高糖对原代培养人系膜细胞表达TGF-β1的影响

目的了解高糖对原代培养的人肾小球系膜细胞表达TGF-β1的影响,并进一步探讨糖尿病肾病的发病机制。方法取自愿水囊引产的胎儿肾并解剖取肾皮质剪碎,应用肾皮质组织块法合优生选择法培养人肾小球系膜细胞。以ELISA方法检测TGF-β1的表达。结果与正常组相比较,高糖组TGF-β1在24、48、72h均显著升高(P0.05或P0.01)。结论高糖能够升高系膜细胞TGF-β1分泌,这可能与肾小球系膜细胞细胞外基质积聚和糖尿病肾病发病密切相关。     

霉酚酸对高糖诱导的大鼠系膜细胞增生和高糖诱导的TGF-β、CTGF表达的影响

目的探讨霉酚酸（MPA）对高糖诱导的大鼠系膜细胞（MC）增生和转化生长因子β（TGF-β）、结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法以大鼠MC为受试对象，以不同浓度MPA分别干预24h、48h、72h，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增生情况。用Western blot法测定干预72h时细胞内TGF-β和CTGF蛋白表达水平。结果MPA能抑制高糖诱导的MC增生，且随浓度升高和时间延长，抑制作用逐渐增强。MPA能抑制高糖诱导的MC内TGF-β和CTGF表达。结论MPA可通过抑制MC增生活化及TGF-β和CTGF表达，从而延缓糖尿病肾病肾小球肥大及肾小球硬化的进展。     

已糖胺通路的活化介导系膜细胞转化生长因子β1表达

目的：探讨已糖胺通路（ＨＢＰ）在高糖引起系膜细胞功能改变中的作用。方法：利用体外培养的人肾小球系膜细胞,流式细胞术分析细胞体积、细胞周期和纤维连接蛋白（ＦＮ）的含量,以＾３Ｈ－胸腺嘧啶的掺入反映细胞的增生。采用夹心ＥＬＩＳＡ法和ＲＴ－ＰＣＲ检测转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）蛋白质和ｍＲＮＡ的表达。采用比色法测定ＨＢＰ限速酶－谷氨酰胺：６－磷酸果糖转氨酶（ＧＦＡＴ）的活性。结果：ＨＢＰ激活剂－葡萄     

高糖对系膜细胞基质金属蛋白酶的影响

系膜区基质积聚是糖尿病肾病的病理特征之一，它主要由于基质合成与降解通路的精细平衡失调。近年来研究发现高糖能通过对系膜细胞基质金属蛋白酶类(MMPs)基因转录、活化及抑制等三方面复杂的调控而降低其基质降解活性，调控过程可能由转化生长因子(TGF)-β、胰岛素样生长因子(IGF)-1和基质糖化等介导。系膜细胞MMPs活性下降致系膜区基质降解减少可能是引起系膜区基质积聚导致糖尿病肾病的重要原因之一。     

己糖胺通路的活化介导系膜细胞转化生长因子β1的表达

目的探讨己糖胺通路(HBP)在高糖引起系膜细胞功能改变中的作用.方法利用体外培养的人肾小球系膜细胞,流式细胞术分析细胞体积、细胞周期和纤维连接蛋白(FN)的含量,以3H-胸腺嘧啶的掺入反映细胞的增生.采用夹心ELISA法和RT-PGR检测转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白质和mRNA的表达.采用比色法测定HBP限速酶-谷氨酰胺6-磷酸果糖转氨酶(GFAT)的活性.结果HBP激活剂-葡萄糖胺能够诱导系膜细胞肥大、增生抑制和FN合成增多,并增加TGF-β1的表达.高糖能增加GFAT的活性,高糖促进TGF-β1表达的作用能够被GFAT的抑制剂-重氮丝氨酸拮抗.结论HBP的过度活化,可能通过上调TGF-β1的表达,从而介导了高糖对系膜细胞的损伤.     

高糖及血管紧张素Ⅱ对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

糖尿病肾病 (ＤＮ)是糖尿病常见而且严重的慢性并发症 ,高血糖和血管紧张素Ⅱ (ＡｎｇⅡ )是导致ＤＮ肾纤维化最主要的两种物质 ,它们通过共同的信号传导途径参与了肾纤维化的发生发展〔1,2〕。近年来 ,国外研究发现结缔组织生长因子 (ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ)对肾细胞增殖、表型改变及细胞外基质 (ＥＣＭ )具有较强调控作用 ,其异常表达在ＤＮ肾纤维化进程中起了重要作用。本研究拟用高糖和ＡｎｇⅡ刺激体外培养的系膜细胞 ,测定其ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达情况 ,以探讨高糖和ＡｎｇⅡ对系膜细胞…     

肾小球系膜细胞转化生长因子—β1基因启动子中氧化低密度脂蛋白应签元件的研究

目的：了解在氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL)刺激下，转化生长因子－β1（TGF－β1）基因启动子中顺式作用元件的应答情况。研究在大鼠肾系膜细胞中，Ox-LDL对TGF－β1基因启动子转录活性的影响作用。方法：用聚合酶链反应（PCR）、酶切和亚克隆的方法，构建出5个TGF－β1启动子缺失体一虫荧光素酶（luciferase)报告基因，利用其瞬时转染系膜细胞并检测luciferase相对活性。结果：在Ox-LDL(100mg/L)刺激下，luciferase的活性12h即出现，并于36h达到平台期。对Ox-LDL刺激的应答。TGF－β1启动子－1550到－845之间可能存在着增强子，－629到－422之间则可能有抑制子。计算机软件分析表明，前者内有一转录激活蛋白－1（AP－1）精确识别位点。结论：在大鼠肾系膜细胞TGF－β1基因启动子中，AP－1结合序列（TGAGTCA）可能是应答Ox-LDL的顺式作用元件。Ox-LDL上调TGF－β1的表达至少部分是通过AP－1蛋白来介导的，且Ox-LDL可能通过蛋白激酶C（PKC）信号通路激活AP－1从而正调控TGF－β1基因的转录过程。     

甲状旁腺激素促进系膜细胞合成分泌转化生长因子β和纤维连接蛋白的实验研究

目的研究甲状旁腺激素(PTH)对大鼠系膜细胞合成与分泌转化生长因子β(TGF-β)和纤维连接蛋白(FN)的影响及其可能机制c方法①分别以10-12、10-11、10-10、10-1、10-8mmol/L的hPTH1-34刺激大鼠系膜细胞6、12、24、48h后,ELISA方法测定上清中TGF-β和FN的浓度;②分别以10-12～10-8mol/L的hPTH1-34刺激大鼠系膜细胞48h后,半定量RT-PCR方法检测细胞TGF-β mRNA的表达;③以10-8mol/L的hPTH1-34分别刺激大鼠系膜细胞6～48h,采用半定量RT-PCR方法检测细胞TGF-βtuRNA的表达.④分别以10-12～10-8mol/L的hPTH1-34和10ng/L的抗TGf-β抗体共培养大鼠系膜细胞,以无抗TGf-β抗体为对照,48h后测定上清中FN的水平.⑤以10-8mol/L的hPTH1-34与10μg/L的抗TGF-β抗体共同刺激大鼠系膜细胞,分别于6～48h测定上清中FN的浓度,以无抗TGF-β抗体为对照.结果①ELISA结果显示,hPTH1-34促进大鼠系膜细胞合成与分泌TGF-β和FN,且具有浓度依赖和时间依赖性特点,当PTH浓度为10-8mol/L时,其促分泌作用达高峰(P＜0.01);②半定量RT-PCR方法结果显示,hPTH1-34促进大鼠系膜细胞TGF-β mRNA的表达,并具有浓度依赖和时间依赖性特点(各组与对照组间P＜0.05);③加入抗TGF-β抗体后,hPTH1-34促进FN合成分泌的作用明显减弱(与对照组相比P＜0.05).)结论hPTH1-34从蛋白和基因水平显著促进系膜细胞TGF-β的合成与分泌,且呈浓度依赖和时间依赖性特点;hPTH1-34呈浓度依赖和时间依赖性地促进系膜细胞合成与分泌FN;抗TGF-β抗体能部分抑制hPTH1-34对系膜细胞合成FN的促进作用.     

高糖增加Mv1Lu细胞对转化生长因子β的反应性

本文旨在了解高糖培养能否影响细胞对TGF8的反应性。结果显示高糖环境能抑制MvlLu细胞的增殖,同时明显增强了TGFβ的抗增殖效应。结合试验表明,高糖培养后的MvlLu细胞总结合的~(125)I-TGFβ明显增加,而非特异性结合没有改变。我们认为高糖能增加TGFβ与受体的特异性结合,从而增加TGFβ的生物学效应。     

肾小球系膜细胞转化生长因子-β1基因启动子中氧化低密度脂蛋白应答元件的研究

目的 :了解在氧化低密度脂蛋白 (Ox LDL)刺激下 ,转化生长因子 β1(TGF β1)基因启动子中顺式作用元件的应答情况。研究在大鼠肾系膜细胞中 ,Ox LDL对TGF β1基因启动子转录活性的影响作用。　 方法 :用聚合酶链反应 (PCR)、酶切和亚克隆的方法 ,构建出 5个TGF β1启动子缺失体—虫荧光素酶 (luciferase)报告基因 ,利用其瞬时转染系膜细胞并检测luciferase相对活性。　 结果 :在Ox LDL(10 0mg/L)刺激下 ,luciferase的活性 12h即出现 ,并于 36h达到平台期。对Ox LDL刺激的应答 ,TGF β1启动子 15 5 0到 845之间可能存在着增强子 , 6 2 9到 4 2 2之间则可能有抑制子。计算机软件分析表明 ,前者内有一转录激活蛋白 1(AP 1)精确识别位点。　 结论 :在大鼠肾系膜细胞TGF β1基因启动子中 ,AP 1结合序列 (TGAGTCA)可能是应答Ox LDL的顺式作用元件。Ox LDL上调TGF β1的表达至少部分是通过AP 1蛋白来介导的 ,且Ox LDL可能通过蛋白激酶C(PKC)信号通路激活AP 1从而正调控TGF β1基因的转录过程。     

大鼠肾小球系膜细胞产生的生长抑制性因子——转化生长因子β

本文观察了肾小球系膜细胞产生的自分泌生长抑制因子的情况。结果显示,肾系膜细胞培养上清中含有抑制自身生长的活性物质,后者有耐酸性;HPLC分析洗脱液中最主要的抑制性活性物质的分子量为16～30kD;抗-转化生长因子β(TGFβ)抗体能中和其大部分抑制活性物质;生物学方法检测表明,上清中含有活性TGFβ.此外,培养液中加入抗TGFβ抗体,能明显增强细胞的增殖.结果表明,大鼠肾系膜细胞能产生活性TGFβ,后者是一种自分泌的生长抑制性因子.     

人重组骨形成蛋白-7对高糖诱导的肾系膜细胞转化生长因子-β1及结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨人重组骨形成蛋白-7(rhBMP-7)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)基因表达及细胞外基质(ECM)成分Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维黏连蛋白(FN)分泌的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为四组:正常对照组(DMEM培养基含1 000 mg/L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖)、rhBMP-7低剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+50 nmol/L rhBMP-7)、rhBMP-7高剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+100 nmol/L rhBMP-7).RT-PCR技术检测TGF-β1和CTGF基因表达水平,ELISA技术检测上清液中TGFβ1、ColⅣ、FN含量.结果 高糖组系膜细胞TGF-β1和CTGF mRNA水平明显高于正常对照组(P<0.01),TGF-β1、ColⅣ和FN分泌增多,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与高糖组比较,rhBMP-7不同剂量(50、100 ng/ml)TGF-β1和CTGF mRNA表达明显降低,培养上清中TGF-β1、ColⅣ及FN分泌量亦明显减少,且差异显著(P<0.05).结论 RhBMP-7通过抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、CTGF基因表达和ECM的分泌可能起到抗纤维化作用.     

阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖

目的 探讨阿魏酸钠(SF)对高糖诱导的原代培养系膜细胞(GMC)增殖的作用及其机制.方法 原代培养肾小球系膜细胞,分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组,分别于处理后24、48 h收集细胞.用MTT法检测细胞增殖;流式细胞术测定cyclinD1和细胞周期;免疫细胞化学检测p53蛋白的表达.结果 48 h内,高糖促进GMC增殖,使GMC由G1期进入S期细胞比例增高;同时cyclinD1蛋白表达上调而p53蛋白的表达减少;SF能明显对抗高糖的这种作用,其作用随SF浓度的增加、作用时间的延长而加强.结论 SF可能通过抑制cyclinD1蛋白表达和促进p53蛋白生成,从而抑制高糖诱导的GMC增殖.     

高糖对系膜细胞金属蛋白酶表达的影响及肝素的干预作用

目的:研究高糖对正常人类系膜细胞(NHMc)增殖及金属蛋白酶2(MMP2)和金属蛋白酶9(MMP9)表达的影响及肝素对其的干预作用.方法:NHMC在含和(或)不含肝素的高糖培养基中培养,以正常糖培养基作对照.采用WST-1法测定NHMC增殖状况;用Western Blot技术分析MMP2、MMP9表达情况.结果:高糖组NHMC增殖明显高于对照组,二组间有显著性差异(P＜0.05).用肝素干预后,高糖组肝素浓度为50μg/ml时,NHMC增殖开始受到抑制,且随着肝素浓度递增,NHMC增殖抑制更明显(肝素50～400μg/ml浓度组与未加肝素组比较,均P＜0.05或P＜0.01).而对照组肝素浓度为200μg/ml时,NHMC增殖才出现抑制(肝素200～400μg/ml组与未加肝素组比较,均P＜0.05).另外,高糖与对照组NHMC均有一定量MMP2、MMP9表达,加入肝素后MMP2、MMP9出现高表达,特别是在高糖组尤为明显.结论:肝素能抑制高糖刺激下NHMC增殖并能使体外NHMC中的MMP2、MMP9出现高表达,推测MMPs可能参与了高糖状态下NHMC的细胞外基质的降解过程并且肝素有肾保护作用.     

糖化血清蛋白对刺激肾小球系膜细胞表达转移生长因子-β_1的作用

目的　探讨Ａｍ ａｄｏｒｉ糖化血清蛋白对肾小球系膜细胞表达转移生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）的影响。方法　用体外制备的Ａｍ ａｄｏｒｉ糖化的胎牛血清蛋白（Ａｍ ａｄｏｒｉ－ｍ ｏｄｉｆｉｅｄ ｇｌｙｃａｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ｐｒｏｔｅｉｎ）分别在生理浓度葡萄糖（５．５ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ）和高浓度葡萄糖（２５ｍｍ ｏｌ／Ｌ）培养液中作用于大鼠肾小球系膜细胞,观察ＴＧＦ－β１ ｍ ＲＮＡ表达有改变。结果　糖化血清蛋白在正常糖浓度下作用于系膜细胞４天后,ＴＧＦ－β１ 基因表达显著增高,为对照组的１．９９倍。结论　糖化血清蛋白对肾小球系膜细胞中的ＴＧＦ－β１基因表达有明显的刺激作用,可能是其参与糖尿病肾病发病的机制之一     

糖化血清蛋白对刺激肾小球系膜细胞表达生长因子—β1的作用

目的 探讨Ａｍａｄｏｒｉ糖化血清蛋白对肾小球系膜细胞表达转移生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）的影响。方法 用体外制备的Ａｍａｄｏｒｉ糖化的胎牛血清蛋白（Ａｍａｄｏｒｉ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｇｌｙｃａｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ｐｒｏｔｅｉｎ）分别在生理浓度葡萄糖（５．５ｍｍｏｌ／Ｌ）和高浓度葡萄糖（２５ｍｍｏｌ／Ｌ培养液中作用于大鼠肾小球系膜细胞，观察ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ表达有改变。结果 糖化血清蛋白对肾小     

高糖高溶血磷脂胆碱环境下血小板活化因子在内皮细胞与系膜细胞相互关系中的作用

目的 探讨高糖高溶血磷脂胆碱环境下内皮细胞与系膜细胞相互作用对细胞外基质(ECM)积聚的影响及血小板活化因子(PAF)在其中的作用.方法 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与人肾小球系膜细胞(HMC)共培养和HMC单独培养,将两种培养模型分别分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、PAF受体拮抗剂BN52021组,比较各组细胞上清液人纤维连接蛋白(Fn)、人Ⅳ型胶原(Col IV)、PAF含量及HMC中PAF受体(PAF-R)mRNA的表达水平.结果 (1)高糖高脂促进单培养和共培养细胞Fn、 Col IV和PAF含量的升高,且共培养组Fn、 Col IV和PAF水平均高于单培养组,BN52021可抑制高糖高脂刺激的Fn和Col IV升高(P均<0.05).(2)高糖高脂上调HMC中PAF-R mRNA的表达水平(P<0.05).结论 高糖高脂环境下,系膜细胞和内皮细胞存在异常的相互作用,促进Fn、Col IV、PAF的产生,高糖高脂刺激的ECM分泌增加可能与PAF有关.     

转化生长因子β1反义寡核苷酸抑制单侧肾切除糖尿病大鼠系膜增生

目的 探讨转化生长因子（TGF）β1反义寡核苷酸对单侧肾切除糖尿病大鼠系膜增生的作用。方法 采用人工合成TGF－β1反义、正义及错配的3组寡核苷酸经脂质体包裹柏转染单侧肾切除糖尿病大鼠肾小球系膜细胞（MC）。用细胞计数检测转染后MC的生长抑制率，用RT－PCR和ELISA方法检测TGF－β1 mRNA和蛋白的表达水平，并检测IV型胶原mRNA表达水平的变化。结果 TGF－β1反义寡核苷酸可抑制MC的存活，TGF－β1 mRNA及蛋白的表达水平下降，IV型胶原mRNA的水平也下降。结论 TGF－β1反义寡核苷酸不仅抑制TGF－β1 mRNA及蛋白的表达，而且还可抑制细胞外基质IV型胶原mRNA的表达，抑制MC的肥大，从而抑制单侧肾切除糖尿病大鼠系膜的增生。     

螺内酯对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、FN分泌的影响

目的探讨螺内酯对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖的抑制作用及转化生长因子β1（TGF-β1）、纤维黏连蛋白（FN）分泌的影响。方法将大鼠GMCs置于低糖、高糖及高糖＋不同浓度螺内酯中传代培养,并以此分组。采用噻唑蓝法检测各组大鼠GMCs增殖情况,采用ELISA法检测各组TGF-β1、FN分泌情况。结果高糖培养组大鼠GMCs增殖明显高于低糖培养组（P〈0.05）。加入螺内酯后,GMCs增殖受到抑制,与低糖、高糖组比较P〈0.05或〈0.01,且随着螺内酯剂量增加细胞增殖抑制递增。螺内酯可明显减少TGF-β1、FN的分泌（P〈0.05或〈0.01）,并随浓度增高、时间延长抑制作用增强。结论高糖能刺激大鼠GMCs增殖;螺内酯能抑制大鼠GMCs增殖,并可抑制TGF-β1、FN分泌。     

高糖对胰岛β细胞功能影响研究进展

诸多研究表明长期而持续的高血糖是导致β细胞功能缺陷的重要因素,包括早期减少葡萄糖刺激的胰岛素分泌和最终不可避免地减少胰岛素基因转录和β细胞数量,本文就近几年来有关高血糖对胰岛β细胞功能影响的研究进展作简要归纳,深入认识糖尿病的发病机制和致病过程,将更好地防治2型糖尿病具有重要意义。