Potential role of N-Succinyl-Chitosan in immune reconstitution after umbilical cord blood transplantation in mice

How to shorten the immune convalescence required after transplantation in recipients is still an austere medicinal problem. Speed-up recovery means less infection opportunity and high survival. In this study, an immune-deficient mouse model was developed by lethally irradiation to evaluate the immune reconstitution effect of N-Succinyl-Chitosan (NSC), a water soluble low molecular weight chitosan derivative, after umbilical cord blood stem cells transplantation, including hematopoiesis parameters detection, T-cell phenotype analysis and pathological comparison; effects of NSC on proliferation of umbilical cord blood stem cell has also been evaluated in vitro. By comparison and analysis, we found the combination of NSC and hematopoietic growth factors could dramatically shorten the time required for the recovery of hematopoiesis, T-cell phenotype and injured spleen after transplantation, suggesting that NSC may hasten the immune recovery and therefore may shorten the time of exposure to life-threatening opportunistic infections in transplant recipients. Moreover, we demonstrated that NSC was effective on the proliferation and clone of umbilical cord stem cell in vitro, suggesting NSC could speed up the immune reconstitution in umbilical cord blood transplantation by enlarge the number of umbilical cord blood stem cell.     

54例非亲缘脐血造血干细胞移植回顾性分析

本研究对广州市脐血库1998年6月至2003年7月提供的54例非亲缘脐血移植进行回顾性分析,以研究脐血移植的相关影响因素.脐血均采自广州市妇婴医院正常分娩的足月顺产孕妇,脐血分离、冻存、复温方法参照纽约脐血库标准及相关文献;选择脐血的依据是HLA相合程度及有核细胞数量.结果表明1998年6月至2003年7月间,库存脐血3475份,与21家移植中心合作提供脐血99份,治疗患者85例.其中同胞脐血移植11例.对54例非亲缘关系脐血移植病例进行统计分析显示,在54例受者中,恶性病患者43例,占79.6%,非恶性病患者11例,占20.4%,受者中位年龄9.5(1.2-33)岁,中位体重27(10-60)公斤,TNC中位输入量6.82×107/kg,移植后60天植入43例(ANC＞500/μl的中位时间为17天),植入率为79.6%.脐血移植有核细胞重建时间与输入的有核细胞数以及疾病类型相关,同HLA相合程度不相关.急性Ⅲ-Ⅳ度GVHD发生率为21.6%,慢性GVHD发生率为5.4%.6例患者出现自体恢复(11.1%).存活率42.6%.结论非亲缘性脐血造血干细胞移植尤其在治疗小儿白血病方面具有良好的应用前景.     

非血缘脐血移植治疗成年人恶性血液病的展望

近年来,非血缘脐血移植(UCBT)治疗成年人恶性血液病取得较多进展.UCBT治疗急性白血病的疗效与单倍体移植、非血缘骨髓移植、外周血干细胞移植的疗效相当,成为治疗恶性血液病的重要选择.单份UCBT的优势在于移植物抗宿主病(GVHD)发生率低且易于控制,保留有较好的移植物抗肿瘤(GVT)效应,并且患者接受治疗后生活质量较好.而UCBT的劣势在于其脐血干细胞数量少(尤其对于成年患者),因此其植入率低、植入较慢、免疫重建慢、移植早期感染发生风险高.改善UCBT的植入率低、免疫重建慢等问题,可以提高UCBT治疗成年人恶性血液病的疗效,丰富造血干细胞移植的供源.本文对今后UCBT治疗成年人恶性血液病,主要在解决UCBT植入问题、免疫重建问题、脐血人类白细胞抗原(HLA)配型等方面进行展望.     

关注脐血移植后发生供者细胞来源的白血病

复习了最近报道的脐血移植后供者细胞白血病和相关文献，并就其发生机制和脐血保存等问题作了讨论。鉴于存在胚胎来源白血病细胞的可能性，建议较系统地监测脐血移植后白血病复发的病例，以确定供者细胞来源白血病的频率和是否真正存在白血病前体细胞的输注。     

胎盘组织及血液中含有丰富的造血干/祖细胞

大量的临床移植表明人脐血 (UCB)可以在造血干细胞移植的儿童中得到造血重建 ,可是在成人中脐血移植 (UCBT)效果并不理想 ,这主要是脐血中所含的细胞数及造血干 /祖细胞数有限 ,而不适宜体重较大的成人。本研究在收集脐血的同时 ,也分别收集胎盘血 (UPB)及胎盘组织 (UPT)中的细胞 ,检测有核细胞数 ,CD34(造血干 /祖细胞的表明标记 )阳性细胞 ,粒单细胞集落 (CFU GM)。结果发现 :来自于胎盘血和胎盘组织中的有核细胞数是脐血细胞的 3- 4倍 ;脐血、胎盘血及胎盘组织细胞的有核细胞数分别为 (8.3± 1.0 4 )× 10 8,(16 .33± 5 .5 4 )× 10 8和(8.0 1± 2 .6 4 )× 10 8;CD34+ 细胞分别为 (0 .77± 0 .0 1)× 10 6,(1.2 5± 0 .5 5 )× 10 6和 (4.2 1± 1.90 )× 10 6;在细胞的长期培养中 ,UPB细胞和UPT细胞能生存更长时间 ,而且这些细胞更易贴壁形成纤维样的细胞 ;冰冻前后UPT细胞活性及回收率无明显差异 ,表明胎盘细胞和脐血细胞一样适合于长期储存 ;而且 ,在UPB和UPT中含有更高比例的T淋巴细胞抑制细胞群 ,可能意味着UPB和UPT具有更强的免疫抑制功能。结论指出 ,有必要建立含有胎盘和脐血细胞的血库 ,以便为大剂量放疗及化疗后的儿童及成年病人进行造血干细胞移植 ,为重建造血创造条件     

新鲜及冻存的人脐血移植于裸鼠的实验研究

目的　探讨人新鲜脐血及冻存脐血移植于裸鼠的规律及差别。方法　采用Balb/Cnu +裸鼠致死量放射线照射后输入人新鲜或冻存脐血单个核细胞 ,观察小鼠存活率、存活时间 ,检测移植成活证据及干细胞在小鼠体内的迁移 ,定居情况。结果　新鲜脐血组及冻存脐血组小鼠存活率及存活时间均显著高于对照组 ,前两组则无显著差异 ;PCR法及流式细胞术检测小鼠体内人特异性基因及细胞均证实了人冻存脐血已在小鼠骨髓内定居并植入成活 ,持续至少 130d ;但冻存脐血干细胞的迁移情况与新鲜脐血有所差异。结论　脐血中富含造血干细胞 ,能使免疫缺陷小鼠获得造血和免疫重建 ;冻存可长期保存干细胞活性 ,但可能影响干细胞表面定居相关粘附分子 ,从而影响其迁移行为。     

脐血间充质干细胞移植治疗糖尿病足二例并文献复习

目的 观察脐血间充质干细胞移植治疗糖尿病足的疗效和安全性.方法 将脐血间充质干细胞多点注射到自愿接受干细胞移植的2例患者病变下肢,细胞数(3～7)×107/L,每点0.3～0.5 ml,每,点间距3 cm×3 cm,肌肉组织丰富的部位可分层注射.术后第1天至3个月定期观察患者临床症状及各项指标的变化并进行综合分析.结果 脐血间充质干细胞移植后3个月进行评价,2例患者下肢疼痛均明显缓解、皮温升高、皮肤凉感消失、间歇性跛行明显改善和足部溃疡愈合.踝肱指数、经皮氧分压较前有明显升高,血管造影显示治疗后病变下肢均有丰富的侧支血管生成.移植后2例患者均未出现严重并发症和明显不良反应,均未行截肢术.结论 脐血间充质干细胞移植治疗糖尿病下肢缺血性血管病是一种安全、有效的手段,可使一部分患者免除截肢,改善其生活质量.     

脐血造血干细胞移植中脐血输注的护理

脐血造血干细胞移植中如何使脐血造血干细胞顺利输注人病人体内是移植成功的重要环节,因此,脐血输注的护理尤为重要。笔阐述9例脐血造血干细胞移植患,脐血输注前输注时的护理,脐血输注后并发症的观察及护理3个部分的护理经验。9例患均成功进行了脐血输注。     

脐带血单个核细胞体外培养分化为肝细胞的实验观察

目的探讨脐带血单个核细胞在体外定向分化为肝细胞的条件及能力,为建立脐血干细胞移植治疗慢性肝衰竭提供实验依据。方法采集脐带血分离单个核细胞后,在实验组加入成纤维细胞生长因子(FGF)及促肝细胞生长因子(HGF)、或FGF加胎肝上清液培养,对照组只加FGF培养,观察细胞生长分化状况,免疫组化检测两组人甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(Alb)。结果实验组可见类圆形及多边形细胞,呈类肝细胞形态,对照组大多为梭形细胞,未见多边形细胞;实验组细胞AFP、Alb免疫组化染色为阳性,对照组未见AFP,Alb阳性细胞。HGF的诱导分化效果优于胎肝上清液。结论脐带血单个细胞在HGF或胎肝上清液的诱导下可以定向分化为能分泌Alb及AFP的类肝细胞。     

混合脐血血浆对脐血CD34^＋细胞体外扩增的作用

采用两步法分离出脐血CD34~ 细胞,比较研究了混合脐血血浆联合IL-3,IL-6,GM-CSF,Epo 4种中、晚期造血因子和单纯的4种造血因子情况下脐血CD34~ 细胞的体外扩增。结果表明,混合脐血血浆联合造血因子对粒-巨噬细胞集落形成单位(granulocyte-macrophage colony-forming unit,CFU-GM),红系爆式集落形成单位(burst-forming unit of erythriod,BFU-E),混合集落形成单位(minxed colony-forming unit,CFU-mix)3种集落的扩增效果明显优于单纯的4种造血因子联合组,差异具有统计学意义(P<0.01),但单纯混合脐血血浆扩增效果较差。脐血造血细胞扩增对子成人脐血移植有重要意义。上述结果提示,混合脐血血浆的扩增成功,可代替或弥补早期造血生长因子的作用,用于脐血造血细胞的体外扩增。     

体外长期培养的人脐血造血细胞表面标志的动态分析

目的：探讨脐血造血细胞体外扩增及移植的最佳时机。方法：用造血干细胞因子，重组人白细胞介素（ｒＩＬ）３，ｒＩＬ１β和ｒＩＬ６长期培养人脐血造血细胞，并对其表面标志进行动态观察。结果：ＣＤ３＋和ＣＤ２０＋的Ｔ、Ｂ淋巴细胞培养第７天升高，１４天后下降至低水平维持。ＣＤ３４＋细胞培养７天后增多，１４天达高峰，继而下降在一定水平维持。ＣＤ３３＋细胞培养第７天显著增多，１４２１天达高峰，第２８天明显下降。ＣＤ４２ｂ＋细胞培养２１天开始增多，２８天达高峰，第３５天仍处于较高水平。ＨＬＡＤＲ＋细胞培养１４２１天时稍有增高。结论：含有上述细胞生长因子的培养体系能够扩增脐血造血细胞并维持其存活。培养１４２１天造血细胞数量最多、状态最佳，适于移植     

混合脐血成人移植定量监测植入状态的实验研究

为了定量监测和研究双份异基因脐血用于成人白血病患者移植后两份脐血的植入状态、嵌合体类型、供者细胞相对数量的动态变化及演变规律 ,采用荧光标记复合扩增短串联重复 (STR)位点嵌合体定量检测技术 ,对 1例急性髓细胞白血病成人患者移植两份 (脐血 1有核细胞数为 2 .5× 10 7/kg ,脐血 2有核细胞数为 1.5 3× 10 7/kg)HLA各 1个位点不相合的异基因脐血前后的序列血样进行 9个STR位点的检测 ;利用供、受者之间的差异位点定性判断脐血是否植入以及嵌合体类型 ;而后根据 377XLDNA测序仪上荧光扫描后两供者差异基因检出峰的峰面积计算脐血植入后患者体内两份脐血的细胞相对数量 ,定量分析供体细胞植入程度及演变规律 ;并与采用HLA差异基因对植入状态的分析结果进行对比。结果表明 :移植后 15天两份脐血同时植入 ,植入状态为完全双份供者嵌合体 ,患者体内脐血 1的相对细胞数量占 5 1.3% ,脐血 2占 4 8.7% ;30天时脐血 1嵌合体细胞上升为 70 .0 % ,脐血2嵌合体细胞下降为 30 .0 %。 5 2天时只检测到脐血 1的基因 ,植入状态转为完全单份供者嵌合体 ,有核细胞数少的一份脐血被排斥 ,有核细胞数多的一份长期植入。结论 :荧光标记复合扩增STR嵌合体定量检测可精确地描述两份脐血的植入程度及变化过程 ,为临床脐     

人脐血单个核细胞移植治疗心肌梗死合并心力衰竭

背景：多项基础研究证实人脐血干细胞治疗急性心肌梗死合并心力衰竭安全有效,但目前尚未有该方法用于临床治疗的报道。目的：观察人脐血单个核细胞移植治疗心肌梗死合并心力衰竭患者的远期疗效。方法：入选2009年1月至2011年6月辽宁中医药大学心血管内科收治的心肌梗死合并心力衰竭患者共25例,其中12例患者冠脉造影后通过微导管将脐血单个核细胞悬液注入到冠状动脉远端,13例患者进行常规治疗。所有患者均规范应用药物治疗,急性期均行冠脉造影及经皮冠状动脉介入治疗。治疗前,治疗后12,24个月观察两组患者心功能改善情况,评价指标为左室射血分数、左室收缩末期容积及左室舒张末期容积。结果与结论：与治疗前比较,移植组治疗后12,24个月左室射血分数显著增高,左室收缩末期容积、左室舒张末期容积显著降低（P〈0.05）。与治疗前比较,对照组治疗后12,24个月左室射血分数、左室收缩末期容积、左室舒张末期容积差异均无显著性意义（P〉0.05）。与对照组相比较,移植组各个时间点左室舒张末容积、左室收缩末容积均显著降低,左室射血分数增高（P〈0.05）。各随访期间均未发现相关不良事件发生。结果表明利用人脐血单个核细胞移植治疗心肌梗死合并心力衰竭,可显著改善患者心功能及左室重构情况。     

Cryptococcal meningitis following umbilical cord blood transplantation,association between the occurrence of cryptococcal infection and tacrolimus discontinuation among allogeneic hematopoietic stem cell recipients

Few cases of cryptococcal infection following umbilical cord blood transplantation (UCBT) have been reported. We report a case, where cryptococcal infection occurred soon after rapidly reducing the dose of tacrolimus in a UCBT recipient who received micafungin prophylaxis during the early phase of transplantation. The etiology of cryptococcal infection following allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT), including UCBT, might be associated with rapid dose-reduction of calcineurin inhibitors, such as tacrolimus during early phase of allo-HSCT. To our knowledge, this is the first English-language report to describe in detail a case of cryptococcal meningitis with fungemia during early phase of UCBT.     

Potential effectiveness of stored cord blood (non-frozen) for emergency use

Bone marrow has been used for a number of years to assist patients who have accidentally received potentially lethal levels of irradiation. The intent of the transplant is to replace the victim's own bone marrow that has been injured from the irradiation or to act as temporary support to allow the patient's own marrow to recover. Following the Chernobyl disaster, some victims received bone marrow that was HLA matched or partially matched. However, donor marrows were difficult to obtain in adequate numbers; as a substitute for bone marrow, frozen fetal liver cells were used as a source of hematopoietic stem cells. The use of fetal livers, however, was unsuccessful. Human umbilical cord blood, currently considered an excellent source of hematopoietic stem cells, was not used at Chernobyl. For several years, we have been able experimentally to keep SJL/J mice alive with the use of human umbilical cord blood after the animals received lethal levels of irradiation. This finding suggests that under certain conditions human cord blood does not have to be HLA matched to facilitate rescue from irradiation. In addition, there are reports of unmatched HLA cord blood being used successfully for marrow transplantation. If human cord blood does not have to be matched for HLA, there may be emergency cataclysmic circumstances where the availability of umbilical cord blood may be of considerable value. To simulate a clinical situation such as a nuclear accident, in which human cord blood might serve as a source of stem cells for marrow transplantation, we attempted to rescue immunocompetent mice after 900 cGY of irradiation with the use of (nonfrozen) human cord blood stored in a blood bank. The blood was stored under routine conditions (3–6 °C) for 5 and 7 days in special bags that allow transmission of oxygen. Following lethal levels of irradiation, the cord blood was administered to the animals and a significant survival rate was obtained.     

脐带绕颈对胎儿脐静脉血流的影响

目的 探讨妊娠晚期脐带绕颈对胎儿脐静脉血流的影响。方法 随机选择孕龄36~40周,脐带绕颈但尚无产兆的孕妇65例,观察在无胎动、无胎儿呼吸运动时脐静脉血流速度并记录。结果 有脐带绕颈的胎儿,脐静脉血流速度明显低于对照组(P<0.05)。结论 无产兆的胎儿处于静息状态时,脐带绕颈对胎儿脐静脉血流速度有一定影响。其原因是脐带缠绕形成局部环状管道,血流的离心力增加了系统的阻力,导致动能减少,血流速度下降。     

人脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞移植用于大鼠脊髓损伤的实验研究

目的:探讨人脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞(MSCs)移植对脊髓损伤功能恢复的影响,寻找一种更适合治疗脊髓损伤的细胞源。方法:采集新鲜人脐带血和脐带,分离培养单个核细胞和MSCs。将脊髓损伤模型随机分成3组:单个核细胞移植组、MSCs移植组和低糖必需培养基(L-DMEM)培养组。采用免疫组化和免疫荧光检测细胞移植后1—4周细胞在脊髓内的存活情况和迁移情况,使用BBB行为学评分评估大鼠脊髓功能恢复情况。结果:L-DMEM培养液组在术后各时间点观察评分无明显差异,而细胞移植组脊髓功能处于逐渐恢复过程,与L-DMEM培养液比较,差异有显著性意义。单个核细胞移植组对损伤脊髓功能的修复作用较MSCs移植组显著,且差异有显著性意义。结论:与MSCs相比较,人脐血单个核细胞更适合作为治疗脊髓损伤的细胞源。     

治疗用脐血干细胞的制备及初步临床应用

目的制备满足临床干细胞治疗需要的脐带血干细胞制剂,观察脐血干细胞局部移植治疗肝硬化失代偿和股骨头坏死的初步临床疗效。方法建立标准化操作规程(SOP),进行脐带血的采集、分离和检测,制备脐带血干细胞制剂进行局部移植。选择进行局部移植干细胞制剂治疗的相关疾病患者共11例,其中肝硬化9例、股骨头缺血坏死2例;年龄30—65岁,平均51岁,男9例,女2例。结果制备的脐带血干细胞制剂有核细胞计数达(3.8±1.73)×109个,均达到治疗剂量,其中CD34+细胞比率为(1.93±0.54)%,CD105+细胞比率为(97.9±4.0)%。肝硬化失代偿期患者治疗后白蛋白水平逐步升高,1个月后与治疗前相比有明显升高(P<0.05)。肝硬化和股骨头缺血坏死患者经治疗后临床症状均有好转。结论脐带血干细胞移植可为临床多种疾病的有效治疗提供一种新手段。     

人脐血清代替胎牛血清体外培养脐血树突状细胞

目的　探讨人脐血清取代胎牛血清对脐血来源的树突状细胞体外诱导的影响。方法　无菌采集脐血 ,密度梯度离心法获取界面细胞 ,采用Mini MACS分离技术 ,分离CD34+ 造血干细胞 ,分成 3组 :脐血清组 (加入含 10 %UCS的RPMI 16 4 0培养液及细胞因子 ) ,胎牛血清组 (加入含 10 %FCS的RPMI 16 4 0培养液及细胞因子 ) ,对照组 (含10 %FCS但不含细胞因子 )。细胞因子为IL 4、GM CSF和TNF α ,第 8天收集部分细胞做细胞表型分析、形态学观察。结果　脐血清培养的DC(UCS DC)表面CD80、CD5 4和HLA DR的表达率与胎牛血清培养DC(FCS DC)比较无明显差异 ,UCS DC、FCS DC表达率与对照组比较均明显增高。结论　脐血清代替胎牛血清体外培养脐血来源的DC前体细胞 ,可以诱导出成熟DC ,为临床应用提供了一种新的选择。     

脐血间充质干细胞支持下脐血单个核细胞扩增的研究

目的 探讨脐血源间充质干细胞联合外源性细胞因子对脐血单个核细胞体外扩增的支持作用.方法 从脐血中分离、培养出间充质干细胞并检测其细胞表面抗原;以此间充质干细胞作为细胞滋养层.将脐血单个核细胞接种于无血清培养体系中培养18天,在第0、7、10、14及18天检测有核细胞总数、CD34+、CDl33+细胞数、集落形成单位数和(G2+M+S)期细胞含量变化.结果 ①从脐血中分离、培养出的间充质干细胞能稳定表达CD29、CD105和CD44,但不表达CD34和CD133;②外源性细胞因子及脐血源间充质下细胞均支持脐血间充质干细胞扩增,但以细胞因子联合脐血源间充质干细胞组效果最好,在第10天上述榆测指标达到峰值,分别为第0天的(6.91±1.91)、(7.75±1.24)、(6.49±1.33)、(15.62±1.29)和(28.26±6.58)倍,且维持造血至少18天.结论 ①从脐血巾能成功分离、培养出间充质下细胞,并完成细胞表型的初步鉴定;②外源性细胞因子联合脐血源间允质干细胞可有效扩增脐血单个核细胞.