离子对-反相高效液相色谱法测定人血清中美托洛尔的含量

目的离子对-反相高效液相色谱(HPLC)法测定人血清中美托洛尔浓度的评价。方法血清样品经蛋白沉淀剂(N,N-二甲基甲酰胺)沉淀后,高速离心,取上清液进行分析。测定使用C18色谱柱,甲醇-水(50:50,水相中含0.14%磷酸二氢钾)为流动相,以VP-16为内标,荧光检测Ex=277nm,Em=299nm。结果美托洛尔的浓度检测范围是2～1000pg/ml,r=0.9988;样品平均回收率为94.15%,相对标准差RSD为3.62%(n=6)。结论本方法选择性强,灵敏,重现性好。     

高效液相色谱法测量患儿血清甲氨蝶呤浓度

目的：建立测定患儿血清中甲氨蝶呤浓度的方法,用于临床患儿血药浓度监测。方法色谱柱采用岛津原装柱（250 mm×4．6 mm,5μm）,流动相为0．025 mol/L 磷酸二氢钠溶液（pH 为5．41）-甲醇（76∶24,V/V）,流速1．0 mL/min,检测波长313 nm,柱温35℃,样品经10％高氯酸沉淀蛋白后,取上清液130μL 加10μL 1 mol/L NaOH 后直接进样。结果血浆中甲氨蝶呤的浓度在0．00～4．84μmol/L 和4．84～10．00μmol/L 范围内与峰面积线性关系良好,r 1＝1,r2＝1,平均回收率分别为61．67％和71．83％,日内及日间精密度的 RSD 小于10％和12％（n＝3）。结论所用方法简便快速、准确可靠、灵敏度高、重现性好、线性范围宽和成本低,适于甲氨蝶呤的血药浓度监测。     

用高效液相色谱法测定血清中尼群地平的浓度

目的：建立测定血清中尼群地平浓度的高灵敏度高效液相色谱方法，用于尼群地平临床药物代谢动力学的研究和临床治疗检测。方法：以尼群地平为内标，使用紫外检测器，血甭标本经有机溶剂提取后，上层有机相在空气流下吹干，重组后进行色谱分析。结果：在该方法条件下，浓度为１５０，５０和１５ｎｇ／ｍｌ的尼群地平的平均回收率分别为６８．２％，８８．２％和８７．３％（ｎ＝８），平均日内不精密度分别为３．７％，３．１％和５．     

高效液相色谱法测定米非司酮的血药浓度

目的：建立测定米非司酮血药浓度的方法。方法：以乙睛-甲醇-二氯甲烷三乙胺一水为流动相，血清样品经乙醚萃取，液氮冷冻分离后，在波长302nm处检测米非司酮。结果：线行范围0．02～2．21／μg／ml，米非司酮的工作曲线为y（μg）=0．07x-0．25（r^2=0．9996）。回收率在89％～93％之间。日内与日间RSD均小于4％。结论：高效液相色谱法快速、简便、准确、灵敏，可用于米非司酮的药物动力学研究。     

高效液相色谱法测定人血清甜菜碱方法的建立

目的 采用柱前衍生高效液相色谱法-紫外检测法建立一种测定人血清甜菜碱浓度的方法.方法 以对溴苯乙酰溴和18-冠醚-6溶于乙腈制成衍生液,将其与甜菜碱反应形成的衍生物用Supelcosil LC-SCX色谱柱进行分离.流动相为乙腈∶水体积比90∶10,含16 mmol/L的氯化胆碱,等度洗脱,流速为0.8 ml/min,检测波长为259 nm,利用甜菜碱标准品绘制标准曲线,外标法定量检测20名健康大学生志愿者血清甜菜碱.结果 甜菜碱的测定线性范围为6.25～200.00 μmol/L,回归方程Y=1 568.1X-2 747.5,R2=0.999 8.最低检测限为3.0 μmol/L.批内不精密度为1.88%～3.79%(平均3.24%),批间不精密度为3.14%～6.76%(平均4.39%).方法 回收率为95.89%～102.86%(平均99.16%).结论 成功建立一种检测人血清甜菜碱浓度的方法,适用于实验室及临床常规检测.     

高效液相色谱法测定复方五倍子液中没食子酸的含量

[目的]建立复方五倍子液中没食子酸的含量测定方法.[方法]采用高效液相色谱法,WelchromTM C18柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(15∶85),柱温25℃,流速1.0 mL/min,检测波长为273 nm.[结果]相关系数r=0.9999,平均加样回收率为98.4%,相对标准偏差(RSD)为0.40%,具...     

高效液相色谱法测定血浆中异丙酚浓度

[目的]建立反相高效液相色谱法测定血浆中异丙酚浓度的方法，为临床异丙酚的药理学研究提供科学的分析技术。[方法]用环己烷提取血浆中的异丙酚，用HPLC测定异丙酚含量。色谱柱为YWG—C18柱，乙腈-水(70：30)为流动相，以麝香草酚为内标，用紫外检测，波长254nm。[结果]本方法回收率高，重现性好，线性范围为0．5—10μg/ml，最低检测浓度为50ng/ml。[结论]本方法较为简单，结果准确可靠，适用于异丙酚的药代动力学研究及临床手术过程中异丙酚血药浓度检测。     

高效液相色谱法同时测定血浆同型半胱氨酸及其相关硫醇物浓度方法的建立

目的建立一种柱前衍生反相高效液相色谱-荧光检测法同时测定血浆同型半胱氨酸（homocysteine，Hey）、半胱氨酸（cysteine，Cys）、半胱氨酰甘氨酸（cysteinylglycine，CysGly）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）的方法。方法 以tris-（2-carboxylethyl）-phosphine（TCEP）为还原剂，7-fluorbenzo-2-OX8-1，3-diazole-4-sulfonate（SBD-F）为衍生剂，N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcystine，NAC）为内标，C8柱分离。流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（25 mmo/L，pH 3．0），梯度洗脱，激发波长（kex）380nm，发射波长（hem）510 nm，内标标准曲线法定量。结果Hey、Cys、CysGly、GSH的线性范围分别为1．0—160．0μmol／L，30．0—1 040．0μmol／L，2．0—300．0μmol／L，1．0—130．0μmol／L，具有良好的相关性，r为0．999 4—0．999 9。最低检测限为0．1—2．0μmol/L。日内精密度不超过3．0％，日间精密度除GSH为13．21％外均小于6．0％。平均回收率为87．24％-114．99％。结论本方法准确、灵敏、快速、特异，适合于实验室研究和临床常规检测。     

高效液相色谱法测定鼠脑组织中氨甲喋呤浓度

目的：建立高效液相色谱法(HPLC法)测定鼠脑组织中氨甲喋呤(MTX）浓度的方法。方法：脑组织样加入高氯酸,残渣经流动相溶解后测定,检测波长为306nm。结果：相关系数r=0．9997;线性范围：10．0～0．078125μg．ml^-1;最低定量浓度为0．078125μg．ml^-1;日内RSD≤7．00％,日间RSD≤6．44％,萃取回收率RSD为3．28％～5．48％。结论：本方法简便、可靠,灵敏度高,可用于氨甲喋呤在大鼠脑组织内的检测和药代动力学研究。     

离子交换高效液相色谱法测定糖化血红蛋白的初步评价

目的 评价离子交换高效液相色谱法测定糖化血红蛋白(GHbA1C)的临床应用.方法 采用离子交换高效液相色谱法测定糖化血红蛋白.结果 参考范围在4.1%～6.1%,批间CV≤2.35%,批内CV≤0.81 %.结论 离子交换高效液相色谱法测定糖化血红蛋白(GHbA1C)的准确度高、精密度好、速度快,为临床医生调整糖尿病治疗方案提供了及时可靠的依据.     

高效液相色谱-荧光法测定血清犬尿喹啉酸和色氨酸方法的建立

目的建立同时检测血清犬尿喹啉酸（kynurenic acid，KYNA）和色氨酸（tryptophan，Trp）的高效液相色谱-荧光法。方法采用高效液相色谱在线衍生技术，通过对最佳检测波长、流速、流动相中醋酸锌浓度和乙腈比例等因素的探讨，得出测定Trp和KYNA的最优实验方案，并对其进行方法学评价；测定50名正常人血清KYNA和Trp含量。结果KYNA保留时间约为8．1min，线性范围为1．05～2093nmoL／L，最低检出浓度为0．05nmoL／L，平均回收率为101．19％；Trp保留时间约为11．3min，线性范围为0．49～196μmoL／L，最低检出浓度为0．001μmoL／L，平均回收率为104．43％，二者日内、日间测定的变异系数均小于5％，苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺和犬尿氨酸等物质对该法均无干扰。健康成人血清KYNA和Trp含量分别为（24．25±9．11）nmol／L和（49．05±11．67）μmol／L。结论建立的方法简便、快速、稳定、可行，适用于临床和科研工作。     

高效液相色谱法测定血清甘油三脂的研究

本文研究用高效液相色谱测定血清甘油三脂含量的方法。结果表明 ,用 1,2 ,4 丁三醇作内标 ,2 30nm为测定波长 ,在本文色谱条件下 ,测定血清甘油三脂的含量 ,其结果准确、灵敏、回收率高、操作较简便 ,是测定血清甘油三脂含量较理想的方法     

高效液相色谱法测定血浆同型半胱氨酸

目的 建立测定血浆同型半胱氨酸的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）方法。方法 血浆同型半胱氨酸经巯基乙醇还原后用碘乙酸封闭巯基,。再与邻苯二甲醛（ＯＰＡ）反应完成衍生化,以磺在同型半胱氨酸为内标,经Ｃ１８反相柱进行色谱分离,荧光检测器测定结果。结果测定线性范围达１５０μｍｏｌ／Ｌ,最低检测限为１．０μｍｏｌ／Ｌ日内不精密度３．７－４．２％,日间不精密度３．８－４．３％;方法回收率９３－１０２％。结论本方法     

高效液相色谱法测定血清中25-羟基维生素D3

目的建立测定血清25-羟基维生素D3[25（OH）VitD3]的高效液相色谱（HPLC）法,并评价其应用。方法血清经甲醇沉淀蛋白质,以二氯甲烷-正己烷溶液提取后进行HPLC分析。以25（OH）VitD3标准品外标法建立标准曲线,并检测47名正常健康儿童的血清25（OH）VitD3浓度。结果该方法在10～200μg／L浓度范围内线性关系良好（r=0．9971）,日内变异系数（CV）为3．5％～4．4％,日间CV为3．9％～4.7％。方法回收率为93．4％～106．2％,提取回收率为88．8％～94．1％。正常健康儿童血清25（OH）VitD3夏季参考范围为14．8～34．5μg／L。结论本法具有快速、灵敏、准确和重复性好等优点,可用于临床实验室测定血清25（OH）VitD3浓度。     

高效液相色谱法测定血清葡萄糖

摘要：目的:建立一种测定血清葡萄糖（glucose,Glu）的高效液相色谱法（HPLC）,探讨其能否作为血清Glu测定的参考方法。 方法:以D-半乳糖（D-galactose）为内标物,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白质,在pH 9.1条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）反应,用HPLC测定血清Glu衍生产物、D-半乳糖衍生产物,用标准曲线法定量;对建立的方法进行方法学评价。 结果:本法测定血清Glu的批内变异系数（CV）为0.33%～0.67%,平均0.51%;批间CV为0.02%～0.85%,平均0.38%;总CV为0.47%～1.03%,平均0.68%。回收率为98.22%～101.96%。分析Glu的参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的偏差为-0.928%～0.347%,平均偏差为-0.072%。 结论:初步建立了测定血清Glu的HPLC法;该法准确、精密,有望作为血清Glu测定的候选参考方法。     

高效液相色谱检测全血贮存对血清总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的影响

目的检查全血贮存对血清总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)的影响,并探讨其可能机制。方法建立高效液相色谱(HPLC)方法,测定不同个体全血样品经不同温育后血清TC、总游离胆固醇(TFC)、HDLC和高密度脂蛋白游离胆固醇(HDLFC),计算有关参数或指标并做统计分析。结果建立的HPLC方法平均批内变异系数0.22%～0.51%;全血温育造成血清TC和HDLC变化(平均0.6%～2.1%和2.0%～4.1%),有些个体变化明显(TC>±3%,HDLC>±5%)。结论建立血清TC、TFC、HDLC和HDLFC的精密测定方法;血清TC和HDLC在不同条件下的全血贮存中,受血清体积变化、血细胞-脂蛋白间胆固醇交换或转移等许多复杂因素的影响而发生变化;血脂测定标本应尽量减少不必要的贮存。     

高效液相色谱-荧光检测法在慢性肾功能不全患者血清芳香族氨基酸检测中的临床价值

目的 建立同时测定血清AAA含量的HPLC-FLD法,探讨CRI患者血清AAA含量变化及其临床应用价值。方法血清标本来自于100名健康体检者和80例CRI患者。将CRI患者按2002年美国肾脏基金会(NKF)诊断分期标准进行分期：CKD 2期4例、CKD 3期12例、CKD 4期12例和CKD 5期52例;按CRI不同病因分组：慢性肾炎型32例、糖尿病型36例和高血压型12例。血清经高氯酸去蛋白后,离心取上清液测定,外标法定量。采用Megres C18色谱柱,流动相为乙腈：水（体积比为1∶9）,流速为1.0 ml/min,荧光检测器在不同时间段设定特定波长对血清AAA进行测定。对健康对照组和CRI患者组血清中AAA总量、Tyr、Phe和Trp含量及不同分期和不同病因CRI患者血清Tyr、Phe和Trp含量进行比较,同时评价血清AAA总量诊断CRI的敏感度与特异度。结果Tyr、Phe和Trp线性范围分别为0.550～275.000、3.050 ～1 220.000和0.049～49.000 μmol/L,最低检测限分别为0.014、0.500和0.005 μmol/L,平均回收率分别为100.9％、101.3％和98.5％,日内精密度为2.32％～3.92％（平均为3.13％）,日间精密度为3.18％ ～4.20％（平均为3.58％）。CRI患者组血清AAA总量、Tyr、Trp含量及Tyr/Phe比值分别为(135.74±12.23)、(52.27±8.25)、(21.49±4.25) μmoL/L和[0.87（0.68 ～1.05）],低于健康对照组的(174.47±11.57)、（63.53±4.68）、(44.22±3.67) μmol/L和[0.97（0.94～1.00）],差异均有统计学意义（t=- 14.709、4.452、22.100,U=266.000,P均＜0.05）。不同分期CRI患者Tyr、Phe和Trp含量差异无统计学意义;Tyr含量在慢性肾炎组、高血压组和糖尿病组间差异无统计学意义,Phe在慢性肾炎组与高血压组、慢性肾炎组与糖尿病组间差异有统计学意义（U= 114.00、395.00,P均＜0.05）,Trp在慢性肾炎组与糖尿病组间差异有统计学意义(U=349.00,P＜0.05)。血清AAA总量诊断CRI的敏感度、特异度分别为90％ (72/80)和100％ (100/100)。结论HPLC-FLD法测定血清AAA简便、快速,敏感度高及特异度好,同时测定血清AAA含量对CRI患者的诊断和评价有一定价值。     

高效液相色谱法检测精浆辅酶Q10水平及氧化应激研究

目的建立人精浆中辅酶Q10高效液相色谱测定方法,探讨正常生育男性及不育症患者精浆中辅酶Q10含量水平差异及其与男性不育氧化应激反应的关系.方法精浆样品经甲醇沉淀蛋白后,用正己烷提取辅酶Q10组分,45℃下氮气流吹干后溶解,以Lichrospher C18化学键合硅胶为固定相,异丙醇～甲醇～四氢呋喃(55∶ 39∶ 6)为流动相进行色谱等度分离,在275 nm波长下以辅酶Q9为内标定量检测,并对195例不育症患者和23名正常生育对照男性进行分析.结果在所建立的分析条件下,辅酶Q10及内标辅酶Q9色谱保留时间分别约为5.83 min及4.97 min,峰形清晰对称,与样品中其余内源性物质分离完全,定量准确.辅酶Q10浓度在0.01 ～10.00 mg/L范围线性良好.批间(n=5)及平均批内(n=6)测定的相对标准偏差分别为0.80%和1.81%.样品测定回收率为94.1%～99.0%.对23例正常生育男性及195例不育症患者精浆中辅酶Q10含量测定结果分别为(37.1±12.2) μg/L和(48.5±20.4) μg/L,统计学分析表明两组之间的差异有统计学意义(P<0.01),随着精液中精子数量越少,这种差异性越显著.结论精浆CoQ10水平可作为男性不育研究时一项有用的生化参考指标,其升高或降低能反映生殖系统氧化应激反应状况,为临床治疗和有关男性生殖功能机制研究提供参考指导.     

变性高效液相色谱法筛查间隙连接蛋白2耳聋基因突变

目的　探讨变性高效液相色谱法 (DHPLC)在耳聋基因筛查中的应用价值。方法　应用DHPLC检测 6个家系的 4 8名个体 ,然后进行直接测序。结果　 6个家系中A ,B ,C ,E ,F家系有间隙连接蛋白 2 (GJB2 )耳聋基因的变化 ,F家系表现为 2 35delC突变 ,B家系表现为 2 35delC和 2 32G→A杂合性突变。 79G→A(V2 7I)、341A→G (E1 1 4G)杂合性改变分别为 1 9例和 1 6例 ;纯合性改变分别为 1 0例和 6例。 2种方法的检测结果均为阳性者 30例 ,均为阴性者 1 0例 ;DHPLC阳性 ,测序阴性 1例 ;DHPLC阴性 ,测序阳性 2例。DHPLC方法的敏感性为 95 % ,特异性为 91 %。结论　DHPLC是一种高效、经济、简便、灵敏的耳聋基因筛查技术