喉肿瘤相关成纤维细胞促进原代喉鳞状细胞癌细胞体外生长

 目的  验证喉肿瘤相关成纤维细胞 (cancer associated fibroblasts,CAFs)对原代培养的喉鳞状细胞癌 (laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)细胞的体外生长是否有促进作用。方法  选取20例喉癌临床标本进行原代培养,将生长出的原代喉癌细胞中的CAFs通过差速消化法去除后继续单独培养,相差显微镜观察喉癌细胞在传代培养过程中的形态学变化,流式细胞仪检测喉癌细胞在传代过程中凋亡细胞比例的变化,Western blot检测喉癌细胞在传代过程中凋亡蛋白Caspase 3表达水平的变化,以始终与CAFs共培养传代的喉癌细胞作为对照。结果  与CAFs分离后喉癌原代细胞在体外传代培养过程中生长活性很快下降,多数在3代以内停止生长。相差显微镜观察到形态学上凋亡漂浮的喉癌细胞逐代增多,流式细胞仪检测到的凋亡细胞比例逐代增加,Western blot检测到的Caspase 3表达水平逐代增加;而始终与CAFs共培养生长的LSCC细胞在传代过程中生长活性却无明显下降 (P<0.05)。结论  喉肿瘤相关成纤维细胞对体外原代培养的LSCC细胞的生长具有明显的促进作用。     

二烯丙基二硫下调p38活性抑制乳腺癌MCF-7细胞侵袭和转移

目的探讨大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)对乳腺癌MCF-7 细胞侵袭转移的作用及其机制。方法采用不同浓度（0, 100,200,400 μmol/L）DADS处理MCF-7人乳腺癌细胞24 h,Transwell侵袭实验检测DADS对细胞侵袭的作用,划痕愈合实验 观察DADS对细胞迁移的改变,Western blotting 检测细胞中上皮标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、间质标志蛋白波形蛋白 （Vimentin）和基质金属蛋白MMP-9的表达和p38活性;TGF-β1上调p-p38表达后上述作用的变化。结果Transwell和划痕愈 合实验发现DADS呈浓度依赖性抑制MCF-7 细胞的侵袭和迁移能力,Western blotting 结果表明DADS可抑制Vimentin 和 MMP-9 的蛋白表达,上调E-cadherin 的表达而下调p38 活性;TGF-β1 可上调p-p38 和MMP-9 表达,明显抵消DADS对MCF-7 细胞的抑制效果。结论DADS可下调p38活性,抑制MCF-7细胞的侵袭转移。     

肝细胞生长因子和MAPK途径在大肠癌细胞体外侵袭中的作用

目的:探讨肝细胞生长因子/离散因子(HGF/SF)在大肠癌细胞体外侵袭中的作用。方法:用细胞迁移系统分析HGF、PD98059和SB203580处理的大肠癌细胞Caco-2和Colo320体外迁移能力;用逆转录聚合酶链反应检测Caco-2细胞中MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-1、TIMP-2的mRNA表达。结果:HGF对Colo320细胞迁移无影响。细胞培养48 h后,Caco-2细胞迁移数HGF组和PD98059组与对照组比较、HGF组和PD98059组比较,差异显著[对照组(104.40±4.77/)ml,HGF/SF组(126.80±5.40/)ml,PD98059组(82.80±4.15/)ml,P<0.01]。HGF组MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2都有表达,MMP-2高表达;PD98059组TIMP-1和TIMP-2高表达。结论:HGF促使Caco-2细胞迁移。HGF/SF上调Caco-2细胞中MMP-2和MMP-9的表达,使肿瘤细胞破坏周围基底膜能力增强而容易形成转移。HGF对某些大肠癌细胞发挥促进侵袭、促进转移的作用,MAPK途径在HGF/SF诱导的大肠癌细胞Caco-2中发挥生物学效应。     

Nanog表达上调促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖和侵袭

目的：观察Nanog高表达对乳腺癌细胞MCF-7生物学特性的影响。方法：构建重组质粒pcDNA3.1（-）-Nanog,利用免疫荧光观察Nanog高表达后,乳腺癌细胞MCF-7中Nanog的定位。利用平皿克隆分离法获得Nanog高表达的乳腺癌细胞系MCF-7。应用克隆形成实验、Transwell迁移和侵袭实验观察Nanog高表达对乳腺癌细胞MCF-7生物学特性的影响。结果：Nanog在MCF-7细胞中定位于核,Nanog高表达后,乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力显著增强。结论：Nanog能够促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力。     

肝细胞生长因子对肺癌95D细胞系增殖和侵袭的影响

目的探讨人类重组肝细胞生长因子（rhHGF）对人肺癌95D细胞系侵袭、增殖的影响及其机制。方法应用细胞培养技术培养95D细胞,分别用10,30,50μg/L不同浓度rhHGF作用95D细胞48h,以MTT法检测rhHGF对95D细胞增殖的影响;以过河实验、Transwell方法及RT-PCR方法检测rhHGF对95D细胞的运动侵袭能力和对MMP-9基因表达的影响。结果rhHGF可明显增加95D细胞的增殖和生长,且随浓度提高作用增强,呈剂量效应关系。过河实验、Transwell方法显示rhHGF能增强95D细胞的体外侵袭和运动能力,随浓度提高,过河时间缩短,细胞侵袭力增加（P〈0.05）;RT-PCR测定显示rhHGF作用48h后,95D细胞中MMP-9基因表达上升。结论rhHGF可促进人肺癌95D细胞的生长和增加其体外侵袭能力,其机制与直接增加95D细胞迁移运动,及MMP-9表达增加有关。     

腺病毒介导的双自杀基因系统对乳腺癌细胞的杀伤作用

目的 探讨腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶(CD)和胸苷激酶(TK)融合双自杀基因系统对乳腺癌治疗作用.方法 用重组VEGFP-CD/TK-GFP基因的腺病毒体外感染表达VEGF的乳腺癌MCF-7细胞和对照组不表达VEGF的乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察其感染效率,以RT-PCR检测受感染细胞CD/TK的表达,然后给子前药环氧鸟苷(GCV)和/或5-氟胞嘧啶(5-FC),用MTT法观察该体系对细胞生长增殖的影响;用流式细胞术观察细胞周期变化.建立MCF-7裸鼠皮下移植瘤模型,采用瘤内注射腺病毒载体联合腹腔内注射前药GCV和/或5-FC治疗后,观察肿瘤生长情况.结果 腺病毒对两种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增.RT-PCR检测发现转染Ad-VEGFP-CD/TK的MCF-7细胞有目的 基凶的表达,而乳腺上皮细胞无表达.MTT法检测显示表达VEGF的MCF-7细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达VEGF的乳腺上皮细胞对前药不敏感,CD/TK融合基因对MCF-7的疗效优丁任一单自杀基因(P＜0.01).在感染复数为100时,用流式细胞仪分析细胞周期显示治疗组细胞G0-G1期比率增多,S期细胞减少.在MCF-7裸鼠移植瘤模型中.该双自杀基因系统能够显著抑制肿瘤的牛长.其疗效优于任一单自杀基因(P<0.01).结论 腺病毒介导VEGF启动子驱动的CD/TK融合双自杀基因联合GCV和5-FC能有效治疗乳腺癌,其效果优于单自杀基因系统.     

ErbB2在MCF-7细胞中的过度表达意义

目的 研究ErbB2的过度表达是否能促进MCF-7细胞株的生长和侵袭。方法通过逆转病毒，将ErbB2转入MCF-7细胞内，并证实ErbB2被表达并具有生物活性。检验实验组和对照组(AP2)的侵袭力和浸润力。结果ErbB2、MCF细胞中被过度表达并产生效果。在体外，相对于对照组，ErbB2组表现了更强的浸润率和侵袭力。但可以被ErbB2的抵制剂赫塞汀所抵制。结论ErbB2过度表达可以促进细胞的浸润和侵袭。抵制实验则提供了一种新的癌症治疗手术方法。     

新型雌激素受体GPR30激活HER2-ERK1/2促进乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭

目的 探讨G蛋白耦联受体30 (GPR30)受体在低表达表皮生长因子受体2(HER2)的乳腺癌MCF-7细胞中激活HER2的分子机制和生物学意义.方法 用Western blot的方法检测17-p-雌二醇(E2)、三苯氧胺(TAM)的活性代谢产物(4-OHT)或GPR30激动剂(G-1)作用于乳腺癌MCF-7细胞后HER2和下游信号分子ERK1/2磷酸化水平的变化.在MCF-7细胞被不同的抑制剂GPR30拮抗剂(G-15)、EGFR酪氨酸激酶抑制剂(AG1478)、HER2酪氨酸激酶抑制剂(AG825)、Src家族激酶抑制剂(PP2)或MMP抑制剂(GM6001)预处理2h后,再次检测HER2和ERK1/2的磷酸化水平变化.最后用Transwell方法检测G-1引起的MCF-7细胞迁移和侵袭能力的变化.结果 MCF-7细胞在用E2、4-OHT和G-1处理后,HER2和ERK1/2的磷酸化水平增加,该变化在用G-15、AG1478、AG825、PP2或GM6001预处理后受到抑制.而G-1引起的MCF-7细胞迁移和侵袭能力的增强也能被G-15、AG1478、AG825、PP2或GM6001抑制.结论 GPR30通过激活HER2-ERK1/2信号转导途径可促进MCF-7细胞的迁移和侵袭.     

SHP-1对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭的影响及机制初步探讨

目的探讨SHP-1对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭能力的影响。方法 MCF-7细胞株分别瞬时转染SHP-1的特异性siRNA干扰序列;然后分别通过RT-PCR和Western-blot检测MCF-7细胞干扰前后SHP-1基因和蛋白表达变化,并通过RT-PCR检测干扰前后MMP-9基因变化;通过Transwell小室实验检测干扰SHP-1对细胞侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和Western-blot证实SHP-1在人乳腺癌细胞株MCF-7中有表达以及SHP-1SiRNA的干扰效率;干扰SHP-1后,MMP-9的表达量上调;Transwell小室实验证实,与MCF-7阴性干扰对照及空白对照细胞相比,siRNA组的侵袭能力显著增强(P<0.001)。结论乳腺癌MCF-7中SHP-1的表达水平高低和该细胞侵袭能力高低呈负相关,其侵袭可能和MMP-9的表达呈正相关。     

浸润性乳腺癌中肝细胞生长因子的表达及其与化疗敏感性和预后的相关性

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)在浸润性乳腺癌中的表达及其对新辅助化疗敏感性和预后的影响。方法免疫组化法检测125例浸润性乳腺癌组织中HGF的表达,分析HGF与患者术前化疗及5年生存率的关系;利用si-RNA沉默乳腺癌细胞株MCF-7检测HGF的表达,MTT法检测加入不同浓度表阿霉素共培养后的细胞增殖能力。结果HGF阳性组与阴性组在TNM分期、组织学分级、淋巴结转移、新辅助化疗疗效及预后方面差异有统计学意义(P<0.05),下调HGF后的MCF-7细胞对表阿霉素的耐药性减弱。结论 HGF在乳腺癌中表达与淋巴结转移、预后及化疗敏感性密切相关,有可能作为判断预后和预测化疗疗效的指标之一。     

肝细胞生长因子对子宫内膜癌细胞增殖影响的实验研究

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对子宫内膜癌细胞HEC-2B增殖的影响及子宫内膜癌细胞HEC-2B中HGF受体C-met的表达,了解HGF对子宫内膜癌细胞的作用及其机制。方法体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-2B,用RT-PCR的方法检测HEC-2B中HGF受体C-met有表达。对HEC-2B进行24 h血清饥饿后用不同剂量的HGF作用于HEC-2B。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析细胞的增殖力,用流式细胞仪检测细胞的增殖周期。结果C-met在HEC-2B细胞中稳定表达,HGF促进细胞的增殖,并在一定的范围内有剂量依赖关系,各处理组与对照组相比,P<0.05。当HGF浓度达到60 ng.mL-1时,增殖水平较对照上调约1.9倍。结论HGF/C-met能够在体外促进子宫内膜癌细胞的增殖。     

埃兹蛋白477位酪氨酸的磷酸化在神经生长因子前体促进乳腺癌细胞侵袭中起关键作用

目的研究神经生长因子前体（precursor of nerve growth factor, proNGF）促进乳腺癌细胞侵袭的作用与埃兹蛋白（ezrin） 表达水平及其567位苏氨酸（Thr567）和477位酪氨酸（Tyr477）的磷酸化的相互关系。方法用梯度浓度的proNGF（0、2.5、5和 10 ng/mL）刺激人乳腺癌细胞系MDA-MB-231 和MCF-7,用Transwell 侵袭实验检测proNGF对MDA-MB-231 和MCF-7 侵袭 的影响;用免疫印迹法检测ezrin 蛋白的表达水平,ezrin Thr567 和ezrin Tyr477 磷酸化水平的变化;在MDA- MB-231 中转染 pEnter-His-ezrinY477F质粒（ezrin显性负突变质粒）,研究ezrin Tyr477磷酸化在proNGF促进乳腺癌细胞侵袭中的作用。结果 proNGF 以浓度依赖的方式促进MDA-MB-231 和MCF-7 的侵袭（P<0.05）;proNGF 以浓度依赖和时间依赖的方式显著升高 ezrin Tyr477磷酸化,而对ezrin蛋白的表达以及其Thr567磷酸化无明显影响;Src激酶特异抑制剂SKI-606显著抑制proNGF对 ezrin Tyr477磷酸化的促进作用;转染pEnter-His-ezrinY477F抑制proNGF对MDA-MB-231细胞ezrin Tyr477磷酸化和侵袭能 力的促进作用（P<0.05）。结论ezrin Tyr477磷酸化在proNGF促进乳腺癌细胞侵袭中起关键作用;proNGF通过激活Src激酶使 ezrin Tyr477发生磷酸化。     

乳癌组织中肝细胞生长因子及其受体C-Met的表达

目的：研究乳癌组织中肝细胞生长因子（HGF）及其受体C-Met的表达及对预后的意义.方法：采用免疫组织化学SP法检测39例人乳腺浸润性导管癌（组织学分级：Ⅰ级5例,Ⅱ级19例,Ⅲ组15例;PTNM分期：Ⅰ期22例,Ⅱ期10例,Ⅲ期7例）及12例乳腺纤维腺瘤组织中HGF和C-Met的表达,分析乳癌组织学分级及临床分期与HGF和C-Met的关系.结果：乳癌组织中HGF和C-Met的阳性表达率高于乳腺纤维腺瘤组织（P＜0.05）,其阳性表达率随癌组织的组织学分级及临床分期增高而增高.结论：乳癌组织中HGF和C-Met高表达可能与患者的不良预后相关.     

miR-29a促进人乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的机制

探讨微小核酸miRNA-29a对人乳腺癌细胞MCF-7体外迁移和侵袭的促进作用及其机制。采用miR-29a模拟物及miR-29a抑制剂分别上调和下调miR-29a的表达;采用细胞划痕法和Transwell小室法检测miR-29a对细胞迁移和侵袭能力的影响;采用Targetscan7.1数据库预测miR-29a的靶基因;荧光素酶报告法验证miR-29a的靶基因;Western blot和实时荧光定量PCR验证其表达结果。结果表明:miR-29a可显著促进MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。Targetscan软件预测HBP1可能为miR-29a的靶基因,荧光素酶报告实验显示miR-29a靶向HBP1基因的3′-UTR区。Western blot和实时荧光定量PCR结果显示,miR-29a下调了HBP1蛋白水平的表达,而mRNA水平则无明显变化。研究结果揭示在乳腺癌中高表达的miR-29a通过下调HBP1,从而使乳腺癌细胞获得高的迁移和侵袭能力,促进乳腺癌的转移。     

microRNA-7对人肺癌95D细胞体外侵袭的作用

目的探讨微小RNA-7（microRNA-7,miR-7）对人肺癌95D细胞体外侵袭的作用。方法采用体外转染法将miR-7瞬时转染95D细胞后,应用Real-timePCR特异探针法检测95D细胞中miR-7的表达情况,应用划痕法检测95D细胞的迁移情况,Invasion实验检测95D细胞侵袭能力的变化;用Western印迹法检测95D细胞中胰岛素样生长因子1受体（Insulin growth factor 1 receptor,IGF1R）表达及下游信号的变化。结果与对照组相比,miR-7转染组95D细胞体外侵袭能力明显削弱（〈0.05）,而IGF1R表达则显著下调,其信号途径分子Akt的磷酸化水平也明显降低。结论 miR-7可以抑制人肺癌95D细胞的体外侵袭,可能作为后续肺癌生物治疗的新靶点。     

肝细胞生长因子抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的检测肝细胞生长因子(HGF)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞(CFbs)增殖和胶原合成的影响,探讨其在高血压心室重构中的作用。方法用消化法培养CFbs,以HGF和(或)AngⅡ刺激CFbs,以蛋白免疫印迹方法分析CFbsⅠ型胶原蛋白合成,MTT法检测CFbs的增殖。结果AngⅡ促进CFbs增殖和Ⅰ型胶原蛋白的合成,HGF可抑制这些作用。结论HGF能抑制AngⅡ诱导的SD大鼠CFbs增殖和心肌胶原沉积,从而减少AngⅡ引起的高血压心室重构,实现保护心脏的作用。     

吉西他滨诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的 研究吉西他滨诱导人乳腺癌细胞系MCF-7细胞产生凋亡。方法 应用MTT法、DNA电泳技术及流式细胞术观察吉西他滨诱导人MCF-7细胞凋亡。结果 吉西他滨作用后，MTT结果显示细胞生长抑制率随药物浓度的增加而逐渐增大；DNA断裂电泳可见典型的梯形DNA条带，大小约180～200bp的整倍数递增，随吉西他滨作用时间延长和浓度的增加而逐渐增强；流式细胞术分析，吉西他滨1．0μg／ml和10．0μg／ml作用24h后，凋亡细胞比例分别为8％和14％；作用48h后分别增加到15％和29％。结论 吉西他滨可以诱导乳腺癌细胞产生凋亡，呈时间和剂量依赖性。     

HGF对高糖诱导肾间质成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对高糖诱导肾间质成纤维细胞损伤的修复作用。方法 将人肾脏间质成纤维细胞培养于不同浓度的葡萄糖中，其中25mmol／L葡萄糖组培养液中加入不同浓度的rhHGF，分别于不同时间段收集细胞，采用MTT法检测细胞增殖．流式细胞仪检测细胞周期结果高糖作用早期细胞增殖旺盛，随着高糖的持续刺激，细胞增殖发生停滞，同时细胞出现肥大外源性加入HGF后，对高糖造成的细胞损伤具有修复作用。结论 高糖作用下的肾间质成纤维细咆早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞，出现肥大HGF可以通过促进细胞增殖，抑制由于高糖诱导的细胞肥大。     

靶向干扰CDK2AP1对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响

目的：探讨靶向干扰细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白-1（CDK2AP1）对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响。方法构建重组慢病毒 pGCLV- CDK2AP1- shRNA及重组空病毒pGCLV- GFP,分别稳定转染乳腺癌细胞系MCF-7,获得乳腺癌细胞株 MCF-7/RNAi- NC 和 MCF-7/RNAi- CDK2AP1。采用定量 PCR 法检测两组 MCF-7细胞株的CDK2AP1mRNA表达,xCELLigence/RT- CIM实时细胞电子分析系统检测细胞迁移能力,Transwel 实验检测细胞的侵袭能力。结果成功构建乳腺癌细胞株MCF-7/RNAi- NC和MCF-7/RNAi- CDK2AP1,相比MCF-7/RNAi- NC细胞组,MCF-7/RNAi- CDK2AP1细胞组的CDK2AP1mRNA表达受到明显抑制,其细胞迁移和侵袭能力均显著下降（P＜0.05）。结论乳腺癌细胞MCF-7中CDK2AP1低表达能有效抑制细胞的体外迁移和侵袭能力。     

miR-367对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制

目的：探讨miR-367对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并阐明其作用机制。方法：检测乳腺癌组织、癌旁组织、MCF-7细胞和MCF-10A细胞中miR-367相对表达水平。将miR-NC或miR-367-inhibitor转入MCF-7细胞作为阴性对照组和miR-367-inhibitor组,检测2组MCF-7细胞活性、细胞集落数、Ki67阳性表达率、细胞划痕愈合率、侵袭细胞数和KLF4相对表达水平。将miR-NC或miR-367-mimic转入MCF-7细胞作为阴性对照组和miR-367-mimic组,检测2组MCF-7细胞集落数、细胞划痕愈合率、侵袭细胞数和KLF4相对表达水平。结果：与癌旁组织或MCF-10A细胞比较,乳腺肿瘤组织和MCF-7细胞中miR-367相对表达水平均明显升高（P<0.01）。与阴性对照组比较,miR-367-inhibitor组MCF-7细胞中miR-367相对表达水平、细胞活性、细胞集落数、Ki67阳性表达率、细胞划痕愈合率和侵袭细胞数均明显降低（P<0.01）,KLF4相对表达水平明显升高（P<0.01）;与阳性对照组比较,miR-367-mimic组MCF-7细胞中miR-367相对表达水平、细胞集落数、细胞划痕愈合率和侵袭细胞数均明显升高（P<0.01）,KLF4相对表达水平明显降低（P<0.01）。结论：miR-367可促进MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制KLF4的表达有关。