缺氧及HIF-1α对结直肠癌上皮-间质转化及侵袭增殖的影响

目的 研究不同缺氧条件下缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、锌指转录因子Snail及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在结直肠癌SW480细胞中的表达水平,以及它们对细胞的增殖凋亡和侵袭迁移力的影响,探讨三者在结直肠癌的缺氧及上皮间质转化中的作用及可能机制.方法 利用氯化钴(CoCl2)化学诱导细胞缺氧模型,实验分组:常氧组、低氧组和无氧组.采用MTT法检测结直肠癌SW480细胞的生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell小室法)检测细胞的侵袭迁移力,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡及周期变化,RT-PCR及Western blot检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherin mRNA与蛋白的表达.结果 MTT结果显示随CoCl2浓度的增加结直肠癌SW480细胞的增殖活性逐渐增加(P＜0.05);Transwell结果显示随缺氧程度的增加穿过基质膜和聚碳酸酯膜的细胞数逐渐增多,侵袭迁移率增加(P＜0.05);FCM检测结果显示与常氧组比较,无氧组和低氧组G0/G1期SW480细胞明显减少,G2/S期细胞明显增多,细胞凋亡率降低(P＜0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示低氧组、无氧组与常氧组比较,SW480细胞内HIF-1α和Snail mRNA与蛋白的表达增加,E-cadherin mRNA和蛋白的表达降低(P＜0.05),且HIF 1 α和Snail的表达呈显著正相关.HIF-1α、Snail与E-cadherin的表达均呈显著负相关(P＜0.05).结论 缺氧及HIF-1α可促进结直肠癌SW480细胞株的体外生长增殖活性,抑制其凋亡,增强其体外侵袭迁移能力,其机制可能是缺氧诱导HIF-1α表达上调直接作用于SW480细胞产生,亦可能是缺氧或HIF-1α表达上调通过促进Snail表达,抑制E-cadherin表达,间接导致EMT的发生发展而产生.     

缺氧微环境下HIF-1α对胰腺癌细胞上皮间质转化及侵袭迁移的影响

目的:探讨缺氧微环境下缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）对胰腺癌细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及侵袭迁移的影响。方法:首先比较缺氧和常氧培养的胰腺癌细胞形态和体外侵袭迁移能力,以及HIF-1α和EMT相关因子的表达水平。然后通过HIF-1α抑制剂YC-1和siRNA基因沉默分别从蛋白和mRNA水平抑制HIF-1α的表达,检测缺氧培养的胰腺癌细胞体外侵袭迁移能力,以及EMT相关基因的表达水平。结果:形态学和分子水平证实缺氧诱导人胰腺癌细胞株AsPC-1、Capan-2、Panc-1的EMT改变,增强其体外侵袭和迁移能力。缺氧上调HIF-1α、Snail、N-cadherin的表达,下调E-cadherin的表达。抑制HIF-1α的表达后,Snail和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调,并且体外侵袭迁移能力降低。结论:HIF-1α介导EMT在缺氧促进胰腺癌细胞侵袭迁移中发挥重要作用。     

Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响

目的:探讨Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响。方法:根据CCK-8实验结果选择CoCl2和MK-2206的浓度,最后分成空白组、MK-2206组、CoCl2组、MK-2206+CoCl2组;Transwell小室实验检测四组细胞的迁移和侵袭能力;RT-PCR法检测各细胞组中Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达水平;Western blot技术检测各细胞组中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、HIF-1α蛋白表达的差异性情况。结果:CoCl2诱导的缺氧环境可以促进SW480细胞的侵袭、迁移(P＜0.05),同时能够促进HIF-1α的mRNA和蛋白表达(P＜0.05),但是低浓度范围内的CoCl2对SW480细胞增殖活性无明显影响(P＞0.05);MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境中抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭、迁移能力(P＜0.05);MK-2206能在体外的常氧环境下抑制SW480细胞的Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达(P＜0.05),缺氧环境无明显作用;同时MK-2206能够在常氧和缺氧环境中显著降低p-Akt、p-mTOR、HIF-1α的蛋白表达水平(P＜0.05)。 结论:Akt抑制剂MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境下抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭能力,但缺氧环境可能会弱化MK-2206对SW480细胞迁移的抑制作用。     

缺氧诱导因子1 -α参与结直肠癌细胞上皮间质转化及DNA同源重组修复的机制

目的:研究氯化钴(CoCl2)模拟的细胞体外缺氧微环境对结直肠癌细胞株SW480及Caco-2上皮间质转化及DNA同源重组修复的影响并探究其机制.方法:应用不同浓度的氯化钴(CoCl2)处理SW480及Caco2细胞72 h后,CCK8法检测细胞增殖能力,划痕及Transwell试验检测细胞的迁移及侵袭能力,流式细胞术(FCM)检测细胞周期及凋亡情况,RT-PCR及Western blotting实验检测细胞内相关基因mRNA及蛋白水平的变化情况.结果:CCK-8实验提示细胞在缺氧后增殖能力明显增加(P＜0.05);划痕试验及Transwell侵袭实验提示细胞在缺氧条件下迁移及侵袭能力明显增强(P＜0.05);流式细胞术提示细胞在缺氧后被阻滞在S期(P＜0.05),凋亡率明显下降(P＜0.05);RT-PCR试验表明缺氧后细胞内缺氧诱导因子1-α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)及RAD51的mRNA水平上调(P＜0.05);Western blotting实验表明在缺氧环境下细胞内HIF-1α表达上调(P＜0.05),上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition)相关蛋白:钙黏附蛋白E(E-cadherin)表达下调,波形蛋白(vimentin)及转录抑制因子(snail)表达上调(P＜0.05),DNA同源重组相关蛋白BRCA1及RAD51表达上调(P＜0.05),PI3K/AKT(磷脂酰肌醇-3-羟激酶)信号通路下游关键信号分子AKT1及共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutant gene)的编码产物ATM激酶磷酸化水平显著上调(P＜0.05).结论:慢性缺氧环境可促进结直肠癌细胞SW480及Caco-2的增殖、迁移和侵袭能力,抑制凋亡,其机制可能与HIF-1 α/PI3 K-AKT、HIF1-α/ATM信号通路介导EMT及DNA同源重组修复过程有关.     

过表达缺氧诱导因子-1α的结直肠癌裸鼠可视化模型的建立

目的:建立一种荧光可视化显像且稳定过表达缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的裸鼠结直肠癌移植瘤模型。方法:对不同的人结直癌细胞系(SW480、SW620、LOVO及HCT116细胞)用缺氧诱导剂Co Cl2处理,根据HIF-1α被诱导表达的情况选择合适的靶细胞;将HIF-1α的c DNA序列克隆至慢病毒表达质粒p LV-TRC-EGFP,构建p LVHIF1α-EGFP慢病毒表达质粒,并包装过表达HIF-1α的慢病毒颗粒Lenti-HIF1α-EGFP。将Lenti-HIF1α-EGFP感染SW480细胞,嘌呤霉素筛选稳定过表达HIF-1α的细胞株SW480HIF-1α,Western blotting检测SW480HIF-1α细胞内HIF-1α及其下游蛋白VEGF、M1型丙酮酸激酶(pyruvate kinase expression M1,PKM1)的表达情况,Transwell实验检测其迁移能力。裸鼠腹腔注射SW480HIF-1α建立结直肠癌移植瘤模型,倒置荧光显微镜观察裸鼠腹腔移植瘤结节。结果:常氧条件下4种结直肠癌细胞均不表达HIF-1α,经Co Cl2诱导后,除SW480细胞系以外的细胞均可被诱导表达HIF-1α,故选择SW480细胞作为研究靶细胞。成功构建稳定过表达HIF-1α的细胞株SW480HIF-1α,SW480HIF-1α细胞内HIF-1α、VEGF和PKM1的表达水平均高于野生型SW480细胞,其迁移能力较野生型SW480细胞显著增强[观察视野内迁移细胞数:(250±11)vs(50±5)个,P<0.01]。SW480HIF-1α组裸鼠肠壁形成肿瘤结节数量显著多于SW480组[(15±4)vs(4±1)个,P<0.05]。结论:成功建立了高表达HIF-1α的荧光可视化裸鼠移植瘤模型,为进一步的相关功能学研究以及药物筛选提供条件。     

缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7生物学行为的影响

目的:研究缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为,增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α(hypoxic-induciblefactor1α,HIF-1α)的表达,检验其在这一过程中的作用,并进一步探讨作用机制。方法:慢病毒感染细胞,干扰乳腺癌细胞系MCF-7中HIF-1α的表达,得到HIF-1α表达正常的乳腺癌细胞系MCF-7-NC和HIF-1α表达受干扰的细胞系MCF-7-HIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧,用MTT法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力,ANOVA检验检测其增殖能力的区别。Transwell实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力,计数通过Transwell小室的细胞,ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。结果:MTT实验结果:正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell实验检测细胞的侵袭能力,缺氧后正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后,正常表达HIF-1α的细胞系MCF-7-NC发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。共聚焦荧光染色显示:在诱导缺氧后,正常表达HIF-1α的MCF-7-NC细胞极性发生变化,呈长梭形改变,上皮标志物人广谱角蛋白(pan-cytokeratin,P-CK)表达下调,间质标志物人α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达上调;而HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△无明显EMT变化。结论:在体外条件下,缺氧可以引起乳腺癌细胞系MCF-7增殖能力减弱、侵袭能力增强,可以诱导乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,干扰缺氧诱导因子亚基HIF-1α的表达,则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。     

沉默LIMK1抑制人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化

目的:研究沉默LIMK1对人结肠癌SW480细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）的影响。方法:RT-PCR、Western blot、免疫荧光与免疫组化检测沉默LIMK1对EMT相关分子表达的影响。裸鼠实验检测沉默LIMK1对移植瘤生长的影响。结果:RT-PCR检测显示,沉默LIMK1可下调Vimentin和上调E-cadherin mRNA表达(P<0.05)。Western blot显示,沉默LIMK1可明显下调SW480细胞Snail及Vimentin蛋白表达和上调E-cadherin表达(P<0.05)。免疫荧光显示,LIMK1沉默细胞Snail与Vimentin阳性信号较对照组明显减弱,而E-cadherin阳性信号显著增强。裸鼠实验结果显示,沉默组肿瘤生长速度较SW480组明显减慢(P<0.05)。沉默组移植瘤瘤重（0.16±0.079）g较SW480组（0.86±0.165）g明显减少,瘤重抑制率为97.7%(P<0.05)。LIMK1沉默组移植瘤较对照组的Ki-67、Vimentin、Snail与CD34阳性表达明显减弱,而E-cadherin表达明显增加。结论:沉默LIMK1可体外抑制人结肠癌SW480细胞EMT。     

缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7生物学行为的影响

目的:研究缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为,增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α(hypoxic-induciblefactor1α,HIF-1α)的表达,检验其在这一过程中的作用,并进一步探讨作用机制。方法:慢病毒感染细胞,干扰乳腺癌细胞系MCF-7中HIF-1α的表达,得到HIF-1α表达正常的乳腺癌细胞系MCF-7-NC和HIF-1α表达受干扰的细胞系MCF-7-HIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧,用MTT法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力,ANOVA检验检测其增殖能力的区别。Transwell实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力,计数通过Transwell小室的细胞,ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。结果:MTT实验结果:正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell实验检测细胞的侵袭能力,缺氧后正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后,正常表达HIF-1α的细胞系MCF-7-NC发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。共聚焦荧光染色显示:在诱导缺氧后,正常表达HIF-1α的MCF-7-NC细胞极性发生变化,呈长梭形改变,上皮标志物人广谱角蛋白(pan-cytokeratin,P-CK)表达下调,间质标志物人α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达上调;而HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△无明显EMT变化。结论:在体外条件下,缺氧可以引起乳腺癌细胞系MCF-7增殖能力减弱、侵袭能力增强,可以诱导乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,干扰缺氧诱导因子亚基HIF-1α的表达,则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。     

长程缺氧对结肠癌细胞增殖的影响

目的:体外观察长程缺氧环境对结肠癌细胞SW480和HCT116增殖能力的影响并探讨其可能的作用机制。方法:缺氧培养结肠癌SW480和HCT116细胞14～28d,采用MTT法和平板克隆法检测缺氧条件下2种结肠癌细胞增殖能力的改变;激光共聚焦显微镜下观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和Wnt/β-catenin信号通路关键因子β-catenin的表达;蛋白质印迹法检测HIF-1α和β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、Ser9被磷酸化的GSK-3β[phospho-glycogen synthase kinase-3β(Ser9),pGSK-3β(Ser9)]以及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。以常氧下培养的这2种细胞作为对照。结果:细胞生长曲线和平板克隆检测结果均显示,长程缺氧适应后SW480和HCT116细胞的增殖能力较常氧下明显增强(P<0.01);激光共聚焦显微镜下观察发现,HCT116细胞在缺氧条件下HIF-1α的表达部位发生改变;蛋白质印迹法检测发现,与常氧组比较长程缺氧组细胞中HIF-1α(P<0.05)、β-catenin(P<0.05)和pGSK-3β(Ser9)(P<0.01)蛋白的表达均上调,而总GSK-3β的表达无明显变化,PCNA在缺氧条件下表达上调(与常氧组比较,在SW480细胞中P<0.05,在HCT116细胞中P<0.01)。结论:缺氧适应可促进结肠癌细胞SW480和HCT116的增殖,这可能是HIF-1α与Wnt/β-catenin信号转导通路共同作用的结果。     

沉默泡膜蛋白1对SW480细胞增殖与侵袭影响的研究

目的 泡膜蛋白1(vacuole membrane protein-1,VMP1)是近年来新发现的一个重要功能的抑癌基因.为明确VMP1在结直肠癌中的功能和意义,本研究通过慢病毒载体沉默结直肠癌细胞系SW480中VMP1基因的表达,探讨VMP1基因沉默后对结直肠癌细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用.方法 应用RT-PCR及蛋白质印迹法检测5种结直肠癌细胞系中VMP1的表达状况;设计人VMP1基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染VMP1高表达的结直肠癌细胞系,运用蛋白质印迹法鉴定其对VMP1基因的沉默效果;VMP1基因沉默后,通过MTT法和软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞技术检测细胞凋亡;运用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力.结果 VMP1在5种细胞系中存在差异性表达.具有低转移潜能的HT-29和SW480细胞与具有高转移潜能的LoVo、RKO和SW620细胞相比,有更高的VMP1表达水平,其中mRNA表达差异有统计学意义,t=3.88,P=0.005;而蛋白表达差异有统计学意义,t=14.29,P＜0.001.选取低转移细胞株中VMP1表达相对较高的SW480细胞作为研究对象,构建VMP1 shRNA慢病毒载体沉默SW480细胞中VMP1的表达.蛋白质印迹结果提示,VMP1稳定沉默的SW480细胞构建成功.在稳定沉默VMP1基因后,MTT法显示SW480细胞的增殖速度在24和48 h显著升高,F值分别为79.77和12.35,P值分别为＜0.001和0.025.软琼脂克隆形成实验结果显示,SW480细胞的集落数目显著增多,F=75.23,P＜0.001.二者均表明SW480细胞增殖能力增强.流式细胞技术检测显示,VMP1基因沉默后可抑制SW480细胞凋亡,F=84.44,P＜0.001.Transwell迁移实验结果显示,VMP1沉默后SW480迁移能力增强,F=155.90,P＜0.001.结论 VMP1基因可能与结直肠癌的细胞增殖、凋亡与转移有关,进而参与了结直肠癌的发生、发展.     

BCYRN1对结直肠癌转移表型的影响及其机制探讨

目的:探究长链非编码RNA脑细胞质RNA1(BCYRN1)在结直肠癌组织中的表达特征及其与细胞侵袭转移的关系。方法:35例结直肠癌组织及相应的癌旁正常组织收集于2016年3月至2017年12月期间经我院普外科行结直肠癌根治术的患者，采用实时荧光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）技术检测结直肠癌及癌旁正常的组织中BCYRN1、Snail及E-cadherin的mRNA表达水平；比较不同来源组织中BCYRN1、Snail及E-cadherin表达差异并分析BCYRN1与Snail及E-cadherin表达的相关性；分析BCYRN1表达与患者病理资料间的关系。采用过表达载体慢病毒转染技术外源性上调结直肠癌细胞SW480中BCYRN1的表达以此作为实验组细胞，转染空白对照载体的SW480作为对照组细胞，Transwell侵袭及迁移实验检测细胞转移能力；RT-qPCR技术检测Snail及E-cadherin mRNA表达的变化；Western Blot实验检测Snail及E-cadherin蛋白表达水平的变化。结果:实验组Transwell基底膜侵袭及迁移细胞数显著高于对照组，实验组BCYRN1及Snail mRNA表达显著高于对照组，E-cadherin mRNA表达显著低于对照组，Snail蛋白表达显著高于对照组，E-cadherin蛋白表达显著低于对照组。BCYRN1及Snail mRNA在结直肠癌组织中表达显著高于癌旁正常的组织，E-cadherin mRNA在结直肠癌组织中表达显著低于癌旁正常的组织，结直肠癌组织中BCYRN1与Snail mRNA表达显著正相关，与E-cadherin mRNA表达显著负相关，结直肠癌组织中BCYRN1高表达患者TNM分期及浸润深度显著高于低表达患者。结论:BCYRN1可通过Snail/E-cadherin途径促进结直肠癌侵袭转移能力。     

核转录因子Snail对肝内胆管癌细胞HCCC9810侵袭和迁移能力的影响北大核心CSCD

目的探讨核转录因子Snail对肝内胆管癌细胞HCCC9810侵袭和迁移能力的影响。方法采用小干扰RNA(si-RNA)技术靶向沉默肝内胆管癌细胞HCCC9810中Snail的表达,通过Transwell和划痕实验检测肝内胆管癌细胞侵袭和迁移能力,采用免疫印迹法检测si-RNA处理前后的胆管癌细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达情况。结果 Transwell结果显示靶向沉默Snail后HCCC9810细胞的迁移能力下降(P=0.005),侵袭能力减弱(P=0.007),细胞划痕结果表明细胞迁移能力同样降低(P=0.017),免疫印迹结果表明沉默Snail后E-cadherin表达上调(P=0.004),Vimentin表达下调(P=0.001)。结论 Snail可诱导HCCC9810细胞上皮间质转化,增强其侵袭和迁移能力。     

高迁移率族蛋白B1介导癌症相关成纤维细胞促进结直肠癌转移的机制研究

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)介导癌症相关成纤维细胞(CAFs)活化在结直肠癌转移中的作用。方法 从结直肠癌及癌旁组织中,分离提纯癌旁正常成纤维细胞(NFs)和CAFs,分别与人结直肠癌细胞SW480共培养,划痕实验和Transwell侵袭实验检测NFs和CAFs对SW480迁移、侵袭的作用。免疫组化法检测HMGB1在结直肠癌、癌旁正常结直肠组织中表达。蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测NFs、CAFs中HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平。ELISA法检测上清液中HMGB1表达。应用小干扰RNA (siRNA)技术抑制CAFs细胞内HMGB1基因表达,qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测阴性对照转染组(CAFs-siNC组)与HMGB1-siRNA转染组(CAFs-siHMGB1组)中HMGB1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因和蛋白的表达情况,2组细胞分别与SW480细胞共培养后,划痕实验和Transwell侵袭实验验证HMGB1表达对SW480迁移和侵袭的影响。结果 NFs与SW480细胞共培养迁移率为(25.51±46.96)%,侵袭细...     

慢病毒介导的RNA干扰沉默KIF14表达对结肠癌细胞生长和转移的影响

目的:探讨慢病毒介导RNA干扰沉默KIF14表达对结肠癌SW480细胞生长和转移的影响。方法:采用脂质体法将构建的慢病毒靶向siRNA-KIF14干扰载体转入SW480细胞后,采用RT-PCR和Western blot检测KIF14 mRNA和蛋白的表达,MTT法、流式细胞仪和Transwell小室实验分别检测SW480细胞增殖、凋亡和侵袭,Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白N-cadherin、E-cadherin和Vimentin的表达。结果:转染SW480细胞后成功下调KIF14 mRNA和蛋白的表达。与未转染细胞相比,下调KIF14的表达可抑制SW480细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化,并促进细胞凋亡（P＜0.05）。结论:下调KIF14表达可抑制结肠癌SW480细胞生长和转移。     

非小细胞肺癌中Snail、HIF-1α和E-cadherin表达的临床意义及相关性

目的探讨Snail、乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、E-钙黏素(E-cadherin)在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达的临床意义及相关性。方法采用免疫组织化学法检测62例NSCLC患者肺癌组织和20例癌旁组织Snail、HIF-1α、E-cadherin蛋白表达,并分析与临床病理因素的关系。结果肺癌组织中Snail、HIF-1α及E-cadherin阳性表达率分别为64.5%、59.7%和54.8%,癌旁组织分别为15%、10%和100%。三种蛋白在肺癌组织及癌旁组织表达差异有统计学意义(P<0.05)。Snail和HIF-1α表达升高及E-cadherin降低与肺癌临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。HIF-1α和Snail表达均与E-cadherin表达呈负相关性(P<0.05),但HIF-1α和Snail表达未显示相关性(P>0.05)。结论 Snail和HIF-1α表达升高、E-cadherin表达降低与肺癌发生发展和转移有关,Snail、HIF-1α和E-cadherin检测有助于评估肺癌恶性程度及预后。     

PHF1在结直肠癌中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:探讨PHF1在结直肠癌(CRC)中的表达以及对结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:将SW480和HCT 116细胞分别分为阴性对照组(si-PHF1-NC组,转染si-PHF1-NC)和实验组(si-PHF1组,转染si-PHF1),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测CRC组织和细胞中PHF1的mRNA水平;免疫组化法检测CRC组织中PHF1蛋白表达;MTT法检测CRC细胞增殖活性;克隆形成实验检测CRC细胞克隆数量;流式细胞术检测CRC细胞凋亡;Transwell小室法检测CRC细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹(Western blot)检测CRC细胞EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的表达。结果:与癌旁组织相比,CRC组织中PHF1的mRNA水平和阳性细胞数均显著升高(P<0.05);与正常细胞NCM460相比,CRC细胞SW480和HCT 116中PHF1的mRNA水平也显著升高(P<0.05);与si-PHF1-NC组相比,si-PHF1组SW480和HCT 116细胞存活率、迁移...     

USP7在结直肠癌组织中的表达及其通过调控Wnt/PCP通路对细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨泛素特异性蛋白酶7（ubiquitin specific protease 7,USP7）在结直肠癌组织中的表达及其通过调控Wnt/PCP通路对结直肠癌细胞SW480增殖、凋亡的影响和机制研究。方法:免疫组织化学法检测USP7在结直肠癌组织中的表达;qRT-PCR和Western blotting检测USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中的表达;qRT-PCR和Western blotting检测沉默USP7在SW480细胞中的表达;细胞克隆形成实验检测SW480细胞增殖能力;Transwell迁移实验检测SW480细胞迁移能力;流式细胞术检测SW480细胞的凋亡情况;Western blotting检测Wnt/PCP通路相关蛋白的表达。结果:USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中高表达（P＜0.05）;沉默USP7使SW480细胞中USP7的表达降低（P＜0.001）,细胞的增殖和迁移能力下降（P＜0.001）,细胞凋亡率增加（P＜0.001）;与shNC组相比,沉默USP7使Wnt7a蛋白和RhoA蛋白的表达水平显著下调（P＜0.001,P＜0.001）,JNK蛋白磷酸化程度显著降低（P＜0.01）。结论:USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中高表达。沉默USP7抑制SW480细胞增殖、迁移并诱导细胞凋亡,可能与Wnt/PCP通路有关。     

PTTG1促进结肠癌SW480细胞侵袭和迁移的作用机制

目的 研究垂体肿瘤转化基因 1（pituitary tumor transforming gene 1, PTTG1）过表达促进人结肠癌细胞SW480侵袭和迁移作用及其可能机制。方法 采用脂质体转染法将pcDNA3.1(+)-PTTG1及空载pcDNA3.1(+)转染人结肠癌SW480细胞,G418法筛选阳性克隆。Western blot和Real-time PCR法鉴定稳定过表达PTTG1细胞株建立。Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测MMP2、MMP9、E-cadherin、Vimentin和Snail的表达。结果 （1）成功获得稳定高表达PTTG1的SW480克隆细胞株PTTG1-SW480;（2）过表达PTTG1基因后,SW480细胞侵袭和迁移能力增强,MMP2和MMP9表达升高,上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）标记分子E-cadherin表达降低,Vimentin和Snail的表达升高,差异均有统计学意义（P<0.01）;（3）过表达PTTG1基因后,SW480细胞中PI3K/AKT信号活化增强,使用LY29400干预后,抑制细胞侵袭、迁移和EMT,E-cadherin表达上调、Vimentin和Snail的表达下调,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论 PTTG1基因过表达可能通过活化PI3K/AKT信号诱导SW480细胞EMT发生,发挥促进SW480侵袭和迁移作用;提示PTTG1蛋白可能成为结肠癌治疗的一个潜在靶点。     

缺氧诱导宫颈癌Siha细胞发生上皮-间叶转化的研究

目的 探讨宫颈癌Siha细胞在二氯化钴(CoCl₂)诱导的化学缺氧环境中能否发生上皮-间叶转化(EMT),从而获得侵袭性表型,并初步分析其分子机制。方法 划痕实验及Transwell体外侵袭实验检测化学缺氧对细胞迁移、侵袭及转移能力的影响;Western blot印迹法、细胞免疫化学及免疫荧光检测缺氧对Siha细胞缺氧诱导因子1α（HIF-lα）、上皮细胞标记分子E-cadherin、间叶细胞标记分子vimentin表达的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测缺氧对EMT诱导因子snail、zeb、twist mRNA表达的影响。结果 缺氧可促进人宫颈SCC Siha细胞的迁移、侵袭和转移能力;宫颈癌Siha细胞在常氧、缺氧12 h、缺氧24 h、缺氧48 h条件下E-cadherin蛋白的相对表达逐渐减少,vimentin蛋白的相对表达逐渐增加,缺氧组与常氧组比较差异有统计学意义(P<0.05);缺氧状态下HIF-1α在Siha细胞中聚集,发现Siha细胞形态发生明显变化、且伴有上皮性标记蛋白E-cadherin的表达减弱;Siha细胞twist及snail mRNA的表达与HIF-lα mRNA表达成正相关,且在缺氧12h后差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 缺氧微环境可能通过活化HIF-lα,调节twist、snail等转录因子的表达,促进宫颈癌细胞发生上皮-间叶转化,产生侵袭性表型。