自噬相关蛋白EPG5调节的鼻咽癌细胞经电离辐射后自噬机制的研究

目的　研究电离辐射后鼻咽癌细胞CNE1及CNE2中自噬相关蛋白EPG5的表达情况以及EPG5的表达与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系。方法　鼻咽癌CNE1及CNE2细胞株接受不同剂量电离辐射后，用Western Blot法检测自噬相关蛋白EPG5的表达。si RNA转染法特异性敲除epg 5基因后，Annexin V-FITC/PI法检测两株细胞凋亡情况。结果　经不同剂量电离辐射后，CNE1细胞株中EPG5的表达量与放射剂量呈正相关，CNE2细胞株中呈负相关。敲除epg 5基因后，EPG 5表达减少的同时，CNE1细胞株凋亡率明显增加，而CNE2细胞株的凋亡率明显降低。结论  鼻咽癌细胞经过电离辐射后，EPG5的表达可能与肿瘤细胞的分化程度有关，分化程度较低的细胞表达下调，分化程度较高的细胞表达上调。同时分化程度低的细胞EPG5低表达可以减少细胞凋亡，这可能是低分化鼻咽癌产生放疗抵抗的分子机制。     

X射线交错互补修复基因1多态性和EB病毒感染对鼻咽癌细胞基本特性的影响

目的　探讨X射线交错互补修复基因1（X-ray repair cross-complementing gene 1,XRCC1）多态性与EB病毒感染对鼻咽癌细胞基本特性的影响。方法　将鼻咽癌细胞株分组,使之分别表达不同的XRCC1基因型,转染EB病毒,比较转染前后不同基因型鼻咽癌细胞的基本特性,并检测XRCC1蛋白的表达水平。结果　XRCC1不同基因型的鼻咽癌细胞之间基本特性无明显差异,XRCC1蛋白水平无差异。EB病毒感染后,各组鼻咽癌细胞生长加快、增殖能力变强、迁移速度加快、凋亡率降低,XRCC1蛋白水平无明显改变。EB病毒感染后,194位点突变型的鼻咽癌细胞与280、399位点突变型细胞相比,细胞增殖和迁移能力改变程度较小,差异有统计学意义。其他基因型细胞基本特性及XRCC1蛋白水平无差异。结论　EB病毒感染可增加鼻咽癌易感性,EB病毒感染后XRCC1 194位点的Trp突变型基因可能对鼻咽癌有保护作用。     

鼻咽癌细胞6-10B和HNE2放疗敏感性的分析

 目的通过对比鼻咽癌细胞6 10B和HNE2的放疗敏感性，为临床鼻咽癌不同分期放射治疗提供依据。方法鼻咽癌细胞6-10B和HNE2用于放疗敏感性实验检测，通过集落形成实验检测细胞对放疗的敏感程度、流式细胞术检测细胞周期、流式细胞术与Western blot检测细胞凋亡、免疫荧光结合Westen blot检测DNA损伤标志物γ H2AX表达水平。结果集落形成实验结果初步看出HNE2（IC50约3.5 Gy）对放疗的敏感性强于6-10B（IC50约5 Gy）；细胞周期结果可以发现放疗后，两株细胞均出现G2M期周期阻滞；HNE2细胞放疗引起的DNA损伤和凋亡水平均高于6-10B。结论鼻咽癌细胞HNE2对放疗的敏感性强于6-10B，为鼻咽癌的不同分期治疗提供临床参考。     

EB病毒BHRF1基因表达对鼻咽癌细胞增殖周期影响的研究

目的：了解ＥＢ病毒编码ＢＨＲＦ１基因表达对鼻咽癌细胞增殖周期的影响。方法：本研究通过构建ＢＨＲＦ１高表达载体并将其转入鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２细胞中，检测转染后稳定表达ＢＨＲＦ１癌细胞的增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）表达和喜树碱作用前后细胞周期分布的改变。结果：ＢＨＲＦ１的表达可促使癌细胞的ＰＣＮＡ表达下降，Ｇ１期细胞增多，Ｓ期细胞减少；而在喜树碱作用后，ＢＨＲＦ１－ＣＮＥ２细胞的凋亡率明显小于对照组，其Ｇ１期细胞数下降，Ｓ期细胞数升高。结论：ＢＨＲＦ１基因的表达可通过调节细胞周期分布、抑制细胞凋亡的发生以增强细胞的生存能力，而可能与鼻咽癌的发生有关     

EGCG对鼻咽癌细胞株裸鼠移植瘤的放疗增敏作用以及对Survivin表达的影响

目的研究凋亡抑制基因Survivin的表达与EGCG对鼻咽癌CNE 2裸鼠移植瘤放疗增敏作用的关系。方法将低分化鼻咽癌细胞CNE 2接种于4～6周龄的雌性裸鼠皮下,待移植瘤生长至4～6?mm时,随机分为4组,分别采用NS、EGCG［50?mg/(kg·w）］、放疗（15?Gy）、EGCG给药24?h后再行放疗等方法分别处理各组裸鼠,处理前后分别测量裸鼠移植瘤的短径、体积。21?d后处死裸鼠,取出肿瘤并称重,将肿瘤组织分成两份,分别用来进行病理切片TUNEL染色以及RT PCR检测Survivin mRNR的表达。结果EGCG＋放疗对裸鼠移植瘤的生长抑制最为明显,肿瘤生长抑制率为89.3%,消退率为40.0％。与对照组EGCG组、放疗组相比,EGCG＋放疗组的凋亡指数均明显增加（P＜0.05),同时,伴有Survivin mRNR的表达显著下降（P＜0.05）。结论EGCG对鼻咽癌裸鼠移植瘤可能具有放疗增敏作用,这种作用可能与凋亡抑制基因Survivin的表达下调有关。     

鼻咽癌放疗后鼻黏膜组织形态学的研究

目的:研究放疗对鼻咽癌患者鼻黏膜组织形态学的影响.方法:按患者纳入条件和剔除条件选择鼻咽癌患者47例,于放疗前后各取中鼻甲黏膜组织1块,采用常规苏木精-伊红染色及PAS染色,光镜下观察鼻咽癌放疗前后中鼻甲黏膜之上皮层的纤毛和细胞、基底层及固有层的腺体和腺细胞的改变;同时随机抽取6例用扫描电镜和透射电镜观察其上皮层的纤毛及纤毛柱状上皮细胞的变化.结果:放疗前,47例患者鼻黏膜组织形态均正常;放疗后,6例无明显变化,41例出现不同层次和不同程度改变.光学显微镜下见:上皮细胞及纤毛脱落,基底膜增厚,固有层的浆液腺减少,黏液腺增多,血管扩张、充血、增生,血管内皮细胞损伤等;扫描电镜下见:纤毛结构异常,出现脱落、粘连成簇状等现象;透射电镜下见:上皮细胞的细胞核形态不规则、固缩,细胞质出现空泡,细胞器明显减少等.结论:鼻咽癌放疗后鼻黏膜组织形态受到不同程度破坏,这可能是鼻咽癌放疗后并发鼻及鼻窦炎的病理学基础.     

抑癌基因PTEN在鼻咽癌组织中的表达及意义

目的 :检测抑癌基因PTEN在鼻咽癌组织的表达缺失情况 ,探讨PTEN与鼻咽癌发生发展之间的关系。方法 :采用免疫组织化学SABC染色法观察鼻咽癌旁正常组织和鼻咽癌组织中PTEN蛋白的表达 ,并分析其与病理组织类型、病理分级和临床分期的关系。结果 :PTEN在鼻咽癌旁正常组织的表达缺失率 (13.3% )低于鼻咽癌组织的表达缺失率 (47.8% ) ,其差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;鼻咽鳞状细胞癌PTEN的表达缺失率(5 8.1% )高于分化型和非分化型非角化癌 (30 .8% ) ;高、中、低分化的鼻咽鳞状细胞癌中 ,PTEN的表达缺失率依次递增 (分别为 2 5 .0 %、6 3.2 %、83.3% ) ;鼻咽癌临床Ⅲ～Ⅳ期的PTEN的表达缺失率 (78.1% )高于临床Ⅰ～Ⅱ期 (2 1.6 % )。结论 :PTEN在鼻咽癌的发生及发展过程中有表达缺失 ,且与病理类型、病理分级、临床分期有关。     

细胞增殖和凋亡在鼻咽癌放疗中的预后价值

目的：研究增殖和凋亡在放射治疗鼻咽癌中的预后价值。方法：回顾性分析42例放疗未控和根据临床病理与之配对的42例放疗治愈鼻咽癌的细胞增殖和凋亡情况，应用胶质银，原位细胞凋亡试剂盒及有丝分裂细胞进行检测。结果：放疗治愈组与未控组之间AnNOR(NOR核仁组成区嗜银蛋白）颗粒计数，凋亡细胞数，凋亡细胞数与分裂细胞数之比值（A／M）有显著差异，结论：AgNOR颗粒计数，凋亡细胞数以及A／M可作为预测放射治疗鼻咽癌预后的参考指标。     

顺铂增加BCL-2蛋白高表达的鼻咽癌细胞凋亡

目的:通过对3种不同鼻咽癌细胞的BCL-2蛋白表达、细胞存活率和凋亡率的观察,探讨提高顺铂治疗鼻咽癌疗效的新方法。方法:采用Western blot技术检测3种不同鼻咽癌细胞CNE1、C666-1及SUNE1的BCL-2蛋白的表达情况;采用MTT法及流式细胞技术,检测并比较顺铂对3种鼻咽癌细胞的细胞存活率和凋亡率的影响。结果:BCL-2蛋白在CNE1及C666-1细胞上高表达,在SUNE1上几乎无表达(P<0.05);经顺铂干预后,CNE1及C666-1细胞的细胞凋亡率明显升高,存活率明显低于对照组(P<0.05);SUNE1细胞的细胞凋亡作用较弱(P<0.05)。结论:BCL-2蛋白在不同类型的鼻咽癌细胞上表达量不同,提示顺铂对BCL-2蛋白高表达的鼻咽癌细胞的杀伤作用更强。     

喉癌自发性与放射诱发细胞凋亡关系的研究

目的:探讨喉癌放疗前及放疗中细胞凋亡的变化及意义。方法:采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化脱氧尿苷三磷酸缺口原位末端标记技术(TUNEL),检测27例喉癌患者放疗前及放疗中病变部活体组织癌细胞的凋亡率(AR)。结果:喉癌放疗前的AR为(21.0±0.7)%,放疗量分别为10、30及60Gy时的AR分别为(60.0±1.5)%、(42.0±1.3)%及(25.0±1.9)%,明显高于放疗前(P<0.05)。结论:检测喉癌患者活检癌细胞的AR有助于判断放射敏感性。     

Maspin蛋白在鼻咽癌放射敏感CNE2细胞株中的表达分析

目的探讨放射敏感鼻咽癌CNE2细胞株在放射条件下丝氨酸蛋白酶抑制剂Maspin蛋白的反应性变化,分析鼻咽癌放射作用的分子机制。方法采用MTT比色法检测放射线对鼻咽癌CNE2细胞株生长的影响,胎盼蓝染色法检测CNE2细胞增殖,流式细胞术检测CNE2细胞放射后的凋亡及周期改变,Western blotting分析Maspin蛋白的表达。结果鼻咽癌CNE2细胞株放射后,细胞周期重新分布,出现较多的G2/M期细胞以及较少的G0/G1期细胞;增殖受到抑制、细胞凋亡明显、Maspin蛋白表达上调,且其上调与细胞凋亡率增高呈现一致性改变,也与细胞周期分布改变相关。结论鼻咽癌CNE2细胞对放射线敏感、容易被诱发凋亡;细胞周期参与了放射诱导的CNE2放射反应调节;放射提高了CNE2细胞的Maspin蛋白表达,提示该蛋白参与了CNE2细胞的放射反应;Maspin蛋白表达提高涉及CNE2细胞周期和凋亡改变,是一个值得深入研究的鼻咽癌放射敏感相关分子。     

放疗诱导鼻咽癌细胞株CNE1热休克蛋白高表达

目的鼻咽癌是一种以放射治疗为主的头颈肿瘤,但部分鼻咽癌对放疗耐受。为了解鼻咽癌放疗耐受机制,本实验拟初步探讨人高分化鼻咽癌细胞株CNE1放疗后的蛋白质改变。方法利用固相pH梯度二维凝胶电泳,建立CNE1放疗前后总蛋白质2DE图谱,利用MALDI TOF MS及数据库搜索初步分析和鉴定部分放疗前后差异蛋白质点。结果高分子量酸性蛋白质在CNE1放疗后20min高表达,其中大多为热休克蛋白质HSPs(heatshockproteins,HSPs)。结论放射能诱导CNE1的热休克蛋白高表达,它们可能与鼻咽癌放疗耐受有关。     

鼻咽癌放疗前后鼻窦炎发生机制及其防治措施

目的:分析鼻咽癌(NPC)患者放疗前后鼻窦炎发生的影响因素,并探讨防治放疗后继发鼻窦炎的措施和手段。方法:回顾性统计分析231例NPC患者放疗前后发生鼻窦炎的影响因素及部分患者的治疗效果。结果:231例NPC患者中,放疗前98例患有鼻窦炎,放疗后165例发生鼻窦炎,其中T分期较高、鼻腔有解剖变异的患者放疗后鼻窦炎发生率较高,有鼻咽局部治疗的患者鼻窦炎发生率较低,放疗前就有鼻窦炎的患者,绝大部分患者放疗后不仅没有得到改善反而有所加重。结论:放疗前鼻窦炎的发病率随临床分期的加重而递增,窦口鼻道复合体的解剖变异、鼻腔解剖变异仍然是其发生的重要因素。对于放射治疗的NPC患者,T分期较高、解剖变异、鼻咽局部治疗以及放疗状况与放疗后鼻窦炎的发生有关,加强放疗前鼻窦炎的治疗以及放疗中、后期鼻咽局部治疗可减少放疗后鼻窦炎的发生。     

鼻咽癌病人放射治疗前后天然杀伤细胞活性、白细胞介素-2水平改变的研究

目的：探讨鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)病人放射治疗前后天然杀伤细胞(NK细胞)活性、白细胞介素—2(IL-2)水平的变化和肿瘤复发转移的关系。方法：选择139例首诊的NPC病人为NPC组，45例健康成人为对照组，两组间性别及年龄无显著差异。NPC病人根据肿瘤有无复发转移又分为两组，均予以^60Coγ射线外照射DT68—80Gy，分别检测放疗前和放疗后(36个月内)及对照组的NK细胞活性及IL-2水平，观察肿瘤复发转移的情况。结果：鼻咽癌病人放疗前、后0-30个月内NK细胞活性及IL-2水平动态观察均明显低于正常对照组(P＜0．05)，至放疗30个月后NK细胞活性及IL-2水平恢复近正常水平。肿瘤复发转移者其NK细胞活性及IL-2水平明显低于无复发转移者(P＜0．05)。30个月内肿瘤复发转移率为85．7％(60/70)。结论：NPC病人免疫功能状况与肿瘤复发转移关系密切。动态观察和评价NK细胞活性及IL-2水平对判断NPC是否复发和转移有一定的指导意义。     

反义细胞角蛋白13基因对人鼻咽癌HNE1细胞移植瘤放疗敏感性的影响

目的　观察反义细胞角蛋白13（cytokeratin 13,CK13）基因对鼻咽癌人嗜中性细胞弹性蛋白酶1（human neutrophil elastase,HNE1）细胞移植瘤放疗敏感性的影响。方法　将HNE1细胞株分为A组（未经处理）、B组（转染慢病毒空载体）,C组（转染慢病毒反义CK13a）和D组（转染慢病毒反义CK13b）共4组建立相应动物模型,放疗后采用流式细胞仪、免疫组化、PCR、Tunel法及Westernblotting检测。结果　细胞周期检测发现转染慢病毒质粒的C组和D组在放疗后与对照组比较G2/M期阻滞时间显著延长;免疫组化结果显示C组和D组移植瘤中CK13表达下降;Tunel法检测细胞凋亡坏死率发现C组和D组细胞凋亡率明显降低;Western blotting检测发现caspase-3凋亡标志物下降。PCR检测发现CDC25mRNA水平明显降低。结论　反义CK13基因通过调控细胞周期和凋亡可降低鼻咽癌HNE1移植瘤的放疗敏感性,并与caspase-3凋亡途径和CDC25信号通路相关。     

Flow cytometric analysis of BHRF1 expression prohibiting apoptosis induced by radiation.

The Epstein-Barr virus gene BHRFI has homology with proto-oncogene bcl-2, which can protect cells from apoptosis. In order to investigate the effect of BHRF1 expression on the anti-apoptotic ability of nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells after irradiation, a high-BHRF1 expression vector was constructed and transfected into the NPC cell line CNE2. Then, the alteration of proliferation and apoptosis in the cells was tested by flow cytometry after cobalt 60 irradiation. The results showed that BHRF1 expression could increase G1 delay and decrease the cell percentage in S phase before irradiation, and reduce the apoptotic rate of CNE2 cells and increase the cell percentage in S phase after irradiation. The results suggest that BHRF1 expression is able to alter the cell cycle and protect CNE2 cells from apoptosis induced by radiation.     

Malignancies of the ear in irradiated patients of nasopharyngeal carcinoma

Objectives/Hypothesis: To report on the clinical profiles and treatment experiences of patients with second primary ear malignancy after treatment of nasopharyngeal carcinoma (NPC). Study Design: Retrospective case series. Methods: A retrospective review of the clinical outcomes and pathology of 11 irradiated NPC patients who subsequently had second primary malignancies of the ear at a single institution. Results: Ten tumors were squamous cell carcinoma and one tumor was chondrosarcoma occurring within the radiation field of previous treatment for NPC. The interval between previous radiotherapy and diagnosis of ear malignancy was 3 to 27 years with a median time of 17 years. Six tumors were located in the external auditory canal, two in the middle ear cavity, two in the periauricular region and one in the mastoid cavity. Four patients underwent surgery, and the other seven patients underwent surgery plus adjuvant radiotherapy. The 3‐year disease‐free and overall survival rates were 30.3% and 20%, respectively. Conclusions: Postirradiated malignancy of the ear is extremely rare, but is one of the causes of death for NPC long‐term survivors despite curative‐intended treatment with surgery plus adjuvant radiotherapy is instituted.     

Oral care experiences with 181 nasopharyngeal carcinoma patients receiving radiotherapy in a Taiwanese hospital

OBJECTIVE: The aim of this study is to present our experiences of the oral care of a cohort of nasopharyngeal carcinoma (NPC) patients before receiving radiation therapy in our institution. PATIENTS AND METHODS: A total of 181 (141 males and 40 females) pre-radiation therapy NPC patients who underwent regular recall dental examination and treatment according to a standard protocol of our Dental Department were collected. RESULTS: One hundred and twelve (68.71%) did not have disease recurrence and only 12 patients (7.36%) had metastasis. The rate of expire was 14.92%. The average number of carious tooth was 2.45 (range: 0-16) whereas the mean number extracted tooth was 2.65 (range: 0-14). One hundred and sixty-four patients were recorded to have suffered from oral mucositis. About 7% patients had oral mucositis in the 1st week, but about 50% of patients developed oral mucositis from the 2nd week to the 3rd week after the beginning of radiotherapy. One hundred and thirty-three patients had records of oral infection. About 67% of the patients suffered from candidiasis during radiotherapy. Xerostomia was found in almost 80% of patients during radiation therapy. The mean number of carious tooth of the patient population during/after radiation therapy was significantly higher than the patient population before radiation therapy (7.18+/-7.10 vs. 2.45+/-2.85; chi2=46.32, p<0.0001). Eighty-four patients were regularly followed-up and the rate of lost follow-up was about 53.6%. One hundred and eighteen patients had custom-made fluoride trays fabricated. As comparing patients with fluoride trays to those without, the former had a significantly higher rate of dental follow-up compliance (chi2=48.56, p<0.0001). CONCLUSIONS: The data and protocol presented in this study would enhance the care and life quality of the NPC patients. Our study showed that a pre-radiotherapy dental care regimen should be conducted simultaneously with the patient's treatment plan to treat the disease. Fluoride tray fabrication is recommended for dentate NPC patients receiving radiation therapy, as it may enhance compliance with dental follow-up.     

鼻咽癌放疗后并发鼻窦炎

目的 探讨鼻咽癌患者在放射治疗后鼻窦炎的发生、发展及其影响因素.方法 回顾性分析蚌埠医学院第一附属医院2000年～2005年256例鼻咽癌患者资料,通过比较放疗前、后鼻咽部CT,总结放疗前无鼻窦炎症状而放疗后发生鼻窦炎的情况.结果 放疗前鼻窦炎发生率为43.8％ (112/256),放疗前无鼻窦炎症状而放疗后出现鼻窦炎...