TGF-β1和ECM与糖尿病肾病关系的实验研究

目的 观察高糖条件下大鼠肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）分泌细胞外基质（ＥＣＭ）成分中纤粘连蛋白（ＦＮ）、层粘连蛋白（ＬＡＭ）、Ⅱ及Ⅳ型胶原和转化生长因子β（ＴＧＦ－β１）的变化,探讨细胞因子和细胞外基质在糖尿病肾病发病中的作用。方法 采用体外大鼠肾小球系膜细胞培养,用ＥＬＩＳＡ方法测定培养上清液中的ＥＣＭ和ＴＧＦ－β１。结果（１）高糖条件下,ＧＭＣ合成和分泌ＴＧＦ－β１增加。（２）高糖对体外培养的系膜细     

大黄酸对体外培养小鼠肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白1表达及葡萄糖摄入的影响

目的　研究大黄酸对系膜细胞葡萄糖转运蛋白１（ Ｇ Ｌ Ｕ Ｔ１） 及葡萄糖摄入的影响,探讨大黄酸拮抗 Ｔ Ｇ Ｆβ１ 作用的可能机制。方法　选用体外培养的小鼠肾小球系膜细胞, Ｇ Ｌ Ｕ Ｔ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ表达的检测 采用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹, 葡萄糖摄入的测定采用２ｄｅｏｘｙ〔３ Ｈ〕 Ｄｇｌｕｃｏｓｅ 摄入法。结果 Ｔ Ｇ Ｆβ１ 显著增加系膜细胞 Ｇ Ｌ Ｕ Ｔ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达和葡萄糖摄入,大黄酸对正常培养条件下系膜细胞的葡萄糖摄入没有明显影响,但可以拮抗 Ｔ Ｇ Ｆβ１ 增加系膜细胞 Ｇ Ｌ Ｕ Ｔ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达与葡萄糖摄入的作用。结论　 Ｔ Ｇ Ｆβ１ 介导系膜细胞葡萄糖代谢的改变以及细胞外基质合成的增加,大黄酸能明显抑制 Ｔ Ｇ Ｆβ１ 所引起的系膜细胞 Ｇ Ｌ Ｕ Ｔ１ 表达与葡萄糖摄入的异常增高。     

大黄素对培养人系膜细胞纤维连接蛋白产生的抑制作用

本文以纤维连接蛋白（ＦＮ）为指标，观察了大黄组份之一大黄素素，对培养人系膜细胞细胞外基质产生的影响、结果用ＥＬＩＳＡ检测、免疫荧光染色以及系膜细胞小丘形成的大小、多寡等多种指标证明了大黄素能够浓度依赖性地抑制系膜细胞分泌的和细胞膜相关的ＦＮ水平，并能拮抗ＴＧＦβ对系膜细胞ＦＮ产生的刺激作用。大黄素的这一药理作用可能与大黄治疗多种慢性肾脏疾病的机理有关。     

抗纤复方对大鼠肝贮脂细胞产生转化生长因子β1的影响

观察抗纤复方对大鼠传代培养肝贮脂细胞自分泌产生ＴＧＦβ１的影响。方法采用血清药理学方法处理贮脂细胞,以貂肺上皮细胞（Ｍｖｌｌｕ）生长抑制ＭＴＴ法检测培养上清中ＴＧＦβ１活性,并以小牛血清、正常鼠血清和秋水仙碱药物血清为对照。结果抗纤复方药物血清和秋水仙碱药物血清均能明显抑制贮脂细胞产生ＴＧＦβ１,而且抗纤复方在低药物血清浓度（５％、１０％）时作用更明显。经抗ＴＧＦβ１抗体中和实验验证了检测ＴＧＦβ１的特异性。结论抗纤复方能抑制贮脂细胞产生ＴＧＦβ１,阻断肝纤维化时的贮脂细胞自分泌放大过程,减少胶原等ＥＣＭ的合成。     

糖化血清蛋白对刺激肾小球系膜细胞表达转移生长因子-β_1的作用

目的　探讨Ａｍ ａｄｏｒｉ糖化血清蛋白对肾小球系膜细胞表达转移生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）的影响。方法　用体外制备的Ａｍ ａｄｏｒｉ糖化的胎牛血清蛋白（Ａｍ ａｄｏｒｉ－ｍ ｏｄｉｆｉｅｄ ｇｌｙｃａｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ｐｒｏｔｅｉｎ）分别在生理浓度葡萄糖（５．５ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ）和高浓度葡萄糖（２５ｍｍ ｏｌ／Ｌ）培养液中作用于大鼠肾小球系膜细胞,观察ＴＧＦ－β１ ｍ ＲＮＡ表达有改变。结果　糖化血清蛋白在正常糖浓度下作用于系膜细胞４天后,ＴＧＦ－β１ 基因表达显著增高,为对照组的１．９９倍。结论　糖化血清蛋白对肾小球系膜细胞中的ＴＧＦ－β１基因表达有明显的刺激作用,可能是其参与糖尿病肾病发病的机制之一     

TGF－β单抗对NIH／3T3细胞增殖及前胶原Ⅲ表达的影响

ＴＧＦ－β在肝纤维化的形成中起着重要作用。以ＭＴＴ法及原位杂交检测法研究ＴＧＦ－β单抗对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞增殖及Ⅲ型前胶原表达的影响。结果表明，ＴＧＦ－β单抗抑制３Ｔ３细胞增殖，并显著抑制细胞Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达，提示离体培养的成纤维细胞可能存在ＴＧＦ－β自分泌，ＴＧＦ－β单抗能显著阻断其效应，阻止细胞增殖及胶原表达。     

TGF—β单抗对NIH／3T3细胞增殖及前胶原Ⅲ表达的影响

ＴＧＦ－β在肝纤维化的形成中起着重要作用。以ＭＴＴ法及原位杂交检测法研究ＴＧＦ－β单抗对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞增殖及Ⅲ型前胶原表达的影响。结果表明，ＴＧＦ－β单抗抑制３Ｔ３细胞增殖，并显著抑制细胞Ⅲ型前腺原ｍＲＮＡ的表达，提示离体培养的成纤维细胞可能存在ＴＧＦ－β自分泌，ＴＧＦ－β单抗能显著阻断其效应，阻止细胞增殖及胶原表达。     

西格列汀对高糖下系膜细胞细胞外基质表达的影响

目的探讨高糖对肾小球系膜细胞细胞外基质表达的影响,以及西格列汀(SIT)对其的干预作用。方法培养肾小球系膜细胞,分为对照(Con)组、高糖(HG)组,以及高糖联合不同浓度的SIT组(HG+S1组、HG+S5组、HG+S10组和HG+S20组)。培养24 h、48 h后,用MTT法测定细胞增殖程度,ELISA检测细胞培养上清层粘连蛋白(LN)、大鼠Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达的变化。结果高糖培养24 h、48 h后,可观察到不同浓度的SIT均可抑制高糖诱导的系膜细胞增殖;SIT组与HG组比较,差异有统计学意义;Con组肾小球系膜细胞可分泌一定量的LN、Col-Ⅳ和TGF-β1,高糖刺激后LN、Col-Ⅳ和TGF-β1分泌增加,而SIT对系膜细胞分泌物的抑制随其浓度的升高而增强。结论SIT可抑制高糖条件下系膜细胞的增殖,且能降低高糖条件下LN、Col-Ⅳ、TGF-β1的表达,SIT可能对糖尿病患者的肾脏有一定的保护作用。     

大黄酸对体外培养小鼠肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白1表？…

目的 研究大黄酸对系膜细胞葡萄糖转运蛋白１（ＧＬＵＴ１）及葡萄糖摄入的影响,探讨大黄酸拮抗ＴＧＦβ１作用的可能机制。方法 选用体外培养的小鼠肾小球系膜细胞,ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ表达的检测采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹,葡萄糖摄入的测定采用２－ｄｅｏｘｙ－〔＾３Ｈ〕－Ｄ－ｇｌｕｃｏｅｓ摄入法。结果 ＴＧＦβ１显著增加系膜细胞ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ的表达和葡萄糖摄入,大黄酸对正常培养条件下系膜细胞的葡萄糖摄入没有     

血管紧张素Ⅱ诱导肾小球系膜细胞纤维连接蛋白产生的实验研究

目的：观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激后系膜细胞ＡｎｇⅡ受体基因表达和分泌纤维连接蛋白（ＦＮ）的情况。方法：从６月龄人胎肾培养系膜细胞，经ＡｎｇⅡ刺激后用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测胎肾系膜细胞ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ的表达情况，分别用ＥＬＩＳＡ和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测系膜细胞产生的ＦＮ和基因表达。结果：①经１０－８、１０－７、１０－６和１０－５ｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ刺激４８ｈ后，系膜细胞的ＡＴ１受体ｍＲＮＡ表达均有升高，并呈一定的浓度依赖性；而ＡＴ２受体ｍＲＮＡ仅在１０－５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ刺激下才有微弱表达。②１０－７、１０－６和１０－５ｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ能明显促进系膜细胞产生ＦＮ和ＦＮ的ｍＲＮＡ表达的上调，并与ＡｎｇⅡ刺激浓度呈正相关。结论：ＡｎｇⅡ刺激后可使系膜细胞的ＡＴ１受体基因表达和ＦＮ的产生明显增加，并呈一定的浓度依赖性，而ＡｎｇⅡ高浓度可以使ＡＴ２受体表达上调     

肝细胞癌与细胞凋亡失调

在肝细胞癌的发生过程中，正常肝组织中原有的细胞生长与细胞凋亡之间的平衡机制被打破。目前已知肝细胞的凋亡有多种途径，其中ＴＧＦβ１所介导的细胞凋亡和肝癌的关系近来尤受瞩目。无论是在正常肝组织，还是在肝癌组织中，ＴＧＦβ１都是介导细胞凋亡的重要因素：对于原代培养的成年鼠和胎鼠的肝细胞，ＴＧＦβ１均可诱导凋亡；无论是对于正常肝还是退行性肝组织，动物体内静脉给予ＴＧＦβ１，均可引起凋亡；在体内处于凋亡或凋亡前期的肝细胞中均可发现ＴＧＦβ１蛋白和ｍＲＮＡ的表达升高。ＴＧＦβ１不仅可介导细胞凋亡，还可介导细…     

罗格列酮对高糖诱导下大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

以大鼠肾小球系膜细胞株(HBZY-1)为靶细胞,观察不同浓度不同时间罗格列酮(RSG)对高糖培养的系膜细胞的作用,发现RSG在一定范围内以剂量和时间依赖关系抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖,阻止系膜细胞由G1期进入S期,并诱导细胞凋亡。RSG有效减轻了高糖诱导的肾小球系膜细胞的病理损伤。     

糖化血清蛋白对刺激肾小球系膜细胞表达生长因子—β1的作用

目的 探讨Ａｍａｄｏｒｉ糖化血清蛋白对肾小球系膜细胞表达转移生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）的影响。方法 用体外制备的Ａｍａｄｏｒｉ糖化的胎牛血清蛋白（Ａｍａｄｏｒｉ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｇｌｙｃａｔｅｄ ｓｅｒｕｍ ｐｒｏｔｅｉｎ）分别在生理浓度葡萄糖（５．５ｍｍｏｌ／Ｌ）和高浓度葡萄糖（２５ｍｍｏｌ／Ｌ培养液中作用于大鼠肾小球系膜细胞，观察ＴＧＦ－β１ ｍＲＮＡ表达有改变。结果 糖化血清蛋白对肾小     

肝素干预血管成形术后平滑肌细胞生长因子基因表达的研究

目的探讨肝素影响血管成形术后动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增生的机理。方法建立兔动脉粥样硬化模型，行血管成形术；观察肝素对体外兔髂动脉ＳＭＣ的增生、细胞周期、转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达等的影响。结果肝素能抑制ＳＭＣ的增生，并具有浓度依赖性和时间依赖性；肝素阻止ＳＭＣ进入Ｓ期，也有浓度依赖性和时间依赖性；肝素能抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦ信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）的表达；在培养的兔髂动脉ＳＭＣ中ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达呈阴性。结论肝素抑制培养的兔髂动脉ＳＭＣ的增生与抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ的表达有密切关系。     

已糖胺通路的活化介导系膜细胞转化生长因子β1表达

目的：探讨已糖胺通路（ＨＢＰ）在高糖引起系膜细胞功能改变中的作用。方法：利用体外培养的人肾小球系膜细胞,流式细胞术分析细胞体积、细胞周期和纤维连接蛋白（ＦＮ）的含量,以＾３Ｈ－胸腺嘧啶的掺入反映细胞的增生。采用夹心ＥＬＩＳＡ法和ＲＴ－ＰＣＲ检测转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）蛋白质和ｍＲＮＡ的表达。采用比色法测定ＨＢＰ限速酶－谷氨酰胺：６－磷酸果糖转氨酶（ＧＦＡＴ）的活性。结果：ＨＢＰ激活剂－葡萄     

反义核苷酸干预血管成形术后平滑肌细胞生长因子基因表达的研究

为了研究反义核苷酸对平滑肌细胞（ＳＭＣ）及生长因子基因表达的影响。本实验对兔髂动脉粥样硬化模型行血管成形术；应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法观察反义核苷酸对体外兔髂动脉ＳＭＣ增殖及转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达的影响。结果表明：反义核苷酸抑制ＳＭＣ增生，并呈浓度依赖性；反义核苷酸抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达；阳离子脂质体能明显增强反义核苷酸的上述作用。在培养的兔髂动脉ＳＭＣ中ＥＧＦＲｍＲＮＡ表达阴性。结论：反义核苷酸抑制兔髂动脉ＳＭＣ增生与抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达有密切关系。     

多种内分泌激素对人胎胰β细胞发育的影响

本实验结果显示，妊娠１８－２０周之人胎胰β细胞在多种内分泌激素的环境中培养了３周尚未能达到功能成熟；ＥＧＦ，ＰＲＬ及ｎＰＬ能增加组织的胰岛含量并促进其急、慢性胰岛素释放；ＧＨ、Ｔ３及Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ等升糖激素以及含有此升糖激素的多种内分泌激素，在培养早期尚能增加其急、慢性胰岛素分泌，但在培养后期则显示其抑制胰岛素分泌的作用、其组织胰岛素含量及胰岛素分泌率均明显减少。     

糖尿病大鼠肾小球产生转化生长因子β的研究

多肽生长因子合成和活性的异常是导致糖尿病肾病系膜区扩张的机理之一.本文检测了糖尿病大鼠肾小球TOFB的水平,并探讨了体外高糖环境对系膜细胞产生TGFβ的影响.制备STZ诱发的糖尿病模型,4周后用生物学方法检测肾小球培养上清中的TGFβ水平,结果发现糖尿病大鼠肾小球分泌的总TGFβ及活性TGFβ均比对照显著增加,其中活性TGFβ水平的增加更为明显;体外高糖培养后的系膜细胞产生的总TGFβ明显下降,而活性TGFβ却有上升.结果表明高糖环境下肾小球和系膜细胞确实存在着TGFβ分泌和激活的异常,TGFβ可能参与了糖尿病肾病系膜区扩张的形成。     

螺内酯对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、FN分泌的影响

目的探讨螺内酯对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖的抑制作用及转化生长因子β1（TGF-β1）、纤维黏连蛋白（FN）分泌的影响。方法将大鼠GMCs置于低糖、高糖及高糖＋不同浓度螺内酯中传代培养,并以此分组。采用噻唑蓝法检测各组大鼠GMCs增殖情况,采用ELISA法检测各组TGF-β1、FN分泌情况。结果高糖培养组大鼠GMCs增殖明显高于低糖培养组（P〈0.05）。加入螺内酯后,GMCs增殖受到抑制,与低糖、高糖组比较P〈0.05或〈0.01,且随着螺内酯剂量增加细胞增殖抑制递增。螺内酯可明显减少TGF-β1、FN的分泌（P〈0.05或〈0.01）,并随浓度增高、时间延长抑制作用增强。结论高糖能刺激大鼠GMCs增殖;螺内酯能抑制大鼠GMCs增殖,并可抑制TGF-β1、FN分泌。     

类风湿关节炎中转化生长因子β1和细胞间粘附分子的变化

目的：了解类风湿关节炎（ＲＡ）血清、滑液和滑膜组织中转化生长因β１（ＴＧＦβ１）、细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ１）及细胞间粘附分子３（ＩＣＡＭ３）的变化。方法：采用ＥＬＩＳＡ及ＡＢＣ免疫组化方法检测ＲＡ患者血清、滑液和滑膜中ＴＧＦβ１、ＩＣＡＭ１和ＩＣＡＭ３的浓度和阳性程度。结果：ＲＡ血清中ＴＧＦβ１含量较低，而ＩＣＡＭ１含量明显升高，ＩＣＡＭ３含量正常，滑液中ＩＣＡＭ３含量低于血清含量。ＲＡ血清中ＴＧＦβ１含量与ＩＣＡＭ１含量呈中度负相关，与ＩＣＡＭ３含量无显著相关。在ＲＡ滑膜中巨噬细胞、滑膜衬里细胞和成纤维细胞ＴＧＦβ１染色阳性，巨噬细胞、滑膜衬里细胞、成纤维细胞和血管内皮细胞ＩＣＡＭ１染色阳性。结论：ＴＧＦβ１和ＩＣＡＭ１参与了ＲＡ的发生和发展过程，在ＲＡ慢性炎症中，ＩＣＡＭ１对炎细胞转移并聚集于滑膜可能有重要作用，ＲＡ外周血ＴＧＦβ１浓度减低伴随ＩＣＡＭ１浓度的增加。