灵芝孢子提取物对Lactacystin致PC12细胞损伤的保护作用

[目的]探讨灵芝孢子提取物对Lactacystin诱导PC12细胞损伤的保护作用。[方法]体外培养PC12细胞,建立Lactacystin诱导PC12细胞损伤的模型,观察细胞形态,用CCK-8法检测细胞活力,annexin V-FITC/PI流式细胞法检测细胞调亡。[结果]用不同浓度的灵芝孢子提取物处理PC12细胞时,细胞存活率与对照几乎一致,并未表现出细胞毒性。经20μmol/L的Lactacystin处理24 h后,PC12细胞活力比对照组降低,仅为对照组的63.2%。模型组经不同浓度的灵芝孢子提取物预处理后,细胞活力明显提高,其保护作用随浓度升高而升高。Lactacystin诱导PC12细胞凋亡,处理24 h后细胞凋亡率为48.86%,经灵芝孢子提取物处理后,细胞凋亡率明显降低。[结论Lactacystin能诱PC12细胞凋亡,灵芝孢子提取物能对Lactacystin致PC12细胞损伤有一定的保护作用。     

原儿茶酸对β-淀粉样蛋白诱导神经细胞损伤的保护作用研究

目的 通过β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)处理SH-SY5Y细胞或原代海马神经元建立AD细胞模型，探讨原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)对Aβ损伤后的神经细胞的保护效应及其可能机制。方法 应用MTT法筛选Aβ_25-35损伤SH-SY5Y细胞的浓度，并筛选PCA作用于Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞的适宜浓度。通过DCFH-DA染色和JC-1染色探究PCA对Aβ_25-35损伤的细胞内ROS水平和线粒体膜电位的影响。结果 Aβ_25-35损伤SH-SY5Y细胞适宜的造模条件为10μmol/L处理24 h;800μmol/L的PCA对Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞保护效果最佳(P<0.001)。Aβ_25-35处理导致原代海马神经元细胞内ROS水平升高(P<0.001)而线粒体膜电位有降低趋势(P=0.287);PCA干预后，原代海马神经元的细胞内ROS水平显著降低(P<0.01)，线...     

β-淀粉样蛋白在阿尔茨海默病中的研究进展

随着人类寿命的普遍延长,阿尔茨海默病(AD)的发病率也逐渐增加.AD患者大脑中老年斑的主要成分β-淀粉样蛋白可能是该病发病机制中的起始因素和关键环节.因此,对于β-淀粉样蛋白的产生、代谢及其如何引起AD的机制和临床防治研究已经成为国内外关注的热点.本文就近年来β-淀粉样蛋白在AD中的研究进展予以综述.     

丙烯醛对PC12细胞毒性作用的初探

摘要:目的　实验以PC12细胞系为实验对象进行研究,探讨丙烯醛对其毒性作用及其特征,为丙烯醛对AD的发病机制研究提供依据。方法　通过细胞急性毒性实验测得其LC50;测定不同浓度丙烯醛处理后的细胞内总GSH含量和caspase 3酶活性,并通过western blot检测caspase3蛋白质在不同浓度丙烯醛处理后的表达情况。结果　经CCK-8毒性实验和集落形成实验测定丙烯醛LC50分别为29.91 μM、21.94 μM;不同浓度丙烯醛处理24 h后可引起细胞内总GSH的下降;不同浓度丙烯醛处理24 h后细胞内caspase3酶活性未见明显上调,但短时间处理（2 h、4 h和8 h）可见明显上调倾向;western blot实验可见不同浓度丙烯醛处理8 h后有caspase3蛋白表达上调,而处理24 h后caspase3蛋白表达下降。结论　丙烯醛对PC12细胞有较强的急性毒作用,其作用机制可能与丙烯醛诱导的细胞内GSH的耗竭和细胞凋亡以及细胞坏死有关。     

中性内肽酶高表达对β-淀粉样肽诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的 确定中性内肽酶（NEP）高表达对β-淀粉样肽（AB）诱导的PC12细胞凋亡保护作用的分子机制。方法 利用脂质体转染法建立可稳定表达NEP和失活NEP的PC12细胞系。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和免疫印迹法（Western blot法）检测基因在细胞中的表达。利用AB25-35诱导PC12细胞，CellTiter96AQueous单溶液检测系统（MTS）检测细胞存活率；分光光度法检测乳酸脱氢酶（LDH）含量、活性氧（ROS）生成量水平变化；化学发光法检测细胞三磷酸腺苷（ATP）生成量和Caspase-3表达量的变化。结果 在AB25-35诱导PC12细胞凋亡中，NEP高表达可明显提高细胞存活率，降低培养基中LDH含量和ROS生成量；提高细胞ATP释放量；抑制Caspase-3在细胞凋亡中的激活，与正常PC12细胞相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。稳定表达失活NEP的PC12细胞则对细胞凋亡没有影响。结论 NEP通过降低氧化应激反应对细胞线粒体的损伤，抑制凋亡关键蛋白Caspase-3的激活，从而提高AB25-35诱导的神经细胞的存活率。     

氯化锰致PC12细胞凋亡作用及其机制

目的 探讨氯化锰诱导PC12细胞凋亡的作用机制.方法 以PC12细胞为多巴胺能神经元的细胞模型,采用MTT比色法检测细胞生长情况,流式细胞术(FCM)及DNA琼脂糖凝胶电泳(AGE)检测PC12细胞的凋亡情况,免疫组化法检测PC12细胞HSP70、Survivin、Bcl-2和Bax表达情况.结果 锰能抑制PC12细胞的增殖,呈时间-剂量效应关系;并能诱导其凋亡,呈浓度依赖性;凋亡过程中Bax的表达呈浓度依赖性增强,且与凋亡之间呈正相关关系(R1=0.972,P＜0.01),而HSP70、Survivin和Bcl-2的表达呈浓度依赖性下调,且与凋亡之间呈负相关关系(R2=-0.990,R3=-0.976,R4=-0.980,p均＜0.01).结论 锰对PC12细胞的凋亡具有诱导作用,而上调Bax的表达和下调HSP70、Survivin及Bcl-2的表达可能是其诱导PC12细胞凋亡的作用机制之一.     

石杉碱甲改善Aβ诱导的PC12细胞线粒体毒性

目的 研究石杉碱甲对β-淀粉样蛋白间接诱导的神经元线粒体毒性的保护作用。方法 采用transwell构建小胶质细胞和神经元细胞的共培养体系,实验利用共培养体系设置对照组、Aβ_1-42组、HupA组。通过检测活性氧(ROS)、总SOD活性和MDA水平、ATP和MTT水平来评估石杉碱甲在Aβ_1-42诱导的PC12细胞线粒体毒性过程中的保护作用。结果 (1)石杉碱甲可以显著减少Aβ_1-42诱导的PC12细胞ROS、MDA水平;(2)石杉碱甲明显提高PC12细胞的T-SOD和ATP水平。结论 石杉碱甲通过改善Aβ_1-42间接诱导的PC12细胞线粒体毒性发挥神经细胞活性的保护作用。     

铝对PC12细胞淀粉样前体蛋白β位点裂解酶-1蛋白及基因表达的影响

[目的]探讨铝对PC12细胞淀粉样前体蛋白（APP）β位点裂解酶-1（beta-site amyloid precursor proteincleaving enzyme-1,BACE1）蛋白及基因表达的影响。[方法]采用PC12细胞进行培养及麦芽酚铝[Al（mal）3]染毒,将细胞分为6组,分别为：200μmol/L生理盐水组;0、50、100、200和400μmol/L Al（mal）3组。分别采用酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、荧光实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chainreaction,qRT-PCR）于染毒12、24和48 h后测定BACE1蛋白含量及基因表达。[结果]细胞计数试剂盒-8（CCK-8）细胞活力测定结果显示,不同浓度Al（mal）3染毒PC12细胞,可使其细胞活力呈现随染毒时间延长而逐渐下降的趋势。qRT-PCR结果显示,100μmol/L Al（mal）3组在染毒48 h后BACE1基因表达明显高于生理盐水组、0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）;200、400μmol/L Al（mal）3组染毒12、24、48 h后BACE1基因表达明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。ELISA测定结果显示,染毒12 h后400μmol/L Al（mal）3组BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;染毒24 h后200、400μmol/L Al（mal）3组BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）;染毒48h后400μmol/L Al（mal）3组的BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）。[结论]Al（mal）3对PC12细胞具有明显毒性作用,该作用可能与麦芽酚铝致PC12细胞BACE1蛋白和基因表达增强有关。     

米糠提取物对PC12细胞保护作用的体外实验研究

目的探讨富含γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的米糠提取物(rice bran extracts,RBE)对Aβ_(25-35)致PC12细胞损伤的影响。方法 (1)将细胞分为对照组和不同浓度RBE处理组,RBE的浓度分别为50、100、200、400、800、1600和3200(μg/ml),用CCK-8法检测RBE对PC12细胞活性的影响。(2)将细胞分为对照组(不加任何处理因素)、Aβ_(25-35)处理组(20μmol/L)、不同浓度RBE干预+Aβ_(25-35)处理组,RBE浓度分别为100、200、400、500、800、1000和1600(μg/ml)。RBE干预采用预孵育和共孵育2种方式,用CCK-8法检测RBE对PC12细胞的保护作用;并比较2种不同孵育方式的保护效果。结果 (1)一定浓度范围内的RBE可提高PC12细胞的活性。(2)RBE预孵育的浓度为200~1000μg/ml时,对Aβ_(25-35)损伤的PC12细胞具有显著保护作用(P0.05),其最佳浓度为800μg/ml;RBE共孵育的浓度为400~1000μg/ml时,对Aβ_(25-35)损伤的PC12细胞具有显著保护作用(P0.01),其最佳浓度为1000μg/ml。结论适宜浓度的米糠提取物干预对Aβ_(25-35)损伤的PC12细胞具有保护作用。     

小鼠2.5 s神经生长因子对2,5-己二酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的 建立神经生长因子（NGF）对2,5-己二酮（HD）诱导的PC12细胞凋亡保护作用的模型,并探讨其作用机制.方法 以PC12细胞为神经元的细胞模型,将HD和不同浓度的NGF加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测p53蛋白表达,比较各组间的差异.结果 随NGF浓度增加,细胞存活率升高,差异有统计学意义（P＜0.01）;DNA断裂减少;细胞凋亡率减小（P＜0.01）;p53表达量下降（P＜0.05）.结论NGF对PC12细胞可能具有直接的神经营养作用,且可保护PC12细胞免于2,5-HD诱导的损伤以及具有抗凋亡作用.     

电磁辐射急性辐照致PC12细胞的损伤效应

目的探讨电磁辐射急性辐照对PC12细胞的影响.方法对离体培养的PC12细胞以65mW/cm2电磁波急性照射20min,于辐照后即刻、3、12、24h四个时相点检测细胞存活率、乳酸脱氢酶释放率,并采用Annexin-V-FITC及PI双标记流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率.结果电磁波辐照后即刻PC12细胞存活率和LDH释放率变化不明显(P＞0.05),辐照后3h细胞存活率明显降低,而LDH释放率明显增加(P＜0.05),到24h后达到峰值(P＜0.01).电磁波辐照后即刻PC12细胞凋亡开始增加(P＜0.05),3h后凋亡细胞进一步明显增多,凋亡率约为20%,24h后细胞凋亡再次显著增加(P＜0.01).结论电磁辐射急性辐照后早期即可引起PC12细胞损伤,而在辐照后24h出现一种"继发损伤反应",细胞凋亡可能是电磁辐射辐照诱导PC12细胞损伤的主要原因之一.     

活性氧在氯化锰致PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨活性氧（ROS）在氯化锰（MnCl2）诱导PC12细胞凋亡中的作用机制.方法 构建MnCl2诱导的PC12细胞模型,MTT法检测细胞存活率,流式细胞分析PC12细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化程度;分光光度法检测培养基中活性氧（ROS）生成量变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷（ATP）生成量和Caspase-3表达量的变化;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-xl和bax的表达.结果 PC12细胞存活率与MnCl2诱导浓度和诱导时间呈负相关（P＜0.01）;2 mmol/L MnCl2诱导PC12细胞36 h,细胞凋亡率明显上升（P＜0.01）;核DNA发生明显片段化;细胞ROS生成量明显增加（P＜0.001）,细胞ATP生成量受到明显抑制（P＜0.01）;基因bcl-xl表达被抑制,bax表达上升（P＜0.01）;Caspase-3在细胞凋亡中被激活（P＜0.01）.结论 MnCl2诱导的PC12细胞凋亡与ROS升高、线粒体功能破坏和激活Caspase-3有关.     

微波辐射致大鼠PC12细胞损伤作用

目的 观察微波辐射后大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系(PC12)细胞形态、超微结构、周期和凋亡等变化.以探讨微波辐射对其影响.方法 PC12细胞传代培养,6～7d细胞处于对数生长期后,神经生长因子(NGF)诱导7～10d,分别采用0,10,30和50mW.cm2微波辐射,于辐射后6h和1d收集细胞,利用原子力显微镜、透射电镜、流式细胞仪和激光共聚焦扫描显微镜等技术,研究PC12细胞膜、超微结构、细胞周期及细胞坏死和凋亡的变化.结果 辐射后G0-G1期细胞数增加,以30和50mW.cm2为明显,10mW.cm2组未见明显改变.30mW.cm2组PC12细胞凋亡率升高(P＜0.01),坏死率无明显改变;细胞核膜间隙增宽,染色质浓缩边集,核型不整,线粒体肿胀空化.内质网扩张;细胞膜表面粗糙.见圆形或不规则形穿孔.结论 30mW.cm2微波辐射可使PC12细胞损伤,表现为细胞周期阻滞、凋亡增加、超微结构改变及膜穿孔.     

2,5-己二酮诱导的PC12细胞损伤和凋亡

目的建立2,5己二酮诱导的PC12细胞凋亡模型。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,将2,5己二酮(30、40、50mmol/L)加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,Hochest33258观察细胞核变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂、流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较各组间的差异。结果随2,5己二酮浓度增加,细胞存活率下降(P<0.01);荧光显微镜观察有特征性的凋亡细胞核;琼脂糖凝胶电泳有明显的DNAladder;流式细胞仪检测凋亡率随2,5己二酮浓度的增大而增加(P<0.05)。结论一定浓度的2,5己二酮有导致PC12细胞损伤和凋亡的作用。     

β-淀粉样蛋白与缺血性脑血管病

β-淀粉样蛋白（Aβ）沉积被认为是Alzheimer病的特征性病理改变之一。近年的研究表明,在缺血性脑损伤后,Aβ也发生沉积,笔者推测Aβ可能参与了缺血后脑损伤的发生与发展。本文就脑缺血损伤后Aβ在脑组织中的表达、作用机制进行综述。     

川芎嗪对二甲酰胺引起的PC12细胞损伤的保护作用

目的分析川芎嗪对二甲酰胺引起大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆化细胞株PC12细胞损伤的保护作用,探讨川芎嗪治疗脑缺血再灌注损伤的机制。方法采用川芎嗪预处理PC12细胞后,制备二甲酰胺细胞损伤模型,CCK-8法检测细胞毒性、流式细胞术分析Caspase-3、8、9、Western blot检测HMGB1、ELISA检测氧化应激指标观察二甲酰胺的毒性及川芎嗪的保护作用。结果川芎嗪预处理后,PC12细胞的存活数显著提高,Caspase-3和Caspase-9活性降低,未见HMGB1表达降低,SOD上调,LDH和MDA下调,GSH升高。结论川芎嗪对二甲酰胺引起的PC12细胞损伤有显著的保护作用,但其保护作用可能与川芎嗪抑制细胞凋亡、调节氧化应激反应相关。     

葡萄籽原花青素对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制研究

目的探讨葡萄籽原花青素(GSP)对PC12细胞氧化损伤的神经保护作用及机制。方法用H2O2作用于PC12细胞,MTT检测细胞活性,用流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率,共聚焦显微镜观察细胞Caspase-3活性的变化。结果与模型组比较100μg/ml葡萄籽原花青素可使PC12细胞活性升高(P<0.05)和凋亡率下降(P<0.01),并可抵抗H2O2诱发的PC12细胞Caspase-3活性增强(P<0.01)。结论葡萄籽原花青素可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-3活化有关。     

紫河车对阿尔茨海默病模型大鼠脑组织内β淀粉样蛋白及β淀粉样前体蛋白mRNA表达的影响

目的观察用紫河车干预后的阿尔茨海默病（AD）模型大鼠的脑组织内β样淀粉蛋白（Aβ）、β类淀粉前体蛋白信使核糖核酸（βAPPmRNA）表达改变,探讨紫河车改善阿尔茨海默病模型大鼠症状的部分机制。方法用Okadaic acid（OA）注于实验大鼠脑内杏仁核建立AD动物模型,用避暗法和穿梭箱法测试实验大鼠的学习记忆能力,用免疫组织化学方法显示实验大鼠脑组织内Aβ表达的变化,用原位杂交方法显示实验大鼠脑组织内βAPPmRNA表达的变化。结果用紫河车治疗和预防一段时间后的AD模型大鼠,其学习记忆能力的测试成绩明显优于同时间点模型组大鼠的成绩（P〈0.05）,其脑组织内Aβ、βAPPmRNA表达数量也明显少于同时间点模型组大鼠脑组织内的Aβ、βAPPmRNA表达数量（P〈0.05）。结论经紫河车干预后,AD模型大鼠的行为异常得到改善,同时其脑组织内Aβ、βAPPmRNA表达也受到抑制。     

芦荟大黄素对神经细胞PC12缺氧损伤模型保护作用的研究

目的探讨中药芦荟大黄素的细胞保护作用。方法通过建立PC12细胞缺氧缺血模型,对芦荟大黄素的保护作用进行研究。结果芦荟大黄素200μg·m L~(-1)及50μg·m L~(-1)浓度组的细胞重排率显著低于各模型组,芦荟大黄素组(浓度为200μg·m L~(-1)、50μg·m L~(-1)及10μg·m L~(-1))胞内钙离子浓度显著低于各模型组。结论芦荟大黄素对缺氧缺血造成的PC12细胞具有保护作用。     

雌激素对Aβ25-35致PC12细胞膜流动性改变的影响(英文)

目的观察可溶性Aβ25—35作用下PC12细胞膜流动性的改变及17βE_2对此改变的影响。方法培养的PC12细胞分为空白对照组,Aβ损伤组及雌激素干预组,根据浓度梯度雌激素干预组再分为五个剂量亚组,采用荧光偏振法动态检测不同组PC12细胞不同时间膜流动性的改变。结果Aβ损伤组在加入5μM可溶性Aβ25-35后各时间点,与空白对照组相比,其微粘度η值均明显升高(P<0.01);17βE_2干预组在10~(-10)M浓度下各时间点其η值与Aβ损伤组比较均没有显著性差异(P>0.05);而在10~(-9)-10~(-6)M浓度下各时间点η值与Aβ损伤组比较均显著降低(P<0.01或P<0.05),且这种作用具有剂量依赖性,17βE2 10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)M干预组与Aβ损伤组相比,在24h时PC12细胞微粘度η分别降低了36.4%、49.6%、60%、68.4%。结论5μM可溶性Aβ25—35使PC12细胞微粘度明显升高,膜流动性明显下降;雌激素具有改善膜流动性的神经元保护作用,且这种作用具有剂量依赖性。