组织工程角膜治疗兔无菌性角膜溃疡

目的:探讨利用组织工程技术制备角膜基质进行板层角膜移植治疗无菌性角膜溃疡的可行性和疗效。方法:用去垢剂联合胰酶、DNA-RNA酶去除猪角膜基质细胞后制备成组织工程角膜基质;将16只兔的角膜基质内植入壳聚糖膜使之形成角膜溃疡,随机从16只兔中选8只行组织工程角膜基质板层移植;另外8只作为对照组,行新鲜的同种异体板层角膜移植。术后对角膜进行裂隙灯、HE染色光学显微镜检查。结果:组织工程角膜基质移植后无免疫排斥发生,术后8～10wk角膜溃疡完全修复,角膜恢复透明性,与对照组疗效相同。结论:组织工程角膜基质具有良好的生物相容性和治疗作用。     

重度碱烧伤早期异种去细胞角膜材料移植

目的观察重度碱烧伤后,早期(伤后1周内)行异种去细胞角膜材料板层移植手术治疗的可行性和疗效,并与同种异体角膜材料进行比较性研究。方法将19只新西兰大白兔制作成角膜重度碱烧伤模型,伤后1周,取16只随机分为2组,每组8只。一组行猪去细胞角膜材料板层移植;另一组行同种异体板层兔角膜移植。其余3只烧伤后不作任何处理,为空白对照组。术后进行大体观察、裂隙灯、病理学、角膜内皮染色观察。结果重度碱烧伤异种去细胞角膜材料移植后2~3周,有新生血管侵入植片边缘,植片为灰白色半透明状,移植区角膜上皮愈合。6周后,角膜植片新生血管开始减退,植片局部变透明。观察至28周,植片存活良好,无免疫排斥反应发生,炎症静止,眼表维持相对正常的结构,与同种异体角膜移植组治疗效果相同,可为以后的增视性手术创造良好的条件。结论用异种去细胞角膜基质材料对重度碱烧伤角膜进行移植手术治疗,可减轻伤后炎症反应,防止严重并发症的发生,维持了眼表结构。疗效与同种异体角膜移植相同。     

鸵鸟角膜对兔板层角膜移植的排斥反应

目的：角膜穿孔属眼科急症，角膜外伤、感染和化学伤都可引起角膜穿孔，用角膜移植治疗穿孔效果较好，但角膜供体资源在我国目前仍较为缺乏。角膜移植排斥反应是造成移植失败的主要原因。为探索异种角膜移植材料，本实验研究鸵鸟对兔板层角膜移植的植片存活时间及排斥反应特点，以便评价鸵鸟角膜的应用前景。方法：将24只≤8周龄的健康新西兰白兔随机分成两组：A组12只兔为兔一兔同种异体板层移植组；B组12只兔为鸵鸟一兔异种角膜板层移植组，治疗及观察时间均为6wk。两组术后均予结膜下注射地塞米松。术后每日在裂隙灯显微镜下观察植片存活情况和排斥反应指数；术后每周测量新生血管面积；术后1，3，5wk各组取1只兔的术眼角膜行病理检查。结果：鸵鸟板层角膜植片的平均存活时间为23d。驼鸟一兔异种板层和同种板层角膜在1，2wk排斥反应指数及角膜新生血管面积无显著差异，第3wk起差异显著。结论：鸵鸟角膜植片在移植早期能保持透明，且有较好的生物相容性。鸵鸟角膜植片后期因新生血管生长和排斥反应加重而混浊，说明单独应用地塞米松不能完全控制异种植片的排斥反应。     

兔角膜重度碱烧伤后异种猫前板层角膜移植重建角膜眼表

目的研究猫新鲜前板层角膜移植治疗兔右眼角膜重度碱烧伤的疗效。方法将16只5个月龄的健康雄性新西兰白兔右眼制作重度角膜碱烧伤模型,随机分成A、B两组,每组各8只兔,其中A组为猫(4只)→兔异种前板层角膜移植组,植片直径为11.0mm,植床直径为10.0mm;B组未行手术。A组兔术后及B组造模后用500g.L-1葡萄糖及复方氯霉素滴术眼直至处死,记录两组疗效指数,并分别于术后1个月、2个月、3个月取材进行术眼角膜病理学及扫描电镜检查。结果3个月内A组8只角膜碱烧伤兔经异种猫前板层角膜移植后,7只移植角膜保持透明,1只出现局限性角膜混浊和角膜新生血管;而B组未手术的8只兔中出现角膜白斑、新生血管4只,角膜溃疡、穿孔3只,角膜溶解穿孔1只,并且有4只发生睑球粘连等并发症。A、B两组治疗后1个月、2个月、3个月平均疗效指数差异均有统计学意义(均为P<0.05)。A组透明角膜中组织学及扫描电镜下的结构特征清晰;B组兔角膜中有明显的角膜水肿和炎性细胞浸润,组织学及扫描电镜下的结构特征显示细胞连接混乱、消失。B组扫描电镜还提示随着时间的延长,上皮细胞部分生长、增多,细胞连接差,角膜上皮排列紊乱;角膜内皮细胞数量明显减少或无,...     

单纯去细胞猪角膜基质穿透性角膜移植治疗兔角膜溃疡

目的:探讨单纯去细胞猪角膜基质材料诱导兔自体角膜细胞再生及修复兔角膜溃疡的可行性.方法:新西兰白兔10只制作成角膜溃疡模型,接受单纯去细胞猪角膜材料的穿透性角膜移植术,排除发生手术并发症眼(2只),剩余8只术后进行大体观察(裂隙灯检查),观察植片透明度、新生血管、上皮修复情况.分别于3,6,8,16和24wk取材进行组织学观察,并取16wk兔行超声生物显微镜(UBM)检查、32wk兔行透射电镜检查.结果:角膜溃疡修复,眼表重建8只.初期角膜上皮反复糜烂,荧光素纳染色有荧光堆积,HE 组织学检查提示4wk时上皮细胞复层化.角膜基质细胞沿材料板层生长,排列规律;3～7d角膜缘新生血管发生,位于浅基质层,1～20d达高峰,深入植片或沿缝线环形生长,拆线后逐渐消退,32wk后闭锁仅余3～4支微血管;UBM提示角膜恢复自然曲率,植床与植片尚未修复完善.TEM 提示成纤维细胞分泌胶原原纤维,参与材料改建.结论:CACM支持细胞3D生长,促进自体细胞长入,参与角膜修复改建.     

不规则移植片板层角膜移植治疗蚕蚀性角膜溃疡

目的：探讨不规则移植片板层角膜移植联合术后1％环孢霉素A滴眼治疗蚕蚀性角膜溃疡的效果及对视力的影响。方法：应用不规则移植片板层角膜移植治疗蚕蚀性角膜溃疡9例10只眼,术中根据溃疡侵犯角膜的形态切除病变角膜组织及邻近的球结膜和筋膜组织,按照植床的形态制作之相吻合的板层移植片行板层角膜移植术术,术后应用1％环孢霉素A滴眼6－8个月,结果术后随访1－5年,未见复发病例,术后6个月,与术前视力比较,大部分病例视力不变或提高。结论：不规则移植片板层角膜移植术联合术后应用1％环孢霉素A滴眼治疗蚕蚀性角膜溃疡效果肯定,只要植片与植床吻合,疑线松紧适宜,不会导致明显和光而影响视力。     

脱细胞角膜材料的生物相容性研究

目的研究异种脱细胞猫角膜板层角膜移植术后的组织相容性。方法24只18周龄的健康新西兰白兔随机平均分成3组：A组为脱细胞猫角膜材料→兔板层移植组,B组为猫→兔异种新鲜角膜植片板层移植组,C组为兔→兔同种异体新鲜角膜植片板层移植组。用扫描电镜观察术后不同时期术眼角膜的组织病理学改变,抽取兔血测定CD4^＋/CD8^＋T细胞百分比。结果术后1个月3个组间角膜植片炎症反应指数组间比较差异均无统计学意义;2个月A组与B组、A组与C组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。3个月A组与B组、A组与C组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。3个组间术后同期7、15、30d兔外周血CD4＋T细胞和CD8＋T细胞活化率差异均无统计学意义（P〉0.05）。组织切片显示术后3个月内,B、C两组角膜植片炎症反应轻,植片内皮细胞吸收,组织结构基本正常。A组角膜植片炎症反应显著,结构较紊乱,新生血管增生。扫描电镜可见B、C2组角膜上皮结构基本正常,细胞连接较好。A组扫描电镜可见有上皮缺损。结论脱细胞处理的异种猫角膜移植后生物相容性较新鲜角膜差,免疫反应无显著差异。     

复合自体脂肪干细胞的脱细胞猪角膜基质移植治疗兔角膜碱烧伤

目的:研究复合脂肪干细胞的脱细胞猪角膜基质对碱烧伤角膜的治疗效果。方法:制备晾干的脱细胞猪角膜基质,取第3代体外培养的兔自体脂肪干细胞,体外种植到脱细胞猪角膜基质上,培养3d后用于板层角膜移植。结果:板层角膜移植2mo后,术眼角膜基本恢复透明,未发生排斥反应,新生血管较少,3mo后新生血管基本消退。结论:复合自体脂肪干细胞的脱细胞猪角膜基质对兔碱烧伤角膜具有良好的修复能力。     

异种角膜脱细胞基质为供体进行角膜前板层移植的初步研究

目的探讨以异种猪角膜脱细胞基质为供体植片,分析兔角膜进行前板层移植后的生物相容性：设计实验研究。研究对象新西兰白兔。方法应用1％TritonX-100及冷冻干燥处理制备猪角膜脱细胞基质载体,切取1／3厚度前板层作为供体角膜植片,对兔眼角膜前板层切除后进行移植,同时以新鲜猪角膜板层为供体对兔进行前板层移植作对照。通过术后角膜透明度、组织结构观察,评价猪角膜脱细胞基质的生物相容性及植片转归的情况。主要指标角膜透明度和组织学HE染色。结果制备的猪角膜脱细胞基质植片作前板层移植到兔眼后,未见明显的新生血管、炎症反应、角膜坏死等排斥现象,观察期内植片较透明;脱细胞基质表面上皮化良好,植片基质板层与植床逐渐融合,植片内有宿主细胞迁入生长,板层结构与正常角膜相似。结论猪角膜脱细胞基质具有良好的生物相容性、安全性和低抗原性,有望成为角膜板层移植的供体材料。     

深板层角膜移植手术经验探讨

目的为提高手术成功率,探讨深板层角膜移植术的适应证及手术技巧。方法对内皮功能正常的角膜基质病变患者行深板层角膜移植术28只眼,术中采用角膜基质层间注入生理盐水或2%甲基纤维素分离方法,观察术中并发症、术后角膜透明度及术后视力提高等指标。结果19只眼术中未发生后弹力层穿孔,术后植片透明。术中发生后弹力层微或小穿孔9只眼,未行任何处理,其中有3只眼术后出现角膜植片轻度水肿、角膜层间有少量积液,经加压包扎及口服醋氮酰胺,积液在2周内逐渐吸收;另外6只眼术后前房形成良好,植片透明,无角膜层间积液。术后1年随访,28只眼中22只眼植片透明,6只眼角膜半透明。1只眼角膜被铁水烧伤后遗血管翳性混浊患者于术后8个月发生上皮型排斥反应,经药物治疗角膜逐渐恢复透明,无新生血管长入。15只眼最佳矫正视力达0.3～0.6,7只眼达0.1～0.3（含0.3）,6只眼达0.05～0.1。结论目前临床上相当部分用穿透性角膜移植治疗的内皮功能正常的角膜基质病变将可以被深板层角膜移植取代。只要掌握好手术适应证,提高手术操作技术,减少术中并发症及加强术后管理,可提高手术成功率。     

脱细胞猪角膜基质的生物相容性与组织工程化兔角膜上皮移植的研究

目的 探讨脱细胞猪角膜基质的生物相容性,评价组织工程化角膜上皮组织作供体的可行性,观察支架材料的细胞化情况和种子细胞的存活情况.方法 实验研究.采用完全随机化设计的方法,用Dispase-Triton-X-100处理猪角膜基质,脱去角膜细胞;以角膜基质囊袋内植入的方法,观察异种角膜基质植入后的生物相容性,A组:脱细胞猪角膜基质,B组:新鲜猪角膜基质,C组:空白对照组.以组织工程化雄性角膜上皮组织为供体,同种雌性为受体,作板层角膜移植,观察角膜的混浊、水肿、新生血管等情况;组织病理学和免疫组化方法检测支架材料的细胞化情况,Y染色体性别决定基因(SRY)-聚合酶链反应(PCR)方法追踪种子细胞的存活情况.结果 猪角膜基质植入兔角膜囊袋后,角膜逐渐恢复透明,排斥反应指数＜6,组织病理学观察角膜结构完整,胶原纤维平行排列,少许细胞长入脱细胞猪角膜基质边缘,各组免疫组化检测未见CIM+、CD8+T淋巴细胞浸润.组织工程化角膜上皮作异体板层角膜移植后,3～4 d上皮光滑,10～20 d变为透明;15 d时角膜上皮、基质、内皮完整,上皮细胞约4或5层结构,少许基质细胞长入支架,1个月时可见角膜上皮细胞约7或8层细胞,基质纤维排列规则,多量细胞长入脱细胞角膜基质.上皮细胞表达CK3,支架内新生细胞表达波形蛋白.SRY-PCR结果显示种子细胞可以在受体内长期存活.结论 脱细胞猪角膜基质生物相容性良好,组织工程化角膜上皮可作为板层角膜移植的供体,脱细胞猪角膜基质细胞化良好,种子细胞可以在受体内长期存活.     

组织工程角膜片移植治疗无菌性角膜溃疡的实验研究

目的探讨组织工程角膜片治疗角膜溃疡的可行性及疗效。方法将16只新西兰大白兔制作成角膜溃疡模型,随机分为2组,每组8只,分别作单纯羊膜移植和以羊膜为载体的组织工程角膜片移植。术后进行大体观察、裂隙灯观察、组织学观察、扫描电镜观察。结果羊膜为载体组织工程角膜片移植治疗角膜溃疡,平均7.5周溃疡完全愈合,角膜恢复透明性和屈光性,较单纯羊膜移植组(平均9周)角膜溃疡修复快,效果好结论羊膜为载体构建的组织工程角膜片可以有效治疗角膜溃疡。     

组织工程技术构建兔角膜基质组织的实验研究

目的 探讨应用组织工程技术构建兔角膜基质层组织的可行性。方法 新西兰大白免40只,即母兔及其亲生子兔共20对。分离获取新生子兔角膜基质细胞,扩增、培养,汇合后,接种于聚羟基乙酸(PGA),形成细胞-生物材料复合物,移植于对应的母兔角膜基质层。绿色荧光蛋白(GFP)标记角膜基质细胞,示踪角膜基质构建过程。同时,对侧角膜仅行PGA移植,作为材料对照组。8周后取材,行组织学切片,Western blot检测Ⅰ型胶原及电镜下测定胶原纤维直径分布。结果术后8周,实验侧角膜逐渐恢复透明,形成新生角膜基质样组织,胶原与角膜表面平行,排列较整齐,组织学结构接近正常基质组织。实验组Western blot检测提示新生组织中基质细胞表达Ⅰ型胶原;电镜下胶原纤维直径[(29.0±4.7)nm]与正常角膜基质组织比较[(28.5±3.5)nm],差异无显著意义(P>0.05)。对照组正常角膜无新生基质组织形成。GFP标记角膜基质细胞,示踪角膜基质第8周时,荧光显微镜下可见新生组织呈绿色,提示GFP表达。结论 应用组织工程技术可以在兔受体角膜内构建角膜基质层组织。(中华眼科杂志,2004,40:517-521)     

异种角膜基质材料的制备和体外细胞种植的实验研究

目的研究异种角膜基质生物支架材料的制备方法和体外种植兔角膜基质细胞后细胞在材料上的生长、增殖情况。方法将York猪全层角膜用去垢剂联合0．25％胰蛋白酶、DNA-RNA酶祛除猪角膜基质细胞并冻干制备成支架材料；将兔角膜组织块用胶原酶消化后，用含10％血清的DMEM培养液体外培养，并做波形丝蛋白，角蛋白免疫组织化学染色检测；将培养的兔角膜基质细胞的2～3代接种在材料上，培养5d后，做HE染色、扫描电镜观察。结果猪角膜基质片经脱细胞处理后，细胞成分祛除干净并保留了角膜组织的三维网格状结构，网状间隙明显增大，利于细胞生长；体外培养的兔角膜基质细胞波形丝蛋白染色为阳性、角蛋白染色为阴性；HE染色、扫描电镜结果显示兔角膜基质细胞在支架材料上生长、增殖良好。结论异源性角膜经祛脱细胞处理而获得的生物支架材料利于异种细胞的黏附和增殖，可进一步用于组织工程角膜的研究。     

猪脱细胞角膜基质组织结构特点与生物相容性研究

背景构建组织工程化角膜时,载体的选择十分重要。目前有多种载体可供选用,但脱细胞角膜基质是公认的较好载体。目的观察猪脱细胞角膜基质的组织结构特点,评价其与异种角膜基质和上皮细胞的生物相容性。方法取猪角膜组织进行组织块培养,经胰蛋白酶-EDTA酶消化角膜上皮、基质、内皮细胞,支架组织于-20℃冷冻干燥后灭菌保存。猪脱细胞角膜基质石蜡切片行常规苏木精一伊红染色,光学显微镜下观察组织的形态学特征;扫描电镜下观察其组织结构特点;并对其物理特性,如抗拉性、膨胀性、含水量和透明度进行评价。将猪脱细胞角膜基质移植到兔角膜基质层内,同时与体外培养的兔角膜上皮细胞共培养4周,分析其组织和细胞生物相容性。结果经酶消化处理后猪角膜组织中未见上皮、基质和内皮细胞,其胶原纤维直径大小、排列与正常角膜组织相同,抗拉性、膨胀性、含水量和透明度等物理特性与正常猪角膜相似。猪脱细胞角膜基质行异种兔角膜基质层间移植1周时可见轻度水肿,2周后水肿基本消退,4周时透明度较好。猪脱细胞角膜基质与兔角膜基质之间贴附良好,未见炎症反应及新生血管。兔角膜上皮细胞接种于猪脱细胞角膜基质上共培养4周后CK3表达阳性。猪脱细胞角膜基质脱水前与脱水2h、4h后及正常猪角膜基质间的抗拉性、膨胀性、含水量的差异均无统计学意义（P〉0．05）,但脱水2h、4h后及正常猪角膜基质的透明度明显好于脱水前,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论猪脱细胞角膜基质组织结构与正常猪角膜相似,与兔角膜基质和上皮细胞具有良好的生物相容性。     

骨髓间充质干细胞移植治疗眼表损害的初步实验研究

目的观察体外培养的人骨髓间充质干细胞（hMSCs）移植到碱烧伤的兔角膜表面后,干细胞的成活、迁移和分化情况。方法采用NaOH溶液制作兔角膜碱烧伤模型,1个月后将培养有hMSCs的羊膜缝合到碱烧伤的兔角膜表面,以羊膜作为对照组,在裂隙灯显微镜下观察角膜的临床改变。术后1个月,摘除眼球,石蜡切片,苏木素-伊红（HE）染色观察角膜组织结构的变化,并进行抗人核抗体和细胞角蛋白12（CK12）的免疫组化染色以观察hMSCs的分布和分化情况。结果兔眼碱烧伤1个月后,角膜表面和基质层均可见大量血管,角膜呈瓷白色混浊,表面粗糙干燥,出现大量杯状细胞。hMSCs移植1个月后,角膜表面粗糙程度减轻,新生血管略有减少,但是角膜混浊未见明显改善,角膜表面杯状细胞消失;角膜表面和基质浅层存在抗人核抗体染色阳性的细胞;角膜表面细胞CK12染色阳性,而基质层未见CK12阳性细胞。对照组在羊膜移植1个月后,角膜状况较移植前无明显改善,角膜表面仍可见杯状细胞,角膜各层均未见抗人核抗体和CK12染色阳性的细胞。结论hMSCs移植到碱烧伤兔角膜表面后,能够成活并向角膜基质迁移,未发生移植排斥反应。hMSCs由于所在部位不同,可以在周围组织的诱导下向不同方向发生分化,角膜表面的细胞向角膜上皮细胞分化。而基质层中的细胞未分化为角膜上皮细胞。移植后角膜表面结膜化程度有所减轻。     

Acellular ostrich corneal stroma used as scaffold for construction of tissue-engineered cornea

AIM: To assess acellular ostrich corneal matrix used as a scaffold to reconstruct a damaged cornea. METHODS: A hypertonic saline solution combined with a digestion method was used to decellularize the ostrich cornea. The microstructure of the acellular corneal matrix was observed by transmission electron microscopy (TEM) and hematoxylin and eosin (H&E) staining. The mechanical properties were detected by a rheometer and a tension machine. The acellular corneal matrix was also transplanted into a rabbit cornea and cytokeratin 3 was used to check the immune phenotype. RESULTS: The microstructure and mechanical properties of the ostrich cornea were well preserved after the decellularization process. In vitro, the methyl thiazolyl tetrazolium results revealed that extracts of the acellular ostrich corneas (AOCs) had no inhibitory effects on the proliferation of the corneal epithelial or endothelial cells or on the keratocytes. The rabbit lamellar keratoplasty showed that the transplanted AOCs were transparent and completely incorporated into the host cornea while corneal turbidity and graft dissolution occurred in the acellular porcine cornea (APC) transplantation. The phenotype of the reconstructed cornea was similar to a normal rabbit cornea with a high expression of cytokeratin 3 in the superficial epithelial cell layer. CONCLUSION: We first used AOCs as scaffolds to reconstruct damaged corneas. Compared with porcine corneas, the anatomical structures of ostrich corneas are closer to those of human corneas. In accordance with the principle that structure determines function, a xenograft lamellar keratoplasty also confirmed that the AOC transplantation generated a superior outcome compared to that of the APC graft.     

异体角膜缘上皮细胞培养后移植的实验研究

目的观察含培养的角膜缘上皮细胞的羊膜片移植到角膜缘干细胞损伤的异体兔眼角膜上的效果。方法把羊膜为载体组织块培养的角膜缘上皮细胞移植到角膜缘干细胞损伤的异体兔眼角膜上,术后观察角膜混浊度、角膜新生血管、角膜上皮等情况,定期兔进行病理组织学检查。结果角膜缘上皮细胞在羊膜上培养16d形成3～4层,用含有培养的异体角膜上皮细胞的羊膜片移植的12只兔眼,术后第5天,损伤的角膜表面全部上皮化,第16天开始,12只兔眼逐渐出现排斥反应。结论含培养的角膜缘上皮细胞羊膜片异体移植术后早期角膜全部上皮化,晚期则出现排斥反应。     

促红细胞生成素(Epo)及其受体(EpoR)在正常及碱烧伤诱导的鼠新生血管化角膜上的表达(英文)

目的:促红细胞生成素(Epo)是促红细胞生成的因子,由胎儿肝脏和成人肾脏产生,是贫血及缺氧时的一种应答反应。视网膜异常血管形成,如早产儿视网膜病变(ROP),增殖性糖尿病性视网膜病变(PDR)时Epo水平增高,提示Epo在病理性眼部血管生成中的作用。Epo参与视网膜血管生成,但其与角膜新生血管是否有关尚未见报道。本研究旨在探讨Epo/EpoR是否在正常和新生血管化角膜表达及角膜内注射Epo是否可诱发角膜新生血管的产生,从而了解其与角膜新生血管的联系。方法:(1)制备碱烧伤诱导鼠角膜新生血管模型,免疫组织化学的方法检测Epo及EpoR是否在正常角膜及新生血管化角膜表达;(2) Epo的克隆、表达及纯化;(3)角膜基质内分别注射Epo(6μL,1μg)及Epo对照(载体对照)及盐水,第14d观察角膜是否有新生血管产生。结果:Epo及EpoR在正常角膜及碱诱发的新生血管化角膜的角膜上皮细胞,角膜内皮细胞,基质细胞均有表达,并在新生血管化角膜表达加强,同时也在基质内炎症细胞及新生血管均有表达。角膜基质内注射Epo后第14d,6眼中5眼产生新生血管,对照组6眼均未见新生血管。结论:本文首次报道了Epo及其受体表达于正常角膜和新生血管化角膜。角膜内注射注射Epo可诱发角膜新生血管。Epo及其受体系统与角膜新生血管化的形成有关。     

Corneal endothelial regeneration and tissue engineering

Human corneal endothelial cells (HCECs) have a limited proliferative capacity. Descemet stripping with automated endothelial keratoplasty (DSAEK) has become the preferred method for the treatment of corneal endothelial deficiency, but it requires a donor cornea. To overcome the shortage of donor corneas, transplantation of cultured HCEC sheets has been attempted in experimental studies. This review summarizes current knowledge about the mechanisms of corneal endothelial wound healing and about tissue engineering for the corneal endothelium. We also discuss recent work on tissue engineering for DSAEK grafts using cultured HCECs and HCEC precursor cell isolation method (the sphere-forming assay). DSAEK grafts (HCEC sheets) were constructed by seeding cultured HCECs on human amniotic membrane, thin human corneal stroma, and collagen sheets. The pump function of the HCEC sheets thus obtained was approximately 75%–95% of that for human donor corneas. HCEC sheets were transplanted onto rabbit corneas after DSAEK. While the untransplanted control group displayed severe stromal edema, the transplanted group had clear corneas throughout the observation period. The sphere-forming assay using donor human corneal endothelium or cultured HCECs can achieved mass production of human corneal endothelial precursors. These findings indicate that cultured HCECs transplanted after DSAEK can perform effective corneal dehydration in vivo and suggest the feasibility of employing the transplantation of cultured HCECs to treat endothelial dysfunction. Additionally, corneal endothelial precursors may be an effective strategy for corneal endothelial regeneration.