渗透性的影响。方法 制备包含不同浓度的薄荷醇和氮酮的0.75%美洛昔康凝胶,采用改良的Franz扩散池,用离体小鼠皮肤进行体外透皮作用实验,以紫外分光光度法测定美洛昔康累计渗透量及渗透速率。结果 不含促渗剂的美洛昔康凝胶的渗透速率为0.862mg·h^-1,含1%、3%、5%薄荷醇的美洛昔康凝胶的渗透速率分别为0.839,、1.973、0.967mg·h^-1,含1%、3%、5%氮酮的美洛昔康凝胶的渗透速率分别为0.693、0.969、0.789mg·h^-1,含3%薄荷醇和1%、3%、5%氮酮的美洛昔康凝胶的渗透速率分别为1.237、0.997、0.928mg·h^-1。结论 3%薄荷醇对美洛昔康凝胶有明显较好的促渗作用。