阳和平喘颗粒对支气管哮喘大鼠气道黏液高分泌的影响

目的探讨阳和平喘颗粒治疗支气管哮喘的可能作用机制。方法 90只SD大鼠随机分为正常组、哮喘模型组、地塞米松组和阳和平喘颗粒低、中、高剂量组,每组15只。采用卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏及雾化吸入的方法建立哮喘大鼠模型,同时应用氢化可的松腹腔注射复制肾阳虚模型。实验第28天开始阳和平喘颗粒低、中、高剂量组大鼠分别按1.62、3.24和6.48 g/(kg·d)灌胃给药,地塞米松组按0.5 mg/(kg·d)灌胃给药,每日1次,连续给药2周;正常组、哮喘模型组以等量的生理盐水进行灌胃。采用HE染色和PAS染色分别检测肺组织病理学改变及气道黏蛋白分泌情况;Real-time PCR法检测肺组织黏蛋白5AC(MUC5AC)和黏蛋白5B(MUC5B)mRNA的表达水平;ELISA法检测肺泡灌洗液MUC5AC和MUC5B的水平变化。结果与正常组相比,哮喘模型组肺组织可见广泛炎症性细胞浸润、气道狭窄、肺泡腔增大、气道内黏蛋白的分泌量显著增多,MUC5AC和MUC5B蛋白及mRNA的表达水平升高(P0.01)。与哮喘模型组比较,阳和平喘颗粒低、中、高剂量组大鼠肺组织形态学结构明显改善、气道管腔大小明显恢复,同时MUC5AC和MUC5B蛋白及mRNA的表达水平下降(P0.01)。结论阳和平喘颗粒可能通过减少炎性细胞浸润和降低气道黏液蛋白分泌而达到治疗支气管哮喘的效果。     

化痰活血方对哮喘小鼠肺泡灌洗液中IL-5、IL-10、TGF-β1和MUC5AC的影响

目的研究化痰活血方(Hua-Tan-Huo-Xue-Fang,HTHXF)对卵清蛋白(OVA)引起的哮喘小鼠肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluids,BALF)中白细胞数目及IL-5、IL-10、TGF-β1、MUC5AC表达的影响,并探究其治疗哮喘的可能作用机制。方法腹腔注射含有OVA与氢氧化铝的致敏液致敏,雾化吸入OVA激发哮喘模型。于实验第9天灌胃给药,雾化激发期间灌胃时间控制在雾化激发前1h。实验第28天处死小鼠,并取BALF测定其中的白细胞数目及IL-5、IL-10、TGF-β1和MUC5AC水平。结果化痰活血方能明显降低BALF中淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞和白细胞总数,降低IL-5和MUC5AC的水平,升高IL-10和TGF-β1水平。结论化痰活血方治疗哮喘的作用机制可能与化痰活血方减少肺泡中白细胞的聚集,升高IL-10和TGF-β1,抑制IL-5和MUC5AC的产生,抑制气道黏液高分泌和炎症有关。     

化痰活血方通过IL-13信号通路对哮喘小鼠肺组织MUC5AC分泌的影响

目的观察化痰活血方如何调控哮喘小鼠肺组织IL-13信号通路相关分子,干预MUC5AC的生成。方法建立小鼠哮喘模型(卵蛋白诱导),分别给予化痰活血方高、中、低剂量组(30、15、7.5 g/kg)。造模及药物干预结束后取小鼠肺组织,采用荧光定量PCR检测MUC5AC基因变化,免疫组化法检测IL-13/MUC5AC通路中各蛋白变化。结果化痰活血方能下调MUC5AC基因和蛋白表达(P<0.01),抑制哮喘小鼠肺组织中IL-13、IL-4Rα、Phospho-IL-4Rα、IL-13Rα1、Phospho-IL-13Rα1、Gab2、Phospho-Gab2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),上调FOXA2蛋白表达(P<0.01)。结论化痰活血方可干预哮喘小鼠肺组织中IL-13通路上下游多个分子,抑制MUC5AC的生成。     

麻杏石甘汤煎煮方式对哮喘模型小鼠气道黏液分泌和急性低氧环境的影响

目的:观察麻杏石甘汤不同煎煮法对哮喘模型小鼠气道黏蛋白MUC5AC及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的影响。方法:将小鼠随机分为5组(正常对照组,哮喘模型组,麻杏石甘汤分煎组,麻杏石甘汤同煎A组,麻杏石甘汤同煎B组),每组10只,除正常对照组外,其他各组均用鸡卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏小鼠,并以低浓度OVA雾化吸入激发制作哮喘模型。麻杏石甘汤先煎组、麻杏石甘汤同煎A组、麻杏石甘汤同煎B组从激发开始连续7 d灌胃给药,测定各组小鼠支气管肺泡灌洗液MUC5AC及肺组织匀浆HIF-1α浓度。结果:麻杏石甘汤先煎组降低小鼠支气管肺泡灌洗液MUC5AC及肺组织匀浆HIF-1α浓度优于麻杏石甘汤同煎B组和麻杏石甘汤同煎A组(P<0.01)。结论:麻杏石甘汤除去麻黄上沫的煎煮法最理想,其降低支气管哮喘气道黏液高分泌和改善急性低氧环境的效果最佳。     

贝母辛对LPS致黏液高分泌小鼠MUC5AC和EGFR表达的影响

目的:探讨脂多糖致黏液高分泌小鼠MUC5AC表达的影响,并初步探讨其机制。方法:用乙醚麻醉小鼠,经鼻腔滴注脂多糖(1 mg/5 ml磷酸缓冲盐溶液,每只50μl),构建小鼠黏液高分泌模型。将小鼠随机分为对照组、脂多糖组和2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg剂量贝母辛组。HE染色观察各组小鼠肺组织病理学改变、实时定量PCR法检测MUC5AC mRNA表达、免疫组织化学法检测MUC5AC蛋白表达及表皮生长因子受体蛋白表达。结果:脂多糖组肺组织病理学显示:气道上皮脱落,气道内有粘液分泌,肺泡结构呈实变,有大量炎症细胞渗出,贝母辛治疗组上述变化明显减轻,且具有剂量依赖性。贝母辛(2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg)均可降低脂多糖致黏液高分泌小鼠MUC5AC mRNA表达,与脂多糖组相比,均有显著的统计学意义,具有剂量依赖性。免疫组织化学法检测MUC5AC蛋白,正常小鼠气道上皮仅有少量的MUC5AC蛋白表达,模型组明显高于空白组,贝母辛可下调脂多糖诱导的MUC5AC表达,具有剂量依赖性。贝母辛可下调脂多糖诱导的表皮生长因子受体蛋白表达,具有剂量依赖性。结论:贝母辛可降低脂多糖致黏液高分泌小鼠MUC5AC表达,其机制可能与表皮生长因子受体表达下调有关。     

清热润燥方对哮喘小鼠气道反应及炎性反应影响的实验研究

目的:观察清热润燥口服液对哮喘小鼠模型的气道反应、肺组织病理学、气道炎症中IL-13诱导表达的黏蛋白5AC(MUC5AC)和水液代谢的水通道蛋白(AQP5)等因子的影响,探讨“润养与通利”辨治哮喘的理论。方法:采用卵蛋白制造小鼠哮喘模型。将72只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组,清热润燥口服液高、中、低剂量组,各组药物作用后观察相关指标。结果:与模型组比较,清热润燥低剂量组吸气峰流速减少,气道炎症稍好转,BALF中IL-13、MUC5AC均减少; 清热润燥中、高剂量组及阳性药物组吸气峰流速增加、气道炎症好转,IL-13、MUC5AC均减少,AQP5增加。结论:清热润燥方在改善哮喘小鼠气道炎性反应、减少MUC5AC及增加AQP5的表达方面具有积极作用。     

清金化痰汤对COPD模型大鼠肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶及黏蛋白5AC表达的影响

目的探讨清金化痰汤调节慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道黏液高分泌的作用机制。方法 40只清洁级Wistar大鼠随机分为空白对照组(A)、模型组(B)、清金化痰汤组(C)与克拉霉素组(D)。B、C、D组大鼠均给与气道内滴注脂多糖(LPS)联合烟熏的方法建立慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌模型。B、C、D组连续30 d分别给予生理盐水、清金化痰汤、克拉霉素灌胃,正常组正常喂养。实验第31天,处死大鼠,提取肺组织。每组随机选取6只,采用实时荧光定量PCR检测肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、黏蛋白5AC(MUC5AC)基因表达,阿尔新兰-过碘酸雪夫法观察气道上皮杯状细胞增生,免疫组化法检测肺组织及气道上皮NE、MUC 5AC蛋白表达。结果模型组NEm RNA、MUC 5AC m RNA表达、杯状细胞数目、肺组织中NE及MUC5AC表达均较空白对照组显著升高;清金化痰汤组、克拉霉素组MUC 5ACm RNA、杯状细胞数目、肺组织中MUC 5AC均较模型组显著降低;清金化痰汤组NEm RNA、MUC 5ACm RNA、肺组织气道上皮NE表达较克拉霉素组降低;清金化痰汤组在杯状细胞增生、肺组织气道上皮MUC 5AC表达与克拉霉素组无差异。结论清金化痰汤可能通过调节NE/MUC 5AC途径,抑制慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌。     

咳喘六味合剂对RSV感染哮喘小鼠气道炎症的影响

目的:观察咳喘六味合剂对RSV感染哮喘小鼠肺组织中气道炎症的影响。方法:将40只雄性Balb/C小鼠随机分为4组,每组10只。PBS组为非OVA致敏和不感染RSV的对照组。OVA组应用OVA注射和OVA气道雾化吸入致敏。OVA/RSV组和咳喘六味合剂组(KLH组)在应用OVA致敏后用RSV滴鼻,复制急性病毒性哮喘模型。咳喘六味合剂组(KLH组)还用咳喘六味合剂治疗。处死动物,RT-PCR检测肺组织中白细胞介素13(IL-13)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-17A(IL-17A)mRNA的表达;HE染色观察肺病理变化。结果:HE染色显示咳喘六味合剂能显著改善RSV感染哮喘小鼠气道炎症。与PBS组相比,OVA组IFN-γ降低,IL-13、IL-17A增高(P<0.05,P<0.01);OVA/RSV组IL-13、IL-17A增高(P<0.01),IFN-γ虽降低,但无统计学意义(P>0.05),且IFN-γ、IL-13均较OVA组增高(P<0.05,P<0.01)。较OVA/RSV组相比,KLH组能显著升高IFN-γ(P<0.05,P<0.01);降低IL-13、IL-17A mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:咳喘六味合剂可抑制气道炎症,改善肺组织中炎性因子的表达,达到控制哮喘的目的。     

三七总皂苷对哮喘小鼠气道炎性反应及Th17细胞因子的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对哮喘小鼠气道炎性反应及白细胞介素-17(IL-17)的影响,探索PNS防治支气管哮喘的可能作用机制。方法:SPF级BALB/c小鼠50只随机分成正常对照组、哮喘模型组,PNS低、中、高剂量组。鸡卵清蛋白(OVA)腹腔注射及雾化激发法,复制哮喘模型。观察小鼠肺组织病理变化,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中IL-17的变化。结果:药物干预组哮喘症状有所减轻,肺组织炎性细胞浸润减轻。与哮喘模型组比较,PNS中剂量组具有明显降低哮喘小鼠血清中IL-17的浓度的作用(P<0.05)。结论:PNS对哮喘小鼠肺组织细支气管及血管周围炎性细胞浸润有减轻作用,可减少气道上皮黏液分泌,改善气道炎性反应状态。PNS可能通过抑制哮喘小鼠IL-17的表达,减轻气道炎性反应,干预哮喘发作。     

金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌大鼠肺组织黏蛋白5AC及水通道蛋白5表达的影响

目的观察金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道黏液高分泌大鼠肺组织黏蛋白5AC(MUC5AC)、水通道蛋白5(AQP5)表达的影响,探讨其治疗气道黏液高分泌的可能机制。方法 24只SD大鼠随机分成正常组、模型组、金水六君煎组和阿奇霉素组,每组6只。采用烟熏加气管内脂多糖滴入制作大鼠COPD气道黏液高分泌模型,成模后给予相应药物干预,连续2周。观察大鼠一般情况,小动物肺功能仪检测肺功能,HE染色观察肺组织病理,PAS染色检测气道杯状细胞数及黏液量,RT-PCR和Western blot分别检测肺组织MUC5AC、AQP5基因与蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肺组织HE染色符合COPD病理改变,肺功能及AQP5基因与蛋白表达明显降低(P0.05),气道杯状细胞数、黏液量增加及MUC5AC基因与蛋白表达显著升高(P0.05);与模型组比较,金水六君煎组大鼠肺功能明显改善(P0.05,P0.01),气道杯状细胞数、黏液量减少及肺组织MUC5AC基因与蛋白表达明显降低(P0.05),肺组织AQP5基因与蛋白表达显著升高(P0.05,P0.01)。结论金水六君煎可促进肺组织AQP5表达,抑制MUC5AC表达,纠正黏蛋白/水盐比例失衡可能是其治疗COPD气道黏液高分泌的机制之一。     

麻杏二三汤对COPD大鼠气道黏液高分泌MUC5AC、MUC5B表达的影响

目的观察麻杏二三汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道黏液高分泌的影响。方法36只SD大鼠随机分为正常组,模型组,阿奇霉素组,麻杏二三汤低、中、高剂量组,各6只。采用烟熏加气管内脂多糖滴入制备COPD模型。分别予以阿奇霉素及低、中、高剂量麻杏二三汤连续14 d灌胃干预,模型组予以等量0.9%氯化钠注射液。观察大鼠一般行为学表现;小动物肺功能仪检测大鼠肺功能指标;HE染色观察肺组织病理;酚红排痰实验检测气道黏液分泌;RT-PCR检测黏蛋白MUC5AC、MUC5B基因表达;Western blotting检测黏蛋白MUC5AC、MUC5B蛋白相对含量。结果与正常组比较,模型组大鼠肺组织HE染色符合COPD病理改变,肺阻力明显增加、肺顺应性明显下降(P<0.05),气道酚红排泌量及肺组织MUC5AC、MUC5B基因与蛋白明显增多(P<0.05)。与模型组比较,阿奇霉素组及麻杏二三汤中、高剂量组大鼠肺阻力明显减低(P<0.05),气道酚红排泌量及肺组织MUC5AC、MUC5B基因与蛋白明显减少(P<0.05)。结论下调MUC5AC、MUC5B基因与蛋白表达可能是麻杏二三汤治疗COPD气道黏液高分泌的作用机制之一。     

清金化痰汤通过p38MAPK/NF-κB信号通路改善大鼠急性气道炎症的作用和机制

目的:探讨清金化痰汤治疗急性气道炎症模型大鼠气道炎症性损伤和黏液高分泌的作用和机制。方法:脂多糖(LPS)诱导建立急性气道炎症大鼠模型,随机分为空白组、模型组、地塞米松组、清金化痰汤高、中、低剂量(7.44,3.72,1.86 g·kg-1)组,各组大鼠自给药开始计时,第4,7天分批次处死。采集肺泡灌洗液(BALF),气管及肺组织,观察各组大鼠BALF中白细胞及细胞分类计数;酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中白细胞介素(IL)-1β,IL-8,肿瘤坏死因子(TNF)-α以及黏蛋白(MUC5AC);光镜下观察气管和肺组织病理学改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,p38MAPK),核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白(IκBα),NF-κB p65蛋白表达水平。结果:清金化痰汤能抑制BALF中白细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞升高,减轻气管和肺组织的病理学炎症积分,减少细胞因子IL-1β,IL-8,TNF-α水平及黏蛋白MUC5AC的表达,下调肺组织p38MAPK,NF-κB p65蛋白表达,增加IκBα蛋白表达水平。结论:清金化痰汤具有抑制炎症细胞浸润,减少细胞因子和黏蛋白MUC5AC的表达,抑制气道炎症反应的作用;清金化痰汤通过调控肺组织p38MAPK/NF-κB信号通路,抑制气道黏蛋白分泌和细胞因子的释放,从而改善气道黏液高分泌状态及其炎症性损伤。     

解毒清肺合剂对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶及黏蛋白5AC表达的影响

目的探讨解毒清肺合剂调节慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道黏液高分泌的作用机制。方法采用气道滴注脂多糖联合烟熏方法建立慢性阻塞性肺疾病模型。40只清洁级Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、解毒清肺组与克拉霉素组。模型组、解毒清肺组、克拉霉素组分别给予生理盐水、解毒清肺合剂、克拉霉素灌胃,空白对照组正常喂养,连续30 d。实验第31日,处死大鼠提取肺组织,每组随机选取6只,HE染色观察肺组织病理形态及黏液腺体增生,实时荧光定量PCR检测各组大鼠肺组织中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、黏蛋白5AC(MUC5AC)m RNA表达,免疫组化检测肺组织及气道上皮NE、MUC5AC蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组气道上皮黏液腺体增生、肺组织NE及MUC5AC m RNA表达、气道上皮NE及MUC5AC蛋白表达升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,解毒清肺组气道上皮黏液腺体增生显著降低(P0.01),且作用与克拉霉素组相当;解毒清肺组肺组织NE、MUC5AC m RNA表达显著降低(P0.01),且作用优于克拉霉素组;解毒清肺组气道上皮MUC5AC蛋白表达降低(P0.05),且作用与克拉霉素组相当。解毒清肺组和克拉霉素组气道上皮NE蛋白表达与模型组无差异。结论解毒清肺合剂通过NE下调MUC5AC蛋白表达,调节慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌。     

桔梗多糖对哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的影响

目的:探讨桔梗多糖对OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的影响。方法:将60只小鼠随机分成6组,每组10只,即正常组、模型组、桔梗多糖(PGP)低、中、高剂量(20、60、80 mg/kg)组和阳性对照地塞米松组。采用卵白蛋白致敏的方法建立哮喘模型后,各组分别予以相应药物干预8周。给药结束后,测定小鼠气道高反应性。分别取材,用于ELISA检测、HE染色、AB-PAS染色和吉姆萨染色计数,Western blot检测肺组织中气道重塑相关蛋白转化生长因子-β1(TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和周期蛋白(Cyclin D1、Cyclin D2)的蛋白表达变化。结果:与正常组相比,模型组小鼠肺阻力(RL)显著升高,动态顺应性(Cdyn)显著降低,BALF中Eotaxin(嗜酸细胞活化趋化因子)、IL-4、IL-5、IL-13和血清中Ig E显著升高,肺组织中炎症细胞浸润和黏液分泌明显增多,支气管杯状细胞增生明显,气道重塑相关蛋白表达显著升高;桔梗多糖高、中、低剂量组均能降低小鼠RL,升高Cdyn,降低BALF中Eotaxin、IL-4、IL-5、IL-13和血清Ig E的含量,明显减少肺组织中炎症细胞的产生、黏液的分泌和杯状细胞的增生以及气道重塑相关蛋白的表达;且桔梗多糖高剂量组与阳性对照地塞米松组比,无统计学差异。结论:桔梗多糖能够降低哮喘小鼠的气道高反应性,减轻炎性反应,降低血清Ig E水平,同时能够降低肺组织TGF-β1、α-SMA、Cyclin D1和Cyclin D2蛋白表达,延缓气道重塑。     

苏子降气汤对COPD气道黏液高分泌大鼠MUC5AC、AQP5的影响

目的观察苏子降气汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道黏液高分泌模型大鼠肺组织中黏蛋白5AC(MUC5AC)和水通道蛋白5(AQP5)的表达的影响,并探讨其干预COPD气道黏液高分泌的作用机制。方法将32只Wister雄性大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、富露施组(西药组)和苏子降气汤组(中药组),每组各8只。采用烟熏联合气道滴注脂多糖(LPS)的方法建立COPD气道黏液高分泌的模型。空白组、模型组予以0.9%氯化钠注射液灌胃,西药组和中药组分别给予富露施、苏子降气汤灌胃,连续2周。苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织的病理学改变;阿尔辛蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色观察杯状细胞的分泌情况;免疫组织化学法检测肺组织中MUC5AC和AQP5蛋白表达水平。结果与空白组相比,模型组大鼠MUC5AC蛋白表达水平增加,AQP5蛋白表达水平减少(P0.05);与模型组相比,中药组和西药组MUC5AC蛋白表达水平减少,AQP5蛋白表达水平增强(P0.05),且中药与西药两组无明显差异(P0.05)。结论苏子降气汤可能是通过增加肺组织中AQP5蛋白,减少肺组织中的MUC5AC蛋白的表达,从而达到减少气道黏液分泌,减轻气道阻塞。     

补肾平喘方对过敏性哮喘小鼠气道炎症改善效果的实验研究

目的:研究补肾平喘方对过敏性哮喘小鼠气道炎症的改善效果。方法:腹腔注射卵清蛋白(OVA)制备过敏性哮喘模型小鼠,随机分为补肾平喘方低、高剂量组(15、30g·kg~(-1)·d~(-1))、地塞米松组(1mg·kg~(-1)·d~(-1))、模型组(等体积生理盐水)。OVA攻击诱导致敏期间给与药物干预,连续8周。末次OVA攻击后,测定各组气道阻力、支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞计数、γ-干扰素(IFN-γ)、白介素4(IL-4)、IL-5、IL-13、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Ig E水平。行HE、AB-PAS染色分别观察气道炎性细胞浸润及肺组织黏液分泌情况。Western blot检测肺组织中NF-κBp65、IκBα、TLR4、Foxp3蛋白表达。结果:给药干预后,补肾平喘方可显著降低气道阻力及炎症细胞数量,同时可降低IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α、Ig E水平,下调p-NF-κBp65/NF-κBp65、p-IκBα/IκBα与TLR4蛋白表达,上调Foxp3蛋白表达。HE、AB-PAS染色结果显示补肾平喘方可减少炎性细胞浸润,抑制肺组织黏液分泌和杯状细胞增生,且呈剂量依赖性。结论:补肾平喘方可有效改善过敏性哮喘小鼠气道炎症,发挥平喘作用。     

隐丹参酮通过抑制p38 MAPK/NF-κB通路改善哮喘气道炎症

目的探究隐丹参酮(CTS)对哮喘小鼠气道炎症的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将50只雌性BALB/c小鼠随机分为5组:生理盐水对照组(Control)、OVA哮喘组(OVA)、CTS低剂量组(CTS 50)、CTS高剂量组(CTS 100)、地塞米松阳性对照组(DEX),每组10只。建立卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)诱导的哮喘小鼠模型,分别用50 mg·kg^-1、100 mg·kg^-1 CTS及10 mg·kg^-1地塞米松腹腔注射处理各组小鼠,对照组用等量生理盐水代替。末次激发24 h后处死小鼠,取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺脏。以Diff-Quick染色对小鼠BALF中炎症细胞进行分类计数;ELISA法检测小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量;小鼠肺石蜡包埋,切片,行HE和PAS染色,观察小鼠肺组织的病理学改变;Western Blot观察核因子(NF)-κB p65表达水平,以及IkB-α、p38 MAPK磷酸化水平。结果 CTS显著减少哮喘小鼠BALF中炎症细胞数量,并降低小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量(P<0.05);CTS显著抑制肺组织中炎症细胞浸润、杯状细胞增生及黏液分泌;CTS抑制NF-κB p65活化并抑制IkB-α、p38 MAPK磷酸化(P<0.05)。结论 CTS可抑制哮喘小鼠气道炎症,其机制可能与抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路有关。     

厚朴麻黄汤对哮喘小鼠气道炎症及TRPA1,TRPV1 mRNA与蛋白表达的影响

目的:探讨厚朴麻黄汤对哮喘小鼠气道炎症的效应及对瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1),TRPV1 mRNA与蛋白表达的影响。方法:将60只雌性Balb/c小鼠随机分为6组,分别为空白组、模型组、厚朴麻黄汤低、中、高(7,14,28 g·kg^-1)剂量组和地塞米松组(0.0024 g·kg^-1),每组10只。复制卵蛋白(OVA)致敏及激发小鼠哮喘模型。检测各组小鼠气道反应性,以不同浓度氯化乙酰胆碱(ACh)雾化吸入激发后增强呼气间歇(Penh)值表示,观察各组小鼠肺组织病理学改变,外周血嗜酸性粒细胞数(EOS),支气管肺泡灌洗液(BALF)中EOS百分比的变化。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素(IL)-4,IL-13,前列腺素D2(PGD2),P物质(SP),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织TRPA1,TRPV1 mRNA与蛋白表达。结果:与正常组比较,给予质量浓度为12.5,25,50 g·L-1ACh雾化吸入后,模型组小鼠Penh明显上升(P<0.05,P<0.01);肺病理显示支气管及管壁周围有大量炎症细胞浸润,支气管黏膜水肿、增厚,黏液分泌增多;外周血中EOS数量及BALF中EOS百分比明显升高(P<0.01)。BALF中IL-4,IL-13,PGD2和SP水平以及肺组织中TRPA1,TRPV1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,各给药组Penh明显降低(P<0.05,P<0.01),肺组织病理损伤改善,外周血中EOS数量及BALF中EOS百分比显著降低(P<0.01);BALF中IL-4,IL-13,PGD2和SP水平以及肺组织中TRPA1,TRPV1 mRNA与蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:厚朴麻黄汤可以改善哮喘小鼠气道炎症、降低气道反应性,其机制除降低Th2相关的细胞因子水平外,可能也与调控TRPA1,TRPV1mRNA与蛋白表达及降低相关神经因子水平有关。     

清肺化痰汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道炎症和黏液分泌的调控作用研究

目的:探讨清肺化痰汤对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)大鼠模型气道炎症和黏液分泌的调控机制研究。方法:建立COPD大鼠模型。50只大鼠随机分为对照组、COPD模型组和清肺化痰汤低、中、高剂量组。Real-time RT-PCR法检测肺组织MUC5AC mRNA的表达,免疫组织化学法检测肺组织MUC5AC蛋白表达,ELISA检测肺泡灌洗液中MUC5AC的表达,ELISA检测肺组织TNF-α和IL-1β的表达,Western Blot检测肺组织中NF-κB的表达。结果:(1)COPD模型组大鼠肺组织中MUC5AC mRNA明显升高,和正常对照组比较有统计学差异(P0.05),清肺化痰汤治疗后MUC5AC mRNA的表达水平下降,呈剂量依赖性,和模型组相比较,中剂量组和高剂量组差异有统计学意义;(2)免疫组化结果显示,对照组呈弱阳性表达,COPD模型组可见大量的MUC5AC表达,清肺化痰汤各组治疗后MUC5AC的表达明显下降;(3)ELISA结果显示COPD模型组大鼠肺泡灌洗液中MUC5AC蛋白量明显高于正常对照组(P0.05);清肺化痰汤各组治疗后,肺泡灌洗液中MUC5AC蛋白量明显低于COPD模型组(P0.05);(4)ELISA结果显示COPD模型组大鼠肺组织中TNF-α和IL-1β蛋白量明显高于对照组(P0.05);清肺化痰汤各组治疗后,大鼠肺组织中TNF-α和IL-1β蛋白量明显低于COPD模型组(P0.05),呈剂量依赖性;(5)Western Blot结果显示COPD模型组大鼠肺组织中NF-κB表达明显高于对照组(P0.05);清肺化痰汤各组治疗后,大鼠肺组织中NF-κB的表达水平低于COPD模型组(P0.05),呈剂量依赖性。结论:清肺化痰汤通过抑制NF-κB信号通路调节TNF-α、IL-1β炎症因子的表达,从而抑制气道上皮MUC5AC的表达。     

从祛瘀化痰法探讨平喘方及拆方对哮喘小鼠Th1/Th2免疫失衡的干预机制

目的研究平喘方及拆方干预哮喘小鼠Th1/Th2免疫失衡的作用机制,并探究"化痰"与"祛瘀"两种治法干预气道炎症的疗效。方法对60只BALB/c雄性小鼠按随机数字表分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组、平喘方组、拆方1(祛瘀方)组、拆方2(化痰方)组共6组,每组10只,运用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝腹腔注射致敏并雾化吸入激发,建立小鼠支气管哮喘模型,末次激发后给药7 d并杀检取材,运用HE染色观察各组小鼠气道及肺组织病理改变,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中白介素4(IL-4)、干扰素γ(INF-γ)、白介素17(IL-17)、白介素10(IL-10)表达,蛋白质印迹法法(Western Blot)检测肺组织中转录因子GATA结合蛋白3(GATA-3)、T盒子转录因子(T-bet)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组病理染色显示炎症细胞侵润明显,管壁及肺组织结构受到破坏,周围组织伴有炎性物质渗出,IL-4、IL-17、GATA-3表达增高(P<0.05),INF-γ、IL-10、T-bet表达减低(P<0.05)。与模型组对比,平喘方及拆方组可显著减少病理染色中的气道炎症程度,减低IL-4、IL-17、GATA-3表达(P<0.05),升高INF-γ、IL-10、T-bet表达(P<0.05),拆方组间比较祛瘀方在改善气道病理优于化痰方,在降低IL-4、IL-17、GATA-3因子水平具有优于化痰方的统计学趋势。结论:平喘方及拆方可减少哮喘小鼠IL-4、IL-17、GATA-3表达,升高INF-γ、IL-10、T-bet表达,改善Th1/Th2免疫失衡,祛瘀与化痰两种治法相比较,祛瘀法在改善气道炎症方面疗效较优。