肿瘤特异性γ δ T细胞扩增体系的建立及其抗肿瘤活性研究

目的:建立一种体外诱导肿瘤细胞特异性γ δ T细胞的培养体系.方法:从人外周血中分离单个核细胞(PBMCs),用不同浓度的磷酸抗原(IPP)与rhIL-2联合刺激γ δ T细胞增殖,观察并收集细胞,采用流式细胞仪检测刺激后 CD3+Vγ9+的 γ δ T 细胞数量以及比例,并计算其扩增效率.结果:经15天扩增培养后,高浓度组10μg/ml 的IPP联合500IU/ml rhIL-2刺激得到的γ δ T细胞的扩增效率最高,且扩增培养至第9天的γ δ T细胞对肿瘤细胞有一定的杀伤活性.结论:适宜浓度磷酸抗原(IPP)联合rhIL-2能有效体外诱导具有较强抗肿瘤活性γ δ T细胞的扩增.     

γδT细胞识别机制研究进展

γδT细胞在肿瘤免疫治疗中具有重要潜力,其识别抗原的特异性和MHC非依赖性使其成为治疗的有力工具。然而,γδT细胞在肿瘤发生发展过程中发挥着复杂多样的双向作用,包括产生促进肿瘤生长的IL-17。近期的研究进一步揭示了γδT细胞的识别机制,包括Vγ9Vδ1 TCR对EphA2的识别机制、Vγ9Vδ2 T细胞激活依赖于磷酸抗原（pAg）介导的BTN2A1-BTN3A1蛋白相互作用,以及TCR链介导的Vδ3亚群识别机制。这些发现为肿瘤免疫治疗提供了新思路,例如通过促进EphA2的表达来增强Vδ1T细胞的杀伤作用,通过干预BTN3A1-BTN2A1相互作用来控制Vγ9Vδ2 T细胞的异常活化等。随着对γδT细胞识别机制研究的不断深入,将为深入理解它们在免疫监视中的角色、优化肿瘤免疫治疗策略提供了新视角和有力支持。     

γδT细胞与肿瘤免疫

Ｔ细胞因其表面受体不同分为αβＴ细胞和γδＴ细胞两大类。γδＴ细胞在受体结构，组织分布，抗原识别以及功能等方面都与αβＴ细胞明显不同。随着研究的深入，人们发现γδＴ细胞亦在相当程度上参与了肿瘤免疫。本文就以上问题进行了综述。     

T细胞超抗原在肿瘤治疗领域的研究进展

随着对恶性肿瘤免疫微环境的深入探索,天然T细胞超抗原（T-cell superantigens,T-SAg）被发现在肿瘤免疫微环境中具备强大的免疫调控功能和抗肿瘤免疫治疗价值,是肿瘤治疗的重要方向。全文总结了T-SAg在肿瘤免疫治疗的最新应用,包括T-SAg定点突变、T-SAg重组融合蛋白、病毒荷载的T-SAg基因治疗、溶瘤病毒治疗和T-SAg纳米颗粒递送体等,为恶性肿瘤的治疗研究带来新思路。     

γδT细胞与疾病的关系

γδ T细胞已是当今细胞治疗研究的热点,活化的γδ T细胞具有较强的杀伤活性,具有抗感染、抗肿瘤作用;γδT细胞还可以维持免疫耐受,调节免疫应答,其异常可导致自身免疫性疾病的发生,本文就γδT细胞在这几方面的作用作一综述.     

γδT细胞与疾病的关系

γδT细胞已是当今细胞治疗研究的热点,活化的γδT细胞具有较强的杀伤活性,具有抗感染、抗肿瘤作用;γδT细胞还可以维持免疫耐受,调节免疫应答,其异常可导致自身免疫性疾病的发生,本文就γδT细胞在这几方面的作用作一综述。     

Gamma delta T 细胞及其抗肿瘤研究的进展

Gamma delta（γδ）T细胞表达Vγ9Vδ2 T细胞受体,占外周血T淋巴细胞的2％～5％左右,主要分布于黏膜相关淋巴组织,是T细胞的亚群之一。其免疫作用介于固有免疫和适应性免疫之间,为主要组织相容性复合体（MHC）非限制性细胞, 具有一定的非特异性杀伤肿瘤细胞的作用,并且具有广泛的抗瘤谱。许多研究证实γδ T细胞参与了机体免疫防御系统的第一道防线,未来以γδ T细胞为基础的细胞免疫疗法,将会成为肿瘤免疫治疗的新战略。本文将对γδ T细胞的抗肿瘤作用机制及其临床应用作一综述。     

食管鳞状细胞癌患者γδT细胞研究

 目的 探讨食管癌患者机体γδT细胞水平及与临床的关系，为γδT细胞在食管癌综合治疗中的应用提供依据。方法 采用流式细胞术测定食管癌患者外周血中和癌组织中γδT细胞水平，分析其与临床的关系。结果 癌组织中浸润γδT细胞水平显著高于癌旁组织（P = 0.045）；食管癌患者外周血中γδT细胞水平显著低于正常人（P = 0.011）；食管癌术后患者外周血中γδT细胞水平显著高于术前患者（P = 0.037）。食管癌T分期、N分期、M分期、大体分型、病变部位、病变长度（3 ~ 5 cm组和5 cm组）、组织学分级各组与正常组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。食管癌患者外周血中总T细胞，各组与正常组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；外周血中γδT细胞年龄、性别、病变长度（＜3 cm），各组与正常组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 γδT细胞在机体抗食管癌中发挥重要作用，手术切除肿瘤后可使患者γδT细胞恢复正常水平。     

γδT细胞的细胞毒活性研究

目的 探讨选择性扩增人γδT细胞的方法及其细胞毒活性。方法 用耐热性结核杆菌分子多肽抗原（Mtb)刺激正常人PBMC，并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδT细胞，通过MTT试验观察γδ细胞对人红白细胞白血病细胞K562的细胞毒活性。结果 Mtb刺激及磁珠分选后的γδT细胞可达73％和98．05％，效靶细胞比例为10：1时其对K562细胞的杀伤率分别为59％和78．5％。结论 Mtb刺激及磁珠分选所获得的高纯度γδT细胞可介导对K562细胞的高效细胞毒活性。     

肝脾γδT细胞淋巴瘤伴副肿瘤综合征一例并文献复习

目的 探讨肝脾γδT细胞淋巴瘤伴副肿瘤综合征患者的临床表现、病理学特征、免疫表型、治疗及预后。方法 分析1例肝脾γδT细胞淋巴瘤伴副肿瘤综合征患者的临床资料,并复习相关文献。 结果 患者为成年男性,以高热、肝脾大、贫血等发病,诊断为肝脾γδT细胞淋巴瘤,后期治疗过程中出现副肿瘤综合征。结论 肝脾γδT细胞淋巴瘤是较为罕见的外周T细胞淋巴瘤,以肝脾大、发热为主要临床表现,可合并副肿瘤综合征。该疾病进展快,预后差,生存期短,目前尚缺乏有效的治疗方法。     

肿瘤免疫治疗与肿瘤特异记忆性T细胞

近年来以肿瘤相关抗原(TAA)及树突状细胞(DC)呈递机制为基础发展起来的肿瘤免疫治疗取得一定进展，研究表明，肿瘤特异记忆性T细胞存在于患者骨髓中，体内外实验均证实其再激活后对肿瘤靶细胞具有更有效的杀伤作用。     

SLEγδT细胞受体V区基因取用初探

本文利用PCR特异性扩增、Southern Blot及DIG杂交等方法检测TCRγ链、δ链V区基因在SLE患者和正常人PBMC中的表达.结果表明,与正常对照相比,SLE患者在Vγ基因、Vδ基因均表现出限制性取用,特别是VγⅡ,Vδ4,Vδ6在7例SLE患者中均未检测到.Vγ基因取用范围从2个基因(VγⅠ,VγⅢ)到3个基因(VγⅠ,VγⅢ和VγⅣ)Vδ基因则从     

人γδT细胞、CD3AK细胞、CIK和DCs对荷胃癌裸鼠的疗效

Rosenberg等将LAK细胞应用于临床以来,人们对肿瘤的细胞免疫治疗进行了深入的研究.由于肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子和肿瘤微环境,以及荷瘤机体抗肿瘤免疫效应细胞不同程度地存在数量和质量上的异常,因此,在肿瘤细胞免疫治疗上必须用固有免疫细胞联合适应性免疫细胞进行治疗,才能有效地清除肿瘤细胞或抑制肿瘤生长.本研究应用术后2年末复发胃癌患者的树突状细胞(dendritics cells,DCs)、CIK细胞、CD3AK细胞和γδT细胞对已建立的人胃癌(SGC-7901细胞株)模型裸鼠进行单独或联合治疗,以观察这些细胞单用和联用的治疗效果.     

结核杆菌抗原特异性激活和扩增γδT细胞

目的探讨用结核杆菌低分子多肽抗原激活和扩增γδT细胞的方法。方法分离获取健康人PBMC,用结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb—Ag）或CD3mAb刺激PBMC,通过流式细胞仪检测总T细胞和佛细胞CD69分子的动态表达（6～72h）及细胞增殖培养10d后78T细胞的比例,用MTT试验检测细胞毒活性。结果对Mtb—Ag的刺激,总T细胞和柙细胞均在活化刺激24h时表达CD69分子达高峰,但总T细胞仅为16．0％,γδT细胞可达75．2％;新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为（5．37±0．64）％（n=5）,在刺激培养10d后,CD3mAb组为（1．37±0．38）％（n=5）,Mtb—Ag组为（69．67±1．46）％（n=5）。结论Mtb—Ag可特异性激活T细胞,用Mtb—Ag刺激T细胞活化增殖培养,可获得大量的T细胞。     

人γδT细胞、CD3AK细胞、CIK细胞和树突状细胞对已建立胃癌裸鼠的治疗作用

目的 探讨胃癌患者外周血γδT细胞、CD3AK细胞、CIK细胞和树突状细胞(DC)对已建立的胃癌裸鼠的免疫治疗作用.方法 用人胃癌细胞株(SGC-7901)接种BALC/c裸鼠皮下,建立胃癌裸鼠模型.将已建立胃癌的裸鼠随饥分为4组,每组5只,A组:用RPMI-1640培养液治疗作为对照组;B组:DC+CIK细胞治疗组,C组:γδT细胞治疗组;D组:DC+CD3AK细胞+γδT细胞治疗组,治疗组每次治疗同时给予IL-26000单位,肿瘤细胞接种第4天开始治疗,以后每3 d进行一次治疗,共3次,从接种肿瘤细胞后第55天结束实验.结果 裸鼠接种5 × 106胃癌细胞后第4天,存接种部位均有肿瘤形成,直径为2～3 mm,成瘤率为100%.荷瘤小鼠经第一次细胞免疫治疗3 d后B、C、D组肿瘤消退裸鼠分别为1、2、1只,第2次细胞免疫治疗后肿瘤消退的裸鼠的数目分别为2、2、2只,末消退的肿瘤体积均有减少,而对照组肿瘤体积不断增大.在第一次治疗后20 d时测A、B、C、D组平均肿瘤体积分别为87、40、45和38 mm3,各治疗组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).治疗组存活天数较对照组存活天数长,其中C组与D组存活天数比较差异有统计学意义(P<0.01),D组长于C组.结论 用胃癌患者的DC+CIK细胞、γδT细胞、DC+CD3AK细胞+γδT细胞治疗胃癌裸鼠能不同程度消退裸鼠已建立的胃癌和延缓其生长.细胞免疫治疗能延长荷瘤裸鼠生存期,其中 D组免疫治疗后小鼠存活天数大于C组.     

γδT细胞在细胞免疫治疗骨肉瘤中的潜在作用

γδT细胞是T淋巴细胞中一类数量比较少的细胞,不受MHC I、Ⅱ类分子以及相关抗原肽配体限制,可直接识别抗原,分泌细胞因子溶解靶细胞,具有广泛的抗肿瘤活性.在骨肉瘤患者中,γδT细胞可通过识别骨肉瘤细胞表面相关抗原,溶解杀灭肿瘤细胞.未来以γδT细胞为基础的细胞免疫疗法联合手术、化疗等方法可在较大程度上提高骨肉瘤患者生存率.     

γδT细胞、NK细胞及LAK的生物学特性比较

过继性免疫治疗是肿瘤生物治疗的重要手段之一.80年代后期,开始进行LAK细胞抗肿瘤过继免疫治疗,并取得一定效果.近来,γδT细胞和NK细胞在非恃异性或半特异性免疫治疗中的作用逐渐被重视.我们通过体外分离和增殖培养γδT细胞、NK细胞和LAK细胞,比较研究了3种细胞的抗肿瘤的生物学特性,结果显示,以MACS分离γδT细胞,培养2周后细胞数扩增600～800倍,CD3,CD8和γδT表达阳性率分别是70.41%,42.69%和40.5%,γδT细胞对NK敏感细胞K562以及NK不敏感细胞Raji,XG-73种不同到细胞均有较高的杀伤率,分别为35.98%,32.27%和49.08%,高于对照组PBMC的19.56%,11.34%和10.58%;NK细胞对此3种细胞的杀伤率分别是45.21%,12.34%和11.94%;     

γδT细胞对血液肿瘤细胞的体外杀伤活性

目的:建立γδT细胞培养体系,探讨γδT细胞对不同血液肿瘤细胞的杀伤活性.方法:选取2016年1月至2016年4月在解放军第307医院造血于细胞移植科收治的4例B细胞淋巴瘤患者和该院5例体检健康志愿者,分别分离其外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),用唑来磷酸(zoledronate,Zol)和IL-2体外扩增γδT细胞,采用流式细胞术检测γδT细胞对血液肿瘤细胞Jurkat、THP-1、HL-60、K562、Raji、U-937和RPMI-8226的杀伤活性,比较CIK、NK和γδT三种细胞对K562细胞的杀伤作用,检测γδT细胞IFN-γ、TNF-α的分泌水平及CD107a分子的表达水平.结果:成功在体外扩增外周血γδT细胞;γδT细胞对Jurkat、THP-1、HL-60、K562、U-937和RPMI-8226细胞均有明显的杀伤活性(P＜0.05);γδT细胞对K562细胞的杀伤活性与NK细胞无统计学差异,但明显强于CIK细胞(P＜0.01);随着与K562细胞共孵育时间的延长,γδT细胞分泌IFN-γ的水平呈现出时间依赖性增加,TNF-α在8h后逐渐增加;与K562细胞或HL-60细胞共孵育后,γδT细胞CD107a分子的表达水平均显著增加(P＜0.01).结论:体外扩增的γδT细胞对血液肿瘤细胞具有较高的杀伤活性,为血液肿瘤的细胞免疫治疗提供实验依据.     

调节性T细胞与肿瘤

调节性T（regulatory T, Treg）细胞是一群具有抑制其他免疫细胞功能的负调控细胞，包括CD4+ Treg、CD8+ Treg、NKT Treg 和双阴性（double negative，DN）Treg细胞等四大类。研究显示，肿瘤微环境中Treg细胞数量升高，且这些升高的 Treg细胞能抑制抗肿瘤免疫、降低肿瘤免