日本血吸虫Sj97疫苗研究进展

日本血吸虫疫苗研制已作为我国防治该病的重要组成部分。副肌球蛋白是WHO提出的血吸虫疫苗较为理想的候选抗原之一,已用于日本血吸虫疫苗的研究。本文主要对日本血吸虫副肌球蛋白的概况、重组蛋白疫苗和DNA疫苗研究进展进行综述。     

自愈水牛血清免疫筛选日本血吸虫cDNA文库

目的　采用自愈水牛血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库并寻找日本血吸虫疫苗新候选抗原。　方法　用感染日本血吸虫后的自愈水牛血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,将阳性重组子克隆、测序,对核酸序列进行分析,确定目的基因。　结果　从大陆株日本血吸虫成虫λZAPIIcDNA文库筛到26个阳性克隆,经初步鉴定获3种编码蛋白分子的基因:副肌球蛋白,谷胱甘肽S转移酶,羟基类固醇脱氢酶。　结论　感染日本血吸虫后的自愈水牛血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,可用于寻找日本血吸虫疫苗新候选抗原。     

日本血吸虫菲律宾株副肌球蛋白的基因克隆和全部核苷酸序列

血吸虫副肌球蛋白作为疫苗的潜力,在用天然的日本血吸虫副肌球蛋白和天然或重组的曼氏血吸虫副肌球蛋白免疫/攻击实验中得到证实。此外,通过被动免疫,一种小鼠抗副肌球蛋白的单克隆IgE抗体,可使小鼠在血吸虫幼虫自皮肤移行至肺的阶段获得保护。本文作者报道了副肌球蛋白的克隆和全部核苷酸序列。     

血吸虫糖蛋白研究进展

有关血吸虫疫苗的研究迄今已有70余年的历史.90 年代中期WHO/TDR 选定了6 种曼氏血吸虫候选疫苗分子,它们是28kDaGST、97kDa 副肌球蛋白、62kDaIrv-5、28kDa磷酸丙糖异构酶(TPI)、23kDa表膜抗原和14kDa脂肪酸结合蛋白.但这些候选疫苗分子单独免疫尚不足诱导40%以上的免疫保护力.因而,对血吸虫疫苗保护性抗原及其效应机制的研究还需要进行大量的基础性工作.糖蛋白是血吸虫主要抗原物质,大量存在于童虫和虫卵阶段,在血吸虫免疫应答及免疫调节方面起着十分重要的作用.现已证明,血吸虫糖蛋白不仅可以诱导保护性抗体,亦可诱导封闭性抗体的产生[1].因此,研究血吸虫糖蛋白的结构、功能及免疫机制,可为血吸虫疫苗的发展提供新的策略.本文就血吸虫糖蛋白及其在疫苗研究中的进展概述如下.     

血吸虫疫苗候选抗原-谷胱甘肽S转移酶(GST)抗原的研究近况

GST为一组具有解毒功能的酶。曼氏血吸虫及日本血吸虫水溶性26-28KD蛋白质抗原具有GST酶活性。这类蛋白质抗原被认为是目前很有希望的血吸虫疫苗候选抗原。本文就近年来对血吸虫GST的研究情况作一概述:1理化性质;2免疫学特性;3基因克隆及表达等。     

日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白的基因克隆与序列分析

本研究根据曼氏血吸虫疫苗候选分子Sm23的基因序列，设计了一对引物，并通过聚合酶链反应（PCR）基因克隆技术，从日本血吸虫中国大陆株cDNA文库中克隆出了中国大陆株23kDa膜蛋白基因。DNA序列分析表明，编码日本血吸虫中国大陆株Sj23膜蛋白的基因含有657bp，与曼氏血吸虫Sm23的核着酸有79．5％的同源性，而与日本血吸虫菲律宾株的Sj23的同源性为100％。该研究为发展Sj23多肽疫苗奠定了基础。     

免疫印染分析慢性血吸虫病人血清识别日本血吸虫的抗原谱

业已证明,感染血吸虫的人或动物均能建立部分抗感染的抵抗力。分析和确定与建立这种抵抗力有关的血吸虫抗原成分,对筛选血吸虫候选疫苗分子和了解血吸虫抗原与宿主免疫系统的相互作用都是非常重要的。有关这方面的研究以曼氏血吸虫居多。在曼氏血吸虫保护性抗原的研究中,已从童虫、成虫和虫卵的抗原成分中确定了数个具有保护性功能的抗原分子,此提示血吸     

日本血吸虫肌动蛋白轻链基因的获得和分析

目的运用表达序列标签(expressedsequencetag,EST)技术,从日本血吸虫成虫cDNA文库中筛选和鉴定日本血吸虫新基因,为寻找日本血吸虫新的候选疫苗奠定基础。方法转化日本血吸虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,获得EST;用NCBI站点的GenBank对所获得的新基因序列进行同源性检索;利用BLAST程序对同源性高的基因进行核苷酸和氨基酸水平的同源性比较;并利用pcgene软件对其蛋白质结构进行初步分析。结果发现xzw00081克隆的cDNA序列为日本血吸虫新基因并获得GenBank登录号(AY225851)。该cDNA序列与曼氏血吸虫肌动蛋白轻链基因高度同源,核苷酸水平的同源性为84%;氨基酸水平的同源性为86%;编码蛋白的理论相对分子质量为1053888,等电点为696;抗原表位可能位于氨基酸序列158～184处。结论用EST寻找日本血吸虫新基因是一种可行的方法,所筛选到的日本血吸虫新基因长374bp,编码88个氨基酸,与曼氏血吸虫肌动蛋白轻链基因高度同源,为进一步研究该基因的全序列及功能作准备。     

血吸虫种群基因结构:群体中不可忽视的个体基因细微差异

为研制曼氏血吸虫疫苗,已利用一系列候选抗原分子制备成疫苗。尽管作了大量艰苦研究,但是,对于在自然种群中,这些抗原分子的遗传变异及变异程度仍缺乏充分研究。本文作者建议:要将研究重点瞄准血吸     

人对曼氏血吸虫特定免疫原的免疫应答:巴西两个流行区粪检阴性者的副肌球蛋白抗体水平持续增高

为了解在血吸虫免疫动物模型中诱导保护性免疫的副肌球蛋白(parmyosin)和谷胱甘肽转移酶(GST)在人群中的应答。作者检测和分析了巴西曼氏血吸虫病流行区人群对副肌球蛋白GST和成虫可溶性抗原(SW     

寄生虫与无脊椎动物宿主相互关系的研究:血吸虫、肝片吸虫和某些肺螺之间共同抗原——原肌球蛋白的协同进化

以往已证明血吸虫与螺宿主存在着共同抗原。此后人们就此进行了大量深入细致的研究。本文报道用4种抗曼氏血吸虫原肌球蛋白(SMTM)单抗1C_1,1F_(10),1G_6,3D_2与日本血吸虫、曼氏血吸虫、埃及血吸虫、肝片吸虫、湖北钉螺、切口小泡螺、盘螺、膀胱螺、水蛭、黑腹果蝇等无脊椎动物原肌球蛋白反应的结果。     

血吸虫感染抗性人血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库

目的分析血吸虫感染抗性人血清中起免疫保护作用抗体针对的日本血吸虫蛋白抗原谱,为日本血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原分子。方法采集血吸虫流行病区感染抗性人血清,免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对获得的阳性克隆核苷酸进行序列分析,并利用软件对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果共筛选出29个持续阳性克隆,对其进行测序,获得25个基因,包括5种已知基因(其中日本血吸虫肌球蛋白12个、丝氨酸蛋白酶抑制剂2个、细胞色素b1个、延伸因子1-α1个和线粒体编码区1个)和5个未知基因,软件分析显示不同抗原分别具有多个不同的抗原表位。结论获得的阳性克隆插入基因片段可能编码潜在的日本血吸虫病疫苗分子,其中日本血吸虫肌球蛋白为主要抗感染蛋白分子。     

日本血吸虫发育过程中副肌球蛋白的免疫定位

在血吸虫疫苗研究中,副肌球蛋白(一种97kDa蛋白)被认为是一种有效的疫苗靶抗原。本文对日本血吸虫各发育阶段副肌球蛋白的免疫定位进行了研究。 各期日本血吸虫分别取自湖北钉螺和感染血吸虫的BALB/c小鼠。压螺收集菲律宾株尾蚴,用尾蚴逸出法收集中国株尾蚴;肺期童虫从感染3天后的小鼠肺部取得;感染40     

日本血吸虫肌球蛋白部分重链基因核酸疫苗的构建与小鼠保护性研究

目的研究日本血吸虫肌球蛋白部分重链基因核酸疫苗对小鼠的保护效果。方法用致弱童虫免疫血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,获得的阳性克隆之一与曼氏血吸虫肌球蛋白重链基因同源。PCR法扩增该片断基因,产物克隆入真核表达载体pcDNA3中,构建成肌球蛋白部分重链基因核酸疫苗。将50μg肌球蛋白(myosin)核酸疫苗注射C57BL/6小鼠的两侧股四头肌,免疫3次,间隔2周,末次免疫后2周经腹部皮肤攻击感染尾蚴30条/鼠,感染6周后用门静脉灌注法收集成虫,计算核酸疫苗免疫组减虫率与空质粒对照组减虫率。结果核酸疫苗免疫组获得了33.02%的减虫率,空质粒对照组获得了24.50%的减虫率,经t检验,两组差异无显著性。结论肌球蛋白部分重链基因核酸疫苗在小鼠中未能诱导出保护力。     

佐剂对血吸虫谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白诱导体液免疫的影响

许多研究表明人类对血吸虫的免疫力是通过重复感染逐渐获得的。因此,抗血吸虫疫苗从理论上说是可行的。由于人类使用活疫苗以及制备足够数量减毒活疫苗的困难,使非活性或修饰的抗原疫苗备受欢迎。研究表明日本血吸虫和曼氏血吸虫谷胱甘肽巯基转移酶(GST)是很有潜力的疫苗抗原。曼     

紫外线致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库

目的筛选紫外线致弱尾蚴中起免疫保护作用的抗原分子,分析其主要表位,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法以紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对阳性克隆插入片段的核苷酸进行序列分析,并利用软件Antheprot对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果经三轮筛选,共获20个阳性克隆,序列同源性分析表明其中有5种已知基因(GST、副肌球蛋白、肌球蛋白、钙离子激活蛋白和3-磷酸甘油醛脱氢酶),6种未知基因,软件分析显示不同抗原分子分别具有多个不同的抗原表位。结论获得的阳性克隆插入基因片段可能为潜在的日本血吸虫病疫苗分子,可能是多抗原、多表位在照射致弱尾蚴中起免疫保护作用。     

血吸虫谷胱甘肽硫转移酶的研究进展

血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(GST)是一组以谷胱甘肽为共同底物的具有解毒功能的同工酶，在血吸虫生长过程中起关键性的作用，是近来较受关注的一种血吸虫抗原。其中日本血吸虫和曼氏血吸虫体内的GST(SjGST和SmGST)是当前研究较深入的血吸虫候选疫苗，二者的同源性很高，构建的疫苗免疫小鼠和猪等都收到了较好的效果，除产生抗感染的免疫保护作用外还具有降低虫荷数及雌虫生殖率等作用，     

血吸虫谷胱甘肽S-转移酶候选疫苗的研究现状

血吸虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,主要流行于亚洲、非洲和拉丁美洲的76个国家和地区.谷胱甘肽S-转移酶(GST)是WHO推荐使用的6种血吸虫疫苗候选抗原之一,用GST免疫小鼠、大鼠、牛或猴均可产生一定的保护力,提示GST是一种有希望的候选疫苗.该文综述了日本血吸虫Sj26GST和Sj28GST、曼氏血吸虫Sm28GST和埃及血吸虫Sh28GST等的研究现状.     

曼氏血吸虫62kDa条带:一种放射致弱疫苗T细胞抗原和钙网蛋白

曼氏血吸虫成虫可溶性抗原(SAWA)的62/60kDa条带可被照射致弱尾蚴免疫的小鼠血清所识别,并可诱导T细胞应答。为证实并进一步研究上述发现,本研究用曼氏血吸虫SAWA 62/60kDa免疫的小鼠血清对曼氏血吸虫成虫cDNA表达文库进行筛选,并对纯化后的62kDa和60kDa蛋白进行氨基酸测序,以鉴定其作为疫苗免疫后T细胞抗原决定簇的性质和可能性。     

日本血吸虫成虫cDNA文库基因筛选结果的分析

分离和鉴定抗原候选基因是日本血吸虫疫苗研制的主要内容,目前常用的办法是通过构建日本血吸虫生活史某一阶段的 cDNA 文库,采用核酸探针或抗体探针,从 cDNA 文库中筛选出特异性抗原基因,或通过 EST 技术利用生物信息学方法得到所需 cDNA 序列,进而可以在体外表达抗原性蛋白质,作进一步的研究。本文就日本血吸虫成虫cDNA 文库的筛选结果作一综述。