三尖杉酯碱诱导慢性髓系白血商K—562细胞凋亡的实验研究

目的 阐明三尖杉酯碱（HT）作用于K562细胞的机制。方法 应用细胞形态，DNA凝胶电泳和流式细胞仪等检测，观察HT对K562细胞株的作用方式，进一步用RT-PCR方法研究bc/rlabl基因在转录水平的改变。结果 0.01-100.00μg/ml浓度HT可诱导K562细胞凋亡，并呈时间和剂量依赖性，随着药物作用时间的延长，bcr/abl基因的转录下调。结论 低浓度HT就可通过抑制bcr/abl基因的表达，诱导K562细胞凋亡。     

高三尖杉酯碱诱导K562和CML细胞凋亡及分化的实验研究

目的 明确三尖杉酯碱（HHT）治疗慢性粒细胞性白血病（CML）的机理。方法 应用细胞长曲线、克隆形成能力、细胞内血红蛋白含量测定、细胞形态,结合DNA凝胶电泳、流式细胞仪等方法,观察HHT对K562细胞株及CML慢性期细胞的作用方式。进一步用RT－PCR方法研究bcr-abl、c-myc 、max基因在转录水平的改变。结果 低浓度HHT抑制K562细胞的克隆形成能力并使K562细胞内血红蛋白含量增加;0.1umol /L 及以上浓度HHT可诱导K562细胞及CML细胞凋亡;细胞周期分析发现细胞阻滞于G1期。c-myc基因在加药24h开始下凋; bcr-abl和max基基的表达未见明显改变。结论 低浓度HHT可抑制K562 细胞增殖并诱导其向红系分化;超过一定“ 阈浓度”HHT可诱导K562细胞和CML慢性期细胞凋亡;HHT可通过抑制c-myc/max 表达来阻 滞细胞周期。     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡中bcl—2家族基因的表达

目的 探讨在高三尖杉酯碱（HHT）诱导K562细胞凋亡时,bcl-2家族部分基因在mRNA水平表达的改变。方法 细胞形态（光镜和电镜）、DNA凝胶电泳、流式细胞仪等方法证实凋亡,进一步用RT－PCR方法研究凋亡过程中bcl-2家族中部分基因表达的改变。结果 超过一定“阈浓度”HHT可诱导K562细胞凋亡;RT－PCR方法发现bax基因和bfl-1基因在加药6h开始上调,家族其它基因bcl-2、bcl-xL的表达未见明显改变。结论 HHT可诱导K562细胞凋亡;其机制可能与HHT在mRNA水平上调bax基因有关;而bfl-1基因的上调可能是K562细胞抗HHT诱导其进一步凋亡的原因。     

高三尖杉酯碱和异三尖杉酯碱对人急性早幼粒白血病细胞凋亡 …

目的 研究高三尖杉酯碱和异三尖酯碱对人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０凋亡的影响。方法采用流式细胞术、ＤＮＡ凝胶电泳、光镜及透电镜等方法。结果 证明高三尖杉酯碱及异三尖杉酯碱能快速、显著地诱导ＨＬ－６０细胞的凋亡,其作用有明显的浓度及时间依赖性。高三尖酯碱的活性明显高于异三尖杉酯碱。结论 高三尖杉酯碱及三尖杉酯碱皆可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,但高三尖杉酯碱的生物活性明显高于异三尖杉酯碱。     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡中bcl-2家族基因的表达

目的探讨在高三尖杉酯碱(HHT)诱导K562细胞凋亡时,bcl-2家族部分基因在mRNA水平表达的改变.方法细胞形态(光镜和电镜)、DNA凝胶电泳、流式细胞仪等方法证实凋亡,进一步用RT-PCR方法研究凋亡过程中bcl-2家族中部分基因表达的改变. 结果超过一定"阈浓度”HHT可诱导K562细胞凋亡;RT-PCR方法发现bax基因和bfl-1基因在加药6h开始上调,家族其它基因bcl-2、bcl-xL的表达未见明显改变.结论 HHT可诱导K562细胞凋亡;其机制可能与HHT在mRNA水平上调bax基因有关;而bfl-1基因的上调可能是K562细胞抗HHT诱导其进一步凋亡的原因.     

高三尖杉酯碱治疗慢性期慢性粒细胞白血病21例

目的 研究小剂量,长疗程高三尖杉酯碱(LD-HHT),对慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)完全血液学缓解(CHR)及疾病无进展长期生存的影响.方法 对2006年一月前在我院确诊的CML-CP患者21例,行肌肉注射或静脉滴注给药:HHT1mg/d 持续8周,2mg/d 持续4周,间歇4-5周,再进行下1个疗程,并作为维持治疗方案.血象分类中有原始细胞者:WBC长至4.0×109/L左右给药,降至1.2×109/L时停药.不受间歇期限制.结果 连续LD-HHT长疗程治疗4年,于2010年1月统计,19例无进展生存(85%)2例急变,其中13例达CHR,6例仍在CML-CP.结论 LD-HHT长疗程治疗能显著延长CML的慢性期,提高患者血液学缓解率.     

三尖杉酯碱治疗慢性粒细胞白血病33例报告

总结我院１９９１～１９９５年期间单用三尖杉酯碱治疗慢性粒细胞白血病患者３３例，现报告如下。１材料与方法１．１病例来源３３例均为未加选择的住院病人，均符合诊断标准［１］。其中男性２１例，女性１２例，年龄１６～６６岁，平均３５．３±１４．４岁。初治２５例...     

伊马替尼联合高三尖杉酯碱治疗初诊慢性髓细胞性白血病疗效观察

目的：观察伊马替尼联合高三尖杉酯碱（HHT）治疗初诊慢性髓细胞性白血病（CML）的疗效和毒副反应。方法：33例CML患者随机分为2组,伊马替尼联合HHT治疗17例（IM＋HHT组）,单用伊马替尼治疗16例（IM组）,观察不同时段的血液学和细胞遗传学反应率。结果：两组患者治疗3个月时的血液学缓解率和治疗6个月时的细胞遗传学反应率无显著差异,但治疗12个月时IM＋HHT组的完全和部分细胞遗传学反应率高于IM组。两组间非血液学毒性和3级以上血液学毒性发生率无显著差异。结论：HHT和伊马替尼的抗CML效应有协同作用,两者联合使用可提高初诊CML患者的细胞遗传学反应率。     

高三尖杉脂碱和阿糖胞苷在老年急性髓系白血病治疗中的疗效

目的对联合应用高三尖杉酯碱与阿糖胞苷治疗患有急性髓系白血病的老年患者的临床效果进行研究分析。方法随机抽取40例急性髓系白血病老年患者病例,将其分为对照组和治疗组,每组20例。对照组采用柔红霉素与阿糖胞苷联合进行治疗;治疗组采用高三尖杉酯碱与阿糖胞苷联合进行治疗。结果治疗组患者的白血病控制效果明显优于对照组;治疗和住院时间明显短于对照组;出现不良反应的人数明显少于对照组;治疗后病情复发率明显低于对照组。结论应用高三尖杉酯碱与阿糖胞苷联合对患有急性髓系白血病的老年患者进行治疗的临床效果较明显。     

高三尖杉酯碱联合JQ1对急性髓系白血病细胞株Kasumi-1、Mv4-11的凋亡诱导作用

目的探讨高三尖杉酯碱（HHT）联合BRD4抑制剂JQ1对急性髓系白血病（AML）细胞株Kasumi-1、Mv4-11的凋亡诱导作用。方法MTS法测HHT、JQ1单药及两药联合对AML细胞株的抑制作用,流式细胞仪检测两药联合对AML细胞株凋亡的作用,Westernblot法检测两药联合对凋亡相关蛋白（Bcl-2、Caspase-3、Parp）的作用。结果与HHT、JQ1单药比较,两药联合的抗白血病效应明显增强,能明显抑制AML细胞株Kasumi-1、Mv4-11的增殖;可促进细胞凋亡作用,并明显抑制Bcl-2蛋白表达,激活Caspase-3,促进Parp的裂解。结论HHT联合JQ1可以增强抗AML细胞株的作用,促进AML细胞株的凋亡,是有效的联合方案。     

川楝素提取物诱导 K562 细胞凋亡的实验研究

目的 探讨川楝素提取物对人白血病 K562 细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法 采用 MTT 法检测川楝素提取物对 K562 细胞增殖的影响;Wright′s染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率的变化;Annexin V/PI 双标记法检测细胞的早期凋亡变化;DNA 琼脂糖凝胶电泳观察 DNA 片段化;比色法检测 Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 相对活性的改变;RT-PCR 检测凋亡相关基因 p21、bcr/abl、H-ras mRNA 表达水平的改变。结果 川楝素提取物显著抑制 K562 细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性,作用 72 h 的 IC50值为 20 nmol/L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;细胞周期和 Annexin V/PI 双标记检测表明川楝素提取物可诱导 K562 细胞凋亡,并呈剂量-时间依赖性;处理组细胞 DNA 琼脂糖凝胶电泳出现明显的 DNA ladder;处理组细胞 Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 的活性均显著增加;p21、H-ras mRNA 表达上调,bcr/abl mRNA 表达下调。结论 川楝素提取物对 K562 细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与 Caspase 信号途径的活化有关。     

土贝母诱导K562细胞凋亡

目的:探讨土贝母诱导分化K562细胞的作用机制.方法:将土贝母制剂加入到在体外培养的K562细胞中,观察K562细胞增殖水平,并检测土贝母制剂作用前后细胞对噻唑蓝还原能力,同时应用流式细胞仪测定K562细胞增殖周期.结果:土贝母制剂对K562细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;K562细胞增殖G0/G1期细胞比率明显增加,S期细胞比率明显减少.结论:土贝母制剂能阻止K562细从G0、G1期向S期转化,抑制K562细胞增殖,促进K562细胞凋亡.     

抗氧化剂An7845对K562白血病细胞的增殖抑制和凋亡诱导活性

目的：观察抗氧化剂An7845在体外对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用液体培养实验,MTT实验,集落培养实验观察抗氧化剂An7845对K562细胞增殖的影响,采用细胞形态学及DNA片段凝胶电泳观察和检测细胞凋亡。结果：不同浓度的An7845（5×10-8～5×10-5 mol/L）对K562细胞具有抑制增殖的作用,并呈剂量依赖关系。经An7845（5×10-7 mol/L）处理后,K562细胞在形态学上可见明显凋亡细胞,DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见DNA梯形带。结论：抗氧化剂An7845能抑制K562白血病细胞增殖和诱导其凋亡。     

补骨脂素加长波紫外线照射对白血病K562细胞的杀伤作用

目的:探讨补骨脂的提纯物补骨脂素(psoralen)加长波紫外线(ultraviolet-A light)照射光化学疗法,亦称PUVA(psoralen plus ultraviolet-A light)疗法,对慢性粒细胞白血病红白病变细胞株K562细胞的杀伤作用.方法:以传代培养的K562细胞为模型,采用四甲基偶氮唑盐比色法(monotetrazolium test, MTT)测定单纯补骨脂素、单纯紫外线照射及PUVA疗法对白血病细胞的杀伤作用;采用流式细胞仪对其进行DNA含量分析,并用早期凋亡试剂盒Annexin-Ⅴ-FITC和碘化丙啶(propidine iodide, PI)双染法测定单纯补骨脂素对白血病细胞的作用;采用电镜技术对其进行形态学观察.结果:单纯补骨脂素或单纯紫外线照射对K562细胞均有杀伤作用,PUVA比单纯补骨脂素或单纯紫外线照射对K562细胞的杀伤作用有明显增强(P＜0.05).PUVA处理后的白血病细胞通过流式细胞仪可以检测到亚二倍体凋亡峰.电镜下可见:细胞体积变小,胞浆浓缩,胞核染色质聚集或边集,核小体碎裂,大部分细胞呈典型的凋亡形态.结论:中药补骨脂提纯物补骨脂素对人白血病细胞K562具有杀伤作用.补骨脂素具有光敏活性,结合360 nm波长紫外线照射治疗对K562细胞的杀伤作用有明显增强.紫外线照射时间以10 min为最佳;补骨脂素适宜的终浓度为40 μg/ml.PUVA对人白血病细胞K562杀伤作用的机制主要是诱导细胞凋亡.     

Triad1调节K562细胞增殖、凋亡和耐药研究*

目的：研究Triad1对慢性髓细胞白血病（CML）细胞株K562增殖和凋亡的作用以及与伊马替尼（IM）耐药的关系。方法：将K562细胞进行血清饥饿培养,流式细胞仪检测细胞周期变化,蛋白免疫印迹法检测PCNA等增殖相关蛋白的表达。shRNA干扰K562细胞后细胞周期和凋亡的变化。构建耐药细胞K562R,蛋白免疫印迹法检测K562和K562R细胞中Triad1以及凋亡相关蛋白的表达。结果：（1）血清饥饿培养后K562细胞阻滞在G0/G1期,恢复血清培养后随着K562细胞增殖,Triad1表达减少,而PCNA等蛋白表达增加。（2）干扰Triad1表达后,K562细胞增殖能力增强,G1期细胞减少。（3）K562R细胞Triad1的表达下降,凋亡相关蛋白表达降低。结论：Triad1通过调节细胞周期来调节K562细胞的增殖,干扰Triad1可促进K562细胞增殖,凋亡减少,Triad1表达下降可能与K562细胞耐药相关。     

吉九里香碱诱导K562细胞凋亡的研究

目的探讨吉九里香碱(girinimbine)通过诱导细胞凋亡而发挥其抑制肿瘤细胞增殖的作用。方法采用MTT法检测吉九里香碱对K562细胞增殖的抑制作用;采用荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;库尔特全自动颗粒粒度仪分析药物引起K562细胞体积大小分布的变化;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯形条带及流式细胞术检测细胞凋亡时凋亡峰的变化。结果MTT结果显示不同浓度的吉九里香碱处理K562细胞不同时间均能抑制细胞的增殖,抑制率依赖于吉九里香碱的浓度和作用时间;50μmol/L吉九里香碱处理K562细胞24h时,细胞出现凋亡典型的形态学特征;50μmol/L吉九里香碱分别处理K562细胞6、12、24h及不同浓度吉九里香碱处理K562细胞24h时,能够使细胞产生明显的DNA梯形条带和体积大小变化,呈一定的量效和时效关系,并且细胞凋亡的亚G1峰随作用时间的延长而增加,分别为(15.93±3.79)%(6h)、(32.87±4.89)%(12h)、(41.30±1.91)%(24h)。结论吉九里香碱可能通过诱导K562细胞凋亡而发挥其抗K562细胞增殖的作用。     

Survivin反义寡核苷酸对5-FU诱导人红白血病细胞系K562凋亡的影响

【目的】探讨survivin反义寡核苷酸(Antisense Oligodeoxy-nucleotid,ASODN)对5-FU(5-氟尿嘧啶)诱导人红白血病细胞系K562细胞凋亡的影响。【方法】体外培养K562细胞,合成survivin ASODN并经脂质体转染至K562细胞内,MTT法观察survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN的细胞毒作用,Hoechst33342/PI双荧光染色观察各组细胞核形态,镜下计算各组细胞凋亡率。【结果】400、600、800、1000nmol/L survivin ASODN处理K562细胞44 h后,IC50为800 nmol/L;与单独使用survivin ASODN或5-FU相比,5-FU联合800 nmol/L survivin ASODN后细胞生长明显受到抑制(P<0.01);Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN组均出现明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现。镜下细胞计数,survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN组细胞凋亡率分别为54.55%、53.85%、86.70%。【结论】Survivin ASODN可增强K562细胞对5-FU的敏感性。     

慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定

目的：筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病（CML）K562细胞的寡核苷酸适体.方法：体外合成长度为88个碱基的随机单链DNA（ssDNA）文库,采用生物素-链霉亲和素磁珠法制备次级文库,以正常人血液中提取的中性粒细胞为反筛细胞,利用指数富集的配基系统进化（SELEX）技术筛选出与CMLK562细胞特异结合的适体.将筛选得到的适体回收纯化后连接pGEM-T质粒载体,经蓝白筛选后,随机挑选24个克隆子进行序列测定.采用荧光标记引物法检测ssDNA文库与K562细胞的亲和力,并用Clustal 2.05和DNA sis V2.5软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测.结果：经过13轮循环筛选,CML K562细胞适体的A值从0.12上升到1.25,至第13轮A值无明显增高.一级结构分析无同源序列,但可分为6个家族,其中5个家族各自具有保守序列,家族6无保守序列.二级结构分析表明,适体形成的茎环、凸环结构可能是与K562细胞特异性结合的结构基础.结论：利用SELEX技术成功筛选出高亲和性的CML K562细胞适体.     

manumycin对人髓系白血病细胞株K562细胞的增殖抑制作用

探讨manumycin对人髓系白血病细胞株K562细胞的增殖抑制作用,为其治疗白血病提供理论依据。方法：实验设阴性对照组（K562加含10%胎牛血清的IMDM培养液）和manumycin组（终浓度分别为2、4、8及16 μmol/L）,分别作用24、48和72 h,镜下观察manumycin作用后K562细胞的生长情况;MTT法检测K562细胞的生长抑制率;24 h 后,用Western blotting方法检测对照组及4、 16 μmol/Lmanumycin组K562细胞中survivin蛋白的表达。结果：镜下观察显示,对照组细胞生长状态良好,密度均一,大小一致,轮廓清晰,折光性强。与对照组比较,8 μmol/L manumycin组细胞明显变小,密度稀疏,大小不均一,细胞轮廓欠清晰,折光性差;16 μmol/L  manumycin组细胞密度明显减少,大小不等,轮廓不清,有细胞碎片。MTT结果显示,随着manumycin浓度增加和作用时间延长,生长抑制率逐渐增加,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,且存在时间-剂量-效应关系。Western blotting结果显示,与对照组比较,16 μmol/L manumycin作用K562细胞24 h以后细胞内survivin蛋白含量下降。结论：manumycin通过下调K562细胞survivin蛋白的表达,促进细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的生长,从而达到治疗白血病的目的。