MALDI-TOF MS检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的应用价值

目的 评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法快速检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的价值.方法 以34株产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌及50株碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌为研究对象,美罗培南与细菌37℃孵育2h后,上清液进行MALDI-TOF MS检测.结果 碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌的质谱峰有3个,质荷比(m/z)依次为384、406、428;而产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌由于可以水解美罗培南,其质谱峰有6个,m/z依次为358、380、402、424、446、468,通过质谱峰的变化可以鉴定产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌,MALDI-TOF MS法与测序法结果高度一致(P=1.000).结论 MALDI-TOF MS可以快速、准确检测产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌,指导临床合理使用抗生素.     

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌研究进展

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌自1998年被发现后,迅速在世界各地传播流行;其耐药机制主要与外膜蛋白缺失、产KPC酶有关;检测须经过表型筛选、菌株确证试验、基因检测等技术确定;替加环索联合多粘菌素B治疗产KPC肺炎克雷伯菌是常规方法;产KPC肺炎克雷伯菌传播速度快,须加强预防控制.     

产KPC肺炎克雷伯菌检测方法构建与耐药机制

目的 探讨产肺炎克雷伯型碳青霉烯酶(KPC)肺炎克雷伯菌检测方法以及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制、可能的治疗药物.方法 选取K-B法证实的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌36株纳入本研究,使用改良Hodge试验、Carba NP试验对菌株进行验证,随后采用PCR扩增、产物琼脂糖凝胶电泳实验,并对电泳阳性条带进行基因测序鉴定.结果 K-B法药敏试验显示36株耐碳氢烯类肺炎克雷伯菌,随后行Hodge验证,33株(91.7%)是产KPC肺炎克雷伯菌,对碳氢烯类耐药而对替加环素及米诺环素仍然敏感.对Hodge试验阳性33株再行Carba NP试验确证,其中27株(87.9%)阳性,6株(12.1%)阴性;对Hodge试验阳性33株行PCR扩增及电泳实验,共有27株出现目标条带(340 bp)提示阳性,与Carba NP试验结果相一致.对出现目标条带的27株肺炎克雷伯菌再进行KPC-2耐药基因PCR扩增产物测序,均为KPC-2型耐药基因.结论 K-B法药敏试验加随后改良Hodge试验验证对于筛查、发现KPC肺炎克雷伯菌具有较高的符合度,为发现KPC肺炎克雷伯菌有效筛查方法.K-B法药敏试验证实对KPC肺炎克雷伯菌,替加环素等可能是有效治疗的药物之一.Hodge试验检测的KPC肺炎克雷伯菌,存在12.1%(6/33)的假阳性率.Carba NP 试验及PCR扩增检测一致性好,具有确证产KPC肺炎克雷伯菌作用.随后的测序研究结果表明检测出的KPC肺炎克雷伯菌均为KPC-2,该型是引起肺炎克雷伯菌对碳青酶烯酶耐药的主要机制.     

肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的研究进展及其治疗策略

肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPCs)对几乎所有的β-内酰胺类抗菌药物耐药。这种对抗菌药物广谱耐药的机制迅速在美国蔓延,在世界各地的报道亦有增加。KPC酶可以水解所有的青霉素类、头孢菌素类、氨曲南及碳青霉烯类。产KPC酶菌株所致感染的治疗选择非常有限。因此,KPC酶介导的耐药机制的出现是全球人类身体健康的重大威胁之一。本文就肺炎克雷伯菌碳青霉烯的研究进展及其治疗策略做一综述。     

MALDI-TOF MS在碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌流行病学分析方面的应用

[摘要]目的：用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 （Matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）检测碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌(Carbapenem - resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)同源性,并与脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis PFGE)和多位点序列分型(multilocus sequence typing MLST)两种检测方法进行对比,探讨质谱在日常工作中的应用价值。方法：选取2017年10月至2017年12月我院患者分离的以及ICU环境采集的碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌10株,检测八种耐药基因：blaTEM 、blaSHV 、blaCTX-M、 blaKPC 、 blaIMP、 blaNDM 、blaVIM、blaOXA 。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)和质谱（MALDI-TOF MS）三种方法对这些菌株进行同源性分析,比较分析结果。结果：PFGE证实10株CRKP均为同一克隆株的传播,ST型同属于ST11。MALDI-TOF MS经过对细菌进行聚类分析和主成分分析可以区分不同型别肺炎克雷伯菌,对同型肺炎克雷伯菌的同源性检测在80%左右。结论：MALDI-TOF MS在肺炎克雷伯菌的同源性检测方面可以应用于院内爆发局部感染的监测,与PFGE和MLST两种方法检测结果一致,但需要尽快建立规范的判断标准。     

携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药致肺炎克雷伯菌感染的暴发

目的了解临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,Kpn）KPC型碳青霉烯酶基因blaKPC存在状况。方法在2008年11月至2009年7月间,从住院病人中分离出19株泛耐药肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验检测菌株产碳青霉烯酶情况,采用PCR及序列分析的方法分析blaKPC基因。结果19株泛耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验结果均阳性、blaKPC基因阳性率为100．0％,序列分析确认均blaKPC-2亚型,其HZ001号菌株（原始编号HZ9871）blaKPC-2基因序列已登录GenBank,注册号为GU086225。结论临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌均携带blaKPC-2基因,产KPC-2型碳青霉烯酶应该是本组菌株对碳青霉烯类抗生素耐药主要原因。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的价值

目的评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）技术在临床实验室中快速鉴定耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的价值。方法收集2019年10月至2020年3月绍兴文理学院附属医院感染患者分离的肺炎克雷伯菌140株。采用VITEK2-Compact全自动微生物鉴定仪进行鉴定,其中33株（23.57%）为耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,主要分离自痰液11例（33.33%）和尿液8例（24.24%）,且内科分离菌株数多于外科。通过微量肉汤稀释法进行敏感度测定;利用PCR技术检测耐药基因;多位点序列分型（MLST）技术对其进行分型;由MALDI-TOFMS进行蛋白图谱分析。结果所有菌株对碳青霉烯类和头孢菌素类抗生素的耐药率均为100.00%,有60.61%的菌株确定为多重耐药菌株;除24株（72.73%）携带blaKPC外,未发现其他碳青霉烯酶编码基因,共有27株（81.82%）为ST11,且所有菌株在11109-Da处均无特征峰。结论由于型别不同,MALDI-TOFMS无法直接区分产KPC的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,但为探索MALDI-TOFMS更多的研究价值奠定基础。     

对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型分析

目的:分析对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型。方法:使用改良的Hodge实验(MHT)初筛产KPC的肺炎克雷伯菌,PCR和测序鉴定耐药肺炎克雷伯菌是否带有KPC基因,并通过GenBank的比对确定KPC基因型。用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对KPC阳性菌株进行同源性分析。结果:13株对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌中有10株MHT结果为阳性,阳性率为76.92%,其中有2株细菌为KPC基因阳性,阳性率为15.38%,通过GenBank比对,此KPC基因为2型。PFGE结果显示这2株细菌来源于同一克隆。结论:分离出了携带有KPC-2型碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌。     

肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶流行及分子特征研究进展

在各种介导肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素耐药的机制中,产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（klebsiella pneumoniae carbapenemase,KPC）是最为常见的一种。KPC为A类β-内酰胺酶,编码基因通常位于质粒上,便于在细菌间传递。KPC主要分布在肺炎克雷伯菌中,也在大肠埃希菌、阴沟肠杆菌等常见肠杆菌科细菌中检出。本文就KPC的流行和分子特征进行综述。     

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪快速鉴别青霉素耐药及敏感的肺炎链球菌的应用

目的 探讨基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪（matrix-assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）快速鉴别青霉素耐药及青霉素敏感的肺炎链球菌的可行性。方法 收集2017年1月到2019年12月广州市番禺区中心医院青霉素耐药的肺炎链球菌（PRSP）10株及青霉素敏感的肺炎链球菌（PSSP）30株。其中31株肺炎链球菌分离自呼吸道标本,占77.5%,18株肺炎链球菌分离自儿科,占45.0%。年龄分布,60岁以上15株,12岁以下18株。用MALDI-TOF MS进行菌株鉴定,用VITEK 2 Compact的药敏卡AST-GP68进行耐药性检测,用VITEK MS的Launch pad软件对MALDI-TOF MS鉴定的肺炎链球菌所产生的质谱峰图进行分析。结果 质谱峰m/z的3992、4419为肺炎链球菌的特征峰,质谱峰m/z的 3853、4218、4619是用于区分PRSP及PSSP最主要的特征峰,不同菌株质谱峰略有不同。164株肺炎链球菌青霉素的耐药率为8.5%,万古霉素﹑利奈唑胺﹑厄他培南的敏感率均为100.0%。90株PSSP及64株PRSP对15种抗生素的药敏结果显示,PSSP的阿莫西林及青霉素的敏感率分别为100.0%,而PRSP的阿莫西林及青霉素的敏感率为0。结论 MALDI-TOF MS可快速准确鉴别PRSP及PSSP,具有耗时短,灵敏度高,特异性好等特点。     

应用液体蛋白芯片飞行时间质谱技术研究原发性肝癌门静脉癌栓形成相关标志物

 目的 应用液体蛋白质芯片飞行时间质谱技术研究肝癌门静脉癌栓（portal vein tumor thrombus,PVTT）形成相关标志物,并建立预测模型。方法 采取非PVTT和PVTT原发性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者血清各20例,采用磁珠分离系统纯化、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）分析及ClinProTools生物信息学方法研究其血清蛋白表达谱,通过神经网络算法（statistical neural networks,SNN）建立图谱诊断模型并进行验证。结果 经数据对比分析找到39个差异有统计学意义的质荷比（m/z）峰（P<0.05）,从中筛选出最具划分能力的8个质荷比峰（m/z=4 420.43、4 055.19、2 988.80、4 091.46、4 072.24、6 935.04、4 109.53和5 321.17）,并以此建立HCC的PVTT诊断模型,模型识别率达到97.5%,而预测率达到92.73%。非PVTT组和PVTT组的准确性分别为100%和95%。结论 筛选得到的蛋白可能成为原发性肝癌PVTT的相关标志物,诊断模型可能对预测PVTT的形成具有重要临床意义。     

Preliminary Application of WCX Magnetic Bead-Based Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry in Analyzing the Urine of Renal Clear Cell Carcinoma

Objective To evaluate the application of weak cation exchange (WCX) magnetic bead-based Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) in detecting differentially expressed proteins in the urine of renal clear cell carcinoma (RCCC) and its value in the early diagnosis of RCCC. Methods Eleven newly diagnosed patients (10 males and 1 female, aged 46-78, mean 63 years) of renal clear cell carcinoma by biopsy and 10 healthy volunteers (all males, aged 25-32, mean 29.7 years) were enrolled in this study. Urine samples of the RCCC patients and healthy controls were collected in the morning. Weak cation exchange (WCX) bead-based MALDI-TOF MS technique was applied in detecting differential protein peaks in the urine of RCCC. ClinProTools2.2 software was utilized to determine the characteristic proteins in the urine of RCCC patients for the predictive model of RCCC. Results The technique identified 160 protein peaks in the urine that were different between RCCC patients and health controls; and among them, there was one peak (molecular weight of 2221.71 Da) with statistical significance (P=0.0304). With genetic algorithms and the support vector machine, we screened out 13 characteristic protein peaks for the predictive model. Conclusions The application of WCX magnetic bead-based MALDI-TOF MS in detecting differentially expressed proteins in urine may have potential value for the early diagnosis of RCCC.     

血清差异表达多肽谱用于人卵巢癌诊断的研究

目的:建立卵巢癌患者血清差异表达多肽谱,并探讨其潜在诊断价值?方法:应用磁珠富集多肽结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)检测方法,筛选上皮性卵巢癌组和健康对照组差异表达多肽峰,利用ClinProTools软件比较两组血清多肽表达差异并建立差异表达多肽谱及早期诊断模型?结果:在卵巢癌组血清中,m/z 2 662.02?2 653.68?5 859.21?5 901.69?5 937.06表达显著上调;m/z 1 857.82?2 074.28?2 856.33表达显著下调?差异表达图谱建立的诊断模型预测早期卵巢癌的准确率达到81.8%(9/11),利用9例宫颈癌血清验证均为阴性,特异性达100%(0/9)?结论:磁珠富集-质谱结合ClinProTools生物信息学分析技术,有望成为新的人卵巢癌辅助诊断技术?     

Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry in the genetic basis of systemic lupus erythematosus and the complicating kidney injury

Background It is necessary to develop some innovative methods to reveal and discover the novel (SLE)-related protein molecules.In the present study,matrix-assisted laser desorption/ionization time of f...     

新发展晚期血吸虫病患者血清肽谱分析

目的:分析新发展晚期血吸虫病患者血清多肽,筛选有潜在应用价值的标志蛋白,为其诊断与发病机制研究奠定基础?方法:采集新发展晚期血吸虫病患者与健康人血清,利用包被有弱阳离子的磁珠富集纯化血清多肽,应用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS)Flex分析技术结合Mascot生物信息学分析血清多肽指纹图谱?结果:与健康对照组比较,在0.8~13.0 ku区段,新发展晚期血吸虫病患者血清中m/z 2 082?4 282多肽表达上调(P < 0.01),2 661?2 991?3 241?5 337?5 906多肽表达下调(P < 0.05);常规晚期血吸虫病患者血清中m/z 2 662?4 209?5 337与5 906处显著下调,2 082处显著上调?结论:m/z 3 241?4 282血清差异多肽对新发展晚期血吸虫病患者的诊断可能具有潜在应用价值,对该病发生发展的机制也奠定了理论基础?     

肝癌血清高表达多肽——人血纤肽A的发现及生物信息学分析

目的 筛选和鉴定肝癌血清高表达的蛋白分子,并对筛选出的人血纤肽(fibrinopeptide)A进行初步分析.方法 运用ClinProt技术系统筛选并鉴定出肝癌血清高表达的蛋白分子,应用生物信息学方法对该蛋白进行分析.结果 一个在肝癌患者血清中高表达的m/z为1465的多肽,经鉴定为fibrinopeptide A,其在肝癌等多种肿瘤中表达上调.结论 fibrinopeptide A可能是肝癌候选血清标志物.     

采用血清蛋白指纹图谱技术筛选食管鳞状细胞癌特异相关性蛋白的研究

目的应用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测食管鳞状细胞癌患者血清蛋白指纹图谱,筛选候选肿瘤标志物并建立诊断模型,初步探讨所建的诊断模型在食管鳞癌诊断中的临床意义。方法144例经手术后病理证实的食管鳞状细胞癌患者和50例健康人血清,用SELDI—TOF—MS检测各血清标本获得血清蛋白指纹图谱。用Biomarker Wizard筛选差异峰。扩大样本量,采用SPSS12．0中ROC曲线分析入选差异峰用于食管癌诊断的灵敏度和特异性。结果在分子量1500～30000范围内,共检测到93个蛋白峰,其中10个差异峰有统计学意义（P〈0．01）。ROC曲线面积超过08的有2768、2745、3403、6638、5972、6440、3321和3978m/z差异峰。当差异峰3403m／z以3．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为87．5％和94．0％;3978m/z以2．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为8417％和72．0％。其诊断价值均超过CA724、CEA和CA242单独或联合检测。结论3978和3403m/z两个蛋白对区分食管鳞癌患者和健康人群具有较好的诊断价值。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因检测及其同源性分析

目的研究六安市人民医院耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药基因及同源性。方法收集2018年4-6月分离自临床标本的肺炎克雷伯菌40株,用法国梅里埃VITEK 2 COMPACT全自动细菌鉴定药敏仪进行鉴定和药敏。采用改良Hodge试验（MHT）和改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）对40株菌进行碳青霉烯酶表型的筛选,采用PCR方法检测其是否携带已知的主要碳青霉烯耐药基因KPC、OXA-48、NDM-1。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对其进行同源性分析。结果40株CRKP多分离自ICU病房（占55%）,以呼吸道来源标本为主（占80%）,对常用抗生素头孢菌素类、氨基糖苷类以及大环内酯类的耐药率均在80.0%以上。MHT和mCIM试验中有33株菌二者均为阳性,2株菌均为阴性,剩下5株MHT试验阳性而mCIM试验结果为阴性。32株菌携带KPC基因,未检出OXA-48及NDM-1基因。同源性分析结果显示40株CRKP分为7个型别,其中A型34株（占85%）,B、C、D、E、F及G型各1株（各占2.5%）。结论分离的CRKP以携带KPC-2基因为主,共有7个型别,以A型为主,为有效治疗和预防CRKP感染提供了参考依据。     

基于MALDI-TOF MS检测肺泡灌洗液病原菌分布和耐药性分析

目的 了解呼吸危重症医学科和重症监护病房(Intensive care unit,ICU)肺部疾病患者支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)病原菌种类及其耐药性。方法 回顾性分析2017年1月～2018年12月我院呼吸危重症医学科和ICU肺部疾病患者BALF分离的病原菌种类及耐药性情况。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对病原菌进行鉴定。结果 BALF阳性检出率为17.80%(162/910),共分离培养出病原菌191株,其中真菌98株(51.31%),以念珠菌、曲霉菌和新生隐球菌为主;革兰阴性杆菌共90株(47.12%),以鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌为主,多药耐药鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率均为58.33%,对头孢哌酮/舒巴坦和替加环素的耐药率分别为45.83%、16.67%,对哌拉西林/他唑巴坦及头孢类药物的耐药率均大于54.0%。其他革兰阴性杆菌对常用抗菌药物的耐药率不高。结论 基于MALDI-TOF MS鉴定的BALF病原菌种类多样,以真菌和革兰阴性杆菌为主,其中鲍曼不动杆菌多药耐药现象严重。病原菌的准确鉴定和敏感药物使用为临床提供治疗依据。