硫酸软骨素在长期甘油冷冻保存角膜中对内皮细胞活性的影响

目的 探讨硫酸软骨素对长期甘油冷冻保存角膜内皮细胞(CEC)保护作用的机制,并与透明质酸钠进行比较,改进角膜长期保存方法.方法 60只Wistar大鼠角膜片随机分为A、B、C、D 4组,A组不保存,后3组经不同方法保存2个月.所有经保存角膜片均行CEC台盼蓝-茜素红活性染色及HE染色检查.取40只SD大鼠与保存后角膜片建立Wistar-SD同种异体穿透性角膜移植模型,裂隙灯显微镜观察角膜排斥反应,测定术后不同时间点植片内TNF-α和IFN-γ表达水平,检验保存效果.结果 染色结果显示,B组与C、D组比较,差异有显著性(P<0.05).B组保存效果和角膜移植术后效果均优于C组(P<0.05),且植片中TNF-α和IFN-γ的表达水平低于C组和D组(P<0.05),接近A组水平(P>0.05).C、D组间TNF-α、IFN-γ水平差异有显著性(P<0.05).结论 甘油冷冻能够保持CEC的活性,硫酸软骨素和透明质酸钠能减少甘油冷冻直接保存时对CEC造成的损害,且硫酸软骨素能进一步增进保存效果.     

比色法测定角膜宁滴眼液中硫酸软骨素含量

角膜宁滴眼液主要成份硫酸软骨素是一种粘多糖 ,为角膜基质的主要成份之一。原地方标准[1] 采用硫酸钡沉淀法测定硫酸软骨素含量 ,此方法精密度虽高 ,但专属性差 ,分析时间长。为更有效地控制其质量 ,与硫酸软骨素原料的含量测定法一致 ,我们参照卫生部药品标准[2 ] ,采用比色法测定角膜宁滴眼液中硫酸软骨素含量 ,并对该含量测定方法依照《中国药典》2 0 0 0年版二部附录[3] 药品质量标准分析方法验证指导原则进行了验证。仪器与方法1　仪器　ＵＶ75 1ＧＤ紫外 可见分光光度计、ＨＨＳ -6Ｓ型电热水浴锅、电动离心沉淀器。盐酸氨基葡萄糖…     

真空冷冻干燥和保存兔角膜内皮细胞活性的实验研究

目的 :观察真空冷冻干燥和保存的兔角膜的内皮细胞活性。方法 :真空冷冻干燥和保存兔角膜后 ,检测内皮细胞密度 ,存活率。结果 :真空冷冻干燥和保存的兔角膜复水后 ,角膜内皮细胞密度为 (2 339± 2 0 5 .73)个 /mm2 ,存活率 78.5 7%。结论 :真空冷冻干燥和保存的兔角膜经过复水后可以保持角膜内皮细胞的活性     

硫酸软骨素对不同时期液氮冷冻保存的家兔心脏瓣膜的影响

目的观察含硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)的液氮冷冻保存的同种异体心脏瓣膜在不同保存时间内细胞活性及瓣膜组织学结构的变化。方法取48枚兔主动脉瓣随机分成6组,每组8只并经灭菌处理。对照组于灭菌后立即行瓣膜细胞活性测定及组织学检查;实验Ⅰ～Ⅴ组分别在含有硫酸软骨素的保护液中液氮深低温保存1、3、5、7、9个月后取出,复温后行瓣膜细胞活性测定、光镜及电镜检查。结果实验Ⅰ～Ⅴ组D(490)值分别为(0.073±0.014)、(0.067±0.021)、(0.066±0.015)、(0.063±0.020)、(0.042±0.018),与对照组(0.105±0.029)比较,瓣膜细胞活性明显下降(P<0.05);实验Ⅰ～Ⅳ组间,各组瓣膜细胞活性无明显差异(P>0.05);实验Ⅴ组与实验Ⅰ组比较,瓣膜细胞活性明显下降(P<0.05)。各实验组瓣膜组织学结构保存尚好。结论CS能维持液氮深低温中保存的心脏瓣膜的细胞活性,使冷冻保存7个月内细胞活性无明显下降,组织学结构保存较好,瓣膜可用性大。     

供体角膜内皮细胞活性的快速鉴定

角膜的透明性是维持角膜正常功能的重要因素,而要维持角膜的透明必须使角膜内皮细胞保持正常的生理功能,因此角膜内皮细胞活性的好坏,直接影响角膜移植手术的成功率.所以,角膜移植术前要求供体角膜内皮细胞必须保持一定的活性.目前眼库中角膜内皮细胞活性的检测方法多用于离体角膜的检查,花费时间长,操作复杂,而且检查后有的不能用于临床,造成不必要的浪费.我们拟选择检查完整供体眼球的简便方法,通过角膜内皮显微镜观察内皮细胞,快速准确评价内皮细胞的活性,以筛选合适的供体材料,提供临床应用或眼库保存.     

硫酸软骨素对软骨细胞琥珀酸脱氢酶活性的影响及意义

目的 探讨硫酸软骨素对软骨细胞增殖影响的作用机制及其在耳硬化症防治上的应用前景，方法 用硝基四氮唑蓝法研究硫酸软骨素对体外培养兔软细胞琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）活性的影响。结果 对照组与实验组ＳＤＨ活性无明显差异，即加入或不加入硫酸软骨素的兔软骨培养细胞内ＳＤＨ活性无明显改变（Ｐ〉０．０５）。结论 硫酸软骨素有望用于治疗耳硬化症。     

乙醛对硫酸软骨素抗凝血作用的影响

①目的　研究乙醛对硫酸软骨素抗凝血作用的影响。②方法　从家兔颈总动脉取血 ,分别测定加入不同浓度硫酸软骨素后的凝血时间以及硫酸软骨素中加入乙醛、乙醇后的凝血时间。③结果　乙醛加硫酸软骨素组的凝血时间大于硫酸软骨素组 (F =2 1 .33,q =34.1 3,P <0 .0 5 ) ;乙醇加硫酸软骨素组的凝血时间较硫酸软骨素组无明显改变 (F =3.73,q =0 .0 6 ,P >0 .0 5 )。 ④结论　乙醛可提高硫酸软骨素的抗凝血作用 ,而乙醇对硫酸软骨素的抗凝血作用无明显影响     

硫酸软骨素酶ABC对大鼠脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖与胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的探讨硫酸软骨素酶ABC对严重脊髓损伤(SCI)大鼠硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法制作大鼠脊髓横断伤模型,60只大鼠随机分为对照组10只、损伤组25只和治疗组25只。治疗组给予硫酸软骨素酶ABC髓鞘浸润治疗。用免疫荧光组织化学观察脊髓CSPGs的表达;用免疫荧光组织化学及Western-blot方法观察脊髓GFAP的表达。结果 SCI后星形胶质细胞明显活化增殖,CSPGs和GFAP的表达明显增加(P<0.05);治疗组脊髓CSPGs和GFAP的表达均较损伤组减少,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论硫酸软骨素酶ABC能够裂解CSPGs,改善SCI区的微环境,改善GFAP蛋白的表达,是修复SCI,促进神经再生的机制之一。     

屈光性角膜切除术对兔角膜内皮细胞的影响

目的：探讨ArF准分子激光对角膜内皮细胞的影响。方法：运用ArF准分子激光对15只新西兰白兔（30眼）行冰同深度（100、200、300μm）屈光性角膜切除术（PRK），通过扫描和透射电镜观察急性期角膜内皮细胞的形态和结构变化。结果：消融深度为100μm和200μm的标本中，角膜内皮细胞的形态和结构没有变化。切削深度为300μm组中扫描电镜示术后30min可见角膜内皮细胞明显水肿，面积增大（195μm^2),形态不清，内皮细胞表面微绒毛减少其细胞间的连接也不肾密。术后3d内皮细胞水肿较前减轻（169μm^2)，微绒毛增多。术后7d时内皮细胞恢复至正常状态（128μm^2)。结论：一定深度的准分子激光才会对角膜内皮细胞造成影响，且随着时间的推移这种损伤会得到修复。     

改良M-K液中添加透明质酸钠对角膜保存时间影响的研究

目的探讨在改良M-K液中加入透明质酸钠(SH),对提高保存角膜质量和延长保存时间的作用.方法参考M-K液配方进行改良,自制中期保存液(MMK液),另加入SH制成保存液Ⅰ(0.05%SH)、Ⅱ(0.03%SH)、Ⅲ(0.01%SH),对照组为MMK液,在保存3、5、7、10 d时,对保存兔角膜片行大体形态观察,台盼蓝-茜素红联合染色、SDH、G-6-P酶活性检测及超微结构观察.结果各组在保存后不同时间点大体形态观察均有较明显差异;实验Ⅰ组(0.05%SH)与同期各组比较,其角膜片的透明度最好,水肿最轻.台盼蓝-茜素红染色活性内皮细胞百分率比较,实验Ⅰ组最高,对照组最低,各组间比较有显著差异(P<0.01);SDH和G-6-P酶染色平均透光密度值比较,各组间有显著性差异(P<0.01).结论在改良M-K液中加入SH可延长角膜保存时间,保存效果与SH的浓度有关.     

硫酸软骨素、硫酸肝素对毛乳头细胞粘附及生长的影响

目的：探讨细胞外基质在毛囊生长发育中的作用,寻持毛乳头细胞（DPC）生长的调节因素。方法：用两步酸消化法分离培养DPC,并通过免疫组化α-平滑肌肌动蛋白（Actin）染色证实。测定硫酸软骨素A,硫酸软骨素C及硫酸肝素对DPC粘附及生长的影响。结果：两步酶消化法分离培养DPC效率高,纯度高,方法简单易行。硫酸软骨素A和硫酸肝素明显促进DPC粘附及生长,而硫酸软骨素C作用不明显。结论：某些细胞外基质可调节DPC的生长,从而影响毛囊的生长发育。     

纳米TiO2为基质的硫酸软骨素分子印迹聚合物的制备及吸附性能研究

目的: 采用分子印迹技术合成硫酸软骨素分子印迹聚合物(Chs-MIPs),并对其吸附特性进行研究。方法: 以纳米二氧化钛(TiO2)为基质,丙烯酰胺为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,硫酸软骨素(Chs)为模板分子,合成Chs-MIPs。研究合成条件及其对Chs的吸附性能,并采用扫描电镜(SEM)对其形貌进行表征。结果: TiO2和丙烯酰胺最合适的质量比为6∶1,交联剂和丙烯酰胺的摩尔比为7∶1。Chs-MIPs对Chs的吸附平衡和动力学数据分别符合Langmuir等温线模型和Pseudo-second-order动力学模型。结论: 所合成的Chs-MIPs对Chs具有良好的吸附性能和重复耐用性能。     

液氮保存对人主动脉瓣组织细胞活力的影响

目的　主要观察液氮 (- 196℃ )保存 1～ 2 4mo不同时间段的瓣膜组织细胞活力及组织培养细胞生长情况的变化 ,为临床适用的人同种主动脉瓣的适宜保存期限提供实验依据 .方法　选取 (18～ 35 )岁健康成年男性脑死亡 30 min内取材的主动脉瓣膜 2 0个 .依据保存时间分为 10组 , 组为新鲜对照组 ,取材后直接供实验用 , ～ 组为冷冻保存组 ,分别为冷冻保存 1,3,6 ,9,12 ,15 ,18,2 1,2 4m o的瓣膜 ,每组 2个瓣膜共 6个瓣叶 .冷冻保存组各组瓣膜缓慢降温 (1℃·min- 1 ) ,液氮中保存 ,实验时进行快速复温 .瓣叶剪为细小组织块 ,一半置入培养瓶中做组织培养 ,相差显微镜下观察其组织细胞生长情况 ;另一半组织块用胰酶消化 ,光镜下做细胞计数并计算其细胞活力 .结果　 组的组织细胞活力最高(93.8% ) , ～ 组细胞活力均较 组明显减低 (6 7.3% vs93.8% P<0 .0 5 ) ; , , 组细胞活力较 ～ 组瓣膜各组明显减低 (5 2 .4% vs76 .5 % P<0 .0 5 ) . 组组织细胞 1wk镜下可见 ,生长较快 ,4wk时镜下细胞数较多 ; ～ 组组织细胞 2 wk镜下可见 ,生长较 组稍缓慢 ,4wk时镜下细胞数减少 ; , , 组细胞 3wk镜下可见 ,生长较慢 ,4wk时镜下细胞数较 组明显减少 .结论　液氮保存对人同种瓣膜组织细胞活力有显著影响 ,其程度     

连续冻融对硫酸软骨素保存心脏瓣膜的影响

①目的观察舍硫酸软骨紊（cs）的液氮冷冻保存的心脏瓣膜在连续冻融下细胞活力及瓣膜组织学结构的变化。②方法选取60只兔主动脉随机分成6组,每组10只并经灭茵处理。对照组灭茵后立即检测;实验Ⅰ—Ⅴ组转入装有7．5％硫酸软骨素的抗冻剂的无茵冻存管内。实验Ⅰ、Ⅲ、V组分别于瓣膜保存4、16、32周后取出复温,然后立行Ⅰ检测。实验Ⅱ、Ⅳ组分别于4、16周后取出,解冻后在室温下放置10min,更换保存液后再次按照程序控速降温法冷冻保存,4周后再次取出复温,然后检测。③结果实验I、Ⅲ、Ⅴ组瓣膜组织学结构损伤较轻。与对照组相比,实验Ⅰ组细胞活力下降不明显（P〉0．05）;实验Ⅲ、Ⅴ组细胞活力明显低于对照组（P〈0．05）,实验Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ组之间比较,细胞活力差异无显著性（P〉0．05）。实验Ⅱ、Ⅳ组瓣膜组织学结构损伤较重。实验Ⅱ、Ⅳ组细胞活力明显低于对照组和实验Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ组（P〈0．05）。④结论舍硫酸软骨素的液氮冷冻保存的心脏瓣膜在单次冷冻保存32周内皆可作为移植瓣膜选用;连续冻融的瓣膜,不管首次保存时间多短,一旦融化则不可再用,即便是用程序控速降温法并加入辅保护剂硫酸软骨素的冷冻液保存的亦无法再用。     

反相高效液相色谱法测定鲨芪康胶囊中的硫酸软骨素

目的 建立鲨芪康胶囊中硫酸软骨素含量的测定方法.方法 以乙腈与四甲基氯化铵水溶液为流动相,在波长195 nm处采用反相高效液相色谱法进行测定.结果 鲨芪康中硫酸软骨素浓度范围在0.02～0.20 mg/ml时,其峰面积与质量浓度呈良好的线性关系(R2=0.9995).硫酸软骨素的平均含量为0.50%～0.55%(质量分数),平均加标回收率为103.7%.结论 该法操作简便易行,结果准确、可靠,可作为该制剂质量控制的主要方法之一.     

降温方法对硫酸软骨素保存的心脏瓣膜的影响

目的观察不同降温方法对含硫酸软骨素的液氮深低温冷冻保存的同种异体心脏瓣膜的组织学结构和细胞活力的影响。方法将32只兔主动脉瓣随机分成4组,每组8只均经灭菌处理。对照组于灭菌后立即行瓣膜细胞活力测定及组织学检查;实验Ⅰ~Ⅲ组分别采用速冻法、阶梯降温法、程序控速降温法将瓣膜保存在含有硫酸软骨素的液氮深低温中1个月,复温后行瓣膜细胞活力测定、光镜及电镜检查。结果三种降温方法下冷冻保存的瓣膜均有损害,与对照组比较,实验Ⅰ组瓣膜组织学结构改变较重,细胞活力下降显著(P<0.05);实验Ⅱ组瓣膜组织学结构改变较轻,细胞活力下降显著(P<0.05),实验Ⅲ组瓣膜组织学结构改变轻微,瓣膜细胞活力下降不明显(P>0.05)。结论程序控速降温法是目前含硫酸软骨素的液氮深低温冷冻保存同种异体主动脉瓣的最佳降温方法,经此法保存的瓣膜组织学结构损伤轻微,细胞活力佳。     

嗅鞘细胞抑制脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白聚糖表达的实验研究

目的:探讨嗅鞘细胞(OECs)移植的治疗作用及其对影响硫酸软骨素蛋白聚糖类分子(CSPGs)表达的影响。方法:将培养的OECs移植于脊髓半横断的Wistar大鼠,移植术后对模型进行数个时间点的BBB运动功能评分,损伤即移植术后4周,对实验组和对照组动物取材,进行免疫组织化学和Western blotting检测。结果:移植后4周,实验组动物的BBB评分高于对照组动物。免疫组织化学和Western blotting检测发现,实验组动物损伤处CSPGs物质表达低于对照组动物。结论:OECs促进脊髓损伤动物运动功能恢复的作用可能与抑制CSPGs分子表达有关。     

猪动脉瓣膜冷冻保存方法比较

目的：研究各种因素夺动脉瓣膜细胞活性的影响,寻找一种更好保护瓣膜的方法。方法：按照正交试验设计,猪瓣膜经过4种因素即抗生素液浸泡,不同浸泡时间,不同冷冻保护液配方和甲基强的松龙加入处理过程,最后以流式细胞仪计数的方法计算瓣膜的细胞活性,结果：3个处理因素即抗生素液浸泡,冷冻保护液配方,甲基强的松龙加入对细胞活性的影响差异有统计学意义。结论：同种瓣的制作储存过程中应用试验提出的方法可能有助于提高同种瓣临床应用的耐久性。