过表达TREM2对癫痫大鼠海马组织炎症及神经元凋亡的影响

目的 探讨过表达髓样细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)对癫痫大鼠海马组织炎症及神经元凋亡的影响.方法 选择清洁级SD雄性大鼠40只,随机分为4组,对照组、模型组、阴性对照组和TREM2过表达组,每组10只.实时荧光定量PCR法检...     

海马神经元凋亡与抑郁症

本文综述了海马神经元凋亡在抑郁症发生发展中可能的作用,复习了中、西医通过抑制海马神经元凋亡治疗抑郁症的方法,为临床探索抑郁症的新疗法提供科学依据。     

miR-146a通过靶向TRIB3调节癫痫大鼠海马神经元凋亡及炎症反应

目的探讨miR-146a靶向调控Tribble同源蛋白3(TRIB3)对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响,以及对炎症反应的调控作用。方法体外培养新生Sprague-Dawley(SD)大鼠的海马神经元,制备癫痫海马神经元模型,采用免疫荧光双染法和膜片钳技术检测癫痫海马神经元模型。将海马神经元随机分为四组:空白对照组(control组):正常海马神经元;癫痫组(EP组):癫痫海马神经元;阴性对照组(miR-146a NC组):转染100 nM miR-146a NC至癫痫海马神经元;miR-146a mimic组:转染100 nM miR-146a mimic至癫痫海马神经元,采用脂质体介导法进行转染;流式细胞术检测各组海马神经元细胞的凋亡情况;Western blot检测各组海马神经元中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)以及肿瘤抑制基因p53的蛋白表达;ELISA法检测各组海马神经元细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平;双荧光素酶报告基因实验确定miR-146a与TRIB3的靶向作用情况。结果癫痫组大鼠海马神经元与正常组大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P0.05);与空白对照组比较,癫痫组miR-146a表达水平升高,海马神经元凋亡数目显著增加,海马神经元中caspase-3、Bax及p53的蛋白表达显著增加,Bcl-2蛋白表达减少,TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平与细胞培养液中的含量均升高,差异均有统计学意义(P 0.01)。与癫痫组比较,miR-146a mimic组海马神经元凋亡数目下降,caspase-3、Bax及p53的蛋白表达显著减少,Bcl-2蛋白表达增加,TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平与含量均下降,差异均有统计学意义(P 0.01)。TRIB3与miR-146a存在靶向关系,在野生型TRIB3-WT中,miR-146a mimic组荧光素酶活性较miR-146a NC组显著降低(P0.01)。结论高表达miR-146a通过靶向调节TRIB3 mRNA表达来抑制海马神经元凋亡的发生,并减少TNF-α、IL-1β和IL-6等炎症因子的释放。     

TGF-β1抑制大鼠创伤性颅脑损伤后海马神经元的凋亡

目的转化生长因子β1（TGF-β1）在星形胶质细胞增生和神经元的存活方面都发挥这重要作用,但是其在创伤性颅脑损伤（TBI）中的作用还未见报道。方法本课题组先前的研究利用大鼠模型发现在大鼠颅脑损伤后,TGF-β1的表达显著上调,表明TGF-β1参与到创伤性颅脑损伤修复的过程中。结果本研究聚焦在TGF-β1对TBI后海马神经元凋亡的影响,神经元的免疫荧光染色和Westernblot结果显示：对TBI后的海马神经元给予适当浓度及时程的TGF-β1处理,海马神经元的的凋亡明显降低。结论这些结果的发现,将有助于更好的理解TGF-β1在大鼠创伤性颅脑损伤中的作用,也有望使得TGF—β1成为临床上救治创伤性颅脑损伤的靶点。     

下调GABA受体基因对癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响及作用机制

目的 探讨下调GABA受体基因对癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响及作用机制。方法 选择30只SD健康雄性大鼠,建立癫痫模型,建模成功后分为模型组、上调组、下调组各10只; 进行细胞转染建立稳定转染的GABA上调组、GABA下调组; 检测3组大鼠海马神经细胞凋亡及PI3K、AKt、mTOR、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果 上调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率高于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率低于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率低于上调组(P<0.05)。上调组大鼠各时间点海马神经细胞增殖率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均低于模型组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平高于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞增殖率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均高于模型组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平低于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞增值率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均高于上调组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平低于上调组(P<0.05)。结论 下调GABA受体基因可能是通过调节PI3K/AKt/mTOR来作用于下游凋亡靶基因,最终抑制癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡     

颞叶癫癇海马神经元凋亡机制的研究进展

颞叶癫痫的海马病理变化分子机制一直是神经学科研究的重点。在发现海马致痫灶中存在天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspases-3）后，学者们推测凋亡机制可能对颞叶癫痫海马病理的形成具有一定作用。近年来，许多学者建立了相应的实验模型或活体标本，以凋亡基础理论为依据，从不同角度对颞叶癫痫中海马神经元损伤的凋亡机制进行研究，相继发现了凋亡级联效应途径中其他分子的显著表达，包括死亡受体、凋亡效应酶、凋亡调节蛋白等，甚至在基因水平找到了凋亡存在的证据，同时也引发了抗凋亡的治疗研究，为颞叶癫痫海马神经元损伤分子机制的进一步研究及颞叶癫痫的药物治疗研究提供了理论基础。本文对此进行综述。     

围生期甲状腺功能低下仔鼠海马神经元凋亡的研究

目的探讨围生期甲状腺功能低下（甲低）仔鼠是否存在海马神经元凋亡。方法SD雌鼠22只自孕15d起丙基硫氧嘧啶（PTU）50mg／d灌胃至仔鼠生后15日龄，复制围生期甲低仔鼠模型（n=120）。随机选60只于出生当日起每天腹腔注射T4 2μg／100g至21日龄断奶．为T；替代治疗组，余60只甲低仔鼠未予特殊处理，另设正常对照组仔鼠60只。应用光镜、透射电镜及TUNEL法观察1、5、10、15、21及50日龄甲低组仔鼠海马神经元凋亡，并与同日龄对照及治疗组比较。结果与同日龄对照组比较，甲低组仔鼠生长发育延迟，体重减轻，15日龄内血清FT3、FT4下降，TSH增高（均P〈0．05）。21日龄血清FT3无明显差异（均P〉0．05），血清FT4下降，TSH增高（均P〈0．05），5013龄血清FT3、FT4及TSH无显著性差异（均P〉0．05）；甲低组仔鼠海马组织光镜下变性神经元增多．透射电镜观察凋亡细胞增多，以上变化以10、15日龄仔鼠为著；除1日龄外，其它各日龄海马CA3区TUNEL阳性细胞增多（均P〈0．05），以15日龄为著（与其它日龄比较，均P〈0．05）。结论围生期甲低不仅使海马神经元凋亡程度增加，而且凋亡高峰后移，生后替代治疗后凋亡明显改善，但未达到正常同龄仔鼠水平。     

糖皮质激素对大鼠海马神经元影响的体外研究

目的　探讨在体外条件下糖皮质激素 (glucocorticoids ,GCs)对海马神经元的影响及其机制。方法　取新生大鼠海马组织进行原代分离培养 ,通过细胞形态学观察、细胞酶学噻唑蓝 (methylthiazolyl,MTT)测定、DNA原位末端标记 (TdT mediateddUTPNickEndLablelingmethod ,TUNEL)法以及凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax的表达观察 0、10 - 9、10 - 8、10 - 7、10 - 6 、10 - 5mol/L不同浓度的地塞米松 (dexam ethasone ,DEX)作用 2 4h对大鼠海马神经元的影响。结果　高浓度的DEX可以引起明显的海马神经元形态变化 ,降低海马神经元的活性 ,并通过上调Bax的表达 ,下调Bcl 2的表达促进海马神经元的凋亡。结论　高浓度糖皮质激素可促进海马神经元的凋亡从而降低海马神经元的活性。     

脑梗死患者海马β-淀粉样蛋白的表达

目的研究人脑梗死后β-淀粉样蛋白(Aβ)1-40和Aβ1-42在海马CA1区神经元中的表达。方法选取因脑梗死而死亡的尸检脑标本43例,并按缺血时间(发病至死亡时间)分为7组,选取因其他疾病死亡(非脑缺血)的尸检脑标本6例为对照组;应用苏木素-伊红(HE)染色方法观察海马神经元形态变化;应用Aβ1-40和Aβ1-42免疫组织化学方法检测人脑梗死后海马CA1区两种蛋白在神经元中的表达情况;用末端脱氧核糖转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)标记凋亡神经元。结果海马CA1区,对照组Aβ1-40和Aβ1-42在神经元中均有微量表达,并且于缺血2 h后表达均迅速增加,Aβ1-40在72 h后达高峰[(36.30±2.67)个/高倍视野],Aβ1-42在24~47 h达高峰[(30.87±4.62)个/高倍视野],以后有所回落,但仍高于对照组。缺血6~23 h可检测到TUNEL阳性细胞,48~71 h达高峰[(27.56±6.76)个/高倍视野]。2~5 h受损神经元形态基本正常,24~47 h神经元形态学变化较为明显,72 h后,大部分神经元出现坏死特征。结论人脑梗死后海马CA1区Aβ1-40和Aβ1-42在神经元中的表达均增加,表明脑缺血可能导致这两种蛋白的聚集,同时Aβ的毒性作用可能对脑梗死后CA1区神经元的迟发性死亡起着一定的作用。     

高糖诱导大鼠海马神经元细胞模型建立及细胞凋亡的影响

目的通过不同葡萄糖浓度和不同作用时间诱导SD大鼠海马神经元,建立稳定的糖尿病脑病细胞模型,探讨高糖对海马神经元凋亡情况的影响。方法 (1)海马神经元的原代培养及纯度鉴定。(2)最适高糖浓度探索:CCK-8法检测海马神经元各组细胞活性。(3)最适浓度下高糖作用时间的探索:Western blot检测海马神经元细胞Bcl-2、Bax的表达情况。(4)最适浓度和作用时间下,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果 (1)成功培养海马神经元,神经元细胞经鉴定纯度达85%以上。(2) 45 mmol/L组海马神经元存活率均 80%。(3) 45 mmol/L-48 h为最适作用时间组,细胞内Bcl-2表达下降、Bax表达升高(P 0. 01)。(4)最适高糖组细胞凋亡率显著升高(P 0. 01)。结论高糖浓度为45 mmol/L、作用时间48 h为理想的糖尿病脑病细胞模型,且高糖通过影响Bcl-2、Bax的表达导致海马神经元凋亡率升高。     

17-β雌二醇对大鼠海马神经元保护作用的实验研究

目的研究17-β雌二醇对大鼠海马神经元树突生长的影响及血清饥饿情况下对神经元存活率的影响。方法体外培养3d的海马神经元通过加入浓度为1nmol/L和2nmol/L的17-雌二醇,统计比较神经元树突的数目和长度;体外培养1d的海马神经元,加入17-雌二醇,培养6～7d后血清饥饿48h后进行NSE染色及MTT检测,检测神经元形态及神经元存活率。结果 17-雌二醇可显著增加存活神经元树突的长度和数量;并能够有效地抑制血清饥饿引起的细胞减少,增加其存活率。结论 17-β雌二醇对大鼠海马神经元的生长发育及存活具有保护性作用。     

GDF-15沉默对脑梗死大鼠模型脑内神经元凋亡的影响及机制研究

目的 探讨生长分化因子-15(Growth differentiation factor-15,GDF-15)沉默对脑梗死大鼠模型脑内神经元凋亡的影响及作用机制。方法 取40只大鼠分为脑梗死组、假手术组、沉默组、空载组,每组10只; 脑梗死组采用颈内动脉线栓法制备脑梗死大鼠模型,沉默组、空载组在建模后立即经尾静脉注射携带GDF-15反义寡核苷酸的GDF-15质粒、空载体质粒,假手术组大鼠暴露颈内动脉、颈外动脉后不插线阻断血流,直接缝合皮肤; 评估大鼠造模3、7 d后的神经功能,流式细胞术检测脑皮质神经元凋亡情况,HE染色法观察各组大鼠脑组织病理改变,采用逆转录-聚合酶链反应(Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)测定脑组织中GDF-15,母亲抗十肽同系物2(Mothers against decapentaplegic homolog 2,Smad2),Smad4、p21 mRNA相对表达水平,采用Western blot法测定GDF-15,Smad2,Smad4,p21蛋白水平。结果 与假手术组比较,脑梗死组、沉默组、空载组造模3、7 d后神经功能评分均升高(P<0.05); 与脑梗死组、空载组比较,沉默组造模7 d后神经功能评分降低(P<0.05); 与造模3 d后比较,脑梗死组、沉默组、空载组造模7 d后的神经功能评分均下降(P<0.05)。HE染色发现,与假手术组比较,脑梗死组出现神经元变性、坏死、脱失,脑组织稀疏、胶质细胞大量增生等; 与脑梗死组比较,沉默组造模7 d后的神经元坏死程度较低,且细胞间质水肿与胶质细胞增生程度较轻微; 空载组神经元病理形态变化与脑梗死组相似。沉默组大鼠神经元凋亡率低于脑梗死组,但高于假手术组(P<0.05)。与脑梗死组、空载组比较,沉默组大鼠脑组织内GDF-15,Smad2,Smad4 mRNA和蛋白相对表达水平更低,p21 mRNA和蛋白相对表达水平更高(P<0.05)。结论 GDF-15沉默可抑制脑梗死大鼠模型脑内神经元凋亡,保护神经功能,作用机制可能与Smad通路及p21有关。     

缺氧-复氧对大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响

目的 观察缺氧-复氧对体外培养海马神经元Bcl-2和Bax表达和神经元凋亡的影响。方法 取培养12d的海马神经元，置于恒温(36℃)密闭容器内，连续充以无氧气体[90％(体积分数)N2、10％(体积分数)CO2]，在缺氧条件下继续培养4h后，再于常氧培养箱内复氧培养24h和72h。于不同时间观察神经元存活数，并分别用抗Bcl-2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色，观察缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2和Bax表达。并用原位末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧-复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果 缺氧-复氧后24～72h,海马神经元对Bcl-2的表达逐渐减弱，对Bax的表达逐渐增强，对Bax／Bcl-2比值逐渐增大，凋亡神经元百分率逐渐增多。结论 缺氧-复氧后24～72h神经元凋亡的发生与神经元Bcl-2表达逐渐减弱，Bax表达逐渐增强，Bax／Bcl-2比值逐渐增大有关。     

β-淀粉样蛋白对海马神经元钙离子浓度的影响及其机制研究

目的　观察β-淀粉样蛋白 (Aβ1 -40 )对海马神经元内钙离子浓度的影响及尼莫地平的拮抗作用。方法　采用大鼠海马神经元的原代培养技术 ,分别用 MTT法和激光扫描共聚焦显微镜结合 Fluo-3 /AM标记观察神经元存活率和细胞内游离钙离子浓度变化。结果　 Aβ1 -40在较高浓度 (1μmol/L和 1 0μmol/L )下 ,对神经元存活率和 [Ca2 + ]i 的影响与对照组相比 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ;5 μmol/L尼莫地平可部分降低Aβ1 -40引起的 [Ca2 + ]i 升高。结论　 Aβ1 -40可引起培养海马神经元存活率下降及胞内钙离子浓度升高 ,尼莫地平有部分拮抗作用。     

知母皂苷Ⅱ对老龄大鼠学习记忆行为及海马区神经元的影响

目的本实验研究知母皂苷BⅡ(Timosaponin B-Ⅱ,TB-Ⅱ)对自然衰老大鼠学习记忆能力的改善及海马区神经元的保护作用。方法 SD大鼠老年对照组(15只)、青年大鼠对照组(15只)、TB-II 1 mg/kg组(15只)、TB-II2 mg/kg组(15只)和TB-II 4 mg/kg组(15只)。Morris水迷宫实验测量动物逃避潜伏时间; Elisa法测定脑脊液IL-6和TNF-α含量; TUNEL法检测海马区凋亡神经元; HPLC法检测多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺含量。结果水迷宫实验显示老龄对照组逃避潜伏时间比青年对照组增加,差异有统计学意义(P 0. 05);给药组与老年对照组相比逃避潜伏时间明显缩短,差异有统计学意义(P 0. 05);给药组脑脊液IL-6和TNF-α浓度下降(P 0. 05);给药组海马区神经元凋亡减少(P 0. 05);给药组DA、NE和5-HT含量增加(P 0. 05)。结论知母皂苷BⅡ通过抑制大脑炎症介质生成和抑制海马区神经元凋亡,提高神经递质含量,明显改善自然衰老大鼠的学习和记忆能力。     

JNK信号转导通路在Aβ25-35诱导大鼠原代海马神经元凋亡中作用机制的研究

目的 研究Aβ25-35诱导海马神经元凋亡的机制以及JNK抑制剂SP600125的保护作用，探讨在Aβ25-35细胞毒性中JNK-c-Jun信号转导通路的可能作用机制。方法 将体外海马原代神经元培养至第7天，用β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)和JNK抑制剂(SP600125)对细胞进行处理。用光镜进行海马原代神经元形态学观察，MTT检测不同时间点的细胞活性，以及用免疫印迹法检测不同时间点的JNK及c-Jun蛋白活性。结果 大鼠原代海马神经元经过Aβ25-35处理后，发生凋亡，细胞生存率呈时间依赖性下降，经过免疫学方法检测发现细胞在Aβ25-35处理早期出现磷酸化JNK和磷酸化c-Jun的表达增高，且这一过程可被SP600125抑制。MTT检测发现在使用SP600125后，细胞生存率上升，具有显著性差异。结论 体外原代海马神经元培养实验表明Aβ25-35在诱导原代海马神经元凋亡过程中，c-Jun氨基端激酶(JNK)及其底物转录因子c-Jun被激活。使用JNK抑制剂SP600125后，JNK和c-Jun均被抑制，且海马原代神经元的生存率明显提高，生存状态明显改善。研究表明JNK信号转导通路可能促成Aβ的细胞毒性作用。     

铁皮石斛多糖对癫痫大鼠认知功能及海马神经元凋亡的影响

目的 探讨铁皮石斛多糖(dendrobium officinale polysaccharides,DOP)对癫痫大鼠认知功能的作用及可能作用机制.方法 收集SPF级Wistar雄性大鼠85只,随机选取15只为对照组,余大鼠给予腹腔注射毛果芸香碱建立癫痫大鼠模型,将造模成功的64只大鼠随机分为癫痫模型组、DOP低剂量组...     

神经保护剂鸡尾酒疗法对海马神经元氧糖剥离（OGD）后神经元凋亡及抗凋亡蛋白Bcl一2表达的影响

目的：探讨不同类型神经保护剂联合应用即鸡尾酒（cocktail）疗法是否较单一神经保护剂对海马神经元培养氧糖剥离（OGD）后有更好的保护作用。方法：采用海马神经元培养氧糖剥离（OGD）模型，分为1，6-二磷酸果糖（FDP）组、MK-801组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）组、cocktail组和对照组，观察神经元凋亡及抗凋亡蛋白Bcl-2表达情况。结果：cocktail组神经元凋亡减少，Bcl-2表达增多，与单-用药各组相比有显著性差异（P＜0．05）。结论：神经保护剂cocktail疗法对神经元缺血保护作用较单一用药明显增强。     

β淀粉样肽25-35对原代培养的海马神经元电压门控钙通道电流的影响

目的 探讨β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)对海马神经元电压门控的钙通道电流(VGCC)的作用.方法 应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元上的VGCC,通过设定不同的钳制电压分别记录高电压激活的钙电流(HVA-ICa)和低电压激活的钙电流(LVA-ICa),并观察Aβ25-35对其的影响.结果 分别对原代培养的海马神经元急性胞外给予2μmol/L和10 μmol/L的凝聚态Aβ25-35,在最大激活电压下加药后ICa幅度分别是加药前的99.80%±0.02%及100.00%±1.58%,差异没有统计学意义.10 μmol/L凝聚态Aβ25-35预孵育24 h可增大ICa,对照组(未给Aβ25-35)为(24.49±4.35)pA/pF,Aβ25-35组(预孵育24 h)为(46.59±7.15)pA/pF,两组差异有统计学意义(P＜0.05);但Aβ25-35组的膜电容[(14.34±1.74)pF]与对照组[(14.44±0.97)pF]相比差异没有统计学意义.结论 急性给予凝聚态Aβ25-35对VGCC没有影响,24 h预孵育凝聚态Aβ25-35增大了VGCC,而膜电容没有改变,提示凝聚态Aβ25-35可通过对细胞膜上钙通道进行分子调控以增大VGCC.     

米诺环素对戊四氮致疒间大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨米诺环素对神经元凋亡的保护作用及与剂量的关系。方法采用戊四氮(PTZ)建立的癫疒间大鼠模型,用灌胃法给不同剂量的米诺环素后麻醉大鼠,灌注取脑进行石蜡切片制备及免疫组化检测,采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文分析系统进行图像分析,观察大鼠海马区细胞凋亡变化。结果对照组与PTZ组比较,对照组凋亡数目少(P<0.05);MT1组与PTZ组比较,细胞凋亡无差异(P﹥0.05);MT2组与PTZ组比较,MT2组细胞凋亡数少(P<0.05);MT3组与PTZ组比较,MT3组细胞凋亡多(P<0.05)。各干预组之间比较,MT2组细胞凋亡较MT3组、MT1组都少(P<0.05)。结论米诺环素在适当的浓度范围内有神经元保护作用。