过达miR-188-5p对丙泊酚麻醉导致的大鼠认知功能障碍的影响

目的 探讨过表达miR-188-5p对丙泊酚麻醉导致的大鼠认知功能障碍的影响.方法 将14d龄SPF级新生SD大鼠随机分为对照组、丙泊酚组、丙泊酚+miRNA,阴性对照(agomir NC)组、丙泊酚+miR-188-5p agomir组(miR-188-5p agomir组).对照组:腹腔注射生理盐水.丙泊酚组:腹腔注射丙泊酚(100mg·kg-1).agomir NC组:在注射丙泊酚前30 min,在大鼠侧脑室注射agomir NC.miR-188-5p agomir组:在注射丙泊酚前30 min,在大鼠侧面脑室注射miR-188-5p agomir,对照组和丙泊酚组在注射前30 min,分别在侧面脑室注射生理盐水.水迷宫实验检测大鼠学习以及记忆能力.苏木精-伊红染色法观察大鼠海马组织病理学改变.RT-qPCR检测各组大鼠海马组织miR-188-5p表达水平.TUNEL法检测四组大鼠海马神经元凋亡情况.Western blot检测各组大鼠海马组织Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白水平.结果 与对照组比,丙泊酚组、agomir NC组大鼠5d逃避潜伏期显著延长,平台跨越次数下降,游泳路程延长,平台停留时间缩短,miR-188-5p显著降低,海马神经元凋亡率显著增加,凋亡相关蛋白Bax和Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平显著增加,Bcl-2表达水平显著下降(均P＜0.05).与丙泊酚组和agomir NC组比,miR-188-5p agomir组5d逃避潜伏期显著缩短,平台跨越次数增加,游泳路程减少,平台停留时间延长,细胞凋亡率显著下降,Bax和Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平显著下降,Bcl-2表达水平显著增加(均P＜ 0.05).结论 过表达miR-188-5p能够改善丙泊酚麻醉导致的大鼠记忆下降,抑制海马神经元细胞凋亡.     

miR-155-5p靶向调控SOCS5调节JAK2/STAT3信号通路促进大鼠脑缺血-再灌注损伤

目的探讨miR-155-5p靶向细胞因子信号传导抑制蛋白5 (SOCS5)对大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用及机制。方法采用改良版线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型。将120只SD大鼠,随机分为6组:假手术组、模型组、抑制对照组(antagomir NC组)、miR-155-5p抑制组(miR-155-5p antagomir 组)、抑制 miR-155-5p+干扰对照组(miR-155-5p antagomir+shRNA control 组)及抑制 miR-155-5p+SOCS5 干扰对照组(miR-155-5p antagomir+SOCS5 shRNA 组),每组 20 只。术后 24 h 对各组大鼠进行神经行为评价;RT-qPCR测定各组脑组织miR-155-5p和SOCS5信使RNA (mRNA)表达水平,Spearman分析模型组中miR-155-5p和SOCS5的相关性;TUNEL法检测海马神经细胞凋亡;Western blot测定各组脑组织中SOCS5、磷酸化Janus激酶2(P-JAK2)、磷酸化信号转导与转录激活因子3 (p-STAT3)、B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平;双荧光素酶报告验证miR-155-5p对SOCS5的调控作用。结果与假手术组相比,模型组miR-155-5p表达水平明显升高(P0.05),而SOCS5 mRNA表达水平明显降低(P 0.05)。在模型组miR-155-5p与SOCS5表达呈负相关(r=-0.857,P0.01)。与模型组和antagomir NC组相比,miR-155-5p antagomir组miR-155-5p表达水平、神经功能损伤评分、海马神经细胞凋亡率、p-JAK2蛋白表达水平、p-STAT3蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平明显降低(P 0.05),而SOCS5和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P0.05)。与miR-155-5p antagomir组和 miR-155-5p antagomir+shRNA control 组相比,miR-155-5p antagomir+SOCS5 shRNA 组 Bax 蛋白表达水平、p-JAK2蛋白表达水平、p-STAT3蛋白表达水平、神经功能损伤评分以及海马神经细胞凋亡率明显升高(P 0.05),而SOCS5和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P 0.05);荧光素酶实验证实SOCS5是miR-155-5p的靶基因。结论miR-155-5p靶向调控SOCS5促进大鼠脑缺血-再灌注损伤,其机制与激活JAK2/STAT3信号通路有关。     

miR-146a通过靶向TRIB3调节癫痫大鼠海马神经元凋亡及炎症反应

目的探讨miR-146a靶向调控Tribble同源蛋白3(TRIB3)对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响,以及对炎症反应的调控作用。方法体外培养新生Sprague-Dawley(SD)大鼠的海马神经元,制备癫痫海马神经元模型,采用免疫荧光双染法和膜片钳技术检测癫痫海马神经元模型。将海马神经元随机分为四组:空白对照组(control组):正常海马神经元;癫痫组(EP组):癫痫海马神经元;阴性对照组(miR-146a NC组):转染100 nM miR-146a NC至癫痫海马神经元;miR-146a mimic组:转染100 nM miR-146a mimic至癫痫海马神经元,采用脂质体介导法进行转染;流式细胞术检测各组海马神经元细胞的凋亡情况;Western blot检测各组海马神经元中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)以及肿瘤抑制基因p53的蛋白表达;ELISA法检测各组海马神经元细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平;双荧光素酶报告基因实验确定miR-146a与TRIB3的靶向作用情况。结果癫痫组大鼠海马神经元与正常组大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P0.05);与空白对照组比较,癫痫组miR-146a表达水平升高,海马神经元凋亡数目显著增加,海马神经元中caspase-3、Bax及p53的蛋白表达显著增加,Bcl-2蛋白表达减少,TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平与细胞培养液中的含量均升高,差异均有统计学意义(P 0.01)。与癫痫组比较,miR-146a mimic组海马神经元凋亡数目下降,caspase-3、Bax及p53的蛋白表达显著减少,Bcl-2蛋白表达增加,TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平与含量均下降,差异均有统计学意义(P 0.01)。TRIB3与miR-146a存在靶向关系,在野生型TRIB3-WT中,miR-146a mimic组荧光素酶活性较miR-146a NC组显著降低(P0.01)。结论高表达miR-146a通过靶向调节TRIB3 mRNA表达来抑制海马神经元凋亡的发生,并减少TNF-α、IL-1β和IL-6等炎症因子的释放。     

亚低温对大鼠脑创伤后海马区凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察亚低温对大鼠创伤性脑损伤(TBI)后海马CA3区细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响,探讨亚低温脑保护的分子生物学机制.方法将大鼠随机分成假手术、单纯脑损伤和脑损伤后亚低温治疗3组,应用改良Marmarou方法制作大鼠TBI模型,分别用流式细胞仪(FCM)和免疫组化法检测各组动物脑海马CA3区细胞凋亡率和Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表达.结果与假手术组相比,大鼠TBI后海马CA3区细胞凋亡率及Caspase-3表达增高(P<0.05),Bcl-2/Bax表达比下降(P<0.05).亚低温治疗后,大鼠脑海马CA3区细胞凋亡率及Caspase-3表达较单纯脑损伤组降低(P<0.05),而Bcl-2/Bax表达比升高(P<0.05).结论亚低温对TBI的脑保护作用机制可能与干预伤后凋亡相关基因表达并减少神经细胞凋亡有关.     

线粒体钙单向转运体在匹鲁卡品致痫大鼠海马神经损伤中的作用

目的研究线粒体钙单向转运体(mitochondrial calcium uniporter,MCU)在氯化锂-匹鲁卡品(pilocarpine,PILO)癫痫大鼠模型神经损伤中的作用。方法将84只雄性SD大鼠随机分成空白对照(CON)组、PILO组(2 h、8 h、24 h和72 h 4个亚组)、Ru360组和精胺(Spermine)组。观察各组大鼠行为学改变,并荧光染色法测定海马组织线粒体Ca~(2+)浓度,TUNEL染色检测海马CA3区神经元凋亡,并采用Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cyt C和caspase-3表达变化。结果 (1)与CON组比较,PILO组海马神经元线粒体Ca~(2+)浓度明显升高,凋亡明显增加(P0.05);与CON组比较,PILO组海马Bax表达水平、线粒体Cyt C释放及caspase-3激活明显增多,而Bcl-2表达水平明显减少(P0.05)。(2)与PILO组比较,Ru360组海马神经元线粒体Ca~(2+)浓度明显降低,凋亡明显减少(P0.05);与PILO组比较,Ru360组海马Bax表达水平、线粒体Cyt C释放及caspase-3激活明显减少,而Bcl-2表达水平明显增多(P0.05)。(3)与PILO组比较,Spermine组海马神经元线粒体Ca~(2+)浓度明显升高,凋亡明显增加(P0.05);与PILO组比较,Spermine组海马Bax表达水平、线粒体Cyt C释放及caspase-3激活明显增多,而Bcl-2表达水平明显减少(P0.05)。结论 MCU在PILO癫痫大鼠海马神经损伤中发挥重要作用,抑制MCU可发挥对海马神经元凋亡的保护作用,其机制可能是通过抑制线粒体介导的细胞凋亡途径。     

大鼠脑创伤后海马CA3区细胞凋亡及相关基因表达研究

目的研究弥漫性脑损伤后不同时间,大鼠海马CA3区细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达情况,探讨脑创伤后神经细胞凋亡的分子生物学机制.方法应用流式细胞仪和免疫组化法,分别检测脑创伤后不同时间海马CA3区细胞凋亡率及Bcl-2,Bax和Caspase-3基因在蛋白质水平的表达情况.结果脑创伤后海马CA3区存在不同程度细胞凋亡,Bcl-2在脑损伤后表达下降,而Bax和Caspase-3在脑创伤后表达升高;Caspase-3表达的峰值时间(72 h)出现在Bax之后(48 h).结论弥漫性脑损伤后,大鼠海马CA3区存在细胞凋亡及Bcl-2,Bax和Caspase-3的表达变化.Bcl-2/Bax表达比值下降早于Caspase-3的上升,Bcl-2/Bax表达比值改变可能与Caspase-3活化有关,进而启动并加重脑损伤后神经细胞凋亡.     

右美托咪定调节MAPK/ERK-CREB通路对大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨右美托咪定(DEX)调节MAPK/ERK-CREB通路对大鼠海马神经元凋亡的保护作用。方法通过腹腔注射氯化锂-毛果芸香碱构建癫痫持续状态(SE)大鼠模型,并随机分为4组,每组各10只。SE+DEX组在SE模型构建成功后腹腔注射DEX 1μmol/L,阳性对照组腹腔注射1μmol/L苯巴比妥,药物干预24 h后,通过Nissl法和TUNEL法检测大鼠海马神经元损伤及凋亡情况,Western blot法检测大鼠海马组织中MAPK、p ERK、p CREB蛋白和凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax表达。结果与正常对照组相比,SE、阳性对照组、SE+DEX组大鼠Racine分值显著增加(P 0. 05),大鼠海马神经元数、Bcl-2蛋白表达量显著减少(P 0. 05),棕褐色TUNEL阳性细胞数、MAPK、p-ERK、p-CREB、caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2蛋白表达量显著增加(P 0. 05)。与SE组相比,阳性对照组、SE+DEX组大鼠Racine分值显著降低(P 0. 05),大鼠海马神经元数、Bcl-2蛋白表达量显著增加(P 0. 05),棕褐色TUNEL阳性细胞、MAPK、p-ERK、p-CREB、caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2蛋白表达量显著减少(P 0. 05)。结论 DEX可能通过抑制MAPK/ERK-CREB通路抑制海马神经元凋亡对其有保护作用。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡研究

目的 观察大鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤后海马CA1区神经元凋亡、TUNEL阳性细胞变化,以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白的表达情况.方法 将健康雄性SD (Sprague-Dawley)大鼠随机分为假手术组和I/R组,每组再分为缺血再灌注后3、6、12、24、48、72 h亚组.应用免疫组化方法检测再灌注后不同时间点大鼠海马CA1区神经元凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白的表达及Bcl-2/Bax比值变化,采用原位细胞凋亡检测(TUNEL)技术检测凋亡阳性细胞数.结果 各组非缺血侧相应区域神经元胞质中Bcl-2均有微弱表达.I/R组缺血侧海马CA1区于再灌注3 h开始出现Bcl-2和Bax蛋白微弱表达,随再灌注时间延长神经元内Bcl-2表达逐渐增强,再灌注24 h后Bcl-2表达达高峰,假手术组与I/R组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 I/R损伤后海马CA1区神经元不仅存在变性坏死,还存在明显的细胞凋亡且细胞凋亡在大鼠I/R损伤中发挥重要作用;I/R可诱导海马CA1区细胞凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白表达,且其表达呈一定规律.     

大蒜素对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察大蒜素对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马凋亡相关蛋白表达的影响,进一步探讨大蒜素的脑保护机制。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为5组:假手术组(Sham组);缺血再灌注组(IR组);缺血再灌注+大蒜素10 mg/kg(All-10 mg)、20 mg/kg(All-20 mg)、30 mg/kg(All-30 mg)组,夹闭两侧颈总动脉8 min再灌注24 h建立大鼠全脑缺血再灌注模型,取海马组织硫堇染色观察海马组织学改变及存活神经元密度;免疫组织化学染色测定海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与Sham组相比,IR组海马CA1区神经元密度明显降低,Bax蛋白表达明显增加(均P0.05);与IR组相比,大蒜素处理各组海马CA1区神经元密度明显增多,Bcl-2蛋白表达明显增加,Bax蛋白表达明显减少,其中以All-20 mg组变化最显著(均P0.05)。结论大蒜素可以通过影响凋亡相关蛋白的表达而抑制细胞凋亡,从而发挥脑保护作用。     

普瑞巴林对慢性颞叶癫癎大鼠海马凋亡调控基因的影响

目的通过观察普瑞巴林对匹罗卡品慢性癫癎大鼠海马区Bcl-2和Bax表达的影响,探讨普瑞巴林治疗癫癎的药理学机制及对大鼠海马神经元的抗凋亡作用。方法采用氯化锂-匹罗卡品化学诱导方法建立慢性颞叶癫癎模型。经腹腔注射普瑞巴林40mg(/kg·d)连续治疗3周,免疫组织化学染色和Western blotting法检测不同处理组大鼠海马区Bcl-2和Bax表达变化。结果与生理盐水对照组比较,模型组大鼠海马区Bcl-2和Bax表达水平显著升高(均P=0.000);与模型组比较,普瑞巴林治疗组大鼠海马区Bcl-2表达水平升高、Bax表达水平降低,组间差异具有统计学意义(均P=0.000)。结论新型抗癫癎药物普瑞巴林可通过降低慢性颞叶癫癎大鼠海马区Bax表达、上调Bcl-2表达而抑制细胞凋亡,发挥神经元保护作用。     

α-细辛醚对KA癫痫大鼠海马组织中Bax、Bcl-2的影响

目的 探讨不同浓度的α-细辛醚对KA癫痫大鼠海马组织中细胞凋亡调节基因Bax、Bcl-2的mRNA及其蛋白表达的影响.方法 红藻氨酸(kainic acid,KA)侧脑室注入SD大鼠制备癫痫模型,随机分为模型对照组(KA组)、α-细辛醚低浓度组(6mg/kg)、中浓度组(12mg/kg)和高浓度组(24mg/kg),另设假手术组为正常对照组,每组10只.α-细辛醚组经腹腔注射连续给药10d后检测大鼠海马组织中Bax、Bcl-2的mRNA及其蛋白的表达.结果 α-细辛醚用药后,大鼠表现为明显的镇静、抗惊厥作用;与正常对照组相比,KA组、α-细辛醚低、中浓度组大鼠海马区Bax的mRNA及蛋白表达升高,差异有统计学意义(P均＜0.05),α-细辛醚高浓度组Bax的mRNA及蛋白表达下降(P＜0.05);与正常对照组相比,Bcl-2的mRNA及蛋白表达KA组显著降低,α-田辛醚中、高浓度组升高(P均＜0.05),低浓度组与对照组相比差异不明显(P＞0.05).结论 KA诱导的SD癫痫大鼠神经元存在Bax、Bcl-2的异常表达,α-细辛醚可能通过降低Bax和提升Bcl-2基因的表达从而减少SD癫痫大鼠神经元凋亡.     

下调miR-203靶向MEF2C/NF-κB抑制颞叶癫痫大鼠海马胶质细胞的活化和炎症反应

目的 探讨下调miR-203对颞叶癫痫大鼠海马胶质细胞活化和炎症反应的影响。方法 将46只成年SD大鼠随机分为假手术组（n=10）、模型组（n=12）、阴性对照组（n=12）和miR-203低表达组（n=12）。立体定向辅助下,将海人酸注入大鼠左侧海马CA3区建立颞叶癫痫模型,miR-203低表达组和阴性对照组大鼠左侧海马CA3区分别注射携带miR-203 inhibitor的腺相关病毒和空腺病毒载体,7 d后取左侧海马组织,PCR法检测miR-203水平,ELISA法检测炎症因子[白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6和肿瘤坏死因子α（TNF-α）]水平,免疫印迹法检测肌细胞增强因子2c（MEF2C）、核因子-κB（NF-κB）p65蛋白表达,TUNEL法检测神经元凋亡,GFAP/CD11b/c免疫荧光染色分析胶质细胞活化。结果 模型组大鼠海马组织miR-203、NF-κB p65蛋白表达量、炎症因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）水平明显增高（P<0.05）,MEF2C蛋白表达量明显降低（P<0.05）,活化的胶质细胞数量、神经元凋亡数量明显增多（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示,MEF2C是miR-203的靶基因。miR-203表达低表达组大鼠海马组织miR-203表达量、NF-κB p65蛋白表达量、炎症因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）水平明显降低（P<0.05）,MEF2C蛋白表达量明显增高（P<0.05）,活化的胶质细胞数量、神经元凋亡数量明显减少（P<0.05）。结论 下调miR-203,靶向调控MEF2C/NF-κB信号通路,抑制颞叶癫痫大鼠海马胶质细胞的活化、神经元凋亡和炎症反应。     

颅脑损伤后冷环境下神经细胞凋亡及相关蛋白表达

目的 探讨冷环境下大鼠颅脑损伤后神经细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2,Bax的表达.方法 80只健康SD大鼠随机分为冷环境致伤组、常温致伤组、冷环境对照组和常温对照组,每组20只;致伤组以撞击法制作重型颅脑损伤模型,对照组仅行开颅手术.采用免疫组化法检测各组神经细胞凋亡及凋亡蛋白Bcl-2,Bax的表达;比较各组大鼠的体温变化、凋亡细胞及凋亡蛋白阳性率差异.结果 冷环境致伤组致伤后大鼠体温显著下降.不同致伤组致伤后凋亡细胞阳性率均显著增加,且两组同时间段比较存在显著差异(P <0.05).不同致伤组致伤后凋亡蛋白Bcl-2,Bax表达均增高,两组同时间段Bax表达差异有统计学意义(P <0.05);冷环境致伤组Bax/Bcl-2比值明显高于常温致伤组(P <0.05).结论 冷环境可引起颅脑损伤后大鼠体温降低,促进神经细胞凋亡.     

西酞普兰对慢性应激大鼠海马CA1和CA3区神经细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2及Bcl相关蛋白表达与凋亡的影响

目的 探讨西酞普兰对慢性应激大鼠海马CA1、CA3神经细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl相关蛋白(Bax)表达和凋亡的影响.方法 40只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、应激组(生理盐水灌胃)、处理1～3组[分别以不同剂量(1 mg·kg-1·d-1、4 nag·kg-1·d-1、8 mg·kg-1·d-1)氢溴酸西酞普兰灌胃],每组8只.采用强迫游泳制造慢性应激模型,用大鼠悬尾实验、力竭实验进行行为学观察,免疫组织化学检测Bel-2、Bax表达水平.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测细胞凋亡.尼康图像分析软件测量分析Bcl-2、Bax阳性表达、凋亡阳性细胞数量及积分吸光度值.结果 应激组静止不动时间[(279±53)s]长于对照组[(182±35)s]及处理1～3组[(200±71)s,(159±59)s,(165±54)s];挣扎次数[(20±3)次]少于对照组[(24±3)次]及处理1～3组[(37±16)次,(32±10)次,(24±4)次];力竭时间[(38.3±5.1)min]长于对照组[(22.9±1.8)min]、短于处理1～3组[(54.4±2.9)min,(69.3±17.6)min,(46.4±4.0)min];差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).与对照组比较,应激组CA1、CA3神经细胞Bcl-2表达变弱、Bax表达增强、凋亡细胞增多,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).与应激组比较,处理1～3组Bcl-2表达增强、Bax表达变弱、凋亡细胞减少,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).处理组1～3组的部分Bcl-2/Bax表达、凋亡阳性细胞数量与对照组的差异有统计学意义(P<0.05),但IA值的差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 慢性应激可影响大鼠海马CAI、CA3神经细胞Bcl-2、Bax表达水平,促进细胞凋亡;西酞普兰可影响慢性应激大鼠海马CAI、CA3神经细胞Bcl-2、Bax表达水平,拈抗细胞凋亡.     

依达拉奉对大鼠蛛网膜下腔出血的脑保护作用

目的探讨依达拉奉对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)的脑保护作用,以为临床应用提供理论依据。方法108只健康成年雄性大鼠,建立蛛网膜下腔出血模型,随机分为假手术组(36只)、手术组(SAH组,36只)和依达拉奉组(36只)。分别采用硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法检测大鼠脑组织丙二醛浓度和超氧化物歧化酶活性;TUNEL法计数大鼠海马CA1区神经细胞凋亡数目;免疫组织化学染色检测凋亡相关因子Bcl-2及Bax的表达水平。结果SAH组大鼠脑组织丙二醛浓度逐渐升高且各时限均高于假手术组(P<0.05),超氧化物歧化酶活性逐渐降低且各时限均低于假手术组(P<0.05),以72h降低最为显著(均P<0.05);依达拉奉组丙二醛浓度逐渐降低且各时限均低于SAH组(P<0.05),以72h降低最为显著(均P<0.05),超氧化物歧化酶活性亦逐渐下降但各时限均高于SAH组(P<0.05)。SAH组大鼠海马CA1区细胞凋亡数目逐渐增加,至72h达峰值水平(均P<0.05),依达拉奉组细胞凋亡数目亦逐渐增加但各时限均低于SAH组(P<0.05)。SAH组大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax表达水平各时限均高于假手术组(均P<0.05),依达拉奉组Bcl-2表达水平均高于SAH组(P<0.05),而Bax表达水平则均低于SAH组(P<0.05)。结论蛛网膜下腔出血后可出现继发性脑损害,依达拉奉能够有效地抑制氧自由基,并通过增强Bcl-2表达和抑制Bax表达而减少神经细胞凋亡,具有一定的脑保护作用。     

七氟醚通过miR-21-5p调控RTN4影响大鼠神经干细胞增殖和凋亡

目的 探究七氟醚(Sev)影响大鼠神经干细胞(NSC)增殖和凋亡的作用机制。方法 将体外培养神经干细胞分为4组：对照组，Sev组，Sev+miR-21-5p mimics组(Sev处理后转染miR-21-5p mimics),Sev+miR-21-5p mimics+pcDNA-RTN4组(Sev处理后miR-21-5pmimics和pcDNA-RTN4共转染)。RT-qPCR检测各组NSC中miR-21-5p和RTN4 mRNA表达水平；Western blot检测干细胞标志物及细胞凋亡相关P53、Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达水平；CCK-8法检测NSC增殖活力；流式细胞术检测NSC凋亡水平。此外，双荧光酶素报告检测miR-21-5p与RTN4之间的靶向关系。结果 与对照组比较，2%Sev处理显著抑制NSC的增殖活力并和促进细胞凋亡；与对照组比较，2%Sev处理可显著下调NSC中miR-21-5p水平；与对照组比较，Sev组凋亡相关蛋白P53、Bax及cleavedcaspase-3表达水平显著上调；miR-21-5p靶向下调RTN4并参与Sev调控NSC活性的...     

低频率电刺激通过调控Rho/ROCK/NF-κB途径对癫痫大鼠作用的研究

目的探究低频率电刺激(LFS)对癫痫的作用及其可能的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为对照组、癫痫模型组、假刺激组和LFS治疗组,每组15只。记录大鼠Racine评分和脑电图,Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;HE染色和尼氏染色检测大鼠海马CA1区病理学变化;TUNEL染色检测大鼠海马神经元细胞凋亡;ELISA检测大鼠血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平;Western blotting检测大鼠海马RhoA、ROCK1、ROCK2、p65、p-p65和凋亡相关基因蛋白表达;RT-PCR检测大鼠海马RhoA、ROCK1和ROCK2 mRNA表达。结果癫痫模型组大鼠出现了连续性棘波。癫痫模型组大鼠的Racine评分;神经元细胞凋亡率;Bax、c-caspase3和p-p65/p65蛋白表达;RhoA、ROCK1和ROCK2 mRNA和蛋白表达;血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平较对照组升高,差异有统计学意义(P0.05)。癫痫模型组大鼠的空间学习记忆能力、神经元数量、尼氏体数量、Bcl-2蛋白表达较对照组降低,差异有统计学意义(P0.05)。LFS治疗组大鼠波峰下降。LFS治疗组大鼠的Racine评分;神经元细胞凋亡率;Bax、c-caspase3和p-p65/p65蛋白表达;RhoA、ROCK1和ROCK2 mRNA和蛋白表达;血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平较假刺激组降低,差异有统计学意义(P0.05)。LFS治疗组大鼠的空间学习记忆能力、神经元数量、尼氏体数量和Bcl-2蛋白表达较假刺激组升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 LFS可能通过抑制Rho/ROCK/NF-κB途径来抑制炎症产生,从而发挥抗癫痫作用。     

木香烃内酯通过调控LncRNA LINC01116/miR-9-5p的表达来减轻过氧化氢诱导的大鼠脑微血管内皮细胞损伤

目的 探讨木香烃内酯(Cos)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的大鼠脑微血管内皮细胞的氧化应激、凋亡的影响及其对长链非编码RNA LINC01116(LncRNA LINC01116)/微小RNA-9-5p(miR-9-5p)的调控作用。方法 原代分离培养大鼠脑微血管内皮细胞,并随机分成Con组、H₂O₂组、Cos-L组、Cos-M组、Cos-H组、Cos-H+pcDNA组、Cos-H+pcDNA-LINC01116组; 采用化学比色法检测丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的水平及超氧化物歧化酶(SOD)的活性; 流式细胞术检测细胞凋亡率; 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC01116、miR-9-5p的表达水平; 双荧光素酶报告实验验证LINC01116与miR-9-5p的靶向关系; 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达水平。结果 H₂O₂处理后MDA的水平显著升高(P<0.05),GSH水平与SOD活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),LINC01116的表达水平显著升高(P<0.05),miR-9-5p的表达水平显著降低(P<0.05); Cos处理后MDA的水平显著降低(P<0.05),GSH水平与SOD活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),LINC01116的表达水平显著降低(P<0.05),miR-9-5p的表达水平显著升高(P<0.05),且Cos-L组、Cos-M组、Cos-H组上述指标的水平比较均有明显差异(P<0.05); 双荧光素酶报告实验证实LINC01116可靶向结合miR-9-5p; LINC01116过表达可减弱木香烃内酯对H₂O₂诱导的大鼠脑微血管内皮细胞凋亡及氧化应激的作用。结论 木香烃内酯可能通过抑制LINC01116的表达及促进miR-9-5p的表达来抑制H₂O₂诱导的大鼠脑微血管内皮细胞的氧化应激及细胞凋亡,从而减轻细胞损伤。     

糖尿病大鼠蛛网膜下腔出血后海马组织中caspase-3、Bax和Bcl-2的表达及醒脑静干预的研究

目的探讨醒脑静对糖尿病大鼠蛛网膜下腔出血（sAH）后海马组织凋亡相关因子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（casDase-3）、Bax和Bcl-2表达的影响。方法成年雄性Wistar大鼠28只,按随机数字表法随机分为空白对照组（n=7）、糖尿病对照组（n=7）、糖尿病SAH组（n=7）和醒脑静治疗组（n=7）;采用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射方法建立糖尿病大鼠模型,然后采用枕大池两次注血法建立糖尿病大鼠SAH模型。SAH后48h取海马组织,用实时聚合酶链式反应检测caspase-3、Bax及Bcl-2的mRNA的表达,并用免疫印迹法测定它们蛋白表达,进行验证。结果空白对照组和糖尿病对照组大鼠海马组织中的caspase-3、Bax和Bcl-2的mRNA表达量均无显著差异（P〉0．05）;与空白对照组和糖尿病对照组相比,糖尿病SAH组和醒脑静治疗组其mRNA表达量均显著升高（P〈0．05）;醒脑静治疗组caspase-3和BaxmRNA表达水平均显著低于糖尿病SAH组大鼠（P〈0．05）,而Bcl-2mRNA表达水平却明显高于糖尿病SAH组（P〈0．05）。它们蛋白表达变化与mRNA表达基本相符。结论醒脑静抑制糖尿病SAH大鼠海马组织促凋亡相关因子表达,而促进抗凋亡相关因子表达,从而发挥保护作用。     

下调GABA受体基因对癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响及作用机制

目的 探讨下调GABA受体基因对癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响及作用机制。方法 选择30只SD健康雄性大鼠,建立癫痫模型,建模成功后分为模型组、上调组、下调组各10只; 进行细胞转染建立稳定转染的GABA上调组、GABA下调组; 检测3组大鼠海马神经细胞凋亡及PI3K、AKt、mTOR、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果 上调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率高于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率低于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞凋亡率低于上调组(P<0.05)。上调组大鼠各时间点海马神经细胞增殖率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均低于模型组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平高于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞增殖率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均高于模型组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平低于模型组(P<0.05); 下调组大鼠各时间点海马神经细胞增值率、Bcl-2、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白表达水平均高于上调组,而Bax、Caspase-3蛋白表达水平低于上调组(P<0.05)。结论 下调GABA受体基因可能是通过调节PI3K/AKt/mTOR来作用于下游凋亡靶基因,最终抑制癫痫模型大鼠海马神经细胞凋亡