二氧化硅活化巨噬细胞中核转录因子早期生长反应基因-1的表达

目的 研究二氧化硅(SiO2)刺激的巨噬细胞中核转录因子早期生长反应基因-1(early growth response gene-1,Egr-1)表达和定位分布的动态变化,探讨Egr-1在硅沉着病发病机制中的作用。方法 用免疫组织化学方法观察大鼠实验性硅沉着病组织中肺巨噬细胞Egr-1表达的动态变化;用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、Western印迹和免疫荧光方法分别检测体外SiO2刺激的巨噬细胞系RAW264．7中Egr-1 mRNA、蛋白表达及其定位。结果 大鼠实验性硅沉着病中肺巨噬细胞Egr-1表达明显上调,阳性反应强度在14d时达到高峰。体外SiO2作用RAW264．7细胞15～240min,Egr-1 mRNA表达均明显增高,峰值位于15min,480min时仅微量表达。Egr-1蛋白于60min时核移位最明显,持续至120min,随后减少;在60～120min时间内,Egr-1核蛋白及总蛋白的表达量亦达峰值,其后开始下降。结论 SiO2能激活巨噬细胞中核转录因子Egr-1,提示Egr-1可能在硅沉着病的发生发展中起重要的调控作用。     

核转录因子在二氧化硅刺激巨噬细胞产生细胞因子中的作用

目的 探讨二氧化硅(SiO2)刺激巨噬细胞生成肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β1增多的分子机制及核转录因子Egr-1和NF-κB介导的信号通路在硅肺发生发展中的作用。方法 Egr-1或NF-κB抗体和反义寡核苷酸分别处理巨噬细胞后,用ELISA法检测细胞上清液中TNF-α蛋白的含量;免疫细胞化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测细胞中TGF-β1蛋白的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α和TGF-β1mRNA的表达。结果 与非抗体处理组比较,SiO2刺激下抗体处理组巨噬细胞生成TNF-α蛋白和TGF-β1蛋白减少,其mRNA表达也相应下降(P<0.05);与未转染和转染正义寡核苷酸的细胞相比,Egr-1或NF-κB反义寡核苷酸转染细胞后,在SiO2刺激下巨噬细胞生成TNF-α蛋白和TGF-β1蛋白减少,二者mRNA表达也相应下降(P<0.05)。结论 SiO2刺激巨噬细胞生成TNF-α和TGF-β1可能主要是经核转录因子Egr-1和NF-κB介导,Egr-1与NF-κB抗体和反义寡核苷酸的应用可能会导致早期肺泡炎的活动性下降,延缓或阻止肺纤维化的形成。     

早期生长反应基因-1的表达与射线诱导胶质母细胞瘤凋亡的相关研究

目的 研究Egr-1基因在胶质母细胞瘤细胞放射前后的表达变化和放射敏感性的研究.方法 培养人恶性神经胶质母细胞瘤(GBM)细胞系T98G,分别提取4Gy剂量射线照射前及照射后不同时间点细胞的总RNA,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测Egr-1表达水平;.收获4Gy剂量射线照射后0、4、8、12、24和36h的细胞,采用细胞增殖抑制实验,及流式细胞术进行细胞周期和细胞凋亡检测.结果 T98G细胞在照射后Egr-1表达水平与对照组比较有显著差异(P =0.017);T98G细胞在射线照射后的生长抑制率与对照组比较有显著差异(P=0.026);射线照射后0、4、8、12 h细胞S期比例逐渐减低,G0/G1期比例逐渐升高,并在照射后12 h达到峰值,G2/M期无明显变化,照射后12、24、36 h细胞S期比例逐渐升高,G0/G1期比例逐渐减低,G2/M期无明显变化,各组之间相比,差异有统计学意义(P=0.035).射线照射后0、4、8、12h细胞凋亡率逐渐升高,并在照射后12 h达到峰值,照射后12、24、36 h细胞凋亡率逐渐降低,各组之间相比,差异有统计学意义(P =0.019).结论 通过射线诱导Egr-1基因表达而引起细胞周期和细胞凋亡的变化;射线诱导的Egr-1基因表达水平与射线诱导的细胞凋亡成正相关.     

转铁蛋白受体1与早期生长反应因子4在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

为研究转铁蛋白受体1(transferrin receptor type 1,TfR1)与早期生长反应因子4(early growth response protein 4, EGR4)在宫颈癌(uterine cervical carcinoma, UCC)组织中的表达水平,并分析其与UCC临床病理分期的相关性,选取2012年3月至2018年5月于武汉市第四医院就诊的慢性宫颈炎患者33例、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)患者78例、宫颈鳞癌患者63例。采集宫颈炎症和癌变组织,采用免疫组织化学法检测组织中TfR1与EGR4的表达水平,并分析两者之间的相关性及其与宫颈鳞癌临床病理分期的关系。结果显示,TfR1与EGR4在慢性宫颈炎、CIN及宫颈鳞癌组织中均有表达,其中在慢性宫颈炎组织中的表达水平最低(分别为6.1%、9.1%),而在CIN组织中的表达水平随分期的增加而上升,在宫颈鳞癌组织中的表达水平最高(分别为74.6%、57.1%)。相关性分析显示,TfR1与EGR4的表达呈正相关(r_s=0.695,P0.001),而两者表达水平均与患者年龄、肿瘤大小无关;TfR1的表达水平在不同国际肿瘤学会和国际妇产科协会(the International Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO)分期和分化程度患者中存在差异(χ~2=16.937,P0.001;χ~2=8.051,P=0.018),EGR4的表达水平则仅在不同FIGO分期患者中不同(χ~2=8.974,P=0.003)。提示在宫颈鳞癌的发生、发展过程中TfR1与EGR4起着重要作用,其中TfR1的表达随着肿瘤细胞分化程度的降低、FIGO分期的增加而上升,EGR4的表达水平则仅随FIGO分期的增加而上升。     

p38丝裂原活化蛋白激酶对严重烧伤大鼠肝脏激活蛋白-1和核因子-κB的影响

目的观察严重烧伤后肝脏p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen—activated protein kinase，MAPK）对激活蛋白（activating protein，AP）-1和核因子（nuclear factor，NF）-κB的影响。方法采用30％TBSAⅢ度烫伤动物模型，健康成年的雄性SD大鼠24只，随机分为假烫组、烧伤对照组和烧伤＋SB203580组。观察烧伤24h后肝脏IκBα含量的变化，并采用凝胶电泳迁移率变化分析（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）法检测肝脏AP-1和NF-κB DNA结合活性的变化。结果大鼠烧伤24h后肝脏IκBα含量明显下降（2086±684 vs 4138±1160，P〈0．05），肝脏AP-1和NF-κB DNA结合活性均显著增强，使用p38MAPK抑制剂SB203580能显著抑制肝脏AP-1 DNA结合活性的上升（469±84 vs 1306±486，P〈0．01），但对肝脏IκBα含量和NF-κB DNA结合活性的变化无明显影响。结论严重烧伤后，肝脏中活化的p38MAPK通过激活转录因子AP-1进而引起细胞因子的产生，在烧伤后肝损伤的发生中起重要作用，p38MAPK这一作用与IκBα降解引起的NF-κB DNA结合活性增强无关。     

p38丝裂原活化蛋白激酶通路介导的早期生长反应基因-1活性与乳腺癌细胞表柔比星耐药性的关系

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路介导的早期生长反应基因(EGR)-1活性与乳腺癌细胞表柔比星耐药的关系.方法 SB203580(15 μmol/L)干预后,激光共聚焦显微镜观察;流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、凝胶电泳迁移率法(EMSA)、RT-PCR及Western blot分别检测耐药MCF-7/Adr及亲本MCF-7细胞内磷酸化p38MAPK蛋白表达、细胞凋亡及细胞内表柔比星浓度、EGR-1蛋白活性改变、细胞对表柔比星敏感性;EGR-1 mRNA、P糖蛋白、磷酸化p53及p38蛋白表达.结果 p38MAPK通路激活的MCF-7/Adr细胞经SB203580(15 μmol/L)干预24和48 h后,(1)MCF-7/Adr细胞(早+晚期)凋亡率分别由(0.54±0.17)%和(0.81±0.16)%提高为(25.36±1.17)%和(38.21±1.25)%,P<0.05,并呈一定时间依赖性;(2)MCF-7/Adr细胞的平均荧光强度分别为(32.45±2.36)及(41.66±3.12),均高于空白对照组及DMSO组MCF-7/Adr细胞的(14.17±1.45)及(16.28±0.63),P<0.01;MCF-7/Adr细胞对表柔比星药物的耐受性显著降低;(3)增加了MCF-7/Adr细胞的EGR-1活性,IC50分别为(21.53±2.17)和(8.77±1.02),低于空白对照组(40.74±2.56);伴随p38MAPK通路活性抑制和EGR-1 mRNA表达增加,磷酸化p53蛋白表达显著上调,而P糖蛋白显著下调.结论 p38MAPK通路与乳腺癌表柔比星耐药密切相关,可能与p38MAPK通路介导的EGR-1表达相关,EGR-1激活抑制了其下游耐药基因转录,从而使表柔比星耐药得以逆转.     

大鼠细胞因子信号转导抑制因子-1基因的原核克隆表达和免疫学分析

目的 克隆表达大鼠细胞因子信号转导抑制因子-1基因(SOCS-1).方法 将大鼠SOCS-1全长编码基因的PCR产物,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)-ratSOCS-1.转化大肠埃希菌BL-21/DE3,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,应用镍离子金属螯合剂亲和层析柱从表达产物中纯化重组蛋白,通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对表达产物和重组蛋白进行鉴定.应用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,抗体滴度达到1:10000以上后进行末次免疫,2周后心脏取血、测定滴度,分离制备免疫血清.用红细胞裂解法制备大鼠外周血白细胞裂解全蛋白.将阴性血清(未用重组蛋白免疫的新西兰大白兔的血清)、免疫血清及兔抗组氨酸标签抗体转入各蛋白条带,用Western免疫印迹检测重组蛋白的免疫学活性.结果 PCR、双酶切及DNA测序分析均表明重组质粒pET-28a(+)-ratSOCS-1构建成功.SDS-PAGE结果可见转化了重组质粒的大肠埃希菌全菌和经超声裂解后的菌体沉淀的样品均在相对分子质量约26 000处有一明显的蛋白条带,经亲和层析获得的纯化重组蛋白有特异的单一条带与上述条带一致,而在超声裂解后的菌体上清中相同位置却未见有蛋白表达条带.Western免疫印迹表明重组蛋白、大鼠外周血白细胞裂解蛋白中相对分子质量约24000的蛋白条带、兔抗组氨酸标签抗体均可被免疫血清识别,分别出现清晰的相对分子质量26000、24 000、26000的反应条带,表明其具有免疫活性.结论 SOCS-1基因可以在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得表达,其纯化重组蛋白具有良好的抗原性和免疫活性.     

内质网应激中活化转录因子6通路及相关调控因子对未折叠蛋白反应的调控

目的内质网应激在多种疾病的发病机制中起到关键作用,持续或强烈的内质网应激反应可诱导细胞凋亡。作为一种内质网跨膜蛋白,活化转录因子6(ATF6)可以感受内质网应激并传递信号诱导未折叠蛋白反应。我们主要对ATF6通路以及其调控凋亡的机制进行综述,重要概述了相关激活剂和抑制剂,希望能为一些神经退行性疾病的治疗提供参考。     

撤除粒-巨噬细胞集落刺激因子对TF-1细胞生长的影响

采用MTT实验测定撤除细胞因子后TF—1细胞的增殖活性，经流式细胞仪、透射电镜观察撤除细胞因子对TF—1细胞凋亡的作用及其形态学变化。采用荧光微孔板读数仪测定调亡过程中Caspase—3活性的改变。结果发现，撤除细胞因子后48h，细胞存活率为正常培养时的48．8％；电镜显示TF—1细胞出现了凋亡典型的变化。细胞凋亡率在撤除因子后24h、48h时分别为21．23％和71．36％，TF—1细胞被阻滞在G0／G1期。细胞内Caspase-3活性在撤除因子后12h、36h时明显升高，荧光度分别为6321和17823。结果表明，撤除因子后可导致TF—1细胞凋亡，Caspase-3活化参与了此凋亡过程。另外通过MTT实验观察到一种新型造血刺激因子粒—巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)／白细胞介素3(IL-3)融合蛋白可维持TF-1细胞生长。     

高速枪弹压力波调控内皮细胞ET—1的信号通路

目的和方法：以高速枪弹压力波致伤培养细胞为实验模型，以特异的Ｇ蛋白和肌醇磷脂代谢抑制剂作用培养内皮细胞，力图从分子创伤学角度探讨压力波调控ＥＴ－１的信号通路。结果：磷脂酶Ｃ抑制剂ｎｅｏｍｙｃｉｎ作用内皮细胞，明显消除压力波对ＥＴ－１释放及表达的刺激作用。Ｇ蛋白抑制剂ＧＤＰ－β－Ｓ则无明显作用。蛋白激酶Ｃ抑制剂ｓｌａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ对压力波作用后ＥＴ－１基因表达增强有较强的抑制作用。结论：高速枪弹压力波对内皮细胞ＥＴ－１的调控可能通过某种直接途径（而非Ｇ蛋白介导）激活肌醇磷脂代谢，从而生成ＩＰ３和二酰基甘油。ＩＰ３可能参与早期ＥＴ－１释放，二酰基甘油对ＰＫＣ的激活参与了ＥＴ－１基因表达的调控。     

猪肝部分切除后不同部位血管的血清及肝细胞生长因子对原代肝细胞生长的影响

目的和方法：观察猪肝部分切除后２４、４８和７２ｈ颈外静脉及７２ｈ肝静脉和门静脉的血清，以及术后７２ｈ从再生肝制得的肝细胞生长因子（ｐｉｇｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＲＨＧＦ）和它们的不同浓度对体外原代培养肝细胞生长的影响。结果：加入术后上述静脉血清均具有明显的促进体外培养肝细胞生长的作用。其中肝静脉血清的作用最强、门静脉血清的次之，颈外静脉血清的作用居第三，而且当加入浓度上升至８０％时，它们的促肝细胞生长作用与５０％浓度相比均无显著降低，相反，加入术前颈外静脉血清浓度达８０％时，其刺激肝细胞生长作用则明显降低。ＰＲＨＧＦ的促进肝细胞生长作用在一定范围内呈剂量依赖性增强。当加入浓度为０３４ｍｇ蛋白质／孔时，达到顶峰，此后即逐渐下降。加入浓度为０４９ｍｇ蛋白质／孔时，则出现抑制效应。结论：术前正常猪颈外静脉血清和ＰＲＨＧＦ除有刺激肝细胞生长作用外，尚有抑制肝细胞生长的效应，当所用浓度增加达到一定值时，即对原代培养肝细胞生长呈现抑制效应     

TGF-β/Smad信号转导通路及其调控机制的研究进展

转化生长因子-β(TGF-β)超家族在胚胎发育和细胞的分化中具有多方面的生理功能,调控基因十分广泛.Smads蛋白是TGF-β超家族表达细胞内重要的信号转导和调控分子.多种DNA结合蛋白可以与Smads结合,直接影响其所调控基因的差异.Smads蛋白在DNA共结合因子辅助下,招募转录激活因子或转录抑制因子调控靶基因的转录.     

携带靶向干扰小鼠早期生长反应基因1短发夹RNA的慢病毒载体转染小鼠视网膜的干扰效率研究

目的 构建携带绿色荧光蛋白(GFP)和靶向干扰早期生长反应基因1(Egr-1)短发夹RNA(shRNA)共表达的慢病毒载体,转染小鼠视网膜组织,观察其对Egr-1基因的干扰效率.方法 针对已经筛选确定的Egr-1基因shRNA有效靶序列,构建携带GFP和靶向干扰Egr-1 shRNA的慢病毒载体LV-shRNA(Egr...     

生长激素和胰岛素样生长因子1在Lewis侏儒模型大鼠颞叶皮质中的表达

BACKGROUND:Insulin-like growth factor-1(IGF-1), a main active factor in growth hormone (GH), plays various biological functions, such as improving cognitive ability and anti-apoptotic action. OBJECTIVE:To detect the expressions of GH and IGF-1 in the temporal cortex of Lewis dwarf rats, and to explore the effect of different concentrations of GH on the differentiation of hippocampal nerve stem cells (NSCs). METHODS:Lewis dwarf rats aged 11(adult) and 20 (senile) month olds and normal wild-type rats were euthanized by decapitation, underwent the craniotomy quickly, and the temporal cortex in the cold saline was extracted. GH and IGF-1 levels were detected using western blotting. After isolation, purification and identification of the rat hippocampal NSCs, the effect of GH in different concentrations (10, 30, 90 μg/L) on the NSCs differentiation was determined at 96 hours after culture. RESULTS AND CONCLUSION:The GH level in the temporal cortex did not differ significantly among rats (P > 0.05). While the IGF-I level in the temporal cortex of Lewis dwarf rats was significantly higher than that of the wild-type rats (P < 0.05). The GH level in the temporal cortex of adult female Lewis dwarf rats was significantly lower than that of the male rats (P < 0.05). Immunofluorescence showed that the proportion of β III-tubulin-positive neurons was significantly higher than that in the control group (P < 0.05) after the hippocampal NSCs and precursor cells cultured for 96 hours with GH (30 μg/L), but there was no significant difference between the control group and treatment group with GH of 10 or 90 μg/L. These results suggest that GH and IGF-I are expressed in the temporal cortex of both Lewis dwarf and wild-type rats which are independent from pituitary GH and the peripheral circulating IGF-1. Additionally, GH can promote the differentiation of hippocampal NSCs and precursor cells into neurons. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程