DC联合SEA激活TIL体外杀伤小鼠肝癌细胞活性研究

目的探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC联合SEA激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性作用。方法从荷瘤小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和H22细胞全细胞性抗原致敏DC,然后用已致敏的DC联合SEA激活从荷瘤小鼠中提取的TIL和脾淋巴细胞,观察受激活后的TIL和脾淋巴细胞作为效应细胞在体外对H22细胞的杀伤活性,并与对照组进行比较。结果TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(50.63±2.52)%]高于脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(12.26±1.28)%],用不同方式激活的TIL对H22细胞的杀伤活性均高于各自对应方式激活的脾淋巴细胞对H22细胞的杀伤活性;SEA激活的TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(64.35±2.82)%]高于TIL对H22细胞的杀伤活性[杀伤率为(50.63±2.52)%],已致敏DC激活的TIL对H22细胞的杀伤活性更高[杀伤率为(75.23±3.21)%],而已致敏DC联合SEA激活的TIL对H22细胞的杀伤活性最高[杀伤率为(86.29±3.83)%]。结论用H22细胞全细胞性抗原致敏的DC联合SEA能显著激活TIL产生高效的对H22细胞的杀伤活性。     

树突状细胞激活效应细胞的最佳效靶比及其体外杀伤活性的研究

目的:探讨树突状细胞(DC)激活肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和小鼠脾淋巴细胞(小鼠脾LC)的最佳效靶比并观察被有效激活的TIL和小鼠脾LC等对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤作用.方法:从荷瘤小鼠四肢长骨提取DC,联合应用GM-CSF、IL-4和小鼠H22肝癌细胞全细胞性抗原致敏DC,然后依据不同的激活效靶比用致敏DC体外激活TIL、小鼠脾LC,分别检测、比较被不同程度激活的TIL、小鼠脾LC以及未激活的小鼠脾LC、未激活的TIL对小鼠H22肝癌细胞的杀伤活性.结果:①当DC:靶细胞(E/T)为1:400和1:200时,所激活的TIL或小鼠脾LC的杀伤活性较弱;当E/T为1:100时,杀伤活性有较明显的提高,与前两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);当E/T=1:50时,杀伤活性增加,与前三者比较差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);而当E/T=1:25、1:12.5和1:6.25时,杀伤活性与E/T=1:50时比较无明显变化(P＞0.05);②当E/T=1:50时,未经DC激活的小鼠脾LC(A组)杀伤率为(9.73±1.40)%,未经DC激活的TIL(B组)和DC激活的小鼠脾LC(C组)杀伤率分别为(50.91±2.36)%和(49.70±2.70)%,DC激活的TIL(D组)的杀伤率为(73.49±2.46)%.A组与其他组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);B组和C组比较差异无统计学意义(P＞0.05);D组与其他各组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:①当E/T=1:50时,DC能很好的发挥抗原提呈作用,使小鼠脾LC和TIL得以充分激活;②充分激活的小鼠脾LC或TIL对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤活性较未激活的小鼠脾LC或未激活的TIL均具有明显的提高,尤以激活的TIL的杀伤活性最强.     

卵巢癌TIL体外研究

为了提高肿瘤浸润淋巴细胞治疗卵巢癌的临床效果，本实验分析研究了卵巢癌ＴＩＬ细胞存活天数与细胞增殖能力、细胞表型及杀伤力之间的关系，发现ＴＩＬ细胞第１５天出现增殖，至２５天达到高峰，４０天左右开始增殖缓慢；培养２０天的ＴＩＬ细胞表型中ＣＤ５、ＣＤ４、ＤＲ明显高于１０天的ＴＩＬ细胞，其中ＴＩＬ的ＣＤ３为８６．２％，ＣＤ４、ＤＲ也较高，分别为５５．６％，９３．１％，ＴＩＬ培养至３０天，其细胞表型变化幅度     

香菇多糖对肿瘤浸润淋巴细胞体外扩增及抗瘤活性的影响

香菇多糖 (Ｌｅｎｔｉｎａｎ)是从香菇子实体中提取的抗肿瘤性多糖体。实验证明香菇多糖对人淋巴细胞ＩＬ -2分泌及ＩＬ -2Ｒ表达具有一定的调节作用 ;可促进Ｔ细胞、ＮＫ细胞及ＬＡＫ细胞的产生[1,2 ] 。本实验观察了香菇多糖对肺癌肿瘤浸润淋巴细胞 (ＴＩＬ)体外扩增及抗瘤活性的影响。1　材料和方法1 1　材料 　 2 2例肺癌患者 ,男 1 5例 ,女 7例 ,年龄为 4 0～ 63岁 ,平均年龄 52 5岁 ,其中鳞癌 1 2例 ,腺癌1 2例 ,所有病例均经手术病理确诊。手术切除的肿瘤组织以无菌操作收集于含抗生素的培养液中 ,待分离ＴＩＬ和肿瘤细胞。1 2　…     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对自体肝癌细胞杀伤活性的研究

目的:探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对自体肝癌细胞杀伤活性.方法:从肝癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC来激活TIL,观察TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性.结果:DC激活的TIL具有很高的对自体肝癌细胞杀伤活性,杀伤率为(89.39±3.05)%,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率.结论:肝癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗肝癌免疫.     

树突状细胞激活的肿瘤浸润淋巴细胞体外抗小鼠乳腺癌活性的研究

目的:探讨致敏的树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)体外抗小鼠乳腺癌活性.方法:从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对小鼠C127乳腺癌细胞、小鼠MA782乳腺癌细胞和小鼠B16黑色素瘤细胞的杀伤活性.结果:经C127细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL具有很强的对C127细胞的杀伤活性[杀伤活性为(70.21±2.86)%],明显高于其对MA782和B16细胞的杀伤活性[杀伤活性分别为(51.31±3.25)%,(31.41±2.65)%],也明显高于未经DC激活的TIL、C127-DC-小鼠脾淋巴细胞和未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞对C127细胞杀伤活性[杀伤活性分别为(48.30±2.97)%,(47.76±3.43)%和(17.23±2.56)%]和对MA782细胞杀伤活性[杀伤活性分别为(38.52±2.87)%,(36.62±2.75)%和(18.07±2.40)%]以及对B16细胞杀伤活性[杀伤活性分别为(25.38±2.63)%,(24.82±2.81)%和(17.34±2.81)%],同时B16细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL(TIL来源于C127瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性.结论:经C127细胞全细胞性抗原致敏的DC能诱导TIL产生高效而特异的体外抗小鼠乳腺癌免疫.     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对自体肝癌细胞杀伤活性的研究

目的探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对自体肝癌细胞杀伤活性.方法从肝癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC来激活TIL,观察TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性.结果DC激活的TIL具有很高的对自体肝癌细胞杀伤活性,杀伤率为(89.39±3.05)%,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率.结论肝癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗肝癌免疫.     

香菇多糖脂质体联合IL—2原位扩增,激活小鼠腹腔巨噬细胞抗？…

为观察香菇多糖脂质体（Ｌｉｐ－ＬＮＴ）与低剂量ＩＬ－２协同体内扩增，激活腹腔巨噬细胞（ＰＭφ）杀瘤活性。体内诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠２ｄ后，收集计数腹腔渗出细胞（ＰＥＣ）及ＰＭφ，监测ＰＭφ细胞毒及ＴＮＦ活性，并于香菇多糖（ＬＮＴ）进行了比较。结果：Ｌｉｐ－ＬＮＴ，ＬＮＴ与ＩＬ－２联合可协同使ＰＥＣ体内大量扩增，ＰＭφ细胞毒活性及ＴＮＦ分泌显著增加，其中Ｌｉｐ－ＬＮＴ较ＬＮＴ最小有效剂量减小５倍，最适     

LAK和TIL细胞的表型测定

应用多种抗人淋巴细胞的单克隆抗体和流式细胞仪，分析用ＩＬ－２诱生患者淋巴细胞２周形成的ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞的表型。结果：ＬＡＫ细胞中ＣＤ＿３￣＋细胞为（８５．０±２．５３）％，ＣＤ＿（１６）细胞为（８．３±１．０）％，证实ＬＡＫ细胞是以Ｔ细胞为主，包括有ＮＫ细胞的混合群体。双标记表型分析ＣＤ＿８￣＋Ｌｅｕ７￣－的ＣＴＬ细胞占８１．４８％，因而推测ＬＡＫ细细胞中，抗原特异性和ＭＨＣ限制性的ＣＴＬ细胞占有很大比例。ＴＩＬ细胞中ＣＤ＿３￣＋细胞为（６４．７±９．７）％，ＣＤ＿（１６）￣＋细胞为（１．６±０．２）％，Ｌｅｕ７￣＋细胞为（６．８±１．１）％。双标记表型分析ＣＤ＿８￣＋Ｌｅｕ７￣－的ＣＴＬ细胞占ＣＤ＿８￣＋细胞的８６．７６％，证实ＴＩＬ细胞主要是Ｔ细胞，ＮＫ细胞极少。     

人胃癌TIL细胞体外杀伤MKN45胃癌细胞株的电镜观察

用电镜观察了胃镜ＴＩＬ细胞杀伤ＭＫＮ４５人胃癌细胞株的形态学变化。发现ＴＩＬ细胞先向靶细胞靠近并伸出伪足与之接触,随后靶细胞开始出现结构破坏,６ｈ后靶细胞破碎死亡。研究证实了胃癌ＴＩＬ细胞对胃癌细胞的杀伤作用。     

树突状细胞活化肝癌肿瘤浸润淋巴细胞抗瘤免疫的体外研究

目的　研究负载肿瘤抗原的树突状细胞 (DC)对原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)体外增殖和细胞毒作用的影响。方法　联合应用GM -CSF和IL - 4对原发性肝癌病人外周血分离的单核细胞进行体外诱导 ,加入自体癌细胞匀浆粗提物进行刺激 ,制备负载肿瘤抗原的DC后 ,与自体TIL在含有低浓度IL - 2的完全培养基中混合培养 ,计数TIL增殖数量 ,ELISA法检测培养上清中IFN -γ和TNF -α的含量 ,LDH法测定TIL对自体肝癌细胞、K5 6 2肿瘤细胞的细胞毒作用 ,与单纯在含有低浓度IL - 2的完全培养基中培养的TIL进行比较。结果　TIL在含低浓度IL - 2的完全培养基中与负载肿瘤抗原的DC混合培养 ,较单纯在含低浓度IL - 2完全培养基中培养增殖效果明显 (P <0 .0 1) ;分泌IFN -γ和TNF -α的量明显提高 (P <0 .0 1) ;对自体肝癌细胞的细胞毒作用显著性增强 (P <0 .0 1) ;两组TIL对自体肝癌细胞的细胞毒作用明显高于对K5 6 2肿瘤细胞的细胞毒作用 (P <0 .0 5 ) ,对K5 6 2肿瘤细胞的细胞毒作用无显著性差异(P >0 .0 5 )。结论　负载肿瘤抗原的DC与TIL混合培养 ,可增强TIL的抗肿瘤活性 ,且具有促增殖作用。     

香菇多糖脂质体联合IL-2原位扩增、激活小鼠腹腔巨噬细胞抗瘤活性

为观察香菇多糖脂质体（ＬｉｐｏｓｏｍｅｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＬｅｎｔｉｎａｎ，ＬｉｐＬＮＴ）与低剂量ＩＬ２协同体内扩增，激活腹腔巨噬细胞（Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，ＰＭ）杀瘤活性。体内诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠２ｄ后，收集计数腹腔渗出细胞（Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｅｘｕｄａｔｅｃｅｌｓ，ＰＥＣ）及ＰＭ，监测ＰＭ细胞毒及ＴＮＦ活性，并于香菇多糖（Ｌｅｎｔｉａｎ，ＬＮＴ）进行了比较。结果：ＬｉｐＬＮＴ，ＬＮＴ与ＩＬ２联合可协同使ＰＥＣ体内大量扩增，ＰＭ细胞毒活性及ＴＮＦ分泌显著增加，其中ＬｉｐＬＮＴ较ＬＮＴ最小有效剂量减小５倍，最适剂量减少４倍，而ＰＭ杀瘤活性提高３０％，且以靶向扩增ＰＭ为主，达７２％。结论：ＬｉｐＬＮＴ较ＬＮＴ生物活性显著提高，ＬｉｐＬＮＴ与小剂量ＩＬ２联合使ＰＭ、ＰＥＣ体内大量增殖，ＰＭ杀瘤活性增强并促进ＴＮＦ生成。     

香菇多糖对小鼠骨髓树突状细胞表型和功能的影响

【目的】 纯化的香菇多糖(lentinan, LNT)为香菇子实体提取物中的有效成分,是兼有抑制肿瘤和提高免疫功能的多糖类生物反应调节剂,在临床上有广泛应用。树突状细胞(dendritic cells, DC)是机体功能最强的专职抗原递呈细胞,它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原,激活T细胞应答并在抑制肿瘤的发生、发展和转移中起到重要作用,同时DC疫苗也在防止多种传染病和肿瘤治疗等方面展现广阔前景。我们在科研见习期间通过研究发现LNT对DC有显著调节作用。但是具体的机理不清,而且国内外未见报道。因此,我们立项对LNT影响小鼠骨髓树突状细胞(bone marrow derived dendritic cells, BMDCs) 表型及功能的变化进行了如下系统研究。 【方法】 取6~8周龄C57BL/6小鼠,颈椎脱臼处死,于75%酒精中浸泡10~15 min,无菌手术取出四肢放入75%酒精中,剔去肌肉,剪掉骨头两端,用1 mL无菌注射器吸取RPMI1640反复冲洗骨髓腔,收集细胞悬液,1 500 r/min,离心6 min,倒掉上清,加入1~2 mL红细胞裂解液1~2 min,用PBS洗3遍后重悬于含双抗和10%胎牛血清(FCS)的RPMI1640培养液中,接种于6孔板,24 h后弃去未贴壁细胞,再加入含GM-CSF、IL-4、双抗和10%FCS的RPMI1640,隔天半量换液,培养至对数期,加药刺激。LNT溶解于RPMI1640中,配制其浓度为50 μg/mL,然后加入培养至对数生长期的BMDCs细胞培养液中, 用RPMI1640培养作为空白对照组,10 ng/mL的LPS(Sigma)刺激培养作为阳性对照。分别应用酸性磷酸酶活性检测、流式细胞仪术、吞噬实验及酶联免疫吸附试验,检测酸性磷酸酶活性、细胞表型及细胞因子IL-12、IL-10及TNF-α含量。 【结果】 与RPMI1640对照组相比,LNT处理组(50 μg/mL)BMDCs酸性磷酸酶活性明显下降(P<0.01);表面关键膜分子CD80、CD86,CD40、CD83,MHC Ⅱ、和CD205的表达水平明显增高(P<0.01);吞噬FITC-dextran量(反映摄取抗原能力)减少(P<0.05);细胞上清液中IL-12、IL-10及TNF-α含量明显增高(P<0.01)。 【结论】 本研究表明适宜浓度的LNT能够显著促进BMDCs表型和功能成熟。     

肿瘤疫苗对小鼠肝癌作用的研究

目的 :通过动物实验评价肿瘤疫苗对肝癌的防治作用 ,为临床应用提供实验依据。方法 :用小鼠肝癌细胞系MM45T .Li经过化学修饰制成肿瘤疫苗免疫小鼠 ,然后再用该细胞系接种于小鼠腋下。分别观察免疫鼠及未免疫小鼠的肿瘤生长情况 ,进行病理学检查 ;并用3H -TdR释放法检测小鼠脾细胞对MM45T .Li细胞的杀伤能力差异。结果 :①经肿瘤疫苗免疫的小鼠的肿瘤生长速度明显低于未免疫小鼠 ;②病理学检查发现免疫鼠肿瘤组织内大量淋巴细胞浸润 ,未免疫鼠内罕见淋巴细胞浸润 ;③3H -TdR释放实验显示免疫鼠脾细胞对MM45T .Li细胞的杀伤能力明显高于未免疫鼠。结论 :按我们现行方法制备的肿瘤疫苗能激活小鼠抗肝癌的免疫反应 ,抑制肝癌的生长 ,但完全保护作用尚不明确     

枸杞多糖对荷瘤小鼠肿瘤微环境T淋巴细胞亚群及树突状细胞的影响

目的:研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对荷瘤小鼠体内肿瘤微环境中T淋巴细胞亚群和树突状细胞(dendritic cells,DCs)的影响,探讨LBP对荷瘤机体免疫逃逸的干预作用.方法:用LBP给H22荷瘤小鼠灌胃,连续2周后,测定肿瘤重量,采用流式细胞术检查肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltrating lymphocyte,TIL)中T淋巴细胞亚群和DCs的数量,以及协同刺激分子CD80(B7-1)表达的变化.结果:LBP可明显抑制肿瘤细胞的生长,增加肿瘤浸润CD4 、CD8 细胞的数量.LBP高剂量组CD4 和CD8 细胞数量的百分比高于模型组(P＜0.05).LBP低剂量和高剂量组肿瘤浸润DCs数量及B7-1表达均较模型组升高,但差异无统计学意义.结论:LBP的抗肿瘤作用可能与恢复荷瘤小鼠TIL中CD4 、CD8 的细胞数量、解除机体的免疫抑制状态及增强机体的抗肿瘤免疫功能有关.LBP能否恢复荷瘤机体DCs的表型及功能尚待进一步研究.     

香菇多糖研究近况

本文收集了近年来４６篇文献，从香菇多糖抗肿瘤免疫，对病毒性肝炎免疫，抗衰老作用等实验研究和对肿瘤的辅助治疗，对病毒性肝炎，以及皮肤病的治疗等临床研究方面的概况作了综述。     

小鼠TIL细胞体外实验性扩增及其抗肿瘤作用的研究

本研究通过在普通培养液中加入一定浓度的ＰＨＡ（植物凝集素）改善ＴＩＬ细胞的培养体系，延长其培养时间，使ＴＩＬ细胞在体外大量扩增，这种扩增后的ＴＩＬ细胞与常规培养的ＴＩＬ细胞在小鼠体内具有相同的抗肿瘤作用。这项研究为临床上更多获取ＴＩＬ细胞进行了有意义的探索。     

香菇多糖的体外抗肿瘤活性研究

目的:研究香菇多糖体外抗肿瘤活性。方法:MTT法观察香菇多糖对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响,流式细胞术分析其对SGC-7901细胞周期的影响,Westernblot法检测其对ERK1/2蛋白激酶磷酸化的作用。结果:香菇多糖能够显著抑制SGC-7901胃癌细胞的生长。香菇多糖作用于SGC-7901胃癌细胞后能够引起S期细胞周期阻滞,激活ERK1/2磷酸化。结论:香菇多糖具有体外抗肿瘤活性,其作用机制可能与诱导细胞周期阻滞和激活ERK1/2信号通路有关。     

香菇多糖联合化疗治疗肝癌的临床研究

目的观察香菇多糖联合化疗治疗肝癌的疗效。方法将45例符合入选标准的肝癌患者,随机分为联合治疗组和对照组。联合治疗组给予香菇多糖,1mg/次,静脉注射,每周3次。联合治疗组和对照组均按PF方案给予化疗,治疗2个月后评价疗效,观察疗效和比较两组患者kamofsky评分。结果联合治疗组总有效率显著优于对照组（P〈0.05）,生活质量改善明显优于对照组。结论香菇多糖配合化疗药物,能增强化疗药物的抗肝癌作用。