羊膜促进间充质干细胞表皮细胞生长的形态学特征

目的：将人羊膜（human amniotic membrane,HAM)负载培养猪骨髓间充质干细胞（MSCs)重建皮肤真皮替代物，负载培养猪表皮细胞重建皮肤表皮替代物，并观察猪MSCs，表皮细胞在HAM上生长增殖的形态特点。方法：将贵州小香猪的MSCs，表皮细胞原代培养，传代扩增后，分别以不同的密度接种于HAM的基质面，逐日于倒置显微镜下观察MSCs，表皮细胞的生长增殖变化情况，并于培养3－18d进行光镜，电镜观察，检测MSCs，表皮细胞在HAM上生长的形态特点，结果：接种后30min内就明显见到MSCs,表皮细胞在HAM上贴附，24h大部分贴附生长，3d形成单层完全覆盖HAM，超微结构形态良好。结论：HAM是MSCs，表皮细胞在体外培养的良好载体，对MSCs，表皮细胞有明显的促增殖作用。     

人羊膜诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞的分化

背景:国内外的研究多采用细胞因子诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞,而较少用人羊膜与骨髓间充质干细胞共培养的方法进行诱导分化。目的:观察人羊膜诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞分化的可行性。方法:体外分离培养、扩增人骨髓间充质干细胞,选用第5代人骨髓间充质干细胞与健康人羊膜共培养12d进行诱导分化。结果与结论:人骨髓间充质干细胞贴壁生长,呈长梭形,流式细胞仪检测表达CD29,CD44的阳性细胞数分别为96.6%,94.6%。人羊膜与人骨髓间充质干细胞共培养12d,人骨髓间充质干细胞渐变为扁平的表皮样细胞,免疫组化染色显示CK19散在阳性,广谱CK为弥漫阳性。说明人羊膜可诱导人骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞。     

人羊膜诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞的分化

背景：国内外的研究多采用细胞因子诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞,而较少用人羊膜与骨髓间充质干细胞共培养的方法进行诱导分化。目的：观察人羊膜诱导人骨髓间充质干细胞向表皮样细胞分化的可行性。方法：体外分离培养、扩增人骨髓间充质干细胞,选用第5代人骨髓间充质干细胞与健康人羊膜共培养12d进行诱导分化。结果与结论：人骨髓间充质干细胞贴壁生长,呈长梭形,流式细胞仪检测表达CD29,CD44的阳性细胞数分别为96.6%,94.6%。人羊膜与人骨髓间充质干细胞共培养12d,人骨髓间充质干细胞渐变为扁平的表皮样细胞,免疫组化染色显示CK19散在阳性,广谱CK为弥漫阳性。说明人羊膜可诱导人骨髓间充质干细胞分化为表皮样细胞。     

人羊膜负载猪骨髓间充质干细胞体外生长的形态特点

背景:人羊膜含胶原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板层体等多种成分,表达多种生长因子及其mRNA的相关蛋白,能为细胞的增殖、分化提供丰富的营养成分,有利于细胞的生长繁殖,其能否负载培养猪骨髓间充质干细胞良好生长值得研究。目的:建立人羊膜负载培养猪骨髓间充质干细胞生长的组织工程方法,观察骨髓间充质干细胞生长增殖的形态特点。设计:随机对照观察。单位:创伤、烧伤和复合伤国家重点实验室,解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所。材料:实验于2003-01/11在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。选用3只出生二三个月的贵州小香猪,雌雄不拘,体质量6～8kg,由解放军第三军医大学实验动物中心提供。主要试剂:IMDM培养基(Hyclone,USA);优质胎牛血清PAA(Germany);Eosin B(Sigma,USA);OCT包埋剂(USA)。主要仪器:BX51立式荧光显微镜(Olympus,Japan);IX70型倒置荧光显微镜(Olympus,Japan);恒冷切片机(2700-Frigcut,德国);骨髓穿刺针(江苏);超净工作台(苏净集团安泰公司);CO2恒温培养箱(QUEUE,USA)。方法:按文献所述方法准备人羊膜,将按文献所述方法分离、培养的贵州小香猪骨髓间充质干细胞贵州小香猪的骨髓间充质干细胞原代培养、传代扩增后,以不同密度(0.84×105/cm2,1.54×105/cm2,2.75×105/cm2)接种于人羊膜基质面,倒置显微镜及扫描电镜下观察不同培养密度骨髓间充质干细胞的生长增殖变化情况;将第2、3代骨髓间充质干细胞以1.54×105/cm2的密度作为合适种植密度接种到由聚酯环支撑的人羊膜的基质面,最长培养至18d,逐日经卷膜、切片、苏木精-伊红染色光镜下观察人羊膜负载骨髓间充质干细胞生长情况,同时给予扫描及透射电镜。主要观察指标:不同培养密度及不同时间点骨髓间充质干细胞在人羊膜上的生长情况。结果:①不同种植密度人羊膜促进骨髓间充质干细胞生长比较:倒置显微镜下,以0.84×105/cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞排列不规则、稀疏,间距大;以1.54×105/cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞生长排列规则,密度适中,24h前细胞轮廓清楚,细胞活性好;以2.75×105/cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞拥挤生长,12h后不见细胞轮廓,多见非贴附细胞,随时间的推移,细胞老化快,细胞碎屑多见。扫描电镜下,以0.84×105/cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,胞体肥大,呈不规则的长多边形扁平状,见粗细突起,细胞间距大;以1.54×105/cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞密度适中,胞体肥大,呈不规则的长多边形扁平状,粗细突起较多,突起相互连接交织。细胞边缘有重叠现象;以2.75×105/cm2细胞密度接种的骨髓间充质干细胞,细胞拥挤重叠生长,周围突起不明显,边缘卷折,细胞碎屑多见。②不同时间点人羊膜负载骨髓间充质干细胞生长情况:倒置显微镜下,骨髓间充质干细胞接种在人羊膜的基质面后很快贴附生长,30min内就可见到骨髓间充质干细胞在人羊膜基质面上的贴附生长象。24h后可见几乎全部骨髓间充质干细胞贴附生长,细胞活力好,折光度强,48h后融合为单层,第4￣18天可见骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面密集生长。苏木精-伊红染色可见骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面呈放射状、漩涡状或平行生长,胞体较大,呈梭形,胞核居中、深染、大而清晰,细胞形态较为一致;扫描电镜下,骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面生长4d,排列密度适中,胞体肥大呈不规则的长多边形扁平状,粗细突起丰富,部分突起相互连接交织成网,胞膜形成突起牢固粘附于人羊膜基质上;透射电镜下,骨髓间充质干细胞在人羊膜的基质面生长4d切面,骨髓间充质干细胞在人羊膜上大多呈双层生长,细胞呈纺锤状,胞核两端胞浆突起较长,互相重叠,染色质以常染色质为主,核仁明显,可见丰富细胞器,如粗面内质网,线粒体。结论:人羊膜对骨髓间充质干细胞有明显的促增殖作用,骨髓间充质干细胞可以人羊膜为载体在体外进行培养,人羊膜是骨髓间充质干细胞的良好载体。     

表皮生长因子干预人羊膜间充质干细胞的增殖和迁移

背景:人羊膜间充质干细胞移植可促进皮肤创伤的愈合.目的:观察表皮生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖和迁移的影响.方法:人羊膜间充质干细胞经分离、鉴定并培养至第3代.细胞经过不同浓度的表皮生长因子处理后,用MTT法测量吸光度值从而计算出细胞存活率,通过计数穿过Transwell小室的细胞数测定表皮生长因子对细胞迁移能力的影响;并用表皮生长因子受体的抑制剂AG1478及PI3K的抑制剂LY294002检测其对细胞迁移能力的影响.结果与结论:表皮生长因子处理后细胞的吸光度值升高1.55倍,穿过膜的数量增高1.5倍;AG1478、LY294002对表皮生长因子引起的迁移有抑制作用.提示表皮生长因子处理后细胞增殖和迁移能力均增强,迁移与EGFR-PI3K信号通路有关.     

表皮生长因子干预人羊膜间充质干细胞的增殖和迁移

背景：人羊膜间充质干细胞移植可促进皮肤创伤的愈合。目的：观察表皮生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖和迁移的影响。方法：人羊膜间充质干细胞经分离、鉴定并培养至第3代。细胞经过不同浓度的表皮生长因子处理后,用MTT法测量吸光度值从而计算出细胞存活率,通过计数穿过Transwell小室的细胞数测定表皮生长因子对细胞迁移能力的影响;并用表皮生长因子受体的抑制剂AG1478及PI3K的抑制剂LY294002检测其对细胞迁移能力的影响。结果与结论：表皮生长因子处理后细胞的吸光度值升高1.55倍,穿过膜的数量增高1.5倍;AG1478、LY294002对表皮生长因子引起的迁移有抑制作用。提示表皮生长因子处理后细胞增殖和迁移能力均增强,迁移与EGFR-PI3K信号通路有关。     

骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化的研究进展

骨髓间充质干细胞是一类非造血性的细胞,在不同诱导条件下可分化为表皮细胞、软骨细胞、骨细胞、神经元细胞、类髓核细胞等。因其来源广泛,具有较高的分化再造潜能,无特异抗原标记,具有归巢潜能,使其具有良好的应用前景。骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化在创面修复的实验研究与临床应用上均有积极意义。本文就骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化的研究现状、分化条件、机制与意义等方面作一综述。     

兔骨髓间充质干细胞与羊膜的共培养

背景:近年来利用组织工程技术构建软骨以修复软骨缺损已经取得较大进步。骨髓间充质干细胞在软骨组织工程研究中作为一种常见的种子细胞被广泛应用。目的:以人羊膜作为细胞支架负载兔骨髓间充质干细胞,观察羊膜的生物相容性。方法:将兔骨髓间充质干细胞接种于人脱细胞羊膜上,体外共培养后进行形态学观察,以四甲基偶氮唑盐比色法观察骨髓间充质干细胞增殖活性,评价羊膜的组织相容性。应用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色法观察细胞存活和凋亡情况。结果与结论:骨髓间充质干细胞在羊膜上生长较好,细胞活力增强,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色结果示仅有少量细胞凋亡。提示羊膜是一种具有良好生物相容性的支架材料,可以促进骨髓间充质干细胞增殖。     

体外培养人骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化及表皮细胞角蛋白的表达

背景:动物实验已经证实骨髓间充质干细胞体外诱导可分化为表皮细胞.目的:观察体外培养条件下人骨髓间充质干细胞向表皮细胞的分化及表皮细胞角蛋白表达.方法:采用Ficoll-Paque密度梯度离心法提取人胚胎骨髓间充质干细胞,以免疫细胞化学及流式细胞仪测定细胞表面CD33、CD34标记物进行鉴定.取第3代骨髓间充质干细胞以30%条件培养基诱导其向表皮细胞分化,免疫细胞化学染色观察诱导后细胞形态与细胞角蛋白水平变化.结果与结论:采用密度梯度离心法从人胚胎骨髓中分离培养得到细胞成分均一的骨髓间充质干细胞.骨髓间充质干细胞经体外诱导后,出现细胞角蛋白19表达阳性细胞,说明骨髓间充质干细胞在体外诱导后可能发生向表皮细胞分化.     

体外培养人骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化及表皮细胞角蛋白的表达

背景：动物实验已经证实骨髓间充质干细胞体外诱导可分化为表皮细胞。目的：观察体外培养条件下人骨髓间充质干细胞向表皮细胞的分化及表皮细胞角蛋白表达。方法：采用Ficoll-Paque密度梯度离心法提取人胚胎骨髓间充质干细胞,以免疫细胞化学及流式细胞仪测定细胞表面CD33、CD34标记物进行鉴定。取第3代骨髓间充质干细胞以30%条件培养基诱导其向表皮细胞分化,免疫细胞化学染色观察诱导后细胞形态与细胞角蛋白水平变化。结果与结论：采用密度梯度离心法从人胚胎骨髓中分离培养得到细胞成分均一的骨髓间充质干细胞。骨髓间充质干细胞经体外诱导后,出现细胞角蛋白19表达阳性细胞,说明骨髓间充质干细胞在体外诱导后可能发生向表皮细胞分化。     

羊膜负载骨髓间充质干细胞对放创复合伤促愈的实验研究

目的将贵州小香猪骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)接种到人羊膜(humanamnioticmembrane,HAM)上,用于治疗放创复合伤全厚皮肤缺损。方法将HAM负载经核荧光标记物DAPI标记的MSCs,培养3～5d后,移植到小香猪全厚皮肤缺损创面作为实验治疗组,以单纯无细胞接种的HAM作对照治疗组。从宏观、光镜、电镜水平进行较系统的观察。结果与对照治疗组相比,HAM负载MSCs能较好地促进放创复合伤皮肤缺损的愈合。荧光标记显示,MSCs参与了局部组织的修复。结论HAM负载MSCs能较好地促进放创复合伤全厚皮肤缺损创面的组织修复。     

Therapeutic potential of bone marrow-derived mesenchymal stem cells on experimental liver fibrosis

OBJECTIVE: To study the effect of mesenchymal stem cells (MSC) on experimental liver fibrosis in rats. DESIGN AND METHOD: MSC were derived from bone marrow obtained from femoral and tibial bones of male albino rats. MSC were separated, grown, and propagated in culture for 4 weeks and were characterized morphologically and by detection of CD29 by RT-PCR. They were then infused into the tail vein of female rats that received CCl4 injection to induce liver fibrosis. Rats were divided into 4 groups: control, CCl4, CCl4 plus MSC, and MSC. Liver tissue was examined histopathologically and liver functions (ALT and serum albumin) were estimated for all groups. Y-chromosome gene (sry) was assessed by PCR in liver tissue of the female rats to confirm uptake of the male stem cells. Hydroxyproline content in liver tissue was assessed by chemical methods and expression of the collagen gene (type I) was detected as a marker for liver fibrosis. Results of the present study showed that MSC have a significant antifibrotic effect as evidenced by the significant decrease in liver collagen gene expression as well as the decrease in hydroxyproline content in the CCl4/MSC group (p<0.001) compared to the CCl4 group. The Y-chromosome gene (sry) was detected by RT-PCR in the CCl4/MSC group, but was not detected in control group and other groups. The CD29 gene was expressed in MSC culture, and this confirmed the efficiency of isolation and propagation of MSC in culture. With regard to liver function, there was also a significant improvement and elevation of serum albumin in the CCl4/MSC group compared to the CCl4 group (p<0.05). As regard to the liver enzyme ALT, there was a decrease of its level in the CCl4/MSC group compared to the CCl4 group. However, this was statistically nonsignificant (p>0.05). In conclusion, MSC have a potential therapeutic effect against the fibrotic process through their effect in minimizing collagen deposition in addition to their capacity to differentiate into hepatocytes.     

端粒酶与骨髓间充质干细胞

目的:探讨导入外源性端粒酶逆转录酶能否使骨髓间充质干细胞生命周期延长,维持干细胞的自我更新能力和多向分化潜能,从而为其临床应用提供种子细胞。资料来源:应用计算机检索PubMed1980-01/2006-06期间有关端粒酶和骨髓间充质干细胞的文献,检索词“telomere,telomerase,bone marrow cell,mesenchymal stem cell”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索CNKI数据库1994-01/2005-12和万方数据库2003/2006期间的相关文献,限定文章语言种类为中文,检索词“端粒,末端转移酶,骨髓细胞,间充质干细胞。”资料选择:选取试验包括间充质干细胞自身端粒酶活性组和间充质干细胞中外源性端粒酶逆转录酶的活性组比较的文章,进行初审,删除明显不相关的试验研究,然后查找余下的文献全文,进一步判断是否为端粒酶对间充质干细胞的作用。纳入标准:①与端粒酶有关,无论是组成或是功能相关的。②与间充质干细胞有关,并涉及其分化潜能研究。排除标准:端粒酶与间充质干细胞之间没有建立关联的试验。质量评价主要考察资料的真实性和试验的严谨性。资料提炼:共检索到256篇相关文献,其中30篇文献根据相应标准采纳,其余文献均被删除。资料综合:端粒酶的表达对于维持骨髓间充质干细胞自我更新能力和复制潜能具有重要意义。利用端粒酶逆转录酶修饰骨髓间充质干细胞,可有效地体外长期扩增并维持干/祖细胞的多向分化潜能特性;通过异位表达端粒酶逆转录酶使骨髓间充质干细胞永生化,可为骨髓间充质干细胞基础研究及临床应用提供药物筛选模型或细胞模型。结论:随着组织细胞工程学的兴起,体外定向诱导干/祖细胞分化为各种所需组织细胞已经成为研究的焦点,因此诱导和增加端粒酶的活性,维持干细胞分化、自我更新和增殖能力,延长干细胞的寿命有重要意义。     

胎盘和骨髓来源的间充质干细胞生物学特性比较

学术背景：间充质干细胞主要来源于骨髓，但人骨髓中的间充质干细胞含量极低。近年来，已有具备干，祖细胞特征的间充质细胞自外周血、密质骨、软骨、肌肉等组织中分离出来，这些组织的一个共同特征就是来源于胚胎发育期的中胚层，提示胎盘中存在间充质干细胞成分。 目的：介绍胎盘和骨髓来源的间充质干细胞的分离方法及应用前景，对其生物学特性进行比较。 检索策略：由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1996—01／2008—2的相关文献，检索词“placenta—derived mesenchymal stem cells，bone marow—derived mesenchymal stem cell，Biological characteristics，Tissue engineering”，并限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库1999—01/2008—2的相关文献，检索词“胎盘来源的间充质干细胞，骨髓来源的间充质干细胞，生物学特性，组织工程”，并限定文章语言种类为中文。共检索到137篇文献，对资料进行初审，纳入标准：①文章所述内容应与胎盘来源的间充质干细胞或骨髓来源的间充质干细胞研究以及两者生物学特性比较密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准：①重复性研究。②Meta分析。 文献评价：文献来源主要是对胎盘和骨髓来源的间充质干细胞研究进展做汇总分析。所选用的31篇文献中，8篇为综述，其余均为临床或基础实验研究。 资料综合：①目前对于胎盘间充质干细胞的体外分离以Percoll连续密度梯度分离纯化法最为经典，采用此法从组织浸出液中分离获得的间充质干细胞大小均匀，纯度较高。骨髓间充质干细胞的分离方法主要包括贴壁法、密度梯度离心法、细胞表面分子标记分选法。②胎盘间充质干细胞在形态上与骨髓间充质干细胞类似，均为典型的成纤维细胞样，并呈漩涡状生长。胎盘间充质干细胞表达类似于骨髓间充质干细胞的表面标志，如间质细胞标志SH2／CD105、SH3：主要组织相容性复合物HLA—ABC；整合蛋白家族CD49e、CD29：透明质酸盐受体CD44等，不表达造血细胞表面标志CD34、CD45和内皮细胞表面标志vWF、Flk21等，表明胎盘来源的间充质干细胞免疫原性很低，这在移植中具有重要意义。 结论：胎盘来源的间充质干细胞具有与骨髓来源的间充质干细胞相似的形态与表面标志，也具有多向分化潜能，并且胎盘取材方便安全，不涉及伦理问题，将成为组织工程干细胞的新来源。     

Therapeutic effects of mouse bone marrow-derived clonal mesenchymal stem cells in a mouse model of inflammatory bowel disease

Mouse bone marrow-derived clonal mesenchymal stem cells (mcMSCs), which were originated from a single cell by a subfractionation culturing method, are recognized as new paradigm for stem cell therapy featured with its homogenous cell population. Next to proven therapeutic effects against pancreatitis, in the current study we demonstrated that mcMSCs showed significant therapeutic effects in dextran sulfate sodium (DSS)-induced experimental colitis model supported with anti-inflammatory and restorative activities. mcMSCs significantly reduced the disease activity index (DAI) score, including weight loss, stool consistency, and intestinal bleeding and significantly increased survival rates. The pathological scores were also significantly improved with mcMSC. We have demonstrated that especial mucosal regeneration activity accompanied with significantly lowered level of apoptosis as beneficiary actions of mcMSCs in UC models. The levels of inflammatory cytokines including TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6, and IL-17 were all significantly concurrent with significantly repressed NF-κB activation compared to the control group and significantly decreased infiltrations of responsible macrophage and neutrophil. Conclusively, our findings provide the rationale that mcMSCs are applicable as a potential source of cell-based therapy in inflammatory bowel diseases, especially contributing either to prevent relapse or to accelerate healing as solution to unmet medical needs in IBD therapy.     

骨髓和脂肪来源间充质干细胞的免疫调节作用

背景：脂肪来源的间充质干细胞是否具有和骨髓来源间充质干细胞类似的免疫调节作用？目的：观察骨髓来源和脂肪来源间充质干细胞的免疫学特征。方法：分离骨髓和脂肪来源的间充质干细胞,分别检测它们对T细胞周期、活化、抑制和增殖的作用情况。结果与结论：骨髓来源和脂肪来源的间充质干细胞同样具有抑制T细胞增殖的能力,在有丝分裂原刺激和混合淋巴细胞反应的T细胞增殖中这种作用都是具有剂量依赖性的,在1︰2时有极强的抑制作用,但是在1︰100时这种作用基本消失,在共培养时骨髓来源和脂肪来源的间充质干细胞都可以使更多的T细胞被抑制在G0/G1期,同时也可以抑制T细胞的早期活化,但是上述作用脂肪来源的间充质干细胞均较骨髓来源间充质干细胞弱,且脂肪来源的间充质干细胞并不具有抑制T细胞凋亡的作用。     

骨髓和脂肪来源间充质干细胞的免疫调节作用

背景:脂肪来源的间充质干细胞是否具有和骨髓来源间充质干细胞类似的免疫调节作用?目的:观察骨髓来源和脂肪来源间充质干细胞的免疫学特征。方法:分离骨髓和脂肪来源的间充质干细胞,分别检测它们对T细胞周期、活化、抑制和增殖的作用情况。结果与结论:骨髓来源和脂肪来源的间充质干细胞同样具有抑制T细胞增殖的能力,在有丝分裂原刺激和混合淋巴细胞反应的T细胞增殖中这种作用都是具有剂量依赖性的,在1︰2时有极强的抑制作用,但是在1︰100时这种作用基本消失,在共培养时骨髓来源和脂肪来源的间充质干细胞都可以使更多的T细胞被抑制在G0/G1期,同时也可以抑制T细胞的早期活化,但是上述作用脂肪来源的间充质干细胞均较骨髓来源间充质干细胞弱,且脂肪来源的间充质干细胞并不具有抑制T细胞凋亡的作用。     

人胎盘源与人骨髓源间充质干细胞的生物学性状比较

背景:人骨髓源间充质干细胞具有很好的临床应用价值,但数量和取材都有限,而人胎盘源间充质干细胞则相反,目前已成为再生医学的重要细胞来源和最具临床应用前景的功能干细胞.目的:比较人胎盘源间充质干细胞和人骨髓源间充质干细胞体外分离培养、扩增及生物学性状的差异.方法:采用胶原酶消化法分离人胎盘组织,密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,分别加入体积分数10%胎牛血清的LG-DMEM 培养液,待细胞汇合至90%后消化传代.分别取第3代的人胎盘和骨髓间充质干细胞,按1×106 浓度接种,当细胞达70%~80%融合时,换成成脂细胞诱导分化培养液,诱导16 d.结果与结论:胎盘间充质干细胞、骨髓间充质干细胞均成贴壁生长、形态均一的成纤维样细胞梭形外观,但后者体积略小.两种细胞均高表达CD29、CD44,不表达CD34、CD106.二者均可分化为脂肪细胞.可见,从胎盘和骨髓中培养出的间充质干细胞在细胞形态、生长特性等方面基本相似,在体外均可有效扩增并成脂肪分化,均可作为组织工程的另一成体干细胞来源,而胎盘源间充质干细胞具有更好的应用前景.     

猪骨髓间质干细胞生物学特性及分化为成骨细胞和心肌细胞的能力

目的:建立猪骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)体外分离培养方法。对猪MSCs的生物学特性及分化为成骨细胞和心肌细胞的能力进行研究。方法:抽取猪骨髓体外培养MSCs,绘制生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期。选择第二代MSC体外诱导分化为成骨细胞和心肌细胞。通过碱性磷酸酶染色及钙沉积对成骨细胞进行鉴定;用免疫组化,透射电镜鉴定心肌细胞。结果:MSC细胞形态呈长梭形或多边形,细胞生长曲线呈S形,群体倍增时间为26h,细胞周期显示有69.22%细胞处于G0/G1期,24.44%细胞处于S期,细胞化学染色显示POX、SB阴性,PAS、α-NAE阳性,约1%细胞ALP阳性。MSC经体外诱导分化后可形成骨细胞和心肌细胞。结论:猪骨髓MSCs可在体外长期、稳定培养,具有多潜能分化活性,可以为间质干细胞系及组织工程研究提供较理想的细胞来源。为临床间质干细胞的应用研究提供动物模型,并为进一步的临床康复研究提供实验依据。