胃癌组织中Vδ1γδT细胞的数量及其NKG2D表达的研究

[目的]研究胃癌患者外周血和癌组织中以及正常胃黏膜的γδT细胞的数量变化和可能的功能改变。[方法]采用胃癌术后和非胃癌的胃溃疡病人(对照)组织样本,并取病人外周血30ml,分离其单核细胞。流式细胞仪检测外周血中γδT细胞数量百分比、正常胃黏膜和胃癌组织中的γδT细胞百分比和胃癌组织中Vδ1γδT细胞NKG2D的表达。[结果]Vγ9γδT细胞在胃癌患者外周血中的百分比显著低于对照组(2.95%±3.71%vs4.31%±3.64%,P=0.041),Vδ2γδT细胞百分比也低于对照组,但没有统计学差异(2.82%±3.63%vs4.02%±3.51%,P=0.115)。Vδ1γδT细胞在胃癌组织中的百分比显著低于正常胃黏膜(41.41%±15.04%vs53.44%±16.32%,P=0.027)。胃癌组织Vδ2、Vγ9γδT细胞的百分比与正常胃黏膜比较无显著性差异。胃癌组织中产生γ-IFN的Vδ1γδT细胞数为3.18±1.98,显著低于正常胃黏膜(5.87±3.25,P=0.007)。NKG2D表达与胃癌组织中生产γ-IFN的Vδ1γδT细胞呈显著正相关(r=0.78,P=0.007)。[结论]在胃癌组织中,Vδ1γδT细胞的数量明显下降,其功能受损。NKG2D的表达下降可能是Vδ1γδT细胞受抑制的原因之一。     

2023年γδT细胞肿瘤治疗领域重大进展

γδT细胞是一类表达γδTCR异源二聚体的特殊固有免疫T细胞。过去,缺乏对其全面系统的基础研究,在其发育、分化、增殖、活化、效应和耗竭等所有环节仍有很多问题尚不清楚。然而,因为成熟的γδT细胞优势定植于皮肤、消化道、呼吸道、生殖道等肿瘤高发的黏膜组织,能以MHC非限制性的方式直接识别和杀伤多种肿瘤细胞,在肿瘤免疫治疗领域具有不可替代的优势,近年来其应用异军突起,发展迅速,也因此反过来促进了基础研究的深入,取得了一些亮眼的进展。本文对2023年γδT细胞在肿瘤免疫治疗领域的重大进展进行述评,主要集中在γδT细胞肿瘤抗原识别机制、肿瘤微环境中γδT细胞的功能调控、γδT细胞抗肿瘤细胞毒活性的机制、新型基于γδT细胞的肿瘤免疫治疗协同增效策略四个方面,以期推动γδT细胞在肿瘤免疫治疗领域的进一步发展,为临床γδT细胞应用协同增效的策略提供新的思路。     

Gamma delta T 细胞及其抗肿瘤研究的进展

Gamma delta（γδ）T细胞表达Vγ9Vδ2 T细胞受体,占外周血T淋巴细胞的2％～5％左右,主要分布于黏膜相关淋巴组织,是T细胞的亚群之一。其免疫作用介于固有免疫和适应性免疫之间,为主要组织相容性复合体（MHC）非限制性细胞, 具有一定的非特异性杀伤肿瘤细胞的作用,并且具有广泛的抗瘤谱。许多研究证实γδ T细胞参与了机体免疫防御系统的第一道防线,未来以γδ T细胞为基础的细胞免疫疗法,将会成为肿瘤免疫治疗的新战略。本文将对γδ T细胞的抗肿瘤作用机制及其临床应用作一综述。     

天然免疫抗肿瘤机制的研究进展

肿瘤的免疫治疗已被广泛重视，但其具体机制仍不很清楚。最近该方面研究取得显著进展，主要包括NK细胞NKT细胞、γδT细胞等天然免疫性机制研究以及IFNγ、穿孔素等效应分子的研究。     

树突状细胞与白血病研究进展

 树突状细胞（DC）是介导T细胞免疫应答的有力启动细胞,白血病来源DC同样具有抗原提呈及摄取能力。用肿瘤抗原冲击DC在体外、体内能够有效地触发T细胞免疫应答,成为肿瘤特异性细胞毒性T细胞。介绍了DC的生物学特性、肿瘤免疫、白血病细胞的肿瘤逃逸机制以及DC在白血病免疫治疗中的研究进展情况。     

IFN-γ在肿瘤免疫及免疫治疗中的作用

IFN-γ在抗肿瘤过程中发挥了重要作用,近年来人们逐渐认识到了其在肿瘤免疫治疗中的必要性。IFN-γ作用于肿瘤发生发展的全过程,其在抗肿瘤方面的作用机制主要分为免疫机制和非免疫机制。IFN-γ可以直接抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成,协同固有免疫和适应性免疫的NK、NKT细胞、γδT细胞以及CD4 + /CD8 + T细胞等完成肿瘤杀伤。然而也有报道IFN-γ的促肿瘤作用,主要表现为在长期慢性炎症和肿瘤微环境中重塑免疫微环境促进免疫逃逸。因此,在肿瘤免疫治疗中要注意IFN-γ的双向效应,防止产生定向选择造成肿瘤免疫抑制。     

T淋巴细胞的抗原识别和免疫治疗

机体淋巴细胞中起抗肿瘤作用的主要是细胞毒T细胞(CTL),CTL表面的T细胞受体(TCR)可以识别肿瘤细胞表面HLA呈递的抗原肽,攻击和破坏肿瘤细胞。淋巴瘤表面的免疫球蛋白(lg)作为独特型抗原可以用于免疫治疗,但是CTL如何识别独特型并不清楚。研究发现供CTL识别不同独特型的T细胞表位(一些抗原9肽)主要分别位于lg重链基因(lgHV)的框架区。人工合成这些T细胞表位,刺激正常人淋巴细胞可以获得大量特异性的抗淋巴瘤的CTL。淋巴瘤按照lgHV可以分为7种基因型。将特异性CTL的TCR基因转染正常T细胞,有可能获得用于免疫治疗的抗不同基因型淋巴瘤的淋巴细胞。     

嵌合抗原受体修饰T细胞在恶性肿瘤中的研究进展

近年来在肿瘤免疫治疗领域,嵌合抗原受体（CAR）修饰T细胞在基础研究和临床试验中取得了巨大进展。CAR由特异性单克隆抗体的可变区和CD3ζ结构域组成。CAR修饰T细胞的胞外区直接识别肿瘤相关抗原（TAA）。T细胞和靶抗原结合后可直接介导细胞毒性,并释放一些细胞因子如穿孔素、颗粒酶、干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,最终导致肿瘤细胞的坏死。尽管CAR-T细胞具有显著的抗肿瘤效应,一些基础研究和临床实验中观察到的安全性问题值得关注。     

同种异体γδT细胞免疫疗法治疗晚期肝细胞癌的安全性及其对患者免疫功能的影响

目的：探讨使用同种异体Vγ9Vδ2 T细胞回输治疗晚期肝细胞癌(HCC)患者的安全性及治疗后患者免疫功能的变化。方法：选择2021年10月至2022年10月珠海市人民医院收治的4例晚期HCC患者,从健康供体获取外周血单个核细胞(PBMC)后经刺激扩增培养获得Vγ9Vδ2 T细胞,经质控放行后予以回输治疗,回输细胞剂量为5×10⁸个/次,每两周一次,回输次数9次以上,治疗后检测患者αβT细胞、B细胞、NK细胞、γδT细胞各亚群比例,转氨酶、肌酐、肌酸激酶等肝、肾、心功能生化标志物,以及血常规三系(白细胞系统、红细胞系统和血小板系统)细胞数量的变化。结果：4例患者在回输治疗后均显示出对异体Vγ9Vδ2 T细胞良好的耐受性;转氨酶、肌酐、肌酸激酶等肝、肾、心功能生化标志物以及血常规三系细胞数量在回输前后均无明显变化;患者的Tfh1、Tc1、CD127⁺TEM、HLADR⁺CD8⁺T细胞、CD27-B细胞比例有升高趋势,提示特异性免疫功能的增强。结论：同种异体Vγ9Vδ2 T细胞治疗晚期HCC有较好的安全性...     

淋巴细胞白血病免疫表型与基因重排研究

采用系列单克隆抗体(McAbs)和聚合酶链反应(PCR)技术研究35例淋巴细胞白血病免疫表型与免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)γ、δ基因重排。结果表明,20例表达不同分化阶段B细胞表面标记,其中18例发生IgH基因重排,8例TCRγ基因重排.2例TCR_δ基因缺失。8例表达不同分化阶段T细胞表面标记,均检测到TCRγ和、或TCR_δ基因重排,无IgH基因重排。3例同时表达T、B细胞表面抗原者均发生IgH和TCRγ基因双重重排。4例缺乏表面抗原表达者中3例发生TCRδ或TCRγ基因重排。2例完全缓解病例经PCR扩增证明存在残留白血病细胞。     

T细胞介导性抗肿瘤免疫治疗的研究进展

在肿瘤发生与发展的过程中 ,机体的免疫系统发挥着重要的免疫监视功能 ,其中 T细胞介导的细胞免疫起关键性作用。因此 ,基于 T细胞的肿瘤免疫治疗策略与方法的探索一直是肿瘤免疫研究领域的热点。1　T细胞介导的抗肿瘤免疫的效应机制大量研究结果表明 ,细胞毒性 T淋巴细胞(CTL)在体内提供了有效的抗肿瘤免疫。事实上 ,CTL介导的对移植肿瘤的排斥是体内特异性抗肿瘤免疫的唯一例证。CD8 CTL是主要的抗肿瘤效应细胞 ,通过识别肿瘤细胞表面由 类 MHC分子所呈递的肿瘤抗原肽 ,进而启动对靶细胞的杀伤。CTL介导的针对致癌病毒感染细胞…     

T细胞介导的精准肿瘤免疫治疗

以嵌合抗原受体-T细胞(chimeric antigen receptor-T cell,CAR-T)治疗和卡控点(check point)阻断为代表的一系列研究和临床应用表明,自体或移植的特异T细胞可以清除已发生的肿瘤,标志着肿瘤免疫治疗进入了新的阶段.近期研究发现,借助于新一代测序、蛋白质组学及生物信息技术,可以鉴别出肿瘤细胞通过MHC提呈的突变特异性的新抗原,这些抗原或抗原组合具有高度的个体和肿瘤特异性.实验表明,新抗原能通过主动免疫在动物模型中产生抗肿瘤的作用,也可作为过继转移抗原特异性T细胞、TCR转染T细胞和CAR-T所识别的目标.这些重要进展为进一步开展肿瘤临床的精准免疫治疗奠定了理论和实践基础.     

个体化肿瘤特异TCR的筛选策略

基因修饰T细胞疗法在肿瘤治疗领域取得突破性进展，主要包括嵌合抗原受体基因修饰T（chimeric antigen receptor engineered T，CAR-T）细胞和T细胞受体基因修饰T（T-cell receptor modified T，TCR-T）细胞。虽然CAR-T细胞疗法在血液系统 肿瘤治疗领域呈现良好的临床治疗效果，但CAR-T细胞仅能识别肿瘤细胞膜抗原（占细胞全部抗原的比例约10%），而TCR-T细 胞可以识别人白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）提呈的细胞内抗原，因此TCR-T细胞可以识别更多种类的肿瘤抗原，进 而实现对CAR-T细胞的合理补充。由于TCR-T细胞需要同时识别细胞内抗原和对应的HLA，而不同患者的HLA分型和表达的 肿瘤抗原都可能存在巨大差异，因此有必要为每个/每类肿瘤患者定制个体化的TCR-T细胞，其中的关键为筛选特异识别肿瘤抗 原的TCR。当前主要有筛选靶向“已知”肿瘤抗原TCR和筛选靶向“未知”肿瘤抗原TCR的两种策略，但其各有适用性，应针对每 个患者制定适合的筛选方法，以制备多种肿瘤特异性TCR-T细胞，从而实现个体化TCR-T细胞的肿瘤治疗。     

CD16a表达在ADCC抗肿瘤作用中的研究进展

<正>抗体依赖的细胞毒性(antibody-dependent cell mediated cytotoxicity,ADCC)作用是指具有杀伤活力的免疫细胞,通过细胞表面的FC受体和单克隆抗体结合,识别被单克隆抗体结合的靶抗原(如细菌或者肿瘤细胞),直接杀伤靶细胞。研究发现,ADCC作用是单克隆抗体治疗肿瘤或其他疾病的重要机制和手段之一~([1])。(1)介导ADCC作用的免疫细胞及其受体:机体发挥ADCC作用的免疫细胞主要包括单核白细胞[如自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和γδT细胞]与多形核细胞(中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞)~([2])。其中,NK细胞     

乳腺癌淋巴结微转移患者克隆性T细胞TCRα链CDR3谱型分析

目的 分析乳腺癌微转移淋巴结T细胞克隆性增生及TCR α链谱型偏移情况,了解抗肿瘤T细胞克隆的分子特征。方法 利用RT-PCR扩增10例乳腺癌微转移淋巴结T细胞32个TCR可变区（AV）亚家族的基因,基因扫描检测T细胞克隆性及TCR AV亚家族取用情况,对单克隆家族行PCR扩增TCR α链全长序列,构建重组质粒后测序,分析互补决定区（CDR3）序列。结果 乳腺癌淋巴结微转移患者T细胞呈单、寡克隆、寡克隆趋势和多克隆增生,不同患者表达1～4个TCR AV亚家族。克隆性T细胞的CDR3氨基酸序列不同,但是病例4和病例8含有相同的CDR3氨基酸基序：AM和DDKII。结论 乳腺癌TCR AV基因表达具有多样性特点,TCR AV家族的取用可能与乳腺癌肿瘤抗原的多样性和不同个体的免疫应答反应有关。相同CDR3氨基酸基序的发现可能对乳腺癌的T细胞介导免疫治疗提供帮助。     

γδT细胞、NK细胞及LAK的生物学特性比较

过继性免疫治疗是肿瘤生物治疗的重要手段之一.80年代后期,开始进行LAK细胞抗肿瘤过继免疫治疗,并取得一定效果.近来,γδT细胞和NK细胞在非恃异性或半特异性免疫治疗中的作用逐渐被重视.我们通过体外分离和增殖培养γδT细胞、NK细胞和LAK细胞,比较研究了3种细胞的抗肿瘤的生物学特性,结果显示,以MACS分离γδT细胞,培养2周后细胞数扩增600～800倍,CD3,CD8和γδT表达阳性率分别是70.41%,42.69%和40.5%,γδT细胞对NK敏感细胞K562以及NK不敏感细胞Raji,XG-73种不同到细胞均有较高的杀伤率,分别为35.98%,32.27%和49.08%,高于对照组PBMC的19.56%,11.34%和10.58%;NK细胞对此3种细胞的杀伤率分别是45.21%,12.34%和11.94%;     

颗粒外排与Fas/Fas配体途径在人yδT细胞的肿瘤细胞毒活性中的作用

目的探讨结核杆菌抗原(Mtb-Ag)特异性活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞的细胞毒活性机制.方法用Mtb-Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增并用磁珠阳性分选法获得高纯度γδT细胞;用RT-PCR法检测γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA的表达;用流式细胞仪检测γδT细胞表面Fas配体(FasL)分子以及几种肿瘤细胞表面Fas分子的表达;用MTT法测定γδT细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性,观察穿孔素/颗粒酶途径的阻断剂concanamycin A(CMA)和Fas/FasL途径的抑制剂brefeldin A(BFA)对γδT细胞细胞毒活性的影响.结果经Mtb-Ag激活和扩增的γδT细胞高表达穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA;Mtb-Ag活化的γδT细胞中22.4%表达FasL分子;CMA能明显抑制YδT细胞对肿瘤细胞(尤其对Fas低表达的K562和PG)的杀伤,BFA能强烈抑制γδT细胞杀伤Fas高表达的Raji和A375.结论Mtb-Ag活化的γδT细胞杀伤Fas低表达的靶细胞时主要通过颗粒外排途径,杀伤Fas高表达的靶细胞时,颗粒外排和FasL均起作用.     

用定量PCR技术分析人体肾癌浸润T淋巴细胞限制性取用TCR Vβ基因格局

T淋巴细胞在特异性抗肿瘤免疫应答中起关键作用。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中富含肿瘤反应性T细胞,体外培养TIL并回输给带瘤宿主,可提高临床免疫治疗效果。但是TIL仍具有高度的异质性,只有从中找到并分离出那些在肿瘤抗原驱动下发生寡克隆扩增T细胞,才有希望在特异并性治疗方面取得突破。国外九十年代起采用分子生物学技术确定TIL中发生寡克隆扩增T细胞的TCR V区基因的特定结构,为肿瘤特异性T细胞免疫治疗开拓了新的前景。本文即是跟踪国外的这一进展,应用定量PCR技术,分析人体肾细胞癌(RCC)TIL的TCR受体谱结构及相应的寡克隆偏移格局。     

NY-ESO-1抗原的基础与临床研究进展

NY-ESO-1是癌-睾丸抗原家族中的重要一员,在多种肿瘤组织中广泛表达,但在正常组织中几乎不表达。目前已经发现了20多个抗原表位,并在多种肿瘤患者体内检测到自发性免疫反应,包括体液和细胞免疫反应,NY-ESO-1的表达及体内自发性免疫应答被证实与肿瘤的诊断和预后有重要关联。NY-ESO-1被认为是肿瘤免疫治疗的理想靶抗原,以NY-ESO-1抗原为靶点的肿瘤治疗性疫苗、TCR基因修饰的T细胞、CAR修饰的T细胞等临床研究相继开展,展示了良好的前景。     

人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCRγδ抗体扩增及其培养和保存的条件

目的:比较人外周血γδ T细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件。方法：分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性antiTCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI 1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδ T细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδ T细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶（lacate dehydrogenase,LDH）法检测γδ T细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用。结果：添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI 1640培养液对γδ T细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液。可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδ T细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδ T细胞受体（T cell receptor,TCR）库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性。这些γδ T细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4 ℃条件下保存12 h,细胞存活率仍达95%以上。结论：可溶性antiTCR γδ抗体和含有人AB血浆的RPMI 1640培养液可以用于人外周血γδ T细胞的体外扩增,扩增得到的γδ T细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好。