人IL—4抗肿瘤的实验研究

在ＭＬＲ中，ＩＬ－４诱导的特异ＣＴＬ的杀伤活性强于ＩＬ－２，但ＩＬ－２对ＣＴＬ的促增殖作用强于ＩＬ－４。用人急性淋巴细胞白血病细胞株ＴＢＬ－Ｅ在裸鼠建立了人的实体瘤模型。用人ＩＬ－４十人ｒＩＬ－２联合诱导的人ＬＡＫ细胞注入荷瘤裸鼠，同时输注细胞因子。结果显示ＩＬ－２组疗效好于ＩＬ－４组，ＩＬ－２＋ＩＬ－４组疗效和ＩＬ－２相似，但可延长肿瘤形成的时间。     

银耳多糖对小鼠IL－2、IL－6、TNF－α活性及其mRNA表达的影响

目的：观察银耳多糖（ＴＰ）对小鼠脾细胞ＩＬ－２、ＩＬ－６和ＴＮＦ活性及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法：分别用ＣＴＬＬ、７ＴＤ１和ＷＥＨＩ－１６４细胞株测小鼠脾细胞ＩＬ－２、ＩＬ－６和ＴＮＦ-α活性，用Ｎｏｒｔｈｅｒｒｎｂｌｏｔ印迹杂交法测上述细胞因子的ｍＲＮＡ表达。结果：银耳多糖（ＴＰ）１００ｍｓ／Ｌ可促进ＣｏｎＡ诱导的脾细胞培养上清１Ｌ－２的活性，该作用１２ｈ即可出现，２４ｈ达到高峰。单用仅呈现类似但较弱的作用。ＴＰ１００ｍｇ／Ｌ从１２ｈ起明显增强ＬＰＳ活化的小鼠腹腔巨噬细胞产生ＩＬ－６的能力。ＴＰ２５、１００ｍｇ／Ｌ可明显增强小鼠腹腔巨噬细胞ＴＮＦ－α的活性。ＴＰ可促进小鼠脾细胞中细胞因子ＩＬ－２、ＩＬ－６ＴＮＦ－ａｍＲＮＡ的表达量，并且具有一定的剂量反应关系和时效关系，最适剂量为２００ｍｇ／ｋｇ，给药９ｄ，表达量最高。结论：ＴＰ通过促进ＩＬ－２、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａｍＲＮＡ表达，而促进上述细胞因子的生成。     

支气管动脉灌注LAK／rIL－2及化疗药物联合治疗原发性肺癌疗效及病理

本组５４例原发性肺癌均在支气管动脉灌注（ＢＡＩ）化疗１次后，经３～４周开始用ＬＡＫ／ＩＬ－２（ＢＡＩ）治疗。我们采用肿瘤缩小、疗后免疫指标、疗后病人的生活质量、肿瘤经ＬＡＫ／ＩＬ－２治疗后病理变化四项指标。ＬＡＫ细胞围绕在癌灶周围，与癌细胞密切接触，癌细胞有变性、坏死，证实经ＢＡＩ给予ＬＡＫ／ＩＬ－２治疗肺癌方法可行、疗效确实。经ＢＡＩ联合化疗治疗总有效率可达８７％，明显高于单纯ＢＡＩ化疗组的７０％（Ｐ＜０．０５），同时也讨论了影响ＬＡＫ／ＩＬ－２疗效的因素及ＬＡＫ／ＩＬ－２的副作用和防治。     

B7—1基因转当小鼠EL—4淋巴瘤细胞体外诱导免疫小鼠脾细胞产生的白细胞介素

目的 研究Ｂ７－１基因转染小鼠ＥＬ－４淋巴瘤体外诱导免疫小鼠脾细胞产生的白细胞介素－２。方法 以ＣＴＩＬ－２细胞检测ＥＬ－４Ｂ７－１＾＋免疫小鼠的脾细胞与癌细胞共育的ＭＬＴＣ培养上清中的ＩＬ－２活性。结果 ＥＬ－４Ｂ７－１＾＋免疫小鼠的ＳＰＬ经瘤细胞在体外刺激可诱生出明显的ＩＬ－２活性,而ＥＬ－４免疫小鼠的ＳＰＬ则无此作用,两者具有较明显的差异（Ｐ〈０．０１）。结论 Ｂ７－１基因转染小鼠ＥＬ－４淋巴瘤可在体外诱导免疫小鼠脾细胞产生较高水平的白细胞介素－２。     

自分泌IL-4对K562细胞诱导的CTL杀伤活性的影响

探讨ＩＬ－４基因修饰对Ｋ５６２细胞诱导的肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性的促进作用及可能机理。采用逆转录病毒体ＬＸＳＮ将ＩＬ－４ ｃＤＮＡ导入Ｋ５６２细胞,经Ｇ４１８筛选后获得表达ＩＬ－４蛋白的Ｋ５６２克隆。以野生型和载体修饰的相应细胞为对照,检测了ＩＬ－４基因修饰Ｋ５６２细胞诱导的Ｔ细胞增殖反应,用＾５１铬（＾５１Ｃｒ）释放法检测ＣＴＬ杀伤活性。结果发现ＩＬ－４基因修饰的Ｋ５６２细胞诱导的Ｔ细胞增殖反应     

LAK细胞联合复方白细胞介素2疗法及其抗肿瘤治疗

用低剂量ＩＬ－２，同时加入人ＲＢＣ诱导制备同种异体ＬＡＫ细胞，可见ＬＡＫ细胞的增殖明显和杀伤活性显著提高。用自制的复方白细胞介素２及ＬＡＫ细胞组成ＬＡＫ细胞联合复方白细胞介素２（ＬＡＫ／ＩＬ－２Ｃｏ．）过继免疫疗法和联合放疗、化疗的综合疗法，共治疗中、晚期恶性肿瘤１３８例，疗效结果判定，单纯免疫疗法治疗组，无ＣＲ，ＰＲ３０．３％，综合疗法治疗组ＣＲ＋ＰＲ为５８％，且副反应均较轻，本项应用研究结果是安全有效的，能作为抗肿瘤优选的治疗方案     

肿瘤化疗药物对人LAK细胞活性的影响

用四氮唑（ＭＴＴ）法分别检测顺氨氯铂（ＰＤＤ），丝裂霉素－Ｃ（ＭＭＣ）、阿霉素（ＡＭＤ）、氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ），长春新碱（ＶＣＲ）对ＩＬ－２诱导人外周血ＬＡＫ细胞活性的影响，及其与ＬＡＫ细胞对胃癌细胞的相加杀伤作用。①ＭＭＣ、ＡＤＭ、５－Ｆｕ、ＶＣＲ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性稍有下降，Ａｒａ－Ｃ能抑制ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性，ＰＤＤ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性明显提高。     

IL—2／LAK与放,化疗联合治疗晚期恶性肿瘤

目的：探讨ＩＬ－／ＬＡＫ细胞与放疗和／或化疗联合治疗晚期恶性肿瘤的价值。方法：本组共３０例,其中单纯ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗５例（包括２例ＴＩＬ细胞胸腹腔灌注）,ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞联合放疗１８例（包括１例动脉灌注）,ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞联合化疗４例）包括１例动态灌注）,ＩＫ－２／ＬＡＫ细胞联合放疗和化疗３例。结果：完全缓解率２０．０％（６／３０）,总有效率５０．０％（１５／３９）,其中单纯ＩＬ－     

肺癌常用化疗药物对IL－2诱导LAK细胞活性的影响

选用３Ｈ－ＴｄＲ释放法及掺入法分别检测ＬＡＫ细胞活性、ＬＡＫ细胞增殖功能及９种临床常用肺癌化疗药物对ＬＡＫ细胞抗肿瘤活性的影响。结果显示，不同化疗药物对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性的影响不同，同种化疗药物不同浓度间的影响也有差异。卡铂（Ｃａｒｂｏ）、足叶乙甙（ＶＰ１６）、５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）有增强作用；环磷酰胺（ＣＴＸ）、顺铂（ＣＤＤＰ）、长春新碱（ＶＣＲ）、甲氨喋呤（ＭＴＸ）对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性无明显影响；阿霉素（ＡＤＭ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）在较高浓度时，抑制ＬＡＫ细胞活性产生。除ＣＴＸ外的８种药物均显著抑制ＬＡＫ细胞增殖功能。实验表明：常规剂量的化疗不会抑制ＬＡＫ细胞活性的产生，５－Ｆｕ、Ｃａｒｂｏ、ＶＰ１６与ＩＬ－２结合抗癌可望产生协同疗效．ＩＬ－２先于化疗给药并维持至化疗后一定时间，其联合抗癌效果可能更佳。     

可溶性白细胞介素－2受体在体外对白细胞介素－2介导免疫反应的抑制

用酶联免疫吸附法￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法探讨了可溶性白细胞介素－２受体（Ｓｏｌｕｂｌｅｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ２ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｓＩＬ－２Ｒ）与ｒＩＬ－２的结合特性以及ｓＩＬ－２Ｒ对ＩＬ－２依赖性ＣＴＬＬ－２细胞、ＰＨＡ激活的正常人外周血淋巴细胞增殖反应的作用，结果显示ｓＩＬ－２Ｒ保持了与ｒＩＬ－２结合的特性。在体外ｓＩＬ－２Ｒ对ＰＨＡ诱导正常人ＰＢＬ增殖以及ＣＴＬＬ－２细胞、ＰＨＡ－ＰＢＬ对ＩＬ－２依赖性增殖均有明显的抑制作用，尤其高浓度的ｓＩＬ－２Ｒ抑制作用更为突出。     

TIL细胞对不同肿瘤细胞的细胞毒活性研究

Ｂ７分子是提供协同刺激信号的重要分子，包括Ｂ７－１，其相应配体为ＣＥ２８。ＣＴＬＡ－４。Ｂ７－１分子与ＣＤ２８结合后能诱导协同刺激信号的产生，癌性胸水来源的淋巴细胞体外用重组人ＩＬ－２激活后，对肿瘤细胞也具有较强的细胞毒性，也被认为是一类ＴＩＬ。     

白介素2肝动脉灌注治疗Ⅱ、Ⅲ期原发性肝癌疗效分析

采用白细胞介素－２（ＩＬ－２）加碘油阿霉素乳剂肝动脉灌注治疗Ⅱ、Ⅲ期原发性肝癌８２例，并以７５例同期单用碘油阿霉素乳剂化疗栓塞（ＨＡＣＥ－ＬＡ）患者作对照，结果显示：ＩＬ－２加ＨＡＣＥ－ＬＡ治疗组总有效率为１８．３７％，与对照组相比，疗效明显提高（Ｐ＜０．０１）；而ＩＬ－２联合ＩＮＦ和／或ＩＬ－６加ＨＡＣＥ－ＬＡ治疗组总有效率为２７．２７％，疗效进一步提高。ＩＬ－２治后患者生活质量（ＫＰＳ）平均提高１４．１７分，而对照组仅提高３分。经ＩＬ－２治疗患者Ｔ３、Ｔ４、Ｔ４／Ｔｓ比值明显升高，而对照组却变化不大。说明ＩＬ－２或加用其它生物反应调节剂与ＨＡＣＥ－ＬＡ联合应用治疗原发性肝癌可提高疗效，并有助于患者生活质量提高和免疫功能改善，值得进一步探索     

卡介克蟹对人胎胸腺和脾脏细胞LAK活性的调节作用

卡介克蟹是ＢＣＧ的提取物。应用ＭＴＴ法观察了卡介克蟹对人胎儿胸腺和脾脏细胞ＬＡＫ活性的影响，结果显示：人胎胸腺及脾脏细胞经ＩＬ－２诱导后均能产生明显的ＬＡＫ细胞杀伤活性；卡介克蟹能协同增强ＩＬ－２诱导的胸腺及脾脏细胞ＬＡＫ杀伤活性；且卡介克蟹与ＰＨＡ和ＩＬ－２三者联合诱导的ＬＡＫ细胞杀伤活性不仅高于ＰＨＡ和ＩＬ－２和及ＩＬ－２卡介克蟹联合诱导的ＬＡＫ活性，更明显高于仅用ＩＬ－２单独诱导的胸腺和脾细胞ＬＡＫ杀伤活性。提示卡介克蟹可能成为ＬＡＫ治疗中的生物反应调节剂（ＢＲＭ）。     

胎儿胸腺细胞对PWM和PHA反应性比较

比较了ＰＷＭ和ＰＨＡ对胎儿胸腺细胞及Ｔｈｙ－Ｌ（比重≤１．０７４）和Ｔｈｙ－Ｈ（比重＞１．０７４）两亚群的增殖效应。研究结果表明：ＰＷＭ在较大浓度范围内（０．２～２０μｇ／ｍｌ）对胎儿胸腺细胞尤其是Ｔｈｙ－Ｌ有强烈诱导增殖作用，ＰＨＡ的诱导增殖作用呈明显剂量依赖关系，ＩＬ－２对ＰＨＡ的协同作用远较对ＰＷＭ的协同作用强；多聚甲醛处理的Ｕ细胞对ＰＷＭ和ＰＨＡ诱导的增殖均有辅助作用；Ｔｈｙ－Ｌ为胸腺细胞中对刺激敏感的亚群，而Ｔｈｙ－Ｈ对刺激不敏感。     

支气管动脉灌注LAK／rIL—2及化疗药物联合治疗原发性肺癌…

本组５４例原发性肺癌均在支气管动脉灌注化疗次后，经３－４周开始用ＬＡＫ／ＩＬ－２治疗。我们采用肿瘤缩小、疗后免疫指标、疗后病人的生活质量、肿瘤经ＬＡＫ／ＩＬ－２治疗后病理变化四项指标。ＬＡＫ细胞围绕在癌灶周围，与癌细胞密切接触，癌细胞有变性、不死，证实经ＢＡＩ给予ＬＡＫ／ＩＬ－２治疗肺癌方法可行、疗效确实。经ＢＡＩ联合化疗治疗总有效率可达８７５，明显于单纯ＢＡＩ化疗组的７０％（Ｐ＜０．０５），同时     

两种状态抗CD_3单抗诱导人T淋巴细胞活化增殖的初步观察

目的：观察并比较粘附状态抗ＣＤ３单抗和游离状态抗ＣＤ３单抗诱导人外周血单个核细胞（ＨＰＢＭＣ）活化增殖的能力。方法：采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入淋巴细胞增殖试验、苔盼蓝拒染法、间接免疫荧光染色法以及ＣＴＬＬ细胞ＩＬ－２检测法，分别检测人外周血单个核细胞，经两种状态抗ＣＤ３单抗刺激后，其增殖活性、外源性ＩＬ－２的协同作用、内源性ＩＬ－２释放以及ＩＬ－２Ｒ表达等生物免疫学指标。结果：粘附状态抗ＣＤ３单抗刺激ＨＰＢＭＣ，其增殖活性、活细胞总数以及增殖活性维持的时间均高于游离状态抗ＣＤ３单抗，且前者不依赖外源性ＩＬ－２；粘附状态抗ＣＤ３单抗诱导ＨＰＢＭＣ释放内源性ＩＬ－２以及细胞表面ＩＬ－２Ｒ表达的能力也强于游离状态抗ＣＤ３单抗。结论：粘附状态抗ＣＤ３单抗比游离状态抗ＣＤ３单抗具有更强的诱导人Ｔ淋巴细胞活化增殖能力。     

人LAK细胞对胃癌细胞的杀伤作用

用人重组白细胞介素—２（ｒＩＬ－２）体外激活健康献血员外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ），使之形成淋巴因子激活杀伤（ＬＡＫ）细胞，借助中性红摄入法，研究了ＬＡＫ细胞对胃癌细胞的杀伤作用机制。结果表明：①ＬＡＫ细胞对胃癌细胞具有明显杀伤作用，诱导４天后其活性达峰值；②ＩＬ一２对已诱导的ＬＡＫ细胞杀伤胃癌细胞活性无协同作用；③ＬＡＫ细胞上清液有明显杀瘤活性物质，而ｒＩＬ一２对胃癌细胞无明显毒性作用。提示在ＬＡＫ细胞诱导过程中，淋巴细胞可能自身分泌一些细胞毒因子。     

瘤内注射脂质体包裹的IL－2基因激活免疫效应细胞及诱导细胞因子

目的：为了探讨脂质体介导的ＩＬ－２基因体内基因转移的可行性及对荷瘤小鼠全身免疫功能的激活作用及诱导细胞因子产生的效果。方法：将脂质体分别包裹ＩＬ－２基因、空白质粒及ＰＢＳ后，直接注射至黑瘤体内，１０ｄ后无菌取出小鼠脾细胞，诱导并检测肿瘤特异性杀伤细胞（ＣＴＬ）活性、ＬＡＫ活性及细胞因子的含量，用抗ＭＨＣＩａ单抗检测腹腔巨噬细胞的ＭＨＣＩ类分子的表达。结果：瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，小鼠脾ＣＴＬ细胞活性明显高于瘤体内注射脂质体包裹空白质粒及ＰＢＳ的对照组，其脾淋巴细胞ＬＡＫ活性、诱导ＩＦＮ－γ等细胞因子的含量及表达ＭＨＣＩａ分子的水平均有相应的提高。结论：瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，通过在原位转染肿瘤细胞，增强了肿瘤细胞的免疫原性，诱导机体产生肿瘤特异性的ＣＴＬ以及提高机体非特异性的抗肿瘤免疫反应，发挥抗肿瘤作用。本研究为肿瘤的基因治疗的研究和应用提供了较实用的方法。     

人白细胞介素2基因转移表达及抗乙型肝炎病毒和诱导LAK细胞活性的研究

为了探讨白细胞介素（ＩＬ）－２转基因表达抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的作用，应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＳｖ（Ｘ）－包装细胞系ＰＡ３１７基因转移系统，研究了人ＩＬ－２ｃＤＮＡ转移和表达，以及抗ＨＢＶ和诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）的作用。所构建的人ＩＬ－２重组表达载体ｐＺＩＰｈｕＩＬ－２，以ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀技术转染ＰＡ３１７细胞，筛选到Ｇ４１８抗性克隆，分泌假病毒颗粒达１０６ＣＦＵ／ｍｌ。以假病毒颗粒感染２．２．１５细胞系及正常人外周血单个核细胞，分泌ＩＬ－２水平可达６ＩＵ／ｍｌ，明显抑制２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ的分泌表达，与１００ＩＵ／ｍｌ重组的ＩＬ－２一样可诱导出相似的ＬＡＫ细胞活性。而不含ＩＬ－２ｃＤＮＡ的ｐＺＩＰＳＶ（Ｘ）的假病毒颗粒则无此作用。提示逆转录病毒载体。包装细胞系可以成功地实现人ＩＬ－２ｃＤＮＡ的转移和低水平的分泌和表达，并可明显抑制２．２．１５细胞分泌ＨＢｓＡｇ及诱导ＬＡＫ细胞活性。     

IL-12联合小剂量IL-2对人外周血单个核细胞增殖及杀瘤活性的影响

目的：探讨ＩＬ－１２与ＩＬ－２ 的最佳剂量配伍,以充分发挥两种细胞因子的抗肿瘤作用,从而减少使用剂量和降低毒副作用。方法：静止的或用小剂量ＩＬ－２ 激活的人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）,以含不同浓度ＩＬ－１２ 和（或）ＩＬ－２ 的培养液培养后,分别用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＬＤＨ释放法测定ＰＢＭＣ的增殖作用及杀瘤活性。结果：①５～５０ ＩＵ／ｍ ｌＩＬ－１２ 单独不能诱导ＰＢＭＣ增殖,但能与小剂量（１０ ＩＵ／ｍ ｌ）ＩＬ－２ 协同而促进ＰＢＭＣ的增殖,且能延长增殖作用时间。②经ＩＬ－１２ 作用后,ＰＢＭＣ对ＮＫ敏感的Ｋ５６２细胞及ＮＫ抵抗的Ｒａｊｉ细胞均产生明显的杀伤活性。激活的ＰＢＭＣ经ＩＬ－１２ 和ＩＬ－２ 各１０ ＩＵ／ｍ ｌ联合培养后,对Ｋ５６２ 细胞和Ｒａｊｉ细胞的杀伤率达最大值,分别为７２．０±４．２％ 和６５．４±５．８％ ,显示出明显的协同作用。结论：人ＰＢＭＣ在体外经１０ ＩＵ／ｍ ｌＩＬ－２激活后,再加入ＩＬ－１２ 和ＩＬ－２各１０ ＩＵ／ｍ ｌ共同刺激,能使ＰＢＭＣ发挥强而持久的增殖效应及最大杀瘤活性